Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS

“VERIFICACIÓN DEL FUNCIONAMIENTO DE UN

ESPECTROFOTÓMETRO”

ALUMNO: Juárez Castillón Luis Enrique

GRUPO: 4IV1

SECCCIÓN: 3
Objetivo
 A través de las mediciones se determinará la exactitud espectral y su
eficiencia del espectrofotómetro utilizado.

Fundamento
En el análisis de muestras de suelo y agua, el espectrofotómetro constituye una
herramienta fundamental para la cuantificación de nutrientes y contaminantes. Del
correcto desempeño de este instrumento dependerá en gran medida la calidad de
los resultados obtenidos, por lo que se considera un equipo crítico en los ensayos
de laboratorio y que necesariamente deberá ser verificado periódicamente. Los
principales parámetros a controlar en estos equipos son: la exactitud de la longitud
de onda, la exactitud y precisión fotométrica, la linealidad fotométrica y la
verificación de la luz difusa o parásita.
Exactitud de la escala de longitud de onda
La exactitud de la longitud de onda es la capacidad del dispositivo para funcionar a
la longitud de onda seleccionada. Dicho de otro modo: si seleccionamos una
longitud de onda de 546 nm, la longitud de onda real emitida a través de la
muestra puede ser de 544,5 como mínimo y de 547,5 como máximo, en base a
una exactitud de longitud de onda de ± 1,5 nm (la exactitud de la longitud de onda
varía de un instrumento a otro.
Luz Dispersa
La luz espuria accidental o errática es toda luz que llega al detector sin haber
atravesado la muestra cuya absorbancia se quiere medir, pudiendo ser de la
misma o de diferente longitud de onda que la seleccionada.
Exactitud Fotométrica
Se denomina precisión fotométrica a la medida de la dispersión de una serie de
mediciones de absorbancia alrededor de la media, y se expresa como coeficiente
de variación porcentual
Ancho de Banda
Es en este proceso de donde podemos obtener el concepto de ancho de banda
espectral (ABE) el cual se define como el intervalo de longitudes de onda de
radiación saliente de la rendija de salida de un monocromador medido en la mitad
de un pico del flujo radiante detectado
Linealidad Fotométrica
La capacidad de un espectrofotómetro de dar respuestas lineales a cambios
crecientes o decrecientes en la concentración de una sustancia que cumple la Ley
de Lambert-Beer se denomina linealidad fotométrica.
Exactitud de Longitud de Onda: Filtro de tierras raras (Didimio)

Longitud de de
Longitud %T %T
ondaonda
(nm) (nm)
400 500 42 51
410 510 53.5 42
420 520 56 30
430 530 50.0 30
440 540 46 47
450 550 48 64
460 560 47 60
470 570 45 36
480 580 49 14
490 590 52.5 7

Método de Sulfato de Niquel (NiSO4*6H2O al 20%)

Longitud de %T Longitud de %T
onda (nm) onda (nm)
380 0 490 81
390 0 500 85
400 3 510 85
410 5 520 82
420 8 530 77
Espectro
430 de transmisión
15 de la solución
540 de Sulfato
75 de Niquel al 20%
90 440 27 550 71
450 39 560 66
80
460 51.5 570 59
70 470 63 580 51
60
480 72 590 42

50

40

30

20

10

0
350 400 450 500 550 600 650
 Serie a
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1 Tubo Concentración A400
0 a a´ de NiSO4*H2O Serie a Serie b
0 0.02 0.04 0.06 0.08
(M) 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2

1 1´ 0 0.00 0.00
2 2´ 0.0095 0.05 0.05
3 3´ 0.0285 0.14 0.14
M4 4´ 0.0665 0.32 0.31
5 5´ 0.1045 0.49 0.36
6 6´ 0.1452 0.64 0.64
7 7´ 0.152 0.69 0.68
8 8´ 0.171 0.75 0.75
9 9´ 0.1805 0.80 0.80
10 10´ 0.19 0.85 0.85
Intervalo Dinámico Lineal de la Concentración
 Serie b
0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2
 Resumen de Resultado de Evaluación del Funcionamiento del
Espectrofotómetro
Valores de Valores
Parámetro Estudiado Conclusión
Referencia Experimentales
EXACTITUD DE LA ESCALA DE Max: 420, 490, Max: 420, 490, No cumple
LONGITUD DE ONDA 590 550 Permite evaluar las
condiciones del
1. Filtro de Didimio Min: 440, 470, Min: 440, 470, selector de l
Máximos (λ, nm) 520, 580 520, 590
Mínimos (λ, nm)

