Universidad Nacional del Nordeste - Facultad de Medicina - Microbiologa e Inmunologa

Fisiologa bacteriana
Luis A. Merino

Fisiologa bacteriana

Las bacterias son capaces de realizar una serie de transformaciones qumicas mediante reac-
ciones enzimticas que se traducen en sntesis de nuevos productos, transporte, movimiento y
duplicacin celular
Se considera crecimiento bacteriano al aumento ordenado de todos los componentes celula-
res con el consiguiente aumento del nmero de clulas bacterianas, o sea que el resultado final
del crecimiento bacteriano es la duplicacin celular.

El crecimiento bacteriano se inicia con la captacin de nutrientes a partir del medio ambiente y
los pasos intermedios entre la captacin de nutrientes y la divisin celular constituyen el meta-
bolismo bacteriano. El metabolismo bacteriano est compuesto de dos etapas: una de snte-
sis o Anabolismo y una de destruccin o Catabolismo.
Durante el anabolismo o fase anablica las sustancias simples se convierten en sustancias
complejas y durante el catabolismo o fase catablica las sustancias complejas se convierten en
sustancias simples.

El conocimiento de los requerimientos metablicos y de las condiciones de crecimiento de las

bacterias es til para predecir la forma correcta de obtencin, remisin y conservacin de
muestras clnicas, para seleccionar los medios de cultivo que se utilizarn en el diagnstico y
para estimar el tiempo necesario para que la bacteria alcance un nmero suficiente como para
que su desarrollo se haga visible.

Nutricin bacteriana

Las bacterias deben obtener del medio ambiente los sustratos que sern utilizados para su
crecimiento. Nutricin bacteriana es el proceso mediante el cual las bacterias captan nutrien-
tes a partir del medio que las rodea. Dichos nutrientes deben estar en solucin, an aquellos
que son gaseosos. Si bien los constituyentes generales de las bacterias son muy similares, la
capacidad de captacin de nutrientes y de sntesis de nuevos productos es muy variable entre
distintas especies bacterianas Todas las bacterias necesitan para desarrollar ciertos elementos
bsicos como ser C, P, S, N y agua.

Aunque muchas bacterias slo requieren adicionalmente algunas molculas simples para cre-
cer (como ser aminocidos y azcares) y son consideradas nutricionalmente no exigentes
(Pseudomonas, Escherichia, Staphylococcus), existen otras consideradas nutricionalmente
exigentes que requieren adems compuestos ms complejos como vitaminas y cofactores para
poder desarrollar (Haemophilus, Neisseria). Ciertas bacterias son incapaces de producir y al-
macenar su propia energa por lo que deben tomarla a partir de la clula que se encuentran
infectando y se denominan bacterias energticamente exigentes (Chlamydias y Rickettsias).
Los dos primeros grupos mencionados son capaces de desarrollar en medios fabricados artifi-
cialmente en el laboratorio (in vitro) mientras que el ltimo grupo slo desarrolla en medios de
cultivos que contengan clulas vivas.

Absorcin de nutrientes

La encargada de la absorcin selectiva de nutrientes es la membrana citoplasmtica ya que la

pared es porosa e impide solo el paso de elementos de gran tamao insolubles o particulados.

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A travs de la membrana no slo ingresan sustancias sino que muchas son eliminadas a travs
de ellas, tanto en procesos activos como pasivos.

Transporte a travs de la membrana plasmtica

La absorcin de nutrientes se realiza a travs de la membrana plasmtica mediante los siguien-

tes mecanismos de transporte:

Difusin pasiva: se produce por diferencia de concentraciones de los nutrientes entre el

interior celular y el medio ambiente (glicerol, agua, O2, CO2)

Difusin facilitada: participan aqu ciertas protenas de la membrana denominadas permea-

sas que permiten el paso de molculas desde el exterior al interior celular (aminocidos,
azcares).

Transporte activo:. Este

mecanismo implica un gasto de
energa y constituyen las
denominadas bombas de
transporte, por ejemplo
bombas de sodio, calcio,
oxgeno, etc.

