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EVALUACION DE LA RESPUESTA SUPEROVULATORIA UTILIZANDO LA ABLACION FOLICULAR COMO ALTERNATIVA PARA LA INDUCCION DEL CRECIMIENTO DE UNA NUEVA ONDA

FOLICULAR EN DONADORAS BRAHMAN.


LEONARDO PREZ SANDOVAL MVZ
Proyecto de tesis para obtener el grado acadmico de: ESPECIALISTA EN REPRODUCCIN BOVINA
INSTITUTO DE REPRODUCCIN ANIMAL CRDOBA (IRAC) Y ESCUELA PARA GRADUADOS FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS UNIVERSIDAD NACIONAL DE CRDOBA

(T.E) Y GANADO BRAHMAN EN COLOMBIA


M.N I.A T.E FIV 55 % 38 % 6% 1%
Ao 2000 : 6 embriones viables / vaca / lavado Ao 2005 : 8 embriones viables / vaca / lavado 500 vacas lavadas / ao (2005)
Fuente: XIII Congreso mundial brahman, ASOCEBU, Colombia, 2006.

ANIMALES BRAHMAN REGISTRADOS POR ASOCEBU 2009. TOTAL


M.N. I.A. T.E. FIV. 43,32 % 37,5 % 10,11 % 9,07 %

55.011
23.829 20.626 5.566 4.990

A partir del ao 2005 se reporta un aumento significativo de la tcnica de FIV.


Fuente: revista EL CEBU (ASOCEBU) Colombia,2010.

PATRON DE CRECIMIENTO FOLICULAR DURANTE EL CICLO ESTRAL EN VACAS CEBUINAS

P4; LH

PGF2;P4; E2; LH PGF2 LH

P4 E S T FSH R O
DO
Dominancia

P4; LH

Seleccin

1 ONDA
Reclutamiento

2 ONDA

E S T R 3 ONDA O
D21....

D16 Fuente: Dinmica folicular en bovinos, Pietro Sampaio Baruselli.

D9

BENEFICIOS DE LA T.E

-Comercio de gentica superior.

-Multiplicar animales fsicamente impedidos.

-Pruebas de progenie.

-Transporte de material gentico.

-Conservar material gentico

HORMONAS USADAS PARA SUPEROVULAR BOVINOS


FSHP - siux - folltropin pluset FSHO - ovagen FSHB - bovina recombinante sper ova FSHE - equina recombinante PMSG - ecg- folligon novormn - antipmsg HMG - humana pergovet. Mezcla FSH-P Y ECG

SUPEROVULACION

O.I

O.D

FSH

O.I

O.D

EVOLUCION DE LOS DIFERENTES PROTOCOLOS DE SPO EN BOVINOS, ATRAVES DEL TIEMPO

Fuente: Chvez Aldemar. Ovarios de una vaca brahman superovulada con FSHp ( pluset ).

SPO CON SINCRONIZACIONCON DE CELO BASE


PGF2 Deteccin celo PGF2 Deteccin celo Colecta y T.E

FSH
Da 0 Da 10 Da 13 Da 0 Da 7

SPO CON SINCRONIZACION DE LA ONDA FOLICULAR


Deteccin celo B.E + P4 PGF2 Deteccin celo I.A

Colecta y T.E

Progesterona FSH
Da 0 Da 4 Da 7

Da 8

Da 15

SPO CON SINCRONIZACION DE LA ONDA FOLICULAR Y LA OVULACION


Deteccin celo B.E + P4 PGF2 LH Deteccin celo Colecta y T.E

Progesterona FSH
Da 0 Da 4 Da 7

IATF
Da 8 Da 15

HISTORIAL DE RESPUESTA SUPEROVULATORIA EN VACAS BRAHMAN Y CALIDAD DE EMBRIONES DE ACUERDO A LA HORMONA UTILIZADA. COLOMBIA.

