MANUAL DE PRACTICAS DE FISIOLOGIA VEGETAL

Facultad de Ciencias Agropecuarias - UNER

Autores: Lallana, V.H. y Lallana Ma. del C. (2001)

RELACIONES HIDRICAS DE CELULAS Y TEJIDOS

Contenido:

A. Plasmlisis y turgencia

B. Medicin del potencial hdrico

C. Absorcin de agua en relacin con el potencial agua del medio

D. Estomas y transpiracin
A. PLASMOLISIS Y TURGENCIA

Introduccin:

El agua en las planta cumple varias funciones: constituyente del citoplasma, que junto
con las macromolculas coloidales determina su estructura y grado de agregacin; disolvente
de gases, iones y solutos, estableciendo un sistema continuo en toda la planta; participa en
algunas reacciones directamente como metabolito (por ejemplo en la reaccin de Hill);
mantiene la turgencia celular dando la rigidez que normalmente se observa en los rganos
herbceos. Pero lo que realmente da una idea y una medida de cmo el agua puede
desempear estas funciones es su capacidad para realizar trabajo.

El agua que forma parte de cualquier sistema puede hallarse sometida a diversas
condiciones de temperatura, presin, interaccin con otras sustancias, efecto del campo
gravitatorio, etc. Estas condiciones modifican su estado energtico, es decir su capacidad de
realizar trabajo. Existe un parmetro que expresa esa capacidad: el potencial agua (a w)
Es decir que el agua en una clula se halla sometida a la influencia de dos o ms de estas
condiciones. Por lo tanto la determinacin del potencial agua resulta de la suma algebraica de
los distintos componentes. Como toda energa potencial, se define en relacin a un nivel de
energa arbitrario o estado de referencia. En el caso del potencial agua el estado de referencia
es el agua pura (w = 0), a una presin de 1 atmsfera y a una elevacin y temperatura
(generalmente 25 C) que pueden especificarse. El potencial agua se puede expresar en:
atmsferas, bares J.kg-1. El w tiene dimensiones de energa por unidad de masa o volumen
(J.kg-1) que es equivalente a las de presin, expresndose en unidades SI, Pascal (Pa): Pa = 1
N m-2 = 1 Jm-3 = 10-5 bares. Los valores en la clula son del orden de megapascales (MPa =
10 bares = 9,87 atm). Para el caso de las plantas, el valor del w es negativo. Los
componentes del potencial agua y su simbologa a nivel celular son:

a = o + p +m + g

a w = potencial agua
o = potencial osmtico, representa el potencial derivado de la presencia de solutos (nunca
es superior a 0, por lo que toma valores negativos).
p P = potencial de presin, representa la presin ejercida por la pared celular (puede asumir
valores positivos en clulas turgentes o puede llegar a 0 en clulas flccidas).
m = potencial matricial, representa los efectos mtricos (asume valores negativos de
importancia en clulas jvenes y se hace despreciable en clulas maduras).
g = potencial gravitacional representa la influencia del campo gravitatorio (es de slo 0,01
MPa.m-1 por lo que puede despreciarse, excepto en rboles de gran altura).

Si separados por una membrana semipermeable, colocamos un disolvente puro (por ej.
H2O), y una solucin (en el mismo disolvente) de una sustancia que no pase a travs de la
membrana, observaramos el pasaje del disolvente puro hacia la solucin, con el objeto de
contrarrestar el desequilibrio generado en ambos medios. Este proceso se denomina smosis,
y la fuerza que lo produce, Presin Osmtica. La Presin Osmtica se puede definir como el
exceso de presin hidrosttica que debe ser aplicado a la solucin para lograr un potencial
hdrico igual al del agua pura. Como no se origina una presin real, a menos que la solucin se
coloque en un osmmetro, es preferible usar el trmino "potencial osmtico".

La difusin se produce desde la zona de mayor potencial agua (ya) a la de menor

potencial agua (ya).

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 Toda clula tiene una determinada y constante o, y normalmente se encuentra en un
medio isotnico, es decir un medio que tiene igual o que la del contenido celular. En este c
aso el potencial agua es el mismo a travs de todo el sistema, es decir en la pared celular,
citoplasma, orgnulos y vacuola. Cuando una clula se encuentra en un medio isotnico no
sufre modificacin alguna, el agua entra y sale de ella en igual proporcin.

Sin embargo dado que la planta permanentemente est perdiendo o ganando agua, los
componentes del a pueden diferir en los compartimentos celulares. En la vacuola el a se
debe principalmente a las fuerzas osmticas y de turgencia; mientras que en la pared se debe
a las fuerzas mtricas y en pequeo grado a las osmticas. En el citoplasma de una clula
turgente son importantes tanto el o como el m y el p.

