UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL

Facultad Regional Villa Mara

BIOTECNOLOGA

UNIDAD 3. NUTRICIN MICROBIANA

Para crecer los microorganismos deben tomar del ambiente todas las sustancias
necesarias para la sntesis de
sus materiales celulares y para
la generacin de energa. Estas
sustancias se denominan
nutrientes. El proceso por el
cual una clula se construye a
partir de nutrientes simples
tomados del exterior se
denomina anabolismo. Debido
a que el anabolismo da como
resultado la biosntesis
bioqumica de nuevo material
celular, se lo suele denominar
biosntesis. La biosntesis es un
proceso que requiere energa y por consiguiente la clula debe generarla. Al conjunto
de reacciones bioqumicas que conducen a la produccin de energa utilizable (como
ATP), se denominan catabolismo.

Los nutrientes segn el destino se los clasifica en:

Alimentos Constitutivos: suministran los elementos necesarios para la sntesis de
constituyentes celulares.
Segn la proporcin en que intervengan se los clasifica en:

Macronutrientes: C, H, O, H, S, P, Mg, K

Micronutrientes: Fe, Zn, Cu, Co, etc.

Alimentos Energticos: su degradacin provee la energa necesaria para la

sntesis de constituyentes celulares.

De acuerdo a su forma de utilizacin, se clasifican en:

Fototrofos (foto: luz; trofo: alimentarse) o Fotosintticos: utilizan la luz como

fuente de energa.

Quimiorgantrofo: utilizan compuestos orgnicos como fuente de energa.

Quimiolittrofos: utilizan compuestos inorgnicos (minerales) como fuente de

energa.

1 Ing. Jos M. Reynoso

 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

Alimentos especficos: algunos compuestos no pueden sintetizarse, sino que se

deben hallar preformados. Se los denomina factores de crecimiento (aminocidos,
bases purnicas, pirimidnicas y vitaminas).

Composicin qumica de una clula

Las clulas contienen grandes cantidades de pequeas molculas, as como de

macromolculas. La clula puede obtener la mayora de las pequeas molculas que
necesita del exterior o sintetizarlas a partir de molculas ms sencillas. Las
macromolculas, por el contrario, siempre son sintetizadas por la clula. Aunque hay
numerosos elementos, la totalidad de la masa celular est formada por cuatro tipos de
tomos: carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno. Otros elementos menos abundantes
que los anteriores pero igualmente importantes son: K, P, Mg, Ca, S, Fe, Zn, Mn, Cu.

El agua representa el 80-90 % del peso total de la clula.

En la tabla 1 se muestra la composicin elemental aproximada de la clula

microbiana.

2 Ing. Jos M. Reynoso

 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

Tabla 1: composicin qumica elemental de la clula

Elemento Porcentaje del Funciones fisiolgicas
Peso seco
Carbono 50 Constituyente del material celular
orgnico.
Oxgeno 20 Aceptor de electrones, constituyente
del agua y compuestos orgnicos
Nitrgeno 14 Constituyente de protenas, cidos
nucleicos, coenzimas.
Hidrgeno 8 Constituyente del agua y de
compuestos orgnicos
Fsforo 3 Constituyente de fosfolpidos, cidos
nucleicos y coenzimas.
Azufre 1 Constituyente de aminocidos y
coenzimas
Potasio 1 Cofactor de enzimas
Sodio 1 Asociado a la presin osmtica.
Calcio 0.5 Estabilizador de la pared celular
Magnesio 0.5 Cofactor de reacciones enzimticas.
Cloro 0.5
Hierro 0.2 Componente de los citocromos
Todos los 0.3
dems

Factores de crecimiento

Los factores de crecimiento son molculas orgnicas especficas que, en muy

pequea cantidad, algunas bacterias necesitan para crecer. Salvo excepciones no
tienen funcin plstica (no son sillares de macromolculas) ni sirven como fuente de
energa. Suelen ser coenzimas o sus precursores, vitaminas, que determinadas
bacterias no pueden fabricar por s mismas, al carecer de parte o toda de una ruta
biosinttica.