Tratamiento

N de Vacas

Estructuras Colectadas 24.930 (10/vaca) 10.350 (8.3/vaca) 2.480 (9 /vaca) 37.710 (9.4/vaca)

Embriones Calidad 1 12.400 (5/vaca) 5.175 (4,1/vaca) 1.485 (5,5 vaca) 19.060 (4,7/vaca)

Embriones Calidad 2 4.960 (2 / vaca) 3.105 (2,5 vaca) 661 (2,4/vaca) 8.726 (2,1/vaca)

Embriones Calidad 3 4.320 (1.7/ vaca) 1.242 (1/ vaca) 204 (0,7/vaca) 5.766 (1,4 /vaca)

UFOS

Pluset ( 333 - 500 UI ) Folltropin ( 200 mg ) Ovagen ( 8.8mg ) total

2480

3.250 (1,3/vaca) 828 (0,7/vaca) 80 (0,3 vaca) 4.158 (1/vaca)

1250

270

4000

Fuente: Chvez Aldemar. Colombia 2000 - 2010

METODOS PARA LA INDUCCION DE UNA NUEVA ONDA FOLICULAR EN BOVINOS

Mtodos hormonales:
Sales de estradiol: E17,B.E, V.E, C.E.

17 estradiol Benzoato de estradiol Valerato de estradiol Cipionato de estradiol

Anlogos GNRH

Mtodos fsicos:
Puncin o ablacin folicular

3 4 5 6 7 8 9 Das post tratamiento

10

PROBLEMTICA DE LAS DONADORAS BRAHMAN PARA T.E EN LOS CAMPOS COLOMBIANOS


Existen vacas ceb de 2, 3, y en ocasiones 4 ondas foliculares. La respuesta no depende de la hormona utilizada, pero si, el xito de la respuesta depende de iniciar la superovulacin, en el momento adecuado. A pesar de los diferentes protocolos usados a travs de los aos, no se observa un aumento significativo en el total de embriones viables por donante (IETS 6 embriones). Alta incidencia de quistes, sobre estimulacin y folculos persistentes al momento de la seleccin de la donadora y al momento del lavado.

Ablacin folicular como alternativa !


(limitante en campo: equipo de aspiracin, transductor convexo)

HIPOTESIS
El uso de la aspiracin folicular como inductor de la onda folicular para iniciar el tratamiento superovulatorio en donadoras de embriones de la raza Brahmn, resulta en similares o mejores resultados de la respuesta superovulatoria.

OBJETIVO
Evaluar la respuesta superovulatoria en donadoras de la raza Brahmn, utilizando la aspiracin folicular como alternativa en la induccin de la onda folicular, frente a un tratamiento convencional, utilizando benzoato de estradiol como inductor de la onda folicular.

Gua de aspiracin con transductor lineal, pie medical

Fuente: Chvez Aldemar. Colombia ,2009

PROTOCOLO TRATAMIENTO TESTIGO


PGF 2mg B.E FSH 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 GnRH IATF

Recoleccin de embriones

P4 CIDR

PROTOCOLO TRATAMIENTO EXPERIMENTAL


PGF OPU FSH 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
P4 CIDR

GnRH IATF

Recoleccin embriones

TRATAMIENTO CONVENCIONAL
B.E PGF2 GnRH

P4 FSH 4 das 2- 12h

DIA 0

DIA 4

DIA 7

DIA 9

TRATAMIENTO ALTERNATIVO

PGF2 P4

GnRH

OPU mm
Quistes FSH 4 das 2- 12h

Dominncia

Seleccion

24-36 horas post OPU 24-

HISTORIAL Y METODOLOGIA DEL TRABAJO

MATERIALES

ANIMALES

EQUIPO DE ULTRASONIDO

TRATAMIENTO DE LAS DONANTES

PROTOCOLOS USADOS EN EL ESTUDIO


DIA
0 - (am) 1 - (am) 1 - (pm) 2 - (am) 2 - (pm) 3 - (am) 3 - (pm) 4 - (am) 4 - (pm) 5 - (am) 5 - (pm) 6 - (am) 6 - (pm) 7 - (am) 7 - (pm) Folltropin 2 ml Folltropin 2 ml Folltropin 1,5 ml Folltropin 1,5 ml Folltropin 1ml + 7 cc lutalyse Folltropin 1 ml + Lutalyse 3 ml retirar dispositivo Folltropin 0,5 ml Folltropin 0,5 ml

