BIOTECNOLOGA

INFORME PRCTICA # 2

KELLY MARCELA ALVAREZ - Cdigo 1116 267 309

ANDREA LONDOO Cdigo: 1116 271 568

VICTOR ALFONSO ROMERO Cdigo: 14 801 823

VANESSA ULLOA Cdigo: 1130 618 455

BIOTECNOLOGIA

GRUPO: 305689_25

TUTOR: LAURA MARCELA BERNAL

 BIOTECNOLOGA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS, TECNOLOGIA E INGENIERIA

CEAD PALMIRA VALLE

NOVIEMBRE DE 2017

INTRODUCCIN

Entre los distintos componentes de los alimentos, despus del agua, los carbohidratos
son las sustancias ms abundantes y ms ampliamente distribuidas en la naturaleza;
siendo la celulosa la biomolcula que se encuentra en mayor cantidad en la biosfera, y el
almidn, la fuente energtica alimentaria ms empleada en el mundo.

En la siguiente prctica se realizar una revisin bibliogrfica mediante el estudio del

artculo Influencia de la fuente de carbono sobre la expresin de protenas AOX1-
reguladas en Pichia pastoris mediante el cual se analizar y estudiar el concepto de
diauxia en procesos biotecnolgicos, esto a partir del conocimiento previo dado por el
estudio de los diferentes metabolismos empleados por los microorganismos para su
desarrollo, los requerimientos o condiciones para su crecimiento y los tipos de sustratos
que existen para su correcta reproduccin; adems, teniendo en cuenta que la estructura
y origen de los sustratos (o reactivos) tienen un impacto decisivo en la capacidad de los
microorganismos de sobrevivir y en el cumplimiento de la funcin que se desea. Cuando
alguno de los sustratos presenta una baja solubilidad en agua, se encuentra poco
biodisponible para los microorganismos y la reaccin bioqumica se ver demorada por
un problema de transferencia de masa. La concentracin de los compuestos (tanto
reactivos como productos) tambin es muy importante, por ejemplo, altas
concentraciones de un compuesto pueden ser txicas e inhibir el crecimiento de las
bacterias.
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JUSTIFICACIN

No todos los microorganismos pueden ser utilizados en la industria; los microbios de

inters industrial son organismos que han sido seleccionados cuidadosamente porque
fabrican uno o ms productos especficos. Por esta razn, es importante conocer el
metabolismo de los microorganismos, ya que este es el conjunto de procesos que
posibilitan la vida; frecuentemente los microorganismos industriales exhiben un
metabolismo no equilibrado, en el sentido de que manifiestan o un mal crecimiento, o la
prdida de determinadas cualidades (como, por ejemplo, capacidad para esporular), o de
ciertas propiedades bioqumicas y celulares. Por ello, y a pesar de que las cepas
industriales sean capaces de crecer satisfactoriamente en las condiciones altamente
especializadas en las que se las cultiva en los fermentadores industriales, no es extrao
su pobre crecimiento en ambientes naturales.

Entonces, su importancia radica en que el conocer todas estas caractersticas que son
especficas de cada microorganismo y constituyen el principal criterio para determinar su
papel ecolgico, definen su responsabilidad en los ciclos biogeoqumicos y su utilidad en
los procesos industriales, asi mismo permite disear procesos a la medida segn los
requerimientos y ajustados a costos viables para la industria.
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MARCO TERICO

Metabolismo microbiano:

Las bacterias se encuentran en casi todos los ambientes e intervienen en varios procesos
biolgicos. El crecimiento microbiano requiere la formacin de estructuras complejas
como protenas, cidos nucleicos, polisacridos y lpidos a partir de elementos
preformados en el medio de crecimiento o ser sintetizados por la propia clula, a su vez,
este crecimiento necesita de una fuente de energa para ser llevado a efecto, todo este
proceso se designa con el nombre de metabolismo, que se define como todas las
transformaciones qumicas que ocurren en una clula

Es evidente que los nutrientes son transformados cuando entran en un organismo, ya

que en ningn caso el alimento contiene todas las molculas que una clula requiere.
Esto es evidente si se analiza el crecimiento normal de levaduras en un medio de cultivo
que slo contiene glucosa como nica fuente de energa. Por lo tanto, se puede decir que
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la sntesis de todos los componentes celulares se llevaba a cabo en el interior de las

levaduras.

