DETERMINACIN DE HIERRO EN MUESTRAS DE AGUA POR ESPECTROSCOPIA
ULTRAVIOLETA VISIBLE
Zambrano Mara A Cd.: 0739340.Bentez Leidy.L Cd.: 0827773.
Lizcano Jorge Cd.: 0827833. Universidad del valle, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas Santiago de Cali, Noviembre 21 de 2010. _________________________________________________________________________________________
RESUMEN
En esta prctica, por medio de la tcnica de espectroscopia ultravioleta visible, se determin la
cantidad de Hierro en muestras de agua tomadas en diferentes lugares: agua destilada del laboratorio, agua del lago y agua del bao de hombres del segundo piso mediante la realizacin de una curva de calibracin con estndares de Hierro. Para la preparacin de las muestras problema, se tomaron alcuotas de 25 mL de cada muestra y se completaron hasta el enrase de 50 mL con cloruro de hidroxilamina, 1,10 fenantrolina, acetato de sodio y agua. Los estndares y el blanco fueron preparados en condiciones similares. El contenido de hierro encontrado en la muestra de agua destilada fue de (1,40 102 5,67 104 ) , el agua del bao de hombres tiene una concentracin de hierro de (5,08 103 2,06 104 ) y finalmente, el agua del lago contiene (0,020 8,123 104 ) de hierro, siendo sta la nica muestra con cantidades apreciables de hierro. Ninguna de las muestras supera el lmite mximo de hierro permitido en agua potable, el cual es de 0.3 ppm [1]
Palabras claves: Espectroscopia Ultravioleta, Curva de Calibracin, Absorbancia,
Espectrofotometra, Ley de Beer Lambert
1. DATOS, CALCULOS Y Tabla 2. Datos relacionados a las muestras
RESULTADOS problema, medidos a 510 nm
1.1 Curva de calibracin de Estndares Muestra Absorbancia
de Hierro Absorbancia agua 0,041 destilada Tabla 1. Concentracin de los estndares y Absorbancia agua 0,049 bao hombres Absorbancias medidas a 510 nm Absorbancia agua 0,072 del lago Concentracin Hierro (ppm) Absorbancia 1.2 Calculo del contenido de Hierro en las 0,05 0,145 muestras de agua analizadas 0,1 0,201 0,2 0,445 Empleando mnimos cuadrados y con los datos de la tabla 1, se traza la curva de 0,3 0.616 calibracin, graficando la absorbancia 0,4 0,827 registrada para cada estndar de Hierro 0,5 0,925 versus la concentracin. La grfica correspondiente a la curva de [ +2 ] = (1,40 102 5,67 104 )/ calibracin se muestra a continuacin Similarmente se repite este procedimiento para las muestras de agua del lago y del bao de hombres
Concentracin de Hierro en Agua del bao
de hombres:
( 0,038) (0,0536 0,0294)
[+2 ] = (1,8304 0,0970)/
(0,049 0,038) (0,0536 0,0294)
[+2 ] = (1,8304 0,0970)/
[+2 ] = (2,54 103 1,03 104 ) /
Teniendo en cuenta el factor de dilucin, la
concentracin real de hierro en la muestra de Grfica 1. Curva de calibracin de agua de bao de hombres es: Estndares de Hierro (50 0,02) [ +2 ] = (25 0,03) Para la grfica anterior, la ecuacin de la 3 (2,54 10 1,03 104 ) / recta es la siguiente: [ +2 ] = (5,08 103 2,06 104 )/ 0,038 = (1,8304 0,0970)[ +2 ] + (0,0536 0,0294) Concentracin de Hierro en Agua del lago: El coeficiente de correlacin para esta curva ( 0,038) (0,0536 0,0294) de calibracin es de 0.994, lo cual supone [+2 ] = que hay una buena linealidad. (1,8304 0,0970)/
(0,072 0,038) (0,0536 0,0294)
Para calcular la concentracin de Hierro en [+2 ] = agua destilada, se despeja [ +2 ] de la (1,8304 0,0970)/ ecuacin de regresin lineal, y se reemplaza la absorbancia para dicha muestra, de la [+2 ] = (0,01 4,06 104 ) / siguiente manera: Teniendo en cuenta el factor de dilucin, la ( 0,038) (0,0536 0,0294) concentracin real de hierro en la muestra de [+2 ] = agua del lago es: (1,8304 0,0970)/ (50 0,02) (0,041 0,038) (0,0536 0,0294) [ +2 ] = (0,010 4,06 104 ) / +2 [ ] = (25 0,03) (1,8304 0,0970)/ [ +2 ] = (0,020 8,123 104 )/ +2 3 4 [ ] = (6,91 10 2,80 10 ) / La nica muestra con contenido apreciable Teniendo en cuenta el factor de dilucin, la de Hierro, es la correspondiente al agua del concentracin real de hierro en la muestra de lago, puesto que las absorbancias de las agua destilada es: dems muestras no se encuentran en el rango de la curva