Tratamiento testigo
Ultrasonido iniciar solo con CL CIDR + 2mg B.E

Tratamiento experimental
Ultrasonido iniciar solo con CL + OPU folculos 5mm + CIDR Folltropin 2 ml Folltropin 2 ml Folltropin 1,5 ml Folltropin 1,5 ml Folltropin 1ml + 7 cc lutalyse Folltropin 1 ml + Lutalyse 3 ml retirar dispositivo Folltropin 0,5 ml Folltropin 0,5 ml Primera I.A + conceptal 5 cc Segunda I.A Tercera I.A

LAVADO DE LAS DONANTES

CALIFICACION DE LOS EMBRIONES


CALIDAD 1: Excelente, o bueno. El 85% del material celular debe estar intacto dentro de la masa celular.
no hay defectos visibles, blastmeros de color y estructura uniformes y simtricos, ZP intacta.

CALIDAD 2: Regular, Por lo menos el 50% del material celular debe permanecer intacto dentro de la masa embrionaria, irregularidades moderadas del MCI, o del tamao y color de clulas individuales. CALIDAD 3: Malo, Por lo menos el 25% del material celular debe permanecer intacto dentro de la masa embrionaria. irregularidades mayores del MCI, o del tamao, color y densidad de clulas individuales. CALIDAD 4: Degenerados, son embriones de una clula, muertos o no viables, embriones retardados asimtricos de hasta 8 clulas, con tendencia a la desintegracin como vacuolizacin y clara degeneracin
ESTADO DE DESARROLLO EMBRIONARIO N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 ESTADO NO FECUNDADO APARTIR DE 2 CELULAS MORULA TEMPRANA MORULA BLASTOCISTO INICIAL BLASTOCISTO BLASTOCISTO EXPANDIDO BLASTOCISTO ECLOSIONADO BLASTOCISTO ECLOSIONADO EXPANDIDO

RESULTADOS Y DISCUSION
Cantidad de estructuras colectadas durante el estudio para el tratamiento testigo y experimental.
Cantidad

Numero de animales: 20 totales promedio

Tratamiento testigo 235 11,7

Tratamiento experimental 233 11,6

Cantidad de estructuras colectadas durante el estudio, segn su calidad, para el tratamiento testigo y experimental.
Numero de animales: 20 Tratamiento testigo totales Infrtil Degenerado Calidad 1 Calidad 2 Calidad 3 Transferibles * 15 43 93 83 2 176 promedio 0.7 2.1 4.6 4.1 0.1 8.8 Tratamiento experimental totales 7 25 145 56 0 201 promedio 0.6 1.2 7.2 2.8 0 10

ESTADISTICA
Prueba de Kruskal Wallis
Variable Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Calidad Trat Cal 1 exp Cal 1 Tes Cal 2 exp Cal 2 Tes Cal 3 exp Cal 3 Tes Deg exp Deg Tes Inf exp Inf Tes N Medias D.E. Medianas H 20 0,70 0,26 0,72 86,00 20 0,36 0,37 0,30 20 0,20 0,19 0,19 20 0,44 0,35 0,42 20 0,00 0,00 0,00 20 0,01 0,04 0,00 20 0,07 0,12 0,00 20 0,14 0,17 0,09 20 0,03 0,06 0,00 20 0,04 0,07 0,00 p <0,0001
180

Grfico de barras de los rangos medios del anlisisEde varianza


DE CD CD

147

114

ABC

AB 81 AB A A A

Se presentan las comparaciones de a pares de todas las combinaciones.

