ESPECTROSCOPIA REGIÓN VISIBLE

EVALUACIÓN DEL CUMPLIMIENTO DE LA LEY DE BEER

Laboratorio de química analítica

NRC: 72414

Viernes 2-5

Laura Alejandra Jimenez Salazar

Yudy Andrea Peña Gutiérrez

Dora María Carmona Garcés

Universidad Pontificia Bolivariana

Facultad de Ingenierías

Ingeniería Química

Medellín, Antioquia

2019
1. OBJETIVOS

- Preparar correctamente las soluciones estándar del analito para una correcta
construcción del espectro de absorción.
- Medir la absorbancia de las soluciones estándar a diferentes longitudes de onda.
- Aprender a construir curvas de calibración.

2. MARCO TEORICO

La espectroscopia visible es una de las técnicas más usadas en el análisis químico.

Para que una sustancia pueda ser analizada en el visible debe ser coloreada, lo que se
debe a que absorbe ciertas frecuencias o longitudes de onda del espectro visible y
transmite otras más[1]

La absorbancia (A) y la transmitancia (T) de las longitudes de onda de la región visible

no es la misma en las diferentes tonalidades por lo que se cuenta con ecuaciones para
encontrar estos datos, las cuales son:

𝐴 = 𝑎𝑏𝑐 Ecuación 1

Donde a es la absortividad, b es el espesor de la cubeta de absorción y c es la

concentración de la especie absorbente y A es la absorbancia definida como la cantidad
de radiación que absorbe un analito.

𝐴 = − log(𝑇) = 2 − log(%𝑇) Ecuación 2

Donde T es la transmitancia; definida como la fracción de radiación incidente que

consigue atravesar la solución.

Adicionalmente se usara la ecuación 3

𝑙𝑜𝑔(%𝑇) Ecuación 3.

Para encontrar la concentración en la muestra se usará la ecuación de interpolación.

𝑌2−𝑌1
𝑌𝑑𝑒𝑠𝑒𝑎𝑑𝑜 = 𝑌1 + (𝑋𝑐𝑜𝑛𝑜𝑐𝑖𝑑𝑜 − 𝑋1) ∗ 𝑋2−𝑋1 Ecuación 4.
3. PROCEDIMIENTO Y DATOS EXPERIMENTALES

a. PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES ESTANDAR

Se prepararon diez soluciones estándar con concentraciones entre 5 y 50 ppm en

matraces de 25 mL a partir de una solución de 250 ppm de KMnO4.

b. CONSTRUCCIÓN DEL ESPECTRO DE ABSORCIÓN DEL KMnO4

Se seleccionó una de las soluciones estándar preparadas y se construyó el espectro de
absorción del KMnO4 haciendo un barrido de longitudes de onda entre 380 y 750 nm.

Para poder evaluar el cumplimiento de la ley d Beer fue necesario seleccionar las
siguientes seis longitudes de onda a partir de espectro de absorción del KMnO4
planteadas en la tabla 1

Tabla 1. Longitudes de onda para el cumplimiento de la ley de Beer.

Característica de la longitud de onda Valor de la longitud de onda
Está en un máximo primario 525nm
Está en un máximo secundario 545nm
Está en un mínimo de absorción 599nm
Está en una pendiente positiva grande 487nm
Está en una pendiente negativa grande 570nm
Está en un valor bajo de absorbancia 471nm

c. CONSTRUCCIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN

Se midió la absorbancia de todas las soluciones estándar de las seis longitudes de onda
seleccionadas en la Tabla 1
Luego se construyó la curva de calibración para cada longitud de onda y por último se
analizó el cumplimiento de la ley de Beer en cada una de las seis curvas de calibración.

d. CUANTIFICACIÓN DE LA MUESTRA

Se midió la absorbancia de la muestra a las seis longitudes de onda seleccionadas y se

calculó la concentración de KMnO4 en la muestra en cada una de las curvas de
calibración.

4. CALCULOS Y RESULTADOS

Para una longitud de onda de 525 nm se obtuvieron las siguientes gráficas y resultados.
 Tabla 2. Datos para longitud de onda de 525 nm
longitud de onda 525nm
Concentración (ppm) Absorbancia %Trasmitancia log %T
5 0,077 83,75292821 1,923
10 0,145 71,61434102 1,855
15 0,231 58,74893525 1,769
20 0,306 49,4310687 1,694
25 0,387 41,0204103 1,613
30 0,46 34,67368505 1,54
35 0,548 28,31391996 1,452
40 0,616 24,21029047 1,384
45 0,701 19,90673339 1,299
50 0,774
STDM 3 40,59 0,626

Gráfica 1. Curva de calibración a longitud de onda de 525 nm

Longitud de onda 525nm

0.9
0.8 y = 0.0156x - 0.0051
R² = 0.9997
0.7
0.6
Absorbancia )

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración(ppm)
 Gráfica 2. T vs concentración a longitud de onda de 525 nm

Longitud de onda 525nm

90
80
70

% Trasmitancia
60
50
40
30
20
10
0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración (ppm)

Gráfica 3. %log T vs concentración a longitud de onda de 525 nm.