El trmino metabolismo se refiere al conjunto de reacciones qumicas que tiene lugar en

la clula, y tiene tres funciones especficas a saber:

Obtener energa qumica del entorno, almacenarla, para utilizar luego en diferentes
funciones celulares
Convertir los nutrientes exgenos en unidades precursoras de los componentes
macromoleculares de la clula bacteriana
Formar y degradar molculas necesarias para funciones celulares especficas como,
por ejemplo, movilidad y captacin de nutrientes.

El metabolismo tiene lugar a travs de secuencias de reacciones catalizadas

enzimticamente, y se divide en anabolismo y catabolismo. El proceso por el cual la clula
bacteriana sintetiza sus propios componentes se conoce como anabolismo, y como
resulta en la produccin de nuevo material celular, tambin se denomina biosntesis.

- Catabolismo
Consiste en la degradacin enzimtica de macromolculas como lpidos, hidratos de
carbono y protenas que el organismo obtiene del entorno en que vive o de sus propias
sustancias de reserva. Esta degradacin se acompaa de la liberacin de una gran
cantidad de energa.

- Anabolismo
Es el proceso inverso, es la sntesis enzimtica de macromolculas a partir de
compuestos sencillos, con consumo de energa. Es decir, a partir de molculas sencillas
y de bajo contenido energtico se sintetizan macromolculas complejas en energa.

Existen distintos tipos de organismos segn como aprovechan el carbono y el tipo de

energa que utilizan:
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- Quimio litoautrofos: Obtienen la energa de la oxidacin de compuestos

inorgnicos, y el carbono de la fijacin de CO2. Algunos ejemplos son las bacterias
nitrificantes, oxidantes de azufre, hierro e hidrogeno.
- Fotolitoautrofos: obtienen la energa de la luz y el carbono de la fijacin de CO2.
Usan compuestos inorgnicos como equivalentes reductores. Un ejemplo de este
tipo don las Cyanobacterias.
- Quimio litoheterotrofos: obtienen la energa de la oxidacin de compuestos
inorgnicos, no pueden fijar el CO2. Un ejemplo seran las bacterias oxidantes de
Hidrogeno.
- Quimio organoheterotrofos: obtienen la energa del Carbono y de equivalentes
reductores para reacciones biosintticas de compuestos orgnicos. Un ejemplo
son las bacterias Escherichia Coli y Bacillos spp.
- Fotoorganotrofos: obtienen la energa de la luz, y el carbono y los equivalentes
reductores de compuestos orgnicos.

Carbohidratos como sustratos

El sustrato lo constituye los nutrientes, particularmente el nutriente limitante, ya que es

ste el que restringe su crecimiento. El nutriente limitante es el que est presente en
mnimas cantidades respecto a las necesidades de los microorganismos que dependen
de ellos, por lo tanto, las bacterias deben obtener del medio ambiente los sustratos que
sern utilizados para su crecimiento. Nutricin bacteriana es el proceso mediante el cual
las bacterias captan nutrientes a partir del medio que las rodea (Merino, L.)

Dentro de los sustratos ms utilizados en la industria estn los carbohidratos, son

tradicionalmente las fuentes de carbono utilizadas en la industria de la fermentacin. Por
razones econmicas la glucosa o la sacarosa puras rara vez son utilizadas como nica
fuente de carbono, excepto en los procesos que exigen un control exacto de la
fermentacin.

Las melazas, un subproducto de la produccin del azcar, es una de las fuentes ms

baratas de carbohidrato. Adems de una gran cantidad de azcar, las melazas contienen
sustancias nitrogenadas, vitaminas y elementos traza. Sin embargo, la composicin de
las melazas vara dependiendo de la materia prima utilizada para la produccin de azcar
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(caa o remolacha) y la calidad de las melazas depende de la localidad, condiciones

climticas y proceso de produccin.

Las sustancias nitrogenadas presentes en el extracto de malta incluyen protenas,

pptidos, aminocidos, purinas, pirimidinas y vitaminas. Los medios de cultivo que
contienen extracto de malta deben ser esterilizados cuidadosamente. Cuando existe
sobre calentamiento se produce la reaccin de Maillard debido al bajo pH y a la alta
proporcin de azcares reductores. En esta conversin los grupos aminos de las aminas,
aminocidos (especialmente lisina) o las protenas reaccionan con los grupos carbonilo
de los azcares reductores, aldehidos y cetonas, lo que resulta en la formacin de
productos de condensacin de color tostado. Estos productos de reaccin no son
sustratos adecuados para los microorganismos.