de calibracin, las cuales (50 0,02) dieron concentraciones negativas. [ +2 ] = (25 0,03) (6,91 103 2,80 104 ) / 1.2 Clculo de las absortividades El valor reportado en la literatura, es de molares para cada estndar 112000 M-1 cm-1 [2], entonces, el porcentaje de error en la determinacin est dado por A partir de las concentraciones de los estndares, es posible calcular las . . absortividades molares que cada estndar % = | | 100% . presenta en el complejo de Hierro con fenantrolina (121986.21 112000)M 1 1 % = | | 100% 112000 M 1 1 La reaccin que ocurre entre el Hierro y la = 8,91% fenantrolina, en forma resumida es Cabe resaltar que el valor 112000 M-1 cm-1 no +2 +2 Fe + 3Fen [Fe(Fen)3] es un referente real, ya que es un valor para darse una idea del coeficiente de absortividad Para el estndar de 0.05 ppm se tiene que: molar del complejo. Puede decirse que el valor obtenido en el desarrollo de esta 0.05 +2 1 +2 prctica difiere del referente, dado que al
1000 +2 estar reportado en la literatura se tom bajo 1 +2 1 ciertos parmetros diferentes a los
55.847 +2 1 +2 empleados (no necesariamente se utiliz el = 8.953 107 mismo equipo ni el mismo rango de la curva de calibracin) La relacin entre absorbancia y concentracin est dada por = donde b 2. RESULTADOS Y DISCUSIN es el camino ptico de la celda, que suele ser de 1 cm, A es la absorbancia, es el La espectrofotometra de ultravioleta visible coeficiente de absortividad molar (en (UV-Vis) se basa principalmente en la unidades de M-1 cm-1) y C es la concentracin absorcin y emisin de luz por parte de las (en trminos de molaridad). Entonces sustancias a analizar, a su vez, esto tiene gran incidencia en la estructura misma de las 0.145 molculas y de los tomos, en su tamao, en = = la forma, la distribucin de los electrones y la 1 8.953 107 flexibilidad de las mismas. = 161956.3 1 1 En este tipo de espectrofotometra, se De igual manera se hace el clculo para las encuentra que uno de los aparatos ms otras soluciones, los resultados se utilizados en la determinacin de las encuentran en la Tabla 3. concentraciones de los analitos en muestras es el espectrofotmetro; el cual es un Tabla 3. Concentracin molar del complejo instrumento que mide la absorcin de las Fe-fenantrolina y absortividades molares para radiaciones electromagnticas, cuyo principio cada solucin estndar, medidas a 510 nm esta basado en la Ley de Beer Lambert, que relaciona la intensidad de luz incidente y de la Concentracin Absorbancia Absortividad luz transmitida cuando esta es atravesada Hierro (M) molar (M-1 por una longitud de onda en un medio que cm-1) absorbe. Dicho instrumento consta de una 8,953 x 10-7 0,145 161956,30 fuente de luz caracterizada por un espectro 1,791 x 10-6 0,201 112252,47 de emisin continuo en un intervalo amplio de 3,581 x 10-6 0,445 124259,58 longitudes de onda (325 nm-1100 nm) y de 5,372 x 10-6 0.616 114672,51 un monocromador que acta como filtro 7,162 x 10-6 0,827 115463,67 ptico transmitiendo un haz de luz de longitud 8,953 x 10-6 0,925 103316,95 de onda fija. Aquel haz penetra en la cubeta Promedio 121986,91 de anlisis donde se encuentra la muestra, finalmente un detector sensible a la luz mide soluciones son incoloras. la intensidad del haz a la salida de la cubeta [3]. Muchos compuestos de tipo orgnico que forman quelatos son altamente coloreados, y La seal obtenida se puede interpretar como esto los hace muy tiles para realizar anlisis la absorbancia de la muestra, la cual se ve es cualitativos; tal es el caso de la 1,10 influenciada por diferentes factores, tales Fenantrolina empleada en la prctica, ya que como la concentracin de la muestra, la al acomplejarse con el Hierro, este ligando intensidad del haz de luz incidente y el orgnico exhibe una coloracin rojiza muy camino ptico de dicho haz. Un esquema de intensa. La figura 2 muestra la estructura de un espectrofotmetro de UV Vis puede la 1,10 Fenantrolina, compuesto empleado apreciarse en la figura 1. tanto en la preparacin de estndares como de muestras a analizar
Figura 2. Estructura de 1,10-Fenantrolina.