Translocacin de grupo: impli-

can que la sustancia que ingre-
sa pierde un grupo qumico en
el exterior y gana otro en el in-
terior celular, es decir existe una
alteracin molecular (lpidos)

Captacin de hierro: debi-do a

la alta carga que posee el in
Fe3+, ste debe unirse primero a
ciertas protenas denominadas
siderforos y recin as puede
ser introducida a la clula bacte-
riana.

En la figura de la izquierda se
presentan ejemplos de los
mecanismos de transporte
transmembrana mencionados.

Ciertas molculas de gran tamao

deben ser previamente digeridas mediante enzimas que libera la bacteria (exoenzimas) para
que recin puedan ser absorbidas las molculas ms pequeas. Se mencionan ejemplos de
molculas de gran tamao y las exoenzimas que las digieren: Almidn - amilasas, Protenas -
proteasas, ADN - Desoxirribonucleasas, Gelatina - gelatinasas, Lpidos - lipasas y fosfolipasas.

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No todas las especies bacterianas son capaces de producir todas las exoenzimas, por lo que el
estudio de la produccin de algunas de ellas es til en la identificacin de los gneros y espe-
cies.

Requerimientos de O2 y CO2

En funcin de los requerimientos de O2 y CO2, las bacterias pueden clasificarse en:

Bacterias aerobios estrictas: necesitan una concentracin de alrededor del 21% de oxgeno
para poder desarrollar. (Pseudomonas, Mycobacterium, Corynebacterium)
Bacterias microaerfilas: slo necesitan alrededor de un 5% de oxgeno para desarrollar.
Mayores concentraciones inhiben su desarrollo. (Campylobacter, Helicobacter)
Bacterias anaerobios obligadas o estrictas: son incapaces de sobrevivir en presencia de
oxgeno, es decir requieren un 0% de oxgeno (Fusobacterium, Clostridium)
Bacterias anaerobias aerotolerantes: pueden sobrevivir, aunque no crecer, en presencia de
hasta un 0,5% de oxgeno. (Actinomyces, Propionibacterium)
Bacterias anaerobias facultativas: son capaces de crecer en una atmsfera tanto con o sin
oxgeno. (Streptococcus, Staphylococcus, Enterobacteriaceae)
Bacterias capnfilas: son bacterias aerobias que necesitan adems para crecer un 5-10%
de CO2. (Neisseria, Haemophilus)

Para estudiar en el laboratorio los requerimientos de oxgeno de las bacterias, se coloca la bac-
teria en un medio de cultivo en un tubo profundo (Tubo 1) y se lo incuba durante 24 horas a
37C. Al cabo de ese tiempo se observa el sitio en el cual desarroll la bacteria.
Si la bacteria desarroll slo en la superficie o sea en contacto con el oxgeno, la bacteria es
aerobia estricta (Tubo A). Si en cambio slo se verifica desarrollo en la profundidad del medio e
cultivo, la bacteria es anaerobia estricta (Tubo B). Una bacteria microaerfila desarrollar a cier-
ta distancia de la superficie, donde la concentracin de oxgeno es baja (Tubo C) y una bacteria
anaerobia facultativa desarrollar en todo el volumen del medio de cultivo (Tubo D)

24 hs 37 C

Tubo 1 A B C D

Temperatura ptima de crecimiento

Las bacterias requieren diferentes temperaturas para desarrollar y sobrevivir. Esta caracterstica
es importante para comprender ciertas caractersticas patgenas de las bacteria, para entender
sobre la forma en que las bacterias pueden transmitirse desde el medio ambiente al hombre y
para mantener las muestras clnicas a la temperatura adecuada hasta su procesamiento en el
laboratorio.

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En base a su temperatura ptima de desarrollo y sobrevida, las bacterias se clasifican en:

Bacterias Psicrfilas: soportan bajas temperaturas, entre 0 - 20C (Pseudomonas, Listeria)

Bacterias Mesfilas: desarrollan mejor a temperaturas intermedias, entre 20 - 45C (Staphy-
lococcus, Streptococcus)
Bacterias Termfilas: son capaces de soportar altas temperaturas, de 55C o ms (Bacterias
no patgenas)
Bacterias Estenotrmicas, son mesfilas pero slo desarrollan y sobreviven en rangos es-
trechos de temperatura, entre 35 - 36C (Neisseria)
Bacterias Euritrmicas: son capaces de sobrevivir en amplios rangos de temperatura, entre
0- 44C. (Enterococcus)