En los ltimos aos el proceso de fermentacin sobre sustratos slidos (FSS) ha recibido
una creciente atencin por parte de investigadores de todo el mundo. Como resultado de
ello, se han realizado muchos estudios sobre su viabilidad para ser aplicado en obtencin
de enzimas, aromas y sabores, colorantes, cidos orgnicos, y otras sustancias de
inters para la industria de alimentos. Vale destacar que la mayor atencin hacia este tipo
de fermentacin se incrementa a partir que se observa que este proceso es capaz de dar
altos rendimientos de conversin de sustrato a producto, con menores costos de inversin
y produccin, cuando se compara con el proceso de fermentacin sumergida tradicional
(sustratos con alto contenido de agua). Adicionalmente, es una alternativa para el
aprovechamiento y agregado de valor de desperdicios o subproductos de la agroindustria,
ya que la mayora de los sustratos usados para la FSS surgen de all.

Los sustratos

Los sustratos sirven para la retencin de agua y nutrientes, es un lugar donde los gases
y los nutrientes se intercambian. Las caractersticas fsicas de un sustrato estn
determinadas por los componentes que se usan y la proporcin en la que se encuentran
en la mezcla.

Componentes: Los componentes de los sustratos pueden ser orgnicos o inorgnicos.

Algunos de estos componentes retienen el agua sobre sus superficies, otros la retienen
dentro de sus estructuras. Tenga presente que puede variar la capacidad de retencin de
 BIOTECNOLOGA

agua y la estructura fsica de un tipo de ingrediente especfico segn su origen y la forma

de procesarlo.

Caractersticas fsicas: Aunque existe una cantidad de anlisis de laboratorio para la

caracterizacin fsica de los sustratos, las tres medidas ms comunes son: Densidad
aparente (peso por volumen), capacidad de retencin de agua y aireacin. La capacidad
de retencin de agua es el porcentaje de volumen de agua retenida por el sustrato
despus de ser saturado y haber drenado libremente.

La aireacin es una medicin del volumen del espacio poroso ocupado por aire despus
de que se deja drenar un sustrato saturado.

Caractersticas qumicas: Dos medidas importantes para los sustratos son el pH y la

CE (conductividad elctrica). El pH es una determinacin de cun cido o bsico es una
sustancia o una solucin. Las lecturas de CE miden la capacidad de la solucin del suelo
para conducir una corriente elctrica y es un indicador de la cantidad de nutrientes
disponibles que los cultivos pueden absorber. Para los sustratos, para propsitos
generales, el intervalo de pH ideal es entre 5,2 y 6,2 y el objetivo es de 5,8 cuando est
a saturacin. La CE deseada para los sustratos para propsitos generales es de entre
1,0 y 2,0 mmhos/cm.

CULTIVOS SUMERGIDOS Y EN SUSTRATO SLIDO

En la mayora de los procesos de fermentacin tradicionales aplicados comercialmente,

los microorganismos estn en contacto con el sustrato en un ambiente acuoso, es decir
se trata de un cultivo sumergido, donde la disponibilidad de agua es abundante, lo que
facilita y favorece el crecimiento y desarrollo de los microorganismos. Sin embargo,
existen sustratos, donde el agua disponible est sumamente limitada, y los cultivos
microbianos que all se desarrollan se denominan cultivos en sustrato slido (CSS),
siendo el proceso que resulta del metabolismo de los mismos la fermentacin en sustrato
slido (FSS). La caracterstica principal de este tipo de cultivo es justamente la restriccin
del agua disponible, dado que esta constituye un recurso fundamental para la actividad
de cualquier organismo vivo, todos aquellos microorganismos que logran crecer y
desarrollarse en esas condiciones exponen ciertas cualidades nicas, que no se
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presentan cuando son cultivados con alta disponibilidad de agua. Por esto ltimo, la FSS
se presenta como un proceso biotecnolgico interesante, alternativo al empleo del cultivo
en sustrato sumergido tradicional, y con una amplia perspectiva para la obtencin de
diversos metabolitos de importancia en la industria alimentaria actual y futura, como son
enzimas, flavours, cidos orgnicos, goma xntica u otros polisacridos de origen
microbiano, etc. En la siguiente tabla se detallan las principales diferencias entre cultivo
sumergido y cultivo en sustrato slido (Ver tabla 1)