Se debe tener presente que el Hierro
Figura 1. Esquema sencillo de un presente en el complejo con Fenantrolina se espectrofotmetro de UV-VIS encuentra en forma de Fe+2. Este estado de oxidacin es inestable, y por lo general tiende Dependiendo del tipo de muestra a analizar, a cambiar muy rpidamente, oxidndose se establece si esta o no absorbe. progresivamente hasta llegar a Fe+3 que es Normalmente, la mayora de compuestos un estado de oxidacin mucho mas estable. conocidos suelen absorber en la regin UV- Vis, puesto que emiten algn tipo de color, o La poca estabilidad del Hierro (II) supone un por que los grupos funcionales en la problema en la determinacin a realizar en estructura permiten que haya lugar a una las muestras de agua y en los estndares, es absorcin, sin embargo, las muestras de los por eso que se adiciona un agente reductor, metales no son capaces de absorber por si en este caso es el cloruro de Hidroxilamina, solas en el ultravioleta visible. este reactivo es quin proporciona el menor estado de oxidacin para el Hierro, En el caso de muestras en donde se tengan reduciendo los iones frricos (Fe+3) que se metales, su determinacin requiere que se lleguen a formar, hasta iones ferrosos (Fe+2) lleve a cabo previamente una reaccin segn la siguiente reaccin. qumica especfica que varia segn el analito a determinar (los metales suelen 2 3 + + +3 +2 + 2 + 22 + 4 + acomplejarse con sustancias o grupos (Reaccin 1) orgnicos que absorben en dicha regin del espectro). Entonces, son los productos En resumen, el cloruro de hidroxilamina hace finales de esta reaccin los que se cuantifican que todo el Hierro presente en la muestra utilizando la lectura de la absorbancia de la pase de Fe+3 a Fe+2. muestra, as como la de los estndares a emplear. Por otro lado, es posible que las soluciones Respecto a la medicin de los estndares de acuosas de hierro liberen iones H+ tras la Hierro, hay que sealar que como se dijo formacin de hidrxido de Hierro (II) segn la antes, estos no absorben en la regin del reaccin siguiente espectro visible, debido a que esas +2 + 22 ()2 + 2 + presentara el hierro en la regin visible, la (Reaccin 2) cual result siendo de 510 nm. Esto se debe hacer ya que la longitud de onda es Esos iones pueden incluso ser liberados tras determinante al momento de interpretar la el uso del cloruro de hidroxilamina, tal como absorbancia entregada por cada estndar y se muestra en la ecuacin 1. Los iones por las muestras analizadas. Se debe tener hidronio pueden interferir durante las en cuenta que si bien la ley de Beer Lambert mediciones, es por ello que se emplea no involucra a la longitud de onda dentro de acetato de sodio, para as neutralizar los los clculos o en las frmulas para calcular iones liberados por el cloruro de absorbancia, su eleccin incide fuertemente hidroxilamina, un segundo uso del acetato es sobre el valor de la seal medida, pudiendo para que ste reaccione con los iones inducir o no a errores durante la Frricos (Fe+3) que no alcanzaron a ser determinacin, como falsas seales. reducidos por el cloruro de hidroxilamina. Otra probable razn para el uso del acetato, Hay que destacar que la absorcin del es para que acte como regulador de pH en complejo de Hierro tambin tiene que ver con el medio, ya que al reaccionar con los iones la teora del campo ligando, que se refiere al hidronio, tender a formar cido actico, que llenado de los orbitales d disponibles en el en conjunto con el acetato de sodio forma Hierro por parte del ligando, que es la una especie de buffer, entonces, es posible Fenantrolina. que el complejo de Hierro con Fenantrolina haya de requerir un pH adecuado para poder El Hierro metlico posee una configuracin formarse. Sin embargo, nunca se comprob electrnica [Ar] 4s2 3d6. Cuando se oxida a si el pH tena o no que ver con la formacin y Hierro (II), la configuracin pasa a ser [Ar] estabilidad del complejo. 