Requerimientos de pH

La concentracin de iones hidrgeno en el medio condiciona el crecimiento de las bacterias. En

funcin de su capacidad para desarrollar a diferentes pH, las bacterias pueden clasificarse en:

Neutrfilas: entre 5,5 - 8,0 (Staphylococcus, enterobacterias)

Acidfilas: entre 0,0 - 5,5 (Lactobacillus)
Alcalfilas: entre 8,0 - 11,5 (Vibrio)

El conocimiento del pH ptimo para el desarrollo de las bacterias permite conocer los equilibrios
y cambios posibles dentro de los diferentes ecosistemas bacterianos existentes en el organis-
mo, ya que existen bacterias que se aseguran un ambiente cido para impedir el desarrollo de
bacterias neutrfilas y alcalfilas.

Obtencin de energa

Para poder desempear los procesos metablicos, las bacterias, como todos los seres vivos
deben producir y almacenar energa para luego poder reutilizarla. Slo el grupo mencionado
ms arriba (energticamente exigentes) es incapaz de obtener energa por s solos.

El proceso general de obtencin y consumo de energa puede sintetizarse como sigue:

Molculas complejas

Degradacin produccin de Energa

Metabolitos intermedios

Sntesis consumo de Energa

Molculas complejas

Para obtener energa, las bacterias pueden valerse de diferentes mecanismos:

A) Respiracin aerbica (Oxidacin): Ocurre en presencia de oxgeno, es decir en aerobiosis. El

sustrato es la glucosa u otro azcar y el aceptor final de electrones es el oxgeno molecular.

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Glucosa + O2 CO2 + H2 O + 38 ATP

La respiracin aerbica involucra los siguientes pasos:

1. Gluclisis
2. Decarboxilacin oxidativa
3. Ciclo de Krebs
4. Transporte de electrones

Durante el proceso de forman productos txicos (O2- y H2 O2) que deben ser transformados
por la bacteria productora en O2 y agua mediante enzimas como la peroxidasa y la superxido-
dismutasa. Este mecanismo es utilizado por las bacterias aerobias y anaerobias facultativas
en aerobiosis.

B) Respiracin anaerbica: Ocurre en ausencia de oxgeno. El sustrato es la glucosa u otros

azcares y los aceptores finales de electrones son iones inorgnicos.

Glucosa + S CO2 + SH2 + 34 ATP

La respiracin anaerbica involucra los siguientes pasos:

1. Gluclisis
2. Decarboxilacin oxidativa
3. Ciclo de Krebs
4. Transporte de electrones

Durante el proceso no se liberan productos txicos. Este mecanismo es utilizado por las bacte-
rias anaerobias obligadas y las anaerobias facultativas en anaerobiosis.

C) Fermentacin: es un proceso que ocurre en ausencia de oxgeno. El sustrato es la glucosa u

otros azcares y los aceptores finales de electrones son molculas orgnicas.

Glucosa + NADH Piruvato + NAD+ + ATP

La fermentacin involucra los siguientes pasos:

1. Gluclisis
2. Degradacin del piruvato
3. Productos con alta energa: cido lctico, propinico, butrico, actico,
alcohol etlico, etc.

Este mecanismo es utilizado por las bacterias anaerobias estrictas y anaerobias facultativas
en anaerobiosis.

Para estudiar el metabolismo energtico de las bacterias, se siembran con la bacteria en estu-
dio dos tubos conteniendo glucosa y un indicador de pH, uno de los cuales se cubre con vaseli-
na lquida de manera tal de impedir que el medio de cultivo se ponga en contacto con el oxge-
no ambiental (Tubos 1 y 2). Luego de 24 hs. de incubacin a 37 C se observa lo ocurrido en
ambos tubos. Un cambio de color de verde a amarillo en el medio de cultivo indica que la bacte-

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ria a desarrollado y utilizado la glucosa como fuente de energa, produciendo una acidificacin
del medio con el consiguiente cambio en el color del indicador de pH.
Si el cambio de color se evidencia en el medio expuesto al aire, significa que la bacteria utiliz
la glucosa en presencia de oxgeno, es decir tubo lugar una oxidacin (Tubo A) y la bacteria es
oxidadora. Si el cambio de color ocurre en el medio tapado con vaselina, la utilizacin de la
glucosa se realiz en ausencia de oxgeno, es decir ocurri una fermentacin (Tubo B) y la bac-
teria es fermentadora. Si no se registra cambio en ninguno de los tubos, significa que la bacte-
ria es no glucidoltica, es decir, no es capaz de utilizar la glucosa como fuente de energa.