Ejemplos:
Las bacterias del gnero Brucella requieren como factores de crecimiento
en sus medios de cultivo la biotina, niacina, tiamina y cido pantotnico.
Haemophilus necesita suplementos de grupos hemo y piridn-nucletidos.

3 Ing. Jos M. Reynoso

 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

En la siguiente tabla se muestran algunas de las vitaminas y cofactores

requeridos por algunas bacterias:

Factor o vitamina Funciones principales

p-aminobenzoico (PABA)
Acido flico
Biotina
Cobalamina (vitamina B12)
Niacina (cido nicotnico)
Riboflavina
cido pantotnico
Tiamina (vitamina B1)
Complejo B6 (piridoxal,
piridoxamina)
Grupo Vitamina K, quinonas
Precursor del cido flico
Metabolismo de compuestos C1, transferencia
de grupos metilo.
Biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO 2
Reduccin y transferencia de compuestos C1;
sntesis de desoxirribosa
Precursor del NAD; transferencia de
electrones en reacciones redox
Precursor de FAD y FMN
Precursor de la CoA
Descarboxilaciones; transcetolasas.
Transformaciones de aminocidos y
cetocidos
Transportadores de electrones (ubiquinonas,
menaquinonas, etc.)

Estequiometra Global de Crecimiento:

El crecimiento en trminos estrictamente macroscpicos, requiere que el

ambiente celular contenga los elementos necesarios para formar biomasa, como as
tambin que la energa libre de los sustratos consumidos exceda la energa libre de las
clulas y los productos.
Los compuestos suministrados como nutrientes deben ser compatibles con la
maquinaria metablica de la clula.

4 Ing. Jos M. Reynoso

 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

Una visin macroscpica del crecimiento sera como el descrito en la siguiente

figura:

Clulas (X)
Sustratos
(S)1
Cantidad fija de
Material celular

(S)2 Productos (Pi)

Las restricciones ms simples en la formulacin de un medio seran las

siguientes: si queremos que la biomasa alcance un valor X, y si adems las clulas
contienen una cantidad wi (fraccin en peso del elemento i), luego los sustratos deben
proveer como mnimo wi(X) de todos los nutrientes. Generalmente, este clculo es
ms convenientemente hecho en base al peso seco de la clula. Para estos clculos,
se dispone de tablas que aportan la composicin qumica porcentual de las diferentes
bacterias y levaduras. En general la composicin qumica promedio de las bacterias
tiene la siguiente forma: CH 1.666N0.20O0.27 de peso frmula: 20.7 y composicin
porcentual: C:53 %; N:12 %; H: 8%; O:19% y cenizas: 8%.

La formulacin de medios se complica por varias razones:

Algunos sustratos se liberan como productos y no se asimilan como material

celular.
Deben considerarse tanto las limitaciones cinticas como estequiomtricas
Nutrientes especficos pueden ser los limitantes o productos especficos
pueden ser inhibitorios, debido a las propiedades metablicas particulares
para el microorganismo.

El nmero de nutrientes es muy grande para considerarlos a todos, por lo tanto la

descripcin del sistema se hace basndose en componentes claves, componentes o
elementos limitantes. Podemos encontrar componentes limitantes
estequiomtricamente, es decir que el crecimiento contina hasta que algn nutriente
se agota. Otro tipo de componente limitante puede identificarse basndose en el efecto
que la composicin del medio ejerce sobre la velocidad de crecimiento celular. El
componente limitante a la velocidad de crecimiento puede identificarse para una
cepa en particular y ambiente determinado (T, pH, conocimiento de los nutrientes,
etc). Suponemos que las clulas estn creciendo en un medio dado, en las condiciones
antes prescriptas. Si la concentracin de un componente en particular del medio se
incrementa sbitamente, se incrementar la velocidad de la misma forma?. A menudo
el medio de crecimiento se disea para que un simple componente sea el limitante; el
cambio en la concentracin de los restantes no alterar la velocidad de crecimiento de
las clulas. El componente que limita la velocidad de crecimiento puede no ser el
mismo que limita desde el punto de vista estequiomtrico.