4s03 d6 debido a la prdida de dos electrones en el orbital 4s. Entonces, los pares de Respecto al blanco empleado en las electrones libres presentes en los tomos de determinaciones, este debe estar sometido a nitrgeno de la Fenantrolina pasan a ocupar las mismas condiciones en que se el ahora vaco orbital 4s, tambin pasaran a encuentran los estndares y las muestras a ocupar dos de los orbitales 3d de mas alta analizar, por esa razn el blanco lleva el energa y los tres orbitales 4p mas cercanos, acomplejante (1,10 Fenantrolina), el agente formando un complejo octadrico con reductor (cloruro de hidroxilamina) y el agente hibridacin sp3d2. El complejo de hierro con neutralizante (acetato de sodio). Con la fenantrolina se muestra a continuacin utilizacin del blanco, se asegura que la absorbancia medida en el instrumento provenga netamente del hierro y no de los compuestos mencionados, ya que ellos poseen grupos funcionales que los hacen absorbentes en aquella regin del espectro visible. En ltima instancia, la correccin con el blanco se hizo con el fin de evitar un error en las concentraciones de Hierro de las muestras problema.
Para que los complejos de hierro con
fenantrolina puedan absorber en la regin Figura 3. Complejo de Hierro y 1,10 visible y exhibir una seal, se realiz un fenantrolina. Este complejo se conoce como barrido inicial de longitudes de onda, desde Ferroina [4] 400 hasta 600 nm con la solucin madre, de concentracin 5 ppm de Fe+2, con esta Este complejo formado, es el que posibilita la medicin lo que se buscaba era encontrar la absorcin del Hierro, para poder realizar su longitud de onda de mxima absorcin que determinacin en las muestras y estndares, tambin cabe destacar que a la longitud de Entre las posibles desviaciones de dicha ley, onda de mxima absorcin (510 nm) se se encuentran las relacionadas a la concen- genera una energa de transicin. Esta es tracin, al instrumento y a posibles interac- atribuida a los orbitales 3d del ion ferroso en ciones qumicas [6] el complejo; y a la vez esa energa es la que da la mayor excitacin de esos electrones y A concentraciones altas (generalmente mayo- la que posibilita la fuerte absorcin y por res que 0,01 M), la distancia promedio entre ende, la coloracin que se observ en el las especies responsables de la absorcin complejo. est disminuida hasta el punto que cada una afecta la distribucin de cargas de sus veci- Adems de la energa de transicin, el nas. Esta interaccin, a su vez, puede alterar complejo tambin le debe su coloracin a la la habilidad de las especies para absorber en deslocalizacin de sus electrones , en los una longitud de onda de radiacin. Debido a que hay dos nitrgenos, cada uno de ellos que la extensin de la interaccin depende de trae consigo un par de electrones la concentracin, la ocurrencia de este fen- desapareados los cuales son los encargados meno provoca desviaciones de la relacin de formar un enlace covalente con el Hierro lineal entre absorbancia y concentracin. (II). La resonancia existente en los anillos de benceno tambin ayuda a la fuerte absorcin Cabe destacar que en las determinaciones presentada por la deslocalizacin de los desarrolladas no se trabaj a concentracio- electrones . nes tan altas, dado que la solucin madre se encontraba a una concentracin de 5 ppm y Una particularidad que presentaron las el rango de la curva se localiz entre 0.05 a muestras, es que deba esperarse 0.5 ppm. aproximadamente 15 minutos antes de iniciar las mediciones en el equipo, esto se En cuanto a las muestras de agua, puede debe a que posiblemente los iones Ferrosos decirse que las absorbancias medidas de presentes en el agua, reaccionan lentamente cada una de ellas no alcanzaron a ingresan a con la Fenantrolina, y que con el paso del la curva de calibracin, pues el menor tiempo la coloracin se haca mas intensa estndar report una absorbancia de 0.145, Respecto a la curva de calibracin de los el agua destilada registr una absorbancia de estndares de hierro, esta se realiz a la 0,041, el agua del bao, de 0,049, y longitud de onda de mxima absorcin, la finalmente, el agua del lago, de 0,072. Debido cual es de 510 nm, correlacionando las a esto, las concentraciones reportadas para absorbancias