24 hs a 37C

Tubos 1 y 2 A B C

Medios de Cultivo

Se denomina medio de cultivo al conjunto de sustancias que permiten el crecimiento de los

microorganismos bajo determinadas condiciones de incubacin (Tiempo, temperatura y oxge-
no). stos deben reunir los nutrientes mnimos indispensables para que las bacterias puedan
sobrevivir y desarrollarse.

Los medios de cultivo cumplen un papel fundamental en el aislamiento de bacterias a partir de

muestras clnicas y en la obtencin de grandes cantidades de microorganismos para fabricar
vacunas.

Los medios de cultivo pueden clasificarse segn su consistencia, su composicin y la finalidad

de uso.

Segn su consistencia

Medios lquidos, tambin denominados caldos

Medios slidos, poseen una sustancia solidificante que generalmente es agar-agar, una
sustancia que solidifica a temperatura ambiente y slo sirve de soporte para los nutrientes.

Al inicio de la Microbiologa como ciencia slo se poda obtener las bacterias en medios lquidos
pero era muy difcil y a veces hasta imposible obtener en forma aislada dos bacterias que se
encontraban juntas en una muestra. El desarrollo de medios de cultivos slidos marca un hito
importante dentro de la ciencia mdica debido a que a partir de su aplicacin en el diagnstico
de las enfermedades infecciosas se ha podido recuperar a las bacterias en forma aislada para

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poder realizarle las pruebas de identificacin, sensibilidad a antimicrobianos e inoculacin en

animales (2, 3 y 4 postulados de Koch)

Segn su composicin

Medios sintticos o simples, poseen composicin exactamente conocida, slo contienen

sustancias orgnicas e inorgnicas conocidas. Por ejemplo: agar glucosa, indicador de pH.
Medios complejos: poseen una composicin que slo se conoce en parte ya que algunos de
los ingredientes posee una composicin variable Por ejemplo: medios con sangre, suero
equino, yema de huevo, extracto de carne, etc. Tambin se denominan medios enriqueci-
dos.

Segn su finalidad

Medios para aislamiento primario: son medios slidos que se usan para obtener bacterias
aisladas a partir de una muestra clnica. Son ejemplos de medios de aislamiento primario los
siguientes: Agar nutritivo, Agar sangre, Agar chocolate, Agar Eosina-Azul de Metileno
(E.M.B.), Agar Salmonella-Shigella (S.S.), Agar Manitol Salado, etc.
Medios de enriquecimiento: son medios lquidos en los cuales se siembra inicialmente la
muestra para aumentar el nmero de bacterias antes de ser subcultivado a un medio slido.
Son ejemplos de medios de enriquecimiento los siguientes: Caldo selenito, Caldo Cerebro-
Corazn, Caldo Tioglicolato
Medios de identificacin: son medios lquidos o slidos que permiten estudiar alguna carac-
terstica metablica de la bacteria como ser produccin de enzimas. Son ejemplos de me-
dios de identificacin los siguientes: Agar triple azcar hierro (TSI), Agar citrato, Agar urea,
etc.

Segn sus propiedades

Medios generales: Permiten el crecimiento de la mayora de las bacterias presentes en la

muestra. Por ejemplo: agar sangre, agar chocolate, agar nutritivo, caldo tioglicolato, caldo
cerebro corazn.
Medios selectivos: Permiten el crecimiento de slo determinado tipo de bacteria presente en
la muestra, impidiendo el desarrollo de otras debido a que contienen sustancias (antibiti-
cos, colorantes, sales, etc.) que inhiben el desarrollo de ciertas bacterias. Por ejemplo: agar
manitol salado (alta concentracin de ClNa), Agar Thayer-Martin (presencia de antibiticos),
agar EMB (contiene eosina y azul de metileno que inhiben a las bacterias grampositivas),
etc.
Medios diferenciales: Poseen sustancias que permiten diferenciar entre grupos bacterianos
segn determinadas caractersticas biolgicas (hemlisis, fermentacin de azcares, preci-
pitacin de sales, etc) y permiten realizar una identificacin presuntiva inicial de las bacte-
rias presentes en la muestra. Son ejemplos: agar sangre (hemlisis), agar EMB (fermenta-
cin de lactosa), etc.