Longitud de onda 525nm

2.5

1.5
% log T

0.5

0
0 10 20 30 40 50
Concentración (ppm)
Para una longitud de onda de 487 nm se obtuvieron las siguientes gráficas y resultados

Tabla 3. Datos para longitud de onda de 487 nm

Longitud de onda 487nm

Concentración (ppm) Absorbancia %Trasmitancia log %T
5 0,035 92,257 1,965
10 0,064 86,298 1,936
15 0,102 79,068 1,898
20 0,134 73,451 1,866
25 0,17 67,608 1,83
30 0,201 62,951 1,799
35 0,24 57,544 1,76
40 0,268 53,951 1,732
45 0,307 49,317 1,693
50 0,338 45,920 1,662
STDM3 40,89 0,275

Gráfica 4. Curva de calibración a longitud de onda de 487 nm

Longitud de onda 487nm

0.4
0.35 y = 0.0068x - 0.001
R² = 0.9996
0.3
Absorbancia

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración (ppm)
 Gráfica 5. T vs concentración a longitud de onda de 487 nm

Longitud de onda 487nm

100.000
90.000
80.000
%Trasmitancia 70.000
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0.000
0 10 20 30 40 50 60
Concentración (ppm)

Gráfica 7. %log T vs concentración a longitud de onda de 487 nm.

2 Longitud de onda 487nm

1.95
1.9
1.85
% log T

1.8
1.75
1.7
1.65
1.6
0 10 20 30 40 50 60
Concentración(ppm)
Para una longitud de onda de 570 nm se obtuvieron las siguientes gráficas y resultados.

Tabla 4. Datos para longitud de onda de 570 nm

Longitud de onda 570nm

Concentración (ppm) Absorbancia %Trasmitancia log % T
5 0,041 90,991 1,959
10 0,077 83,753 1,923
15 0,122 75,509 1,878
20 0,161 69,024 1,839
25 0,204 62,517 1,796
30 0,242 57,280 1,758
35 0,289 51,404 1,711
40 0,324 47,424 1,676
45 0,369 42,756 1,631
50 0,407 39,174 1,593
STDM3 40,56 0,329

Gráfica 8. Curva de calibración a longitud de onda de 570 nm

Longitud de onda 570nm

0.45
0.4 y = 0.0082x - 0.0021
R² = 0.9997
0.35
0.3
Absorbancia

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración(ppm)
 Gráfica 9. T vs concentración a longitud de onda de 570 nm

Longitud de onda 570nm

100.000
90.000
80.000
%Trasmitancia 70.000
60.000
50.000
40.000
30.000
20.000
10.000
0.000
0 10 20 30 40 50 60
Concnetración (ppm)

Gráfica 10. %log T vs concentración a longitud de onda de 570 nm.

Longitud de onda 570nm

2.5

1.5
% log T

0.5

0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración (ppm)
Para una longitud de onda de 471 nm se obtuvieron las siguientes gráficas y resultados.

Tabla 5. Datos para longitud de onda de 471 nm

Londitud de onda 471nm

Concentración (ppm) Absorbancia %Trasmitancia log %T
5 0,02 95,4992586 1,98
10 0,034 92,46981739 1,966
15 0,055 88,1048873 1,945
20 0,071 84,9180475 1,929
25 0,09 81,28305162 1,91
30 0,106 78,34296428 1,894
35 0,127 74,64487584 1,873
40 0,14 72,44359601 1,86
45 0,162 68,86522963 1,838
50 0,178 66,37430704 1,822
STDM3 41,13 0,145

Gráfica 11. Curva de calibración a longitud de onda de 471 nm

Longitud de onda 471nm

0.2
0.18 y = 0.0035x + 0.0007
R² = 0.9991
0.16
0.14
Absorbancia

0.12
0.1
0.08
0.06
0.04
0.02
0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración (ppm)
 Gráfica 12. T vs concentración a longitud de onda de 471 nm

Longitud de onda 471nm

120

100
%Trasmitancia
80

60

40

20

0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración(ppm)

Gráfica 13. %log T vs concentración a longitud de onda de 471 nm.

Longitud de onda 471nm

2
1.98
1.96
1.94
1.92
%log T

1.9
1.88
1.86
1.84
1.82
1.8
0 10 20 30 40 50 60
Concnetración (ppm)
Para una longitud de onda de 599 nm se obtuvieron las siguientes gráficas y resultados.