5 Ing. Jos M. Reynoso

 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

Para los sistemas que se analizarn, consideraremos el limitante

estequiomtrico.
Se ha observado que la cantidad de masa celular formada por clulas en
crecimiento es proporcional a la masa de sustrato utilizada (casi siempre fuente de
carbono y energa, u oxgeno).

El factor de rendimiento (YX/S), es la relacin definida como

( X)
YX / S
( S)

El coeficiente puede expresarse en masa o moles para el sustrato y la biomasa.

Si consideramos diferentes sustratos Si en el medio, se definen diferentes coeficientes
de rendimiento YX/Si .
Si el factor de rendimiento es aproximadamente constante para una clula
cultivada en un medio particular, el conocimiento del mismo es de gran utilidad para
determinar los cambios que se producirn en la biomasa al modificar el sustrato. No
hay garanta acerca de la constancia del factor de rendimiento. Variaciones con
respecto a la velocidad de crecimiento son comnmente observadas. Esto puede
explicarse reconociendo que el sustrato puede cubrir diferentes necesidades:
asimilacin en la masa celular; provisin de energa para la sntesis de clulas y
provisin de energa de mantenimiento. El mantenimiento incluye la energa para el
transporte activo de iones y otras especies y las sntesis de reemplazo de
constituyentes celulares. El mantenimiento se refiere a la coleccin de requerimientos
energticos de las clulas para sobrevivir o preservar a la clula en cierto estado, pero
no est relacionado con la sntesis de ms clulas.
Para los quimiohetertrofos, un simple sustrato sirve tanto de fuente carbonada
como de energa, y la utilizacin total del sustrato puede ser escrita como:

(S)= (S)asimilacin + (S)energa de crecimiento + (S)energa de mantenimiento

Dividiendo la ecuacin anterior por (X), se obtiene

1 ( S)asimilacin ( S)energacrecimiento ( S)energamantenimiento

YX / S ( X) ( X) ( X)

Mientras el verdadero factor de rendimiento del crecimiento (X)/(S)asimilacin es

relativamente constante, definido estequiomtricamente, el coeficiente de rendimiento
global no lo es. La distribucin del sustrato en los tres componentes es variable. Una
poblacin en crecimiento rpido usa ms sustrato para asimilacin y energa, mientras
una poblacin en fase estacionaria consume sustrato para mantenimiento, sin consumo
para crecimiento.
Es comn expresar la ecuacin anterior de la siguiente forma:

6 Ing. Jos M. Reynoso

 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

1 1 mS

( YX / S )exp o medido ( Y' X / S )terico

siendo mS el coeficiente de mantenimiento y se utiliza para describir la velocidad

especfica de consumo de sustrato para el mantenimiento y la expresin para el clculo
es la siguente:
dS
dt
m
mS :
X

En el ao 1965 Pirt introdujo el concepto de coeficiente de mantenimiento. A

pesar de la naturaleza emprica de este concepto, se pueden listar varios procesos
involucrados en la energa de mantenimiento:
a) Mantenimiento de los gradientes y potencial elctrico: gradiente de
protones a travs de la membrana. Este proceso requiere energa y en
consecuencia sustrato, pero no se produce biomasa.
b) Ciclos de corta vida: en el interior de la clula hay pares de reacciones
las que resultan de una degradacin neta de ATP.
c) Regeneracin de macromolculas: muchas molculas por ejemplo mRNA
son degradadas y sintetizadas continuamente en el interior de la clula.

MEDIOS DE CULTIVO

El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en

el laboratorio. Como acabamos de ver, en general, todos los microorganismos tienen
parecidos requerimientos de macro- y micronutrientes, aunque ha quedado claro que la
forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y
otras, as como la cantidad relativa de cada nutriente.

Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un
coloide en estado de gel) en la que estn presentes todas las sustancias necesarias
para el crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). Los medios de cultivo
se pueden clasificar, en primera instancia, en tres grandes tipos:

Materias Primas empleadas en los Medios de cultivo

Las materias primas ms importantes corresponden a la fuente de carbono y de

nitrgeno.
Las fuentes de carbono pueden ser:
Hidratos de carbono como la glucosa, lactosa, sacarosa, almidn, dextrinas.
Alcoholes como el glicerol y el manitol
Hidrocarburos como hexadecano, octadecano y otros.
7 Ing. Jos M. Reynoso
 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

Es una prctica comn, emplear polisacridos como fuente de carbono en los

procesos fermentativos industriales. El polisacrido ms disponible es el almidn
obtenido de los granos de maz. Tambin se obtiene de otros cereales y de la papa.
El almidn puede separarse en las dos fracciones ms importantes con agua
caliente. El componente insoluble (10 al 25 %) es la amilosa, en tanto que el
componente soluble es (75 al 90 %) es la amilopectina. La amilopectina, es amilosa
altamente ramificada mediante enlaces (1----6) glucosdicos.

La amilosa y la amilopectina pueden ser degradadas por las y amilasas. La -

amilasa, es una endoglucosidasa, pues hidroliza los enlaces (1---4) de la amilosa y
amilopectina al azar. La -amilasa, es un exoglucosidasa, ya que libera unidades de
maltosa sucesivamente desde los extremos no reductores finales de la cadena.
Ninguna de las dos enzimas antes mencionadas pueden hidrolizar los enlaces (1---6)
de los puntos de ramificacin, los que son degradados por las enzimas
desrramificadoras. Finalmente, otra enzima, amiloglucosidasa (tambin denominada
glucoamilasa), libera glucosa desde los extremos no reductores de la cadena. El jarabe
de maz, un subproducto de la extraccin del almidn de maz, es empleado
principalmente como fuente de nitrgeno, no obstante contiene cido lctico, pequeas
cantidades de azcares reductores y polisacridos complejos.
Dentro de los disacridos, la sacarosa se obtiene de la caa o remolacha
azucarera. Es comn emplear en los medios de fermentacin, melazas las cuales son
los residuos que quedan despus de la cristalizacin en el proceso de azcar refinada.
El costo de las melazas compite con los azcares refinados, no obstante en algunos
procesos no puede emplearse la melaza pues dificulta los procesos de extraccin y
purificacin de los productos. La sacarosa es un disacrido no reductor, ya que el
grupo aldehdo de la glucosa se une al grupo cetona de la fructosa.

La lactosa, es el azcar presente en la leche, es un dmero de la galactosa y

glucosa. Es un disacrido reductor. La maltosa, es la unidad repetitiva en el almidn y
la hidrlisis de la misma da dos molculas de glucosa. La celobiosa, es un
esteroismero de la maltosa y se obtiene por hidrlisis de la celulosa. La maltosa y
celobiosa son disacridos redutores.

Precauciones en el uso de carbohidratos: el calentamiento de las soluciones de

carbohidratos puede causar la hidrlisis de los azcares complejos o la formacin de
productos de oxidacin. Las soluciones concentradas son susceptibles a
descomponerse cuando son calentadas. La descomposicin es mayor cuando el pH es
superior a 7. La solucin de glucosa es estable cuando se autoclava tamponada con
cido ctrico. Evidencia de la descomposicin por el calor es el oscurecimiento de la
solucin.
Los carbohidratos pueden acomplejarse fcilmente con los fosfatos para formar
pigmentos slidos amarronados. Estos complejos pueden actuar como estimulantes o
inhibitorios al crecimiento. La reaccin ms importante en los medios de cultivo es la
reaccin de Maillard. Los aldehdos, cetonas y azcares reductores se combinan con
los aminocidos, pptidos y protenas para formar melanoidinas marrones. La reaccin

8 Ing. Jos M. Reynoso

 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

de Maillard puede causar la prdida de aminocidos esenciales y no estar stos

disponibles para el metabolismo. Las condiciones ptimas para la ocurrencia de
Maillard son: pH entre 7 y 10 y altas temperaturas.