Trat. Ranks 48 Cal 3:exp 54,50 A Cal3:Tes Inf:Tes Deg:Tes Cal1:Tes Cal1:exp Cal 3:Tes 58,50 A Cal3:exp Inf:exp Deg:exp Cal2:exp Cal2:Tes Inf:exp 65,83 A Inf:Tes 75,53 A B Se observo que hay diferencias significativas Deg:exp 82,05 A B con un p 0,0001 entre las diferentes Deg:Tes 104,53 B C Cal 2:exp 119,25 C D combinaciones de tratamientos y calidades. Cal 1:Tes 128,40 C D Cal 2:Tes 141,63 D E Cal 1:exp 174,80 E Medias con una letra comn no son significativamente diferentes (p<= 0,05)

PORCENTAJES DE VIABILIDAD, SEGN LA CALIDAD DE LOS EMBRIONES Y SUS DIFERENCIAS NUMERICAS Y DE % PARA LOS TRATAMIENTOS TRATAMIENTOS.
N animales
20 Infrtiles Degenerados Calidad 1 Calidad 2 Calidad 3 Transferibles

% Embriones transferibles
Tratamiento testigo 8.5 24.4 52.8 47.1 1.1 74.8 Tratamiento experimental 3.4 12.4 72.1 27.8 0 86.2

Diferencias
Numrica 8 18 52 27 2 25 % 5.1 12 19.3 19.3 1.1 11.4

Los valores numricos y porcentuales, favorecen al tratamiento experimental

CONCLUCIONES
El uso de la ablacin folicular es tan efectiva como el B.E para inducir el crecimiento de una nueva onda folicular. La respuesta superovulatoria en vacas Brahmn resulta ser ms constante, cuando se procede a la remocin fsica de los folculos a 5mm de dimetro, dentro de un periodo de 24 horas antes del inicio de la aplicacin de la FSH. El uso de la ablacin folicular resulta en una mejora de la cantidad y calidad del total de estructuras viables, transferibles colectadas. Se observo a nivel de campo una mejora en la respuesta SPO, en especial en aquellos animales que en su historial reproductivo, presentaban una alta incidencia de quistes foliculares.

VENTAJAS
Al mejorar la calidad de los embriones, se podrn mejorar los porcentajes de preez en programas comerciales de transferencia de embriones. Mejor tasa de aprovechamiento de los embriones de mayor calidad, para realizar programas de cri preservacin y almacenamiento de embriones congelados. Posibilidad de iniciar el tratamiento superovulatorio, 24 horas despus de realizada la ablacin en el periodo de 8 a 12 das post estro, o en cualquier momento del ciclo estral, suministrando una fuente extra de progesterona No se requiere la utilizacin de un transductor convexo para OPU Se puede hacer la ablacin folicular con elementos rudimentarios que permitan remover solo los folculos de mayor tamao palpables, sin la necesidad de ultrasonido.

EQUIPOS RUDIMENTARIOS ABLACION

Fuente: Chvez Aldemar. Colombia ,2009

Fuente : Wagner Marques de lima, universidade federal do rio grande do sul, 2007

RECOMENDACIONES

Seria de mucho beneficio al momento de realizar trabajos similares usar semen de un mismo toro, o por lo menos con una misma vaca en los 2 tratamientos, para eliminar la variabilidad del toro, as como iniciar los dos tratamientos al mismo tiempo, alternando todos los animales en ambos tratamientos.

GRACIAS POR SU ATENCION

RESULTADOS PROTOCOLO ABLACION Vs PROTOCOLO CONVENCIONAL, USANDO HCG COMO INDUCTOR DE OVULACION. OVULACION.

N : 20 animales Embriones viables Embriones calidad 1 % viabilidad Total embriones viables

TESTIGO 10 4.6 72% 199

ABLACION 12 6.8 89% 240

Fuente, Chaves, A. Colombia .2010

Cantidad de estructuras colectadas durante el estudio por animal para el tratamiento testigo y Cantidad experimental.
Numero de animales 5592/3 987/8 75/1 1164/04 125/5 274/21 908/5 753/21 187/5 158/2 35/2 858/23 964/0 470/26 257/4 225/9 268 228 017/3 546/4 total promedio Tratamiento testigo 12 10 13 15 3 3 8 10 38 26 2 18 15 10 10 11 14 4 4 9 235 11,75 Tratamiento experimental 15 8 13 13 4 10 5 22 30 16 8 5 19 13 8 11 12 5 8 8 233 11,65

Cantidad de estructuras colectadas durante el estudio por animal, segn su calidad, para el tratamiento testigo y experimental.
Infrtil Degenerados Calidad 1 Calidad 2 Calidad 3 Transferibles