TEMA: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

INTEGRANTES:

 SILVA AUJAPUCLLA, JAQUELIN

 CAMAY ROMINA
 YHORMARILIN CERRON CARRILLO
 FIORELLA SADITH JIMENEZ

PROFESOR: SANTOS

HORARIO: MARTES DE 11:00 A 1:00 PM

CURSO: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

2018-II
PRACTICA N°6 : PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Introduccion:
La preparación de los medios de cultivo se realiza con la finalidad de capturar ciertos
tipos de microorganismos, de los cuales algunos pueden captar masas de diferentes tipos
de microorganismos, como también grupos selectivos de estos.
Es fundamental que se lleve a cabo esta preparación lo más esterilizado posible para asi
evitar contaminaciones en el medio a cultivar y tomar precauciones en caso de alguna
contaminación en las sustancias.
El presente trabajo a realizar trata sobre la preparación de medios de cultivo. De los
cuales en la preparación y/o formulación de los medios de cultivo se puede distinguir en
medios definidos y medios complejos. Los medios definidos proveen nutrientes
requeridos para el crecimiento en la forma de compuestos químicos de concentración
conocida; por otro lado el medio complejo contiene todos los nutrientes necesarios para
el crecimiento de microorganismos que pueden o no tener concentraciones conocidas.
Por otro lado, de acuerdo al tipo de microorganismo que se quiere cultivar los medios
pueden clasificarse en:
Comunes: Los medios de cultivo en este tipo son: agar nutritivo, caldo nutritivo, agar
nutritivo, etc.
Especiales: pueden considerarse a los medios enriquecidos o mejorados, selectivos y
diferenciales.
Dependiendo de la técnica elegida, los medios pueden ser preparados de forma líquida,
como también sólida. En este caso las preparaciones que realizamos en el laboratorio se
trataron de medios líquidos. Los cuales fueron llevados al punto de ebullición del agua
para ayudar su solubilizarían de estos medios.
Los trabajos realizados en el laboratorio fueron:
Caldo nutritivo
Agar nutritivo
Agar Mac Conkey
Agar Manitol Salado
Agar Almidón
Agar Gelatina
En este trabajo el medio de cultivo a trabajar fue el agar almidón, y para realizar la
preparación necesitamos de:
Peptona 1%
K2HPO4 0.5%
Almidón 0.3%
Agar 1.5%
El medio de agar-almidón es utilizado en la selección de microorganismos productores
de amilasas y también en los cultivos de hongos. (Malajovich, 2018) Este medio de
cultivo viene a ser un especial ya que permite cultiva almidón.
El objetivo de esta práctica fue preparar y esterilizar medios de cultivo de diferentes
características para el cultivo de microorganismos (Correa, 2018), para así obtener
diversos medios de cultivo que favorezcan el crecimiento de diversos microrganismos.
De modo de presentación previamente expuesto, esperamos que el trabajo sea de su
agrado con los procedimientos y explicaciones que hemos realizado, para así propiciar
la información necesaria sobre la preparación de medios de cultivo.
2. Materiales y métodos :
Agar Almidón
2.1 Materiales :
 Ingredientes deshidratados:
1 gr de peptona ;0.5 gr de K2HPO4 ;0,3gr de almidon ;1,5 gr de agar; para
100 ml de medio
 Agua destilada
 Algodón,gasa
 Balanza
 Erlenmeyer de 250 ml
 Papel aluminio
 Probeta de 100 ml
2.2 Métodos :

Colocar el polvo en un
Pesar cuidadosamente el
erlenmeyer de 250 ml con
almidón necesario para
un pequeño volumen de
preparar 100 ml de medio
agua destilada

Pesar el resto de los

Agitar constantemente el
ingredientes y agregaarlo
recipiente con el almidón
con el resto de agua
hasta su disolución
destilada

Colocar en el erlenmeyer un
Licuar el medio al baño de
tapón de algodón a la
agua caliente hasta
medida, cubrir con papel,
completar la disolucion del
identificar el material y
agar
esterilizar en autoclave .

