Microbiologa y Laboratorio

Universidad ECCI
Taller de laboratorio No 1.
1) Indique como preparara las siguientes soluciones y medios de cultivo
a) 10 tubos de 9,9 mL de agua peptonada 0,1% p/v.
b) 9 frascos de 90 mL de NaCl 0, 85%p/v
c) 16 cajas grandes de agar ENDO
d) 12 cajas pequeas de agar nutritivo
e) 1500 mL de glucosa 5M
f) 300 mL de NaOH 1N
g) 500 mL de H2SO4 0,1N
Tenga en cuenta la pureza y densidad de estos reactivos.
2) Con respecto a los diluyentes:
a) Que caractersticas debe tener una solucin para ser empleada como diluyente
b) Explique por qu el agua peptonada puede ser empleada como diluyente en
microbiologa?
c) Mencione otros diluyentes que se empleen en microbiologa

3) En los laboratorios de microbiologa se emplean diferentes mecanismos para

eliminar los agentes contaminantes
a) Explique en que consiste el proceso de limpieza, desinfeccin y esterilizacin.
b) En el siguiente cuadro indique porque mtodo esterilizan o desinfectan los
siguientes materiales
Material Mtodo Fundamento del mtodo
Medios de cultivo
Solucin de Glucosa
Cajas de Petri
Solucin de Glucosa
Mesn del laboratorio
Embudos de polipropileno
 a) Que caractersticas debe tener una solucin para ser empleada como diluyente
RTA:
Pueden ser slidos, lquidos o gaseosos. Normalmente slo se consideran como tales a
los que en condiciones normales de presin y temperatura se presentan en estado
lquido.
En los disolventes lquidos distinguimos:
Acuosos: usados para disolver sustancias polares. Sus propiedades fsicas son las
mismas del H2O y las qumicas dependen de las sustancias que contengan.
Orgnicos: sustancias qumicas o mezcla de las mismas, que son capaces de disolver
sustancias no hidrosolubles y que por sus propiedades disolventes tienen mltiples
aplicaciones en diversas tecnologas industriales-laborables. Los incluidos en este grupo
son los considerados propiamente como disolventes.

Los disolventes industriales presentan las siguientes caractersticas principales:

-Son compuestos lquidos y de peso molecular ligero.
-Son sustancias poco polares, y por tanto escasamente miscibles en agua, que
manifiestan una gran lipofilia.
-Poseen gran volatilidad, por lo que presentan una alta presin de vapor, pudiendo pasar
fcilmente a la atmsfera en forma de vapor durante su manejo y por ello susceptibles de
ser inhalados fcilmente.
-Tienen unos puntos de ebullicin relativamente bajos.
-En general son mezclas de varios compuestos qumicos mayoritarios acompaados de
trazos de otros.
-Su composicin puede variar con el tiempo, dada su volatilidad y elevada presin de
vapor y por el hecho de que se contaminan con el uso.
-Uso muy amplio y diverso.
B) Explique por qu el agua peptonada puede ser empleada como diluyente en
microbiologa?
RTA: Puede ser empleada ya que maneja sistemas importantes para la identificacin
de microrganismos, es observar su crecimientos en sustancias alimenticias
superficiales, el agua peptonada es usada como diluyente para enriquecimiento
bacteriano.
c) Mencione otros diluyentes que se empleen en microbiologa
RTA:
Fluidos corporales
. Sangre completa, plasma, o suero sanguneo son frecuentemente aadidos a los medios
empleados para el cultivo de algunos patgenos.
 Carbohidratos:
Llamados comnmente azcares, se utilizan para enriquecer medios, para promover el
crecimiento o la pigmentacin y para determinar si los organismos pueden producir cido
y gas a partir de ellos.

Sistemas amortiguadores:
Algunos componentes son incorporados al medio de cultivo para mantener el pH dentro
del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Los microorganismos ms comunes son
neutrfilos (el pH ptimo para su crecimiento est prximo a la neutralidad), y sales como
fosfatos bisdicos o bipotsicos, o sustanciascomo las peptonas, previenen una
desviacin de pH.

Indicadores de pH
Indicadores cido-base se aaden a menudo a los medios de cultivo con objeto de
detectar variaciones de pH.

Agentes reductores
Se aaden para crear condiciones que permitan el desarrollo de grmenes anaerobios.

Agentes selectivos
La adicin de determinadas sustancias al medio de cultivo puede convertirlo en selectivo.
Por ejemplo, cristal violeta, sales biliares, azida sdica, antibiticos, etc., a la
concentracin adecuada, actan como agentes selectivos frente a determinados
microorganismos.

3) En los laboratorios de microbiologa se emplean diferentes mecanismos para

eliminar los agentes contaminantes
a) Explique en que consiste el proceso de limpieza, desinfeccin y esterilizacin.

Rta: LIMPIEZA: Es la remocin de todos los materiales extraos (detritus, sangre,

protenas, etc.) que se adhieren a los diferentes objetos. Se realiza con agua, detergentes
y productos enzimticos. Este proceso puede reducir en 3-4 logaritmos la contaminacin
microbiana inicial y es el paso previo a cualquier proceso de desinfeccin y/o
esterilizacin. Si el instrumental no est limpio los procesos de desinfeccin y
esterilizacin no sern totalmente eficaces, ya que la suciedad no permitir el contacto del
agente con la superficie y actuar protegiendo a las bacterias.

DESINFECCIN: Este proceso reduce en 3 a 5 log. la contaminacin microbiana inicial.

Produce la destruccin de agentes infecciosos o contaminantes presentes en objetos y
ambientes. Asegura la eliminacin de formas vegetativas pero no de esporas bacterianas.
Posee una seguridad de 1 en 1000.

ESTERILIZACIN: Proceso validado usado para obtener un producto libre de todo

microorganismo en estado latente o activo, causante de enfermedades o infecciones. La
esterilidad es una nocin relativa, reduce 6 log. La contaminacin microbiana inicial con
probabilidad de encontrar 1 microrganismo en 1.000.000. Se debe mantener este estado
hasta su utilizacin.