Cultivos sumergidos Cultivo en sustratos slido

El agua se encuentra altamente disponible El agua no es un componente mayoritario

y es el componente mayoritario del medio. del medio de cultivo
El medio de cultivo fluye libremente. El medio de cultivo no fluye libremente,
porque es slido.
Profundidad del medio grande.
Profundidad del medio pequea
El medio se compone de nutrientes
provenientes de fuentes diversas. La fuente de todos los nutrientes la
constituye el sustrato slido, ya sea de
No hay gradientes de concentracin de fuentes naturales o un soporte slido
nutrientes, sino que hay una uniformidad sinttico impregnado.
en la distribucin de los mismos en todo el
medio. Existen importantes gradientes de
nutrientes, es decir hay zonas del sustrato
Asptico. donde hay grandes concentraciones de
nutrientes disponibles y otras donde los
El medio est constituido por dos fases:
nutrientes son escasos.
una lquida y una gaseosa. El oxgeno
disponible es el que se encuentra disuelto No asptico.
en la fase lquida.
El medio de cultivo se constituye de tres
Los hongos crecen formando pellets. fases: lquida, gaseosa y slida. El
oxgeno disponible se encuentra en la fase
Requiere de una cantidad pequea de
gaseosa.
inculo para iniciar el cultivo.
Los hongos crecen formando hifas, de tipo
El producto final obtenido se encuentra
diluido en el medio, requiere etapas areas o penetrantes.
posteriores de extraccin y concentracin.
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Requiere de un inculo grande para iniciar

el cultivo.
Se obtiene el producto ya concentrado.

Tabla 1. Comparacin de cultivos sumergidos y cultivos en sustrato slido

PROCESO DE FERMENTACIN EN SUSTRATO SLIDO (FSS)

Se denomina FSS a cualquier proceso fermentativo ejecutado sobre un medio no

sumergido, en ausencia de agua libre, donde se usan sustratos naturales que sirven
como fuente de nutrientes y son a su vez el soporte fsico para los microorganismos. El
bajo contenido de humedad define que solo un determinado grupo de microorganismos
puedan desarrollarse, principalmente levaduras y hongos que tienen capacidad de crecer
con menor disponibilidad de agua, aunque existen algunas bacterias que tambin pueden
desarrollarse. Ya desde la antigedad, muchas culturas aprendieron a emplear cultivos
de hongos filamentosos sobre determinadas materias primas slidas para la produccin
de alimentos. Ejemplos tpicos de esto se muestran en la siguiente tabla.

Sustrato o materia
Alimento (origen) Microorganismo Uso
prima

Ketjap (Indonesia) Soja Aspergillus oryzae Sazonador

Kimchi (Corea) Legumbres Bacterias lcticas Condimento

Miso (Japn, Aspergillus niger y

Arroz, soja Sazonador
China) bacterias lcticas

Levaduras y
Pozole (Mxico) Maz Alimento base
bacterias

Sufu (China) Poroto de soja Mucorsp Queso de soja

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Tempeh
Soja Rhizopussp Sustituto de carne
(Indonesia)

Candida,
Torani (India) Arroz Sazonador
Saccharomyces

Tabla 2. Alimentos tradicionales obtenidos por FSS

APROVECHAMIENTO DE SUBPRODUCTOS DE LA AGROINDUSTRIA

Los residuos agroindustriales presentan caractersticas fisicoqumicas adecuadas para

utilizarse como sustratos en procesos de FSS. En general tienen un alto contenido de
polisacridos de glucosa, como celulosa y hemicelulosa, esto es de suma importancia
para que acten como fuente de carbono para el crecimiento de los microorganismos.
Sin embargo, la presencia de lignina, en muchos casos es una limitante para el
aprovechamiento de esos nutrientes, ya que ese compuesto limita la disponibilidad y el
aprovechamiento de las fuentes de carbono por parte de algunos organismos. Para
superar este obstculo una alternativa implementada con xito ha sido disminuir el
tamao de partcula del sustrato slido, de esa forma se aumenta el rea superficial
disponible para los microorganismos, facilitando los procesos de degradacin mediante
el metabolismo enzimtico y aumentando, por lo tanto, la disponibilidad de las fuentes de
carbono. En todo proceso de fermentacin, ya sea slido o sumergido, se considera que
un sustrato es ideal cuando es capaz de proveer todos los nutrientes que en
microorganismo necesita en cantidades adecuadas para su metabolismo celular y
fermentativo. Cuando el sustrato carece de alguno de los nutrientes necesarios se realiza
una suplementacin incorporando otra fuente externa que provea del mismo.