Figura 1 : Procedimiento para la elaboración del medio Agar almidón.

 a b c d
Figura2: Ingredientes deshidratados: a) Agar b)Almidon c)K2HPO4 d) Peptona

Figura3: Pesado de los ingredientes deshidratados

Figura 4: vaciado de los ingredientes en un erlenmeyer

Figura 5: Agregado de agua destilada .

Resultados y discusiones

Figura 6 : Solución con Peptona 1%, 𝐾2 𝐻𝑃𝑂4 0,5%; almidón 0,3% ; agar 1,5%

Se obtuvo una solución con solutos que no podían ser homogenizados en la base, con
consistencia liquida y el color amarillo .El color se debe al agar y al almidón mientras que los
solutos probablemente a que se necesitó una mayor tiempo expuesto al calor.

Cuestionario

1. ¿Cuáles son las ventajas de los medios complejos para el cultivo de

microorganismos?
Permite el aislamiento de bacterias desde una muestra o material patógeno
(secreción purulenta, orina, órgano, etc.) o de un alimento (leche, carne, etc.).
Brinda la posibilidad de la clasificación y tipificación de bacterias por estudio de
sus propiedades bioquímicas en medios diferenciales.
2. ¿Por qué no es necesario ajustar el pH en el caldo nutritivo y si lo es en el agar
almidón?
Si se utiliza agua neutra y un medio deshidratado de buena calidad el pH del
medio usualmente quedará dentro de los límites adecuados, aún así es
conveniente ajustar el pH lo que se puede hacer con un potenciómetro o en su
defecto con papel pH 4.0-7.0. Si el medio es sólido la medición y el eventual
ajuste se hace a 45°-50°C (aún está liquido) y en los medios líquidos se hace a
 temperatura ambiente. La corrección del pH se efectúa con HCl o NaOH 1N o
0.1 N tomando una muestra del medio de cultivo preparado y estéril, se mide el
pH y si fuera necesario se ajusta en la muestra calculando después el volumen
de ácido o base que sea requerido para el total de medio.

No es necesario ajusta en pH en el caldo nutritivo ya que son para

microorganismos no exigentes, esto quiere decir que pueden permanecer
inalterables frente a los cambios bruscos de pH , especialmente son más
susceptibles a los pH básicos.
Por otro lado el agar almidón es un medio rico para el cultivo de
microorganismos en general, crecen una gran mayoría, excepto algunos muy
exigentes. Para lo que este último necesita de alguna alteración en pH para
poder cultivar al microorganismo. El almidón incrementa el desarrollo de
neiserias y las reacciones de hemólisis de algunos estreptococos.

3. Determine la naturaleza química y la función nutritiva de cada uno de los

ingredientes que contienen los medios que ha utilizado.
Peptona: son mezclas de aminoácidos y péptidos que resultan de la
hidrólisis de materias primas con contenido proteico complejo (carne
proteína vegetal leche).Constituyen la principal fuente de aminoácidos en los
medios de cultivo.
Tabla 1: Tipos de peptonas y su aplicación en biología. (Reactivos y Productos quimicos finos ,
2018)

Almidón:
El almidón es una molécula compleja de carbohidrato que consta de muchos
azucares simples unidos en una sola cadena (almidón vegetal) y cadenas
ramificadas (almidón animal).Sirven como reserva energética y bridan energía a
los procesos metabólicos celulares, se almacenan en los tejidos vegetales o el los
músculos e hígado (Ville 1996).

Agar: El agar-agar es un polisacárido de galactosa y galactomanano que se obtiene

mediante algas rojas de los géneros Echema, Gelidium y Gracilaria donde existe en
la forma de sales de calcio o de sales de calcio y magnesio y sirve como agente
solidificante. Forma geles transparentes estables y es degradado por muy pocas
bacterias.

“La agarosa, fracción gelificante, es una molécula lineal neutra, esencialmente libre de
sulfatos, que consiste en cadenas repetidas de unidades alternadas β-1,3 D-galactosa y α-
1,4 3,6-anhidro-L-galactosa. La agaropectina, fracción no-gelificante, es un polisacárido
sulfatado (3% a 10% de sulfato) compuesto de agarosa y porcentajes variados de éster
sulfato, ácido D-glicurónico y pequeñas cantidades de ácido pirúvico” (Porto, 2018)
Fosfato de potasio: aporta las sales minerales que necesitan los microrganismos en sus
procesos metabólicos.