medidas, respecto de la las muestras de agua destilada y del bao de concentracin de los estndares. Es de hombres exhiben concentraciones negativas suponerse que la determinacin realizada (ver seccin Clculos), mientras que la verifique el cumplimiento de la ley de Beer muestra de agua del lago si posee un Lambert, que supone que la relacin entre la contenido apreciable de hierro, equivalente a absorbancia y la concentracin debe ser (0,020 8,123 104 ) . directamente proporcional, evidenciada en una recta con corte en el eje x (a intercepto El lmite establecido segn la norma cero). [5] colombiana de agua potable es de 0.3 ppm expresado como Hierro [1], entonces, el Sin embargo, al observar la Grfica 1 y la porcentaje de error se encuentra dado por: ecuacin de la lnea recta (ver seccin Clculos), se evidencia que el corte del origen de la recta no es exactamente en cero, . . dado que el intercepto es 0.0536, lo cual % = | | 100% . comprueba que la ley de Beer Lambert en este tipo de anlisis tiene posibles (0.02 0.3) desviaciones. % = | | 100% 0.3 = 93,33% El hecho de que este porcentaje de error sea el centro de la curva es que en ese punto la alto no implica necesariamente que la precisin de la determinacin es mucho determinacin haya sido mal realizada, mejor, dado que all hay un intervalo de puesto que se est dando cumplimiento al confianza mucho mas estrecho. Ocurre lo estndar regulatorio de la calidad del agua, contrario en el mtodo de adicin de ya que la concentracin de hierro encontrada estndar, donde hay menos precisin, ya que es muy inferior a la permitida. Entonces, se el punto que se interpola est alejado del puede decir que el agua destilada y el agua centroide de la curva y por ende, en ese del bao de hombres no contienen punto, el intervalo de confianza es mucho cantidades apreciables de hierro, dado que mas amplio exhiben concentraciones negativas Qu son efectos de matriz, y en caso de Finalmente, en cuanto a las desviaciones y que se presenten, como se podran errores relacionados con el instrumento se corregir? encuentran las relacionadas con el ruido instrumental [7]. Las principales fuentes de R/ Un efecto de matriz es una interferencia ruido instrumental asociados a dispositivos causada por diferencias entre la muestra y un elctricos o electrnicos son: estndar que contiene nicamente el elemento a ser determinado. Estos efectos se - Ruido trmico: originado por el movimiento presentan principalmente en matrices trmico de los electrones en las resistencias orgnicas, debido a que en dichas matrices el u otros elementos resistivos de un circuito analito es difcil de extraer, por lo tanto se elctrico. debe introducir la matriz entera y como esta - Ruido de disparo o de golpeteo: tiene origen suele presentar otros compuestos cada vez que una corriente transfiere (aminocidos, protenas, grasas, etc), estos electrones u otras partculas cargadas a pueden arrojar una falsa lectura de la travs de uniones o cuando los portadores de muestra. carga atraviesan las uniones n-p, o llegan a la superficie de los electrodos. Dichos efectos se pueden corregir - Ruido de parpadeo o fluctuacin: Su preparando estndares de calibracin que magnitud es inversamente proporcional a la sean idnticos a la muestra problema en frecuencia de la seal observada. Su todos los aspectos, excepto en la magnitud es importante para frecuencias concentracin del analito (mtodo de menores que 100 Hz. estndar con ajuste de matriz), otra manera . de corregir, es preparar estndares de El ruido instrumental se mide por la calibracin que contengan la propia muestra desviacin estndar de la seal producida por en una proporcin fija y conocida (mtodo de los blancos, razn por la que este parmetro adicin de estndar) aparece en la determinacin del lmite de deteccin Cul es la importancia del camino ptico en los anlisis? PREGUNTAS R/ La importancia del camino ptico, es que Por qu la absorbancia de la solucin de este define la manera en como el haz de luz la muestra problema debe caer en la mitad atraviesa la celda de anlisis de la curva de calibracin?