A. PLASMOLISIS y TURGENCIA

El fenmeno de plasmlisis se produce cuando un grupo de clulas ha sido colocado en

el interior de una disolucin hipertnica (mayor concentracin de solutos que el jugo celular), el
jugo celular pierde agua pasando sta a la disolucin que la rodea (exsmosis).

Al reducirse el volumen vacuolar por la prdida de agua, disminuye al mismo tiempo, la

presin de turgencia hasta valores insignificantes por lo tanto las clulas pierden turgencia y el
contenido protoplasmtico (citoplasma y ncleo) se contrae y comienza a separarse de la
pared celular. Este proceso se denomina plasmlisis.

Esquema de una clulas plasmolizadas y turgente:

Referencias: v, vacuola; Pa, pared celular; Pl, plasmalema; Pr, protoplasma. Los esquemas 1
a 4 indican distintos tipos de plasmlisis y el 5 la misma clula turgente.

A mayor concentracin de solutos, mayor p. osmtica. Entonces cuanto mayor sea la

concentracin o p. osmtica, que tenga la solucin que rodea la clula, mayor ser el grado de
plasmlisis que experimenten dichas clulas.

Por el contrario si colocamos la clula en agua pura o en una solucin muy diluida (de
menor concentracin que el jugo celular), habr difusin neta de agua del medio, que en este
caso es hipotnico, hacia la regin de mayor concentracin de soluto, es decir el interior de

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la clula (endsmosis). De este modo la clula sufrir un aumento de volumen, debido a que el
agua pasa en mayor proporcin desde el medio (hipotnico) hacia el interior de la clula. El
proceso contina hasta que la pared celular (poco elstica) no cede ms, alcanzando la presin
de turgencia un valor mximo. La clula se encuentra saturada de agua, completamente
turgente. Este fenmeno se denomina turgencia.

Objetivo: Observar el fenmeno reversible de plasmlisis.

Tcnica operatoria:

Coloque algas verdes sobre un portaobjetos o trozos de epidermis de Roheo. Observe

el estado de turgencia de las clulas. Coloque un grupo de algas (o epidermis de Roheo) en
una solucin de sacarosa y H2O; verifique el tiempo necesario para que se produzca la
plasmlisis. Sustituya la disolucin que caus plasmlisis, por agua de grifo, mojando bien el
material vegetal y observe el tiempo necesario para que la plasmlisis desaparezca.

Dibujar lo observado, explicarlo y redactar el informe correspondiente.

B. MEDICION DEL POTENCIAL HIDRICO

Introduccin:

Casi todos los mtodos que calculan el potencial hdrico consisten en la determinacin
de ste en un medio en donde una clula ni absorbe ni pierde agua. Es difcil aunque no
imposible determinar el potencial hdrico del jugo vacuolar en una planta multicelular intacta y
puesto que el potencial puede cambiar de inmediato tras el corte, por ejemplo por la liberacin
de las tensiones del tejido, evaporacin, etc., las medidas que se hacen sobre grupos de
clulas aisladas no son ms que groseras aproximaciones de los valores reales in situ.

La absorcin o prdida de agua por los tejidos se puede calcular por los siguientes
mtodos:

a) Mtodo volumtrico: se basa en la medida de los cambios de las dimensiones lineales de

las clulas cuando estas se colocan en soluciones de diferente potencial osmtico.

b) Mtodo gravimtrico: se basa en la medida de los cambios de peso que experimentan trozos
de tejido al ser colocados en soluciones de distinta concentracin de sacarosa u otro soluto
apropiado. La solucin en que no cambie de peso se considera que tiene un potencial hdrico
que corresponde al tejido.

c) Mtodo refractomtrico: consiste en sumergir fragmentos de tejidos en soluciones de

potencial osmtico variable y determinar mediante un refractmetro, la solucin en que no hay
un cambio de concentracin.

d) Mtodos de presin de vapor: Psicrmetros. Se basan en el hecho de que la presin de

vapor de la atmsfera que circunda a un tejido colocado en una cmara cerrada se halla en
equilibrio con el potencial agua del tejido. En dicha cmara se halla instalada una pequea
termocupla. Se utiliza el llamado efecto Peltier para la medicin del potencial agua de la
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atmsfera de la cmara en equilibrio con el tejido. Una dbil corriente electrnica enfra la
termocupla, determinando la condensacin de una pequea cantidad de agua depositada en
ella. Cuando se interrumpe la corriente el agua condensada se evapora de la termocupla con
mayor o menor velocidad, segn sea la presin de vapor de la atmsfera de la cmara.