Tabla 6. Datos para longitud de onda de 599 nm

Longitud de onda 599nm

Concentración (ppm) Absorbancia %Trasmitancia log %T

5 0,009 97,94899854 1,991
10 0,015 96,6050879 1,985
15 0,024 94,62371614 1,976
20 0,03 93,32543008 1,97
25 0,038 91,62204901 1,962
30 0,045 90,15711376 1,955
35 0,054 88,30799004 1,946
40 0,059 87,29713684 1,941
45 0,069 85,3100114 1,931
50 0,075 84,13951416 1,925
STDM3 41 0,061

Gráfica 14. Curva de calibración a longitud de onda de 599 nm

Longitud de onda 599nm

0.08
y = 0.0015x + 0.0009
0.07 R² = 0.9985

0.06
Absorbancia

0.05

0.04

0.03

0.02

0.01

0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración (ppm)
 Gráfica 15. T vs concentración a longitud de onda de 599 nm

Longitud de onda 599nm

100
98
96
%Trasmitancia
94
92
90
88
86
84
82
0 10 20 30 40 50 60
Concentración(ppm)

Gráfica 16. %log T vs concentración a longitud de onda de 599 nm.

Longitud de onda 599nm

2
1.99
1.98
1.97
log %T

1.96
1.95
1.94
1.93
1.92
0 10 20 30 40 50 60
Concentración (ppm)
5. Análisis de resultados

Para todas las longitudes de ondas con las que se trabajó exceptuando la longitud de
onda de 599 nm el coeficiente de correlación cumplía que es mayor o igual a 0,999 lo
que se puede dar a entender como que la ley de Beer se está cumpliendo.

Para el caso de la longitud de onda de 599 nm es cercana, sin embargo, quedan dudas
de si la ley de Beer se está cumpliendo ya que el coeficiente de correlación si es
significativamente más bajo a 0,999
La variación en la concentración encontrada en cada una de las seis curvas de
calibración para la muestra tres se debe a la variación en la longitud de la onda en la
que se encontró cada concentración.
La absorbancia es directamente proporcional a la concentración, por tanto, siempre que
la concentración aumente, la absorbancia aumentara también.

6. CONCLUSIONES

- La absorbancia es la capacidad que tienen algunos compuestos para absorber la

radiación electromagnética, se pudo observar cómo, dependiendo de la
concentración y la longitud a la cual se le aplique un rayo, puede alcanzar un punto
máximo de absorción.
- Según la practica la longitud y la absorbancia son proporcionales hasta alcanzar el
punto máximo y de allí empieza a descender.
- Según la concentración varia la absorbancia del compuesto.
- Variando la cantidad de solvente se puede lograr una disminución de la
absorbancia.

7. PREGUNTAS
- ¿Qué es el ancho de banda de un espectrofotómetro?

El ancho de banda se define como el intervalo de longitudes de onda de radiación

saliente de la rendija de salida de un monocromador medido en la mitad de un pico
del flujo radiante detectado, así el ABE determina el rasgo espectral más estrecho
que puede resolver un espectrofotómetro.[3]

- ¿Cuáles son los componentes de un monocromador y qué función desempeña cada

uno?
Colimadores: su función se basa en direccionar el haz de luz, con el objetivo de que
este incida en el elemento óptico, en la muestra y luego en el detector para que
sean paralelos entre sí.
Elementos dispersores: los de redes de separación de longitudes de ondas y
dispersan la radiación de forma lineal a lo largo del plano focal.
 Rendija de salida.
Recipientes para la muestra (cuarzo o sílice).[4]

- ¿Qué factores pueden originar una desviación de la Ley de Beer?

Causas químicas: variación de algunas estructuras en función de la concentración.

Por instrumentos: depende de la calidad del instrumento.
Cuando la concentración del analito sobrepasa los límites de linealidad.
Cuando la especie absorbente forma parte de un sistema en equilibrio con otras
especies.
Tipo de solvente utilizado por las interacciones soluto-solvente.[5]

- ¿Qué rango de % T es considerado óptimo para trabajar en el espectrofotómetro?

¿Por qué razón?

Los valores de transmitancia pueden ir de 0 a 1, cero si no pasa nada de luz y uno si

pasa toda la luz.
La absorbancia toma valores entre 0 e infinito. Obsérvese que la absorbancia
aumenta conforme disminuye la transmitancia.
Imagen 1. Transmitancia y absorbancia.

Los instrumentos miden transmitancia, es decir, comparan la potencia incidente y

emergente.
Tienen un procesador integrado que convierte los valores en absorbancia. En general,
los instrumentos comunes tienen una escala de absorbancia de 0 a 2[6]
REFERENCIAS

[1] SKOOG, D.A.; Leary J.J., Holler F. James; PRINCIPIOS DE ANÁLISIS

INSTRUMENTAL, 5° ed.; Ed. McGraw-Hill (1998), págs. 353-367.
[2] Espectroscopia UV – visible. S.f. Recuperado de: https://www.u-
cursos.cl/usuario/2775c7595e300ed228a801eb8341e457/mi_blog/r/Espectrofotometria_
_Uv___Visible2012.pdf
[3] Norma ASTM E958 –93 Estándar practice for measuring practical Spectral
bandwitdth of ultraviolet – visible spectrophotometers.
[4] K. I. Tarasov, The spectroscope, Ed. Mezhdunarodnaya Kninga, Moscow 1974
[5] K.D. Mielenz, Optical Radiation Mesure vol 3 Ed. Academic Press New York 1982.
[6] Espectrofotometría. (2019). Recuperado de:
https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica4.pdf