R/ El intervalo de confianza se estrecha cada
vez mas a medida que un punto experimental se acerca al centro de la curva de calibracin y ensancha cada vez mas a medida que se aleja del centro, de lo que se concluye que la razn por la cual la absorbancia debe caer en tienen su fundamento en las interacciones de las radiaciones electromagnticas sobre la materia.
El uso de estndares es de gran
importancia en determinaciones analticas que requieran curvas de calibracin, ya que los compuestos considerados para este fin deben tener afinidad qumica con la muestra. As mismo, el blanco tambin tiene importancia en la determinacin, ya Figura 4. Representacin del Camino ptico que si este no se emplea ni se prepara a I0 es el haz incidente y I1 la intensidad de las mismas condiciones de las muestras y salida. de los estndares, podra ser el causante de falsas seales durante las mediciones. Si el camino ptico es demasiado grande, En la construccin de la curva de entonces le tomar mas tiempo al haz de luz calibracin se realiz el anlisis a la atravesar toda la celda mientras que si este longitud de onda de mxima absorcin, es es mas corto (generalmente 1 cm) el haz no decir 510 nm, debido a que esto mejora la tendr gran dificultad en atravesarla. Dado sensibilidad y minimizara posibles errores que la absorbancia aumenta linealmente con durante la determinacin de hierro en las la concentracin y el camino ptico, puede muestras. deducirse que si dicho parmetro disminuye, la absorbancia tambin tiende a disminuir, En los anlisis por espectrofotometra se ocurre lo contrario con la absorbancia en evidencia el no cumplimiento de la ley de caso de que el camino ptico aumente Beer Lambert, debido a desviaciones relacionadas con la concentracin, el Cul es la finalidad del acetato de sodio instrumento y respecto a interacciones en los anlisis? qumicas que se pudieron presentar.
Ver seccin Discusin De todas las muestras analizadas, la nica
que presentaba contenido de hierro era la Cul es la finalidad del cloruro de del agua del lago, sin embargo, el hecho hidroxilamina en los anlisis? de que el valor obtenido, el cual fue de 0.02 ppm difiera del valor establecido de Ver seccin Discusin hierro en agua (0.3 ppm) no es un indicativo de que la determinacin haya CONCLUSIONES sido completamente errnea, al contrario, es posible afirmar que el contenido de Se comprendi la importancia y el uso hierro en agua es aceptable. de la espectroscopa ultravioleta visible como tcnica de anlisis, se reconoci su utilidad Es posible determinar si existen o no en cuanto a la identificacin y cuantificacin efectos de matriz, siempre y cuando se de Hierro en muestras problema como las compare el mtodo de curva de analizadas en esta prctica. As mismo, se calibracin respecto a otro mtodo, como reconoci el funcionamiento de los el de adicin de estndar instrumentos que componen al equipo. Es deseable que en todo anlisis por Se comprendi que el principio de los curvas de calibracin, las seales mtodos colorimtricos es el de medir referentes a las muestras se localicen en energa radiante, ya sea emitida, absorbida o el centro de la curva y no en los extremos, reflejada. Estas medidas se determinan a pues en el centro de la curva hay un travs de tcnicas fotomtricas, las cuales menor lmite de confianza, La determinacin de hierro pudo realizarse mejor si se hubiesen empleado estndares Revisado Noviembre 20 de 2010 de concentraciones mas bajas, para albergar las absorbancias presentadas por [3] Teoria de la espectrofotometria de las muestras de agua, tanto destilada, ultravioleta visible en: como del bao de hombres. A mayor nmero de puntos en la curva, habrn http://ww.fq.uh.cu/dpto/docencia/pregrado/est mejores intervalos de confianza ruc_2/uv/descargas/uv_1.pdf
Revisado Noviembre 21 de 2010
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