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Manual de Tecnicas Basicas para Un Laboratorio de Salud PDF
Manual de Tecnicas Basicas para Un Laboratorio de Salud PDF
Publicacin Cientifica N o . 4 3 9
Todos los derechos reservados. Ninguna parte de esta publicacin puede ser reproducida, registrada o transmitida en
ninguna forma y por ningn medio electrnico, mecnico, de fotocopia, grabacin u otros, sin permiso previo por
escrito de la Organizacin Panamericana de la Salud.
Edicin original en ingls:
Manual of Basic Technigues for a Health Laboratory
World Health Organization. 1980
ISBN 92 4 154145 8
Introduccin a la traduccin al espaol
IV
CONTENIDO
I PARTE
PROCEDIMIENTOS GENERALES DE LABORATORIO
1. El microscopio: ajuste y conservacin 13
2. Cristalera y aparatos pequeos [[[ 27
3. Limpieza de la cristalera 29
4. Esterilizacin 33
5. Desecho de muestras y materiales infectados 39
6. Mediciones y volumen '.'.'.'.'. 42
7. Balanzas 48
8. Centrfugas 52
9. Agua para uso del laboratorio 56
10. Manufactura de utensilios de vidrio 54
11. Recipientes para muestras 68
12. Envo de muestras a los laboratorios de referencia ...... 71
13. Fijacin y envo de material de bipsias para estudios de patologa 75
14. Registro de las muestras', registros del laboratorio e informes mensuales 78
15. Almacenamiento, inventario, pedidos de suministros 85
16. Electricidad: montaje de equipo elctrico sencillo 87
17. Fontanera: procedimientos simples 94
18. Primeros auxilios en accidentes ocurridos en el laboratorio 98
19. Plano de un laboratorio mdico perifrico '.'.'.'.'. 102
20. Relacin de aparatos necesarios para equipar un laboratorio perifrico .. 104
II PARTE
A. PARASITOLOGIA
Introduccin 111
1. Naturaleza de las observaciones. Recoleccin de heces fecales 113
2. Preparacin de los portaobjetos 116
3. Tcnica especial para huevos de oxiuros [ 119
4. Huevos y larvas de parsitos intestinales 122
5. Helmintos adultos que se encuentran en las heces fecales 143
6. Amebas, flagelados y ciliados: formas mviles 147
7. Amebas, flagelados y ciliados: quistes 155
8. Eleccin de mtodo de concentracin de parsitos 162
9. Mtodo de concentracin por el uso de solucin de cloruro sdico (Willis) 163
10. Mtodo de concentracin por el uso de formaldehido y ter o MIF ', 165
11. Mtodo para concentrar larvas de Strongyloides (Harada y Mori) " \ 168
12. Cmo registrar los resultados de exmenes de heces fecales 170
13. Envo de heces fecales para la deteccin de parsitos 173
14. Ensayo qumico para encontrar sangre oculta en las heces fecales 175
15. Bsqueda de huevos de Schistosoma haematobium en la orina '..'.'.'. 178
16. Otros parsitos que se encuentran en la orina 181
17. Huevos del distoma pulmonar: otros parsitos 183
18. Trichomonas: examen directo del exudado genitourinario, etc 186
19. Preparacin de gota gruesa de sangre y aplicacin de la tincin de Field 189
20. Coloracin de gota gruesa y extensiones sanguneas con tincin de Giemsa 193
21. Identificacin de parsitos del paludismo 196
22. Microf (arias sanguneas: examen de preparaciones hmedas; concentracin 204
23. Microflarias sanguneas: tincin e identificacin ;. 209
24. Oncocercosis: observacin de microfilarias en la piel 215
25. Tripanosomas: deteccin en la sangre; concentracin 220
26. Tripanosomas: examen del lquido de los nodulos linfticos 226
v
B. BACTERIOLOGIA
Pgina
Introduccin 231
27. Preparacin de frotis. Fijacin 232
28. Tincin de Gram 235
29. Microorganismos que se observan por examen directo de los frotis 238
30. Gonococos: examen directo del pus uretral. Sfilis 243
3 1 . Bacilos de la tuberculosis. Tincin de Ziehl y Neelsen: mtodo caliente 249
32. Bacilos de la tuberculosis. Tincin de Kinyoun: mtodo fro 257
33. Lepra: bsqueda de bacilos en nodulos y lesiones de la piel 259
34. Lepra: bsqueda de bacilos en frotis de exudado nasal 264
35. Peste: bsqueda de bacilos 265
36. Envo de muestras de heces fecales 268
37. Examen directo de muestras obtenidas en la garganta. Envo de las muestras 270
38. Examen bacteriolgico directo de la orina 275
39. Muestreo de aguas para exmenes bacteriolgicos 279
C. SEROLOGIA