Actualmente, entre los sustratos ms utilizados en procesos de FSS se encuentran:

bagazos de caa de azcar, yuca, naranja, manzana, uva, tomate; cascarilla y pulpa de
caf; salvado y paja de trigo; paja de arroz; escobajo de uva; harina de trigo y maz; torta
del prensado en la produccin de aceite de diversas semillas o frutos; entre otros.

PRODUCTOS OBTENIDOS A PARTIR DE FSS y SUS APLICACIONES

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Enzimas

Recientemente a partir del trabajo de diversos investigadores de todo el mundo se puede

concluir que la FSS se posiciona como uno de los mejores procesos para la produccin
comercial de enzimas de aplicacin industrial. Al respecto se puede agregar que la FSS
presenta varias ventajas sobre la obtencin por cultivo sumergido. Vale destacar que
estas afirmaciones se han hecho sobre resultados obtenidos en la mayora de los casos,
solo a escala laboratorio, por lo tanto, es necesario continuar trabajando en el escalado
de los procesos, para poder afirmar que tales ventajas comparativas se mantienen
cuando se trabaja a escala industrial.

Aromas y sabores

Una alternativa vlida a ello es la biosntesis de estos compuestos aromatizantes a partir

de determinadas bacterias u hongos, ya que existen diversas especies de
microorganismos que son conocidas por su habilidad para sintetizar o bioconvertir
compuestos aromticos:

Usando como sustrato bagazo de caa de azcar y como inculo cepas de Ceratosystis
fiambrada es posible obtener compuestos que dan intenso aroma frutal. Tambin a partir
de residuos de caf y usando el mismo inculo se logr a escala laboratorio obtener
intenso aroma a anan.

Se logr extraer acetaldehdo y 3 metil butanol, ambos son compuestos aromticos de

extenso uso, a partir de procesos de FSS llevados s acabo por distintas cepas de hongos
filamentosos de la especie Rhizopus oryzae empleando distintos residuos
agroindustriales como sustrato.

Se encontr que la FSS es adecuada para la produccin de pirazinas (compuestos

responsables del aroma a tostado caracterstico de muchos alimentos) cuando el proceso
de fermentacin se lleva a cabo por cepas de Bacillus natto y B. subtilis, sobre granos de
soja.

cidos orgnicos

Muchos cidos orgnicos, son empleados desde hace tiempo en la produccin de

alimentos como aditivos alimentarios cuya funcin es actuar como preservantes, evitando
 BIOTECNOLOGA

o retrasando determinadas reacciones de deterioro de alimentos a fin de aumentar la

estabilidad de los productos y extender su vida til. Si bien la mayor produccin de estos
se realiza por sntesis qumica, estos pueden obtenerse por biosntesis ya que algunos
microorganismos sintetizan cidos orgnicos como metabolitos secundarios durante su
ciclo de vida.

ANLISIS DEL ARTCULO CIENTFICO

 BIOTECNOLOGA

La Diauxia es la expresin de una variacin del poder enzimtico en el curso del

crecimiento, fenmeno extrao a toda seleccin y en el cual la hiptesis de una
adaptacin es incapaz de explicar todos los hechos.

Cuando se estudia el crecimiento de cepas bacterianas en presencia de mezclas

diferentes de hidratos de carbono se comprueba que en ciertas mezclas el crecimiento
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es anormal, momentneamente interrumpido por una fase de velocidad menor o an de

decrecimiento acentuado.

Este fenmeno es lo que acabamos de nombrar: Diauxia. Los azucares utilizables por
cada cepa bacteriana se pueden dividir en dos categoras; unos llamados azucares A
estn asociados a la glucosa y no producen este fenmeno; los otros azucares B lo
provocan en iguales condiciones. Los primeros azucares corresponden a los enzimas
constitutivos y los segundos a los enzimas de adaptacin.

En el artculo seleccionado los autores colocaron en evaluacin el comportamiento y

metabolismo de Pichia Pastoris en diferentes sustratos como glicerol, etanol, metanol
para fomentar la produccin de protenas heterlogas, as mismo sometieron el
microorganismo a un estudio en el cual se proporcion todas las condiciones y los
diferentes sustratos en tres fases que llaman fases en cultivos de alta densidad en los
cuales el microorganismo estudiado presenta un fenmeno diuxico.