Aislamiento primario

Una vez obtenida la muestra clnica, para realizar el diagnstico etiolgico de la enfermedad
infecciosa, o sea, para aislar al agente causal de la misma, es necesario sembrar (inocular) la
muestra en medios de cultivo slidos (y eventualmente lquidos si se desea realizar un enrique-
cimiento previo) (Ver figura inferior)

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Muestras clnicas
Medios de cultivo
Slido Lquido

El objetivo de este paso es obtener colonias bacterianas aisladas. Se denomina colonia al

conjunto de bacterias que provienen de una misma clula madre y en los medios de cultivo apa-
recen como acmulos de miles de bacterias que pueden observarse a simple vista. Las colonias
aisladas se obtienen diseminando la muestra sobre la superficie del agar con ayuda de un ansa
bacteriolgica. Las figuras siguientes muestran un esquema de cmo se disemina la muestra
sobre la superficie del agar y una fotografa de colonias aisladas sobre una placa de agar EMB
luego de 24 horas de incubacin a 37C.

Inicio de
la siembra

Incubar 24 hs
a 37C

Final de
la siembra

Duplicacin bacteriana

En organismos multicelulares la multiplicacin celular se traduce en aumento del tamao del

individuo pero en organismos unicelulares el crecimiento se traduce en aumento del nmero de
individuos. La duplicacin bacteriana se produce por fisin binaria en la que la divisin del
ADN y la divisin celular se llevan a cabo simultneamente.

El tiempo necesario para que se observen las colonias en un medio de cultivo adecuado y bajo
condiciones de temperatura y atmsfera correctas depender del tiempo de duplicacin celu-
lar de la bacteria en estudio. En la figura siguiente se esquematiza un proceso de duplicacin
bacteriano.

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A continuacin se presentan ejemplos de tiempos de divisin y del tiempo mnimo que debe
esperarse para observar colonias en los medios de cultivo.

Escherichia coli - Divisin: 20 minutos - Colonias: 24 horas

Clostridium botulinum - Divisin: 35 minutos - Colonias: 48 horas
Mycobacterium tuberculosis - Divisin: 12 horas - Colonias: 30 das

Cintica del crecimiento bacteriano

Debido a que las bacterias se duplican en cada generacin, la poblacin bacteriana a travs
del tiempo aumentar en forma exponencial de 2.

Si se presenta el nmero de bacterias en funcin del tiempo, tendremos una curva exponencial
pero si representramos el ciclo vital de un grupo de bacterias tendramos cuatro fases (Ver
figura siguiente):
Nmero de
bacterias

2
4
1

Tiempo

1. Fase de latencia: las bacterias se adaptan al medio en el que se encuentran, en este pero-
do el nmero de clulas no vara. El tiempo de adaptacin es variable para las diferentes

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bacterias. En esta etapa, por ejemplo, las esporas bacterianas se transforman en clulas
vegetativas.
2. Fase exponencial: es aqu donde se inicia la multiplicacin bacteriana, el nmero de bacte-
rias aumenta exponencialmente y es aqu donde se liberan las enzimas y toxinas.
3. Fase estacionaria: llega un momento en que existe una competencia por los nutrientes ya
que estos van disminuyendo en su concentracin y las bacterias dejan de crecer. En este
perodo las bacterias esporuladas comienzan a esporular. Algunas bacterias mueren pero
otras se dividen por lo que el nmero de clulas se mantiene sin variaciones.
4. Fase de muerte: el nmero de bacterias comienza a disminuir debido a que las bacterias
que mueren supera al nmero de bacterias que se dividen.

En la prctica, este modelo de crecimiento bacteriano nos sirve para conocer cunto tiempo
deber ser incubado un medio de cultivo con el objeto de que las bacterias en estudio siempre
se encuentren en la fase de crecimiento exponencial, ya que es all cuando se manifiestan to-
das sus propiedades bioqumicas y patognicas.

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