40. Envo de muestras de suero y de sangre seca para efectuar ensayos serolgicos 285
41. Ensayo de V D R L 288
D. MICOLOGIA
HIPARTE
A. EXAMEN DE ORINA
vi
C. HEMATOLOGIA
Pgina
16. Las clulas sanguneas 351
17. Obtencin de sange venosa 353
18. Concentracin de nmero de leucocitos 360
19. Concentracin de nmero de eritrocitos 366
20. Hemoglobina: clculo de la cianometahemoglobina, mtodo fotomtrico 371
21. Clculo de la hemoglobina por medio del comparador de colores 375
22. Clculo de la hemoglobina por el mtodo de Sahli 377
23. Fraccin de volumen de eritrocitos 379
24. Concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos 386
25. Preparacin de extensiones de sangre 387
26. Tincin de extensiones de sangre 391
27. Fraccin de nmero y examen del tipo de leucocitos 397
28. Eritrocitos anormales: examen microscpico 407
29. Estudio de los eritrocitos falciformes 411
30. Reticulocitos 414
31. Velocidad de sedimentacin de los eritrocitos (VSE) 418
32. Tiempo de sangrado: mtodo de Duke 421
33. Tiempo de coagulacin de la sangre entera: mtodo de Lee y White 423
34. Tiempo de retraccin y lisis del cogulo 425
D. QUMICA SANGUNEA
35. Clculo de la glucosa en la sangre y en el LCR: mtodo de la ortotoluidina 429
36. Clculo de la urea: mtodo de la diacetil monoxima/tiosemicarbacida 432
E. TRANSFUSIN DE SANGRE
vii
Prefacio
Laboratorios
El propsito principal de este manual es su uso en laboratorios mdicos de pases en desarrollo. Se ha elaborado
para utilizarlo especialmente en laboratorios perifricos establecidos en esos pases, por ejemplo, en los de
tamao reducido o mediano anexos a los hospitales regionales y los dispensarios o centros rurales de salud donde
a menudo el tcnico laboratorista ha de trabajar solo.
Se ha procurado utilizar el lenguaje ms sencillo posible. Sin embargo, cuando ha sido necesario, se han
empleado trminos tcnicos de uso comn.
WPiS,
Tcnicas
En este manual solo se describen procedimientos de Ce- .j>^
examen directo que se pueden poner en prctica por
medio de un microscopio o algn otro aparato sencillo.
Por ejemplo:
examen de heces fecales en busca de parsitos
examen de sangre en busca de parsitos de la malaria ?3&
examen de esputo en busca de bacilos de la tuber-
culosis
examen de pigmentos biliares en la orina
fraccin de nmero del tipo de leucocitos
envo de heces fecales a laboratorios especializados
para detectar vibriones del clera.
Se pretende as proporcionar una relacin de tcnicas bsicas que sean tiles a los laboratorios perifricos y se
puedan poner en ejecucin con una cantidad relativamente limitada de equipos de uso corriente.
Es posible que algunos laboratorios no se encuentren en condiciones de llevar a cabo todas las tcnicas
descritas. Es decir, quizs el laboratorio de un centro rural de salud no pueda efectuar anlises de qumica
sangunea o del V D R L .
2
Cmo usar el manual
2. Reactivos
Se ha dado un nmero a cada reactivo. Los reactivos necesarios y sus nmeros se indican en la descripcin de
cada tcnica. Al final del libro hay una lista en orden alfabtico de todos los reactivos utilizados, su composicin,
los mtodos de preparacin y los requisitos de almacenamiento. Por ejemplo, uno de los reactivos necesarios para
la tincin de Gram es el cristal de violeta (reactivo No. 56); su composicin y el mtodo para prepararlo se
indican en la lista alfabtica de reactivos que se halla al final de este manual.
3. Equipo
No se han incluido artculos que sean muy costosos o difciles de conseguir. La lista de los que se requieren
para cada tcnica aparece al principio de la seccin correspondiente. En las pginas 104-107 se hace una relacin
de los aparatos necesarios para equipar un laboratorio capaz de llevar a cabo todos los exmenes descritos..
Cuando no se pueda contar con ciertos artculos el tcnico deber hacer todo lo posible para encontrar susti-
tutos. Por lo tanto, una vez vacos, se habrn de conservar los frascos que contuvieron antibiticos inyectables
("frascos de penicilina"); las gradillas para tubos de ensayo y portaobjetos se fabricarn en el lugar; los botes y
latas de hojalata vacos se utilizarn para baos Mara, etc.