Grasas y Aceites
Los aceites fueron los antiespumantes empleados en los procesos de produccin
de antibiticos. Los aceites vegetales de oliva, maz, soja, algodn son empleados por
su contenido en cidos grasos: oleico, linoleico y linolnico.

Las fuentes de nitrgeno pueden ser:

Inorgnicas: amonaco o sales de amonio. De las fuentes inorgnicas, se

utilizan principalmente gas amonio o sales de amonio. El sulfato de amonio
usualmente produce condiciones cidas, pues al utilizar el amonio, se libera
el cido libre. Por su parte, los nitratos normalmente tienden a alcalinizar los
medios cuando son metabolizados. El nitrato de amonio, primero ocasiona
una cada del pH, y cuando se agota el amonio tiene a subir nuevamente el
pH como resultado de la utilizacin del nitrato.

Orgnicas: estn representadas por una gran variedad como: 1)

Hidrolizados de Protenas (Peptonas) que se obtienen de la hidrlisis
cida o enzimtica de diferentes fuentes proteicas como carne de diferentes
rganos y animales, pescado, casena, harina de soja, algodn, girasol, etc.
Mediante el ajuste de la relacin enzima-sustrato y variando el tiempo de
hidrlisis, es posible variar el tamao de la cadena de polipptidos. Adems
de aportar nitrgeno, las peptonas aportan aminocidos, vitaminas, fosfatos
y micronutrientes como el Ca, Zn, Fe y Cu. 2) Extracto de carne, que se
obtiene por extraccin acuosa y posterior concentracin. 3) Extracto de
levadura, que se obtiene mediante la plasmlisis de la levadura y es
bsicamente una mezcla de aminocidos, pptidos, vitaminas hidrosolubles
y carbohidratos. 4) Extracto de malta, que es el extracto soluble en agua de
la malta de la cebada. 5) Cornsteep, que es el agua de maceracin del
maz, y es muy utilizado en la produccin de antibiticos y enzimas.

Adems de los nutrientes antes mencionados, se debe formular una base mineral,
que aporte el resto de los ingredientes.

Los medios segn la composicin se clasifican de la siguiente forma:

Medio sinttico: es un medio compuesto por nutrientes qumicamente

definidos.
Medio complejo: contiene ingredientes de los que se desconoce su
composicin qumica. Derivados de estos medios son los obtenidos por el
agregado a los medios de diversos ingredientes segn su uso,
denominados Medios Enriquecidos. Por ejemplo: agar sangre ( contiene
9 Ing. Jos M. Reynoso
 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

como medio base agar nutritivo y se lo ha enriquecido con sangre humana o

animal); agar yema de huevo ( agar nutritivo con el agregado de yema de
huevo); agar leche descremada ( agar nutritivo con el agregado de leche
descremada).
Medios selectivos: pueden ser sintticos o complejos, pero se preparan de
forma de hacerlo selectivo para un determinado micoorganismo. Un medio
selectivo es aquel al que se le agrega algn componente que inhiba el
desarrollo de algunos microorganismos pero no de todos. Un medio
diferencial es aquel al que se le agregan indicadores, generalmente
colorantes que permite diferenciar durante el crecimiento de las especies.
Por ejemplo, el agar eosina azul de metileno (EMB), es utilizado como un
medio selectivo diferencial. El agar EMB es usado para aislar las bacterias
las bacterias G(-) de las bacterias entricas. El azul de metileno inhibe la
flora G(+). La eosina, es un colorante que responde a los cambios de pH,
cambiando de incoloro a negro en condiciones acdicas. El EMB, contiene
lactosa y sacarosa, pero no glucosa, como fuente de energa, y las colonias
de las bacterias entricas, fermentadoras de lactosa, tales como E. coli,
Klebsiella y Enterobacter, acidifican el medio y las colonias tienen el centro
negro y los bordes verdosos. En cambio, las colonias no fermentadoras de
lactosa, tales como Salmonella, Shigella o Pseudomonas, son translcidas.
Los medios selectivos a su vez pueden ser: de Aislamiento Directo o de
Enriquecimiento. Cuando un inculo mixto contenga una cierta variedad
de organismos diferentes se extienda sobre la superficie del medio
selectivo slido, todas las bacterias que puedan desarrollar sobre l
producirn colonias que pueden tener morfologas particulares. En
contraoposicin al aislamiento sobre medios slidos, estn los medios
selectivos de enriquecimiento que son lquidos y se permite la libre
competencia entre los diferentes microorganismos presentes.
Algunos medios son simultneamente selectivos y diferenciales