Segn el artculo:

En este estudio se demostr que P. pastoris es capaz de crecer en glicerol, metanol y

etanol como nicas fuentes de carbono y energa; adems, se demostr el crecimiento
diuxico cuando dos o tres de estas fuentes de carbonos se encontraban presentes en
forma simultnea, especialmente en las mezclas etanol-metanol y etanol - glicerol. De
esta manera se pudo establecer la prioridad de utilizacin de las diferentes fuentes de
carbono, glicerol > etanol > metanol.

Durante el crecimiento en la mezcla glicerol-etanol el consumo del glicerol precede la

utilizacin del etanol, lo que genera la acumulacin transiente de acetato una vez que se
ha agotado el glicerol. La diauxia se genera durante la adaptacin de la P. pastoris para
crecer a expensas del acetato como nica fuente de carbono. Otro patrn de crecimiento
diuxico ha sido observado al crecer la levadura en la mezcla etanol-metanol, en este
caso el metanol no es consumido hasta que se agota el etanol; sin embargo, la produccin
de acetato es 10 veces menor. En el caso de la mezcla glicerol-metanol no fue posible
observar un comportamiento diuxico evidente, a pesar de que el glicerol es consumido
ms rpidamente. En esta mezcla el consumo de metanol comienza antes que el
consumo de glicerol termine, lo que indica que ciertos niveles de glicerol no reprimen la
expresin del alcohol oxidasa. Cuando se emplea la mezcla de las tres fuentes de
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carbono la prioridad de utilizacin es la siguiente, glicerol > etanol > acetato (acumulado
por la utilizacin del etanol) > metanol.

Segn los resultados obtenidos en el artculo el fenmeno de diauxia se present en casi

todas las mezclas de sustratos en las que fue sometida el microorganismo, adems se
puede observar que el fenmeno se presenta entre la etapa de adaptacin y crecimiento
exponencial, por lo general un sustrato precede del otro permitiendo seguir con el
crecimiento del microorganismo correctamente y no es consumido el siguiente hasta el
que primero haya sido agotado, sin embargo hay excepciones como en el caso de la
mezcla de glicerol- metanol que para el caso de P. Pastoris su consumo en un intervalo
de tiempo es simultneo.

La represin por catabolito

La concentracin intracelular de monofosfato cclico de adenosina (AMPc) es

inversamente proporcional a la concentracin de glucosa en el medio de cultivo, por tal
motivo cuando la clula crece en presencia de glucosa se inhibe la actividad adenilciclasa
haciendo que el nivel intracelular de AMPc sea bajo, caso contrario cuando la glucosa se
consume totalmente pues en esta situacin aumenta la concentracin de AMPc
rpidamente y forma un complejo con la protena receptora de AMPc. Por lo tanto se
puede decir que la represin por catabolito se presenta cuando la celula crece en
presencia de glucosa y etanol y por lo tanto no se sintetiza la enzima.

Inactivacin por catabolito

La biognesis de los peroxisomas se produce cuando las levaduras metilotrficas han

crecido en presencia de metanol como nica fuente de carbono y energa, pero cuando
estas clulas se transfieren a otras fuentes de carbono desparecen por su degradacin
proteoltica

En el microorganismo H. polymorpha, se demostr que cuando se inhibe el metabolismo

energtico a travs de la incubacin anaerbica, por la adicin de iones que inhiben la
cadena respiratoria o cuando se transfieren las clulas a medios de cultivos con fuentes
de carbono no metabolizables, como la deoxiglucosa se abre la posibilidad de prevenir la
degradacin de los peroxisomas.
 BIOTECNOLOGA

En P. Pastoris la inactivacin por catabolito se completa alrededor de 21h despus de

que aparece la primera molcula libre de acetaldehdo como resultado de la
bioconversin de etanol.

Pichia pastoris es una levadura metilotrfica anaerbica facultativa que fue primeramente
descrita por Guilliermond en 1919. El gnero Pichia pertenece a la familia
Saccharomycetaceae, orden Saccharomycetales, clase Saccharomycetes, filo
Ascomycota, reino Fungi (Kurtzman, 1984; Sreekrishna & Kropp, 1996).