2. Solución de NiSO4 6H2O al 20% Max: 500 Max: 490

Máximos (λ, nm)
Mínimos (λ, nm) Min: 400 Min: 400

PROPORCIONALIDAD FOTOMÉTRICA Si cumple

Datos de Regresión a 530 a 570 nm r > 0.98 r = 0.9708 Su desviación
supone fallas en el
detector
LUZ DISPERSA A 400 nm no
%T = 0% - 3% %T = 4.4 cumple, a 450 y a
%T a 400 nm (Solución de NiSO4 6H2O) 500 si cumple

%T a 450 nm %T = 0% - 3% %T = 0.4 Supone fallas en el

detector o en el
%T a 500 nm %T = 0% - 3% %T = 0.2 equipo en general

ANCHO DE BANDA Si cumple

%T = 91.8% %T = 91.4 Se evalúa el ancho
%T a 500 nm de banda
EXACTITUD FOTOMÉTRICA Si cumple

1. Método del filtro de vidrio Neutro %T = 86% %T = 83.4

%T a 530 nm

2. Método de la Solución de NiSO4 6H2O Evalúa el estado, o

al 20% A400 = 1.4-1.6 A400 = 1.356 capacidad de
Absorbancia a 400 nm respuesta, del
Absorbancia a 500 nm A500 = 0.04-0.06 A500 = 0.045 detector.

INTERVALO DINÁMICO LINEAL DE Si cumple

CONCENTRACIÓN r > 0.99 r = 0.998 Permite observar
Datos de regresión Lineal intervalo de fallas en el
concentración detector
Discusión
Obtuvimos los espectros de trasmisión característicos del filtro de Didimio y de una
solución de sulfato de níquel. En la gráfica 1, perteneciente a el espectro de
absorción para el filtro de Didimio, obtuvimos picos a 420,460,490,510 nm. En
cuanto al los resultados obtenidos con solución de NiSO4.6H2O al 20%
obtuvimos máximos a longitud de onda de 500 nm y 510 nm y mínimos a 380,390
nm , mismo valores que se encuentran dentro del intervalo de tolerancia
comparado con el valor de referencia .Esto demuestra que nuestro
espectrofotómetro tiene una escala exacta y que las determinaciones que se
realicen en ese equipo van a ser confiables ya que con esto nos aseguramos que
al ajustarlo a la longitud de onda deseada, el equipo realmente selecciona esa
longitud de onda.

Preguntas extras
 Ley General de la fotometría
La Ley Fundamental de la Fotometría establece una relación de
proporcionalidad entre la Intensidad (I) de la fuente luminosa y la
Iluminación (E) que esta es capaz de provocar sobre una superficie situada
a una distancia (d). Su enunciado más común dice: “La Iluminación recibida
por una superficie cualquiera es directamente proporcional a la Intensidad
de la fuente e inversamente proporcional al cuadrado de la distancia
perpendicular entre ambas”.

 Espectrofotómetro de filtros
Los filtros son artificios ideados para la selección de un determinado
intervalo de longitudes de onda de luz. El mecanismo es siempre
sustractivo. Consiste en el bloqueo de unas longitudes de onda,
permitiendo en cambio el paso de otras. Así, no intensifican un color, sino
que se limitan a oscurecer el color complementario. Los filtros están
compuestos por un material que transmite selectivamente la longitud de
onda absorbiendo todas las demás. Los filtros, equilibran situaciones
cromáticas, retienen el espectro luminoso y permiten el paso sólo de la luz
de su mismo color.