4. Describa el autoclave y su forma de uso.

Los autoclaves son equipos que se usan para esterilizar objetos utilizados en cirugía
intervenciones dentales cultivos bacterianos soluciones u objetos usados en
microbiología (Estridge et al 2000).

Según Castillo-Salgado (1988) es necesario dos autoclaves o estufas de esterilización:

uno para esterilizar material contaminado y otro para el material limpio.
El autoclave tipo Chamberlain trabaja a 121°C calentando el agua que se coloca en el
interior de la cámara hasta que haga ebullición y permite que se sature la misma con el
vapor. Abriendo la válvula se remueve el aire dentro de la autoclave. A partir de la
expulsión de éste vapor se empieza a contar el tiempo de esterilización.

5. ¿Qué otros metodos de esterilizacion se emplean para medios de cultivo?.¿Qué

ventajas otorgan?
Esterilizacion por filtracion:
La filtracion se utiliza especialmente cuando se desea preservar intactas las proteinas
que tienen la propiedad de desnaturalizarse (labiles a temperaturas de esterilizacion ).
Los filtros mas usados son de porcelana, tierra diatomacea vidrio desmenusado
asbestos, membranas de celulosa y colodion . Como auxiliar para el proceso de
filtracion se utiliza el vacio o presion. (French y Herbert 1980)
Esterilizador Arnold:
Se ha determinado que el calor humedo es mas dañino a los microorganismos porque el
agua induce una coagulacion mas rapida de las proteinas. El esterilizador Arnold trabaja
con vapor de agua , el cual circula por rendijas desde la base donde se hierve el agua
hacia toda la camara de esterilizacion y por la pared doble de ésta.Se utiliza para la
esterilizacion descontinuada o Tyndalización.
Se esterilizan medios como gelatina, leche, o cualquier otra sustancia que contenga
materiales labiles al calor , aplicando calor de vapor (100°C) durante 20-30 minutos y
en tres dias sucesivos. (French y Herbert 1980)
Esterilizacion ultravioleta:
Los rayos de luz ultra violeta(U. V.) son letales para los organismos, por lo que se
pueden utilizar lamparas U. V. para esterilizar medios; pero como estos rayos tienen
poca penetracion a traves de vidrio o de un espesor grande de medio, sólo son utiles
para trabajos especiales. Se pueden utilizar, por ejemplo. Para esterilizar bolsitas de
plastico que se van a emplear para el envio de cultivos , o para esterilizar medio de poco
groso preparado en bolsas de plastico selladas. (French y Herbert 1980)
Conclusión:

A partir del agar almidon, pudimos encontrar un medio especial y microorganismos

productores de amilasas.

Bibliografia

 Correa, P. M. (2018). MICROBIOLOGIA GUIA DE LABORATORIO. LIma: UNALM.

 Malajovich, M. A. (2018). Biotecnología: enseñanza y divulgación. Obtenido de MEDIO
DE AGAR-ALMIDÓN:
https://bteduc.com/guias_es/78_Preparacion_del_medio_de_agar-almidon.pdf

 French, E; Hebert, T. 1980. Métodos de investigación fitopatológica. San José

(Costa Rica), Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura, p.22-
26.
 Castillo-Salgado, C.1988. Los servicios de Salud en las Américas: Análisis de
indicadores Básicos. Cuaderno Técnico, (14), 147-152.
 Estridge, BH, Reynolds, AP & Walters, NJ. 2000. Basic medical laboratory techniques.
Cengage Learning.
 Porto, S. (5 de Octubre de 2018). AgarGel. Obtenido de Agar-agar:
http://www.agargel.com.br/agar-tec-es.html
 Reactivos y Productos quimicos finos . (5 de Octubre de 2018). Peptonas. Obtenido de
http://www.reproquifin.com/65PDF0tf4/peptonas.pdf
 Villee, CA.1996.Biologia.9na ed.Mexico,Mc Graw Hill.