Su morfologa es muy variable, pudiendo presentar clulas en las formas esfricas u

ovales, solas o unidas en pares. Sin embargo, las clulas pueden variar su forma de
acuerdo con las condiciones de cultivo; frecuentemente, en condiciones propicias de
crecimiento, tienen forma oval, en ningn caso se presentan pseudo hifas o hifas. En
medio slido forma colonias no filamentosas de color blanco o color crema. Al
microscopio se pueden observar mltiples yemas (Kurtzman, 1984).

P. pastoris presenta esporas en forma de sombrero, reproducindose de forma sexuada

con produccin de ascosporas, que puede variar de uno a cuatro esporas por ascas, con
baja viabilidad. El aislamiento de una ascopora de las cuatro presentes revel que esta
especie es homotlica y su dotacin genmica permanece haploide, a menos que sea
sometida las condiciones limitantes de nitrgeno (Kurtzman, 1984; Lin Cereghino &
Cregg, 2000).

Una de las principales caractersticas de P. pastoris es su capacidad de crecer en medio

mnimo o definido conteniendo metanol como nica fuente de carbono. Esta observacin
fue descrita primera vez por Ogata et al. en 1969. El metanol presente en la clula es
inicialmente metabolizado por una va metablica que involucra las enzimas alcohol
oxidasa, catalasa y formaldehdo desidrogenasa, entre otras (Harder & Veenhuis, 1989).
Adems de Pichia, slo se han descrito otros tres gneros de levaduras metilotrficas:
Hansenula, Torulopsis y Candida (Harder & Veenhuis, 1989).

Cabe resaltar tambin que P. pastoris es un microorganismo perteneciente al subgrupo

de las levaduras respiratorias. Este grupo tiene como caracterstica principal que el
catabolismo de la glucosa es lento, situndose entre 10-40 moles de glucosagclulas
 BIOTECNOLOGA

1min-1, siendo considerados como fermentadores dbiles, es decir, que durante su

crecimiento aerobio una proporcin menor del 30% de glucosa es fermentada, y
presentan una velocidad de respiracin muy alta, con una tasa comprendida entre 150-
250 umoles de O2gclulas-1min-1 (Gancedo & Serrano, 1989) Esta propiedad permite
cultivar a levaduras como P. pastoris hasta densidades celulares del orden de 100 gL-1
de peso seco, pues no hay formacin significativa de subproductos del metabolismo
fermentativo indeseables como el etanol, el cual en otros tipos de cultivos de levaduras
como por ejemplo, Saccharomyces cerevisiae, que a altas densidades celulares puede
alcanzar rpidamente niveles txicos (Torres & Moraes, 2000).

Cuando se presenta diauxia es generado por represin de catablito falta hablar de

ello en el artculo hablan de eso.

http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?option=com_content&view=article&id=
471&Itemid=519

Por favor revisen esta corta definicin para que entendamos un poco y el por qu coloque
algunas cosas en las CONCLUSIONES.

CONCLUSIONES

- En los procesos biotecnolgicos es importante conocer el fenmeno de diauxia

que pueden presentar algunos tipos de microorganismos y con qu tipos de
sustratos ya que los crecimientos diuxicos adems de presentar doble consumo
de diferentes sustratos, la presencia de alguno de ellos puede generar inhibicin
de otros subproductos o enzimas que podra desviar el crecimiento generando
otros productos finalmente no deseados o simplemente no permitiran consumir el
siguiente sustrato por efectos inhibitorios como es el caso de la glucosa y lactosa.
 BIOTECNOLOGA

- El uso de microorganismos que muestran crecimiento diuxico por la presencia de

varios sustratos simultneamente, se podra decir que pueden lograr tener un
rendimiento mayor, en cuanto a su crecimiento, puesto que cuentan con mayor
cantidad de nutrientes en comparacin a un microorganismo crecido en un medio
con solo un sustrato, esto tambin depender de la cantidad que sea suministrada,
las condiciones del ambiente y los tiempos al que sea sometido.

- A partir de todos los anlisis realizados desde la investigacin de informacin

conceptual, bsqueda de artculos relacionados y el anlisis del artculo
seleccionado, el estudiante logr identificar la importancia de conocer como
fisiolgicamente funcionan los microorganismos y de esta manera poder definir y
orientar su uso en la industria dependiendo de la finalidad que se tenga. Adems,
permiti tambin apropiarse y ampliar su conocimiento en el campo de la
microbiologa aplicado en la industria alimenticia.

BIBLIOGRAFA

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