El enfriamiento de la termocupla genera una corriente elctrica que se lee en el

microampermetro. Dicho valor puede ser transformado directamente en lecturas de ya o en
bares o atmsferas, previo calibrado del aparato. El equilibrio se alcanza en unos 15 minutos.

e) Mtodo de presin: Bomba de Scholander: Se basa en determinar la presin que es

necesario realizarle a una hoja, para hacer exudar la savia hacia afuera del tejido,
considerndose dicha presin igual al potencial agua del tejido.

f) Mtodo densimtrico: Chardakov: Se basa en encontrar por tanteo una solucin cuyo
potencial sea igual al potencial agua del tejido. Cuando un tejido se introduce en agua o en
una solucin se produce un intercambio de agua hasta alcanzar el equilibrio, en ese momento
el potencial hdrico del tejido, ser igual al potencial hdrico de la solucin externa. Esto puede
medirse apropiadamente utilizando un colorante y observando el movimiento de la gota
coloreada. La solucin donde no se produce movimiento da el valor del potencial agua del
tejido.

El objetivo de este trabajo prctico ser determinar el potencial agua de un tejido, por el
mtodo gravimtrico - volumtrico y densimtrico.

Tcnica operatoria

Colocar dos series de 12 tubos de ensayo cada una, numerarlos y aadir a cada uno de
ellos 10 ml de la solucin de sacarosa correspondiente a su nmero de acuerdo a lo indicado
en la siguiente tabla:

Tubo N molaridad de o (atm.) Tubo N molaridad de o (atm.)

la solucin la solucin
1 0,05 - 1,3 7 0,45 - 12,7
2 0,15 - 4,0 8 0,50 - 14,3
3 0,25 - 6,7 9 0,55 - 16
4 0,30 - 8,1 10 0,65 - 19,6
5 0,35 - 9,6 11 0,75 - 23,4
6 0,40 - 11,1 12 0,85 - 27,6

Con la ayuda de un sacabocados obtener cilindros de tejido de papa, y con la ayuda de

cuchillas fijas, cortarlos de la misma longitud. Medir con la ayuda de una lupa, con tolerancia de
0,1 mm y pesar con una precisin de 1 mg (hacer estas operaciones rpidamente a fin de
evitar prdidas de agua). Colocar uno de estos cilindros en cada tubo de ensayo.

Al cabo de una hora y media tomar un cilindro de tejido vegetal de uno de los tubos.
Secar rpidamente en superficie sobre papel de filtro; pesar de nuevo y medir su longitud.
Repetir a continuacin con los otros cilindros, teniendo la precaucin de dejar las soluciones
tapadas y conservarlas para la segunda parte de la prctica.

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Chardakov

Tomar una serie de 12 tubos de ensayo, del mismo modo que en la primera parte del
trabajo prctico. Aadir en cada caso unos pocos mg de azul de metileno, para que la solucin
adquiera un color azul claro.

Los cambios en la densidad de las soluciones utilizadas en el apartado anterior, se

determinan colocando en el centro de cada tubo con la ayuda de una micropipeta, una gota de
la solucin coloreada con azul de metileno del mismo nmero, es decir de la misma densidad
inicial. Observar si la gota asciende, desciende o permanece estacionaria. El potencial hdrico
del tejido es igual al potencial osmtico de la solucin en el que la gota no se mueve en ningn
sentido.

Registre sus datos y redacte el informe correspondiente.

Lecturas complementarias:

- Brevedan, R., Curvetto, N. y otros. 1996. Gua de Trabajos Prcticos de Fisiologa Vegetal.
Departamento de Agronoma, U.N.S. Baha Blanca. 61 p.

- Arguello, J., Ledesma, A. y otros. 1992. Gua de Trabajos Prcticos de Fisiologa Vegetal.
Fac. Cs. Agropecuarias, U. N. C. 99 p.

- Monerri, C. y Guardiola, J. 1992. Manual de Prcticas de Fisiologa Vegetal. Dpto. Biologa

Vegetal, Univ. Politcnica de Valencia. 158 p.

- Svori, E. y otros. 1980. "Fisiologa Vegetal". Cap. XI. Pg. 322-332. Hemisferio Sur. 681 p.

- Sutcliffe, J.1984. "Las plantas y el agua". Omega, Barcelona. Cuadernos de Biologa. 41 p.

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