P. ej., el agar de MacConkey. Se trata de un medio de color rosado y transparente, que

posee, entre otras sustancias, lactosa, peptonas, el colorante vital rojo neutro, sales
biliares y violeta cristal.

Este medio es selectivo contra muchas bacterias Gram-positivas debido al violeta

cristal, y tambin contraselecciona muchas Gram-negativas debido a las sales biliares
(que son agentes tensioactivos que desorganizan muchas membranas externas). En
cambio, las Enterobacterias estn evolutivamente adaptadas a soportar sales biliares
en su hbitat natural (el intestino de vertebrados superiores), y pueden crecer en este
medio.

En su faceta de medio diferencial, el agar MacConkey permite visualizar dos tipos de

Enterobacterias segn que puedan o no fermentar la lactosa, con produccin de
cidos. Las bacterias fermentadoras de lactosa (Lac+), excretan al medio gran cantidad
de cidos orgnicos, lo que provoca que sus colonias, y sus alrededores aparezcan de
10 Ing. Jos M. Reynoso
 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

color rojo intenso, debido al viraje del rojo neutro; adems, se forma un halo turbio a
cierta distancia de estas colonias, fenmeno ocasionado por la precipitacin de las
sales biliares inducida por la acidez. En cambio, las bacterias Lac-, al no poder usar la
lactosa, recurren como fuente de C a las peptonas, a las que desaminan: incorporan el
esqueleto carbonado, excretando iones NH4+, que alcalinizan el medio de cultivo, lo
cual se traduce en que el indicador rojo neutro vira a amarillo.

Control del pH en los medios de cultivo

Aunque un medio de cultivo determinado sea adecuado para la iniciacin del

crecimiento, el subsiguiente desarrollo puede resultar limitado por los cambios que se
producen debido al crecimiento y metabolismo. As por ejemplo la oxidacin de una
molcula de succinato de sodio, libera dos iones sodio en forma de una sal muy
alcalina, el carbonato de sodio. La descomposicin de las protenas y aminocidos,
pueden alcalinizar el medio, como resultado de la produccin de amonaco.
Para evitar cambios excesivos en la concentracin del ion hidrgeno, con
frecuencia se aaden al medio buffers o tampones, o bien carbonatos insolubles.
Los buffers a base de fosfatos, que constan de mezclas de fosfatos monobsicos
y dibsicos, son los ms tiles. El PO 4H2K, es una sal dbilmente cida, mientras que
el PO4HK2 es ligeramente alcalino, por lo que la solucin equimolecular de los dos est
muy prxima a la neutralidad con pH de 6.8. Si se aade a esta solucin una cantidad
limitada de un cido fuerte, parte de la sal bsica se convierte en sal ligeramente cida:

PO4HK2 + ClH PO4H2K + ClK

Sin embargo, si se aade una base fuerte, tiene lugar la conversin contraria:

PO4H2K + KOH PO4HK2 + H2O

Los fosfatos son ampliamente utilizados para la preparacin de medios, porque

son los nicos agentes inorgnicos que tienen accin amortiguadora y adems son una
fuente de fsforo, que es un elemento esencial para el crecimiento. No obstante ello, se
debe utilizar en una cantidad moderada, pues por encima de determinados valores,
resulta txico para las bacterias. Generalmente, los hongos y las bacterias pueden
tolerar hasta 5 g de fosfato por litro de medio de cultivo.
Cuando en un cultivo se produce una gran cantidad de cido, las cantidades de
buffers pueden no ser suficientes para mantener el pH en un determinado valor. En
tales casos, suele aadirse al medio carbonatos, como "lcalis de reserva", para
neutralizar los cidos a medida que se producen. En presencia de hidrgeno, el
carbonato es transformado en bicarbonato, y el bicarbonato es convertido
posteriormente en cido carbnico, que se descompone espontneamente dando CO 2
y agua. Estas sucesiones de reacciones son reversibles y pueden resumirse de la
siguiente forma:

CO32- CO3H- CO3H2 CO2 + H2O

11 Ing. Jos M. Reynoso

 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

Debido a que el cido carbnico es extremadamente dbil, y se descompone

dando CO2 que se va a la atmsfera, la adicin de carbonatos impide el acmulo de
iones hidrgeno. Los carbonatos de calcio son los que normalmente se utilizan. Debido
a su insolubilidad, no crea en el medio condiciones alcalinas.

Precipitacin de minerales: un problema que se encuentra con frecuencia en la

preparacin de medios sintticos, es la formacin de un precipitado despus de la
esterilizacin, especialmente si el medio tiene una alta concentracin de fosfatos,
debido a la formacin de complejos insolubles entre los fosfatos y ciertos cationes
como el hierro y el calcio. Aunque generalmente no afectan el valor nutritivo del medio,
pueden hacer difcil la observacin y valoracin del desarrollo microbiano. Este
problema puede solucionarse, esterilizando por separado las sales de calcio y de
hierro, en solucin concentrada y agregarlas al medio esterilizado y fro.
Alternativamente puede agregarse un agente acomplejante como EDTA.

Adicin al medio de precursores y reguladores metablicos

Algunos de los componentes de los medios de fermentacin sirven para regular la
formacin del producto mas que favorecer el desarrollo de los microorganismos. Tales
aditivos incluyen precursores, inhibidores e inductores, los cuales se pueden usar para
manipular el progreso de la fermentacin.

Precursores
Algunos compuestos qumicos, cuando se agregan a ciertas fermentaciones, se
incorporan directamente a los productos deseados. Probablemente el primer ejemplo lo
constituye el mejoramiento de los rendimientos en la produccin de penicilina. Se
pueden incorporar varios sustituyentes a la molcula de penicilina formando cadenas
laterales. Habindose establecido que el factor limitante de la actividad de la penicilina
es la sntesis de estas cadenas laterales, se constituy en una prctica comn el
agregado de cido fenil-actico como precursor de esta cadena para la formacin de la
bencil penicilina (Penicilina G).

Inhibidores
Cuando se aaden ciertos inhibidores a las fermentaciones, puede producirse
ms cantidad de un producto especfico, o un intermediario metablico que
normalmente es metabolizado puede acumularse en le medio. Este es el caso de la
produccin de glicerol por va microbiana. La produccin de glicerol depende de una
modificacin de la fermentacin alcohlica por remocin del acetaldehido. La adicin de
bisulfito de sodio al medio de fermentacin conduce a la formacin de un compuesto de
adicin aldehido-bisulfito (hidroxi etil sulfito de sodio). Como el acetaldehido no est
ms disponible para la re - oxidacin del NADH2, su lugar como aceptor de hidrgeno
es tomado por la di hidroxi acetona fosfato, producido durante la gliclisis. El producto
de esta reaccin es el glicerol 3 fosfato que luego se convierte en glicerol.

Inductores
La mayora de las enzimas de inters industrial son inducibles. Estas enzimas
solamente son sintetizadas en respuesta a la presencia en el ambiente de un inductor.
12 Ing. Jos M. Reynoso
 UNIVERSIDAD TECNOLGICA NACIONAL
Facultad Regional Villa Mara
BIOTECNOLOGA

Los inductores son con frecuencia substratos como el almidn o dextrinas para la
amilasa, maltosa para la pululanasa, pectina para la pectinasa o lactosa para la -
galactosidasa. Los substratos anlogos que no son atacados por la enzima, tambin
pueden servir de inductores

13 Ing. Jos M. Reynoso