Responsabilidad del laboratorista
4
Unidades de medicin
longitud metro m
masa kilogramo kg
tiempo segundo s
cantidad de sustancia mol mol
Seguramente usted conoce las tres primeras unidades, pero es probable que,
como nombre de magnitud, "masa" requiera una explicacin; adems, a no
dudar, habr que explicar el ltimo de los nombres de magnitud y la corres-
pondiente unidad. Masa es la denominacin correcta de lo que comnmente
se llama "peso". (Existe un significado tcnico de "peso": es una medida de
la fuerza con que la gravedad de la tierra atrae una masa dada. Por otra parte,
la masa es independiente de la accin de la gravedad de la tierra. En el
lenguaje cotidiano se suelen confundir las dos palabras; acostumbramos,
adems, decir que una masa "se pesa" cuando se trata de medirla.) La
"cantidad de sustancia" y su unidad, el mol, son de gran importancia para la
medicina e interesarn en su trabajo de laboratorio ms que cualesquiera
otras magnitudes o unidades SI. Cuando reaccionan dos o ms sustancias
qumicas no lo hacen en relacin con su masa. Por ejemplo, en la reaccin
7
que es posible, como concentracin de sustancia.
El uso de concentracin de sustancia en lugar de concentracin de masa es
la diferencia ms importante entre el empleo de las unidades SI y las unidades
tradicionales.
En el sistema tradicional, concentracin de masa se usaba de modo casi exclusivo
(si bien no se denominaba "concentracin de masa", que es un nombre relativa-
mente nuevo). Sin embargo, en el sistema tradicional no siempre se expresaba la
concentracin de masa "por litro". Algunas veces se utilizaba esta expresin, y
otras, "por 100 mi" (es decir, por 100 mililitros, 1/10 de litro), o "por mili-
litro". Pases distintos (y aun laboratorios distintos, en el mismo pas) adoptaban
prcticas diferentes, creando serias confusiones.
Con las partculas o entidades que no se disuelven no es posible usar la
concentracin de masa ni la concentracin de sustancia; se debe emplear otra
magnitud. Por ejemplo, el torrente sanguneo contiene varias clases de clulas.
Todas se encuentran suspendidas en la sangre y es necesario disponer de una
manera de expresar el nmero de clulas que hay en cada litro de sangre. En
este caso el nombre de la magnitud es concentracin de nmero, y se define
como "el nmero de partculas o entidades especificadas en una mezcla,
dividido entre el volumen de sta". La unidad con que se mide la concentra-
cin de nmero es el nmero por litro.
En el sistema tradicional la concentracin de nmero se denominaba "recuento"
y se expresaba mediante la unidad conocida como "nmero por milmetro
cbico".
Algunas veces la magnitud que interesa no es el nmero real de clulas por
litro (concentracin de nmero), sino la proporcin de un tipo determinado
de ellas, o sea la fraccin de) nmero total formada por las clulas de ese tipo.
Esta magnitud se denomina fraccin de nmero y la unidad con que se mide
es 1 (unidad, "uno"). A primera vista esto puede parecer relativamente con-
fuso, pero en verdad es muy sencillo. La unidad, que es el nmero "uno", es
el todo; 0,5 es la mitad, 0,2 la quinta parte, 0,25 la cuarta parte, 0,1 la dcima
parte y as sucesivamente. Por ejemplo, en la sangre hay cinco tipos de leuco-
citos (glbulos blancos). Sus respectivas fracciones de nmero podran ser
0,45, 0,35, 0,10, 0,08 y 0,02. (Si usted suma estas fracciones observar que
el resultado es 1,0, o sea el todo.)
En el sistema tradicional esta magnitud careca de nombre y los resultados se
expresaban como porcentajes y no como fracciones. Por ejemplo, una fraccin
de nmero de 0,5 era 50% y una de 0,08 era 8%. Usted advertir en esto que el
porcentaje dividido entre 100 corresponde a la fraccin de nmero.
Otra magnitud que se mide por la unidad "uno" es la fraccin de volumen.
Se define como el volumen de un componente especfico en una mezcla,
dividido entre el volumen total de sta. En otras palabras, si todo el volumen
que ocupan los eritrocitos (glbulos rojos) en 1 litro (1 000 mi) de sangre es
450 mi, la fraccin de volumen de los eritrocitos ser 4 5 0 / 1 000 = 0,45. La
fraccin de volumen de los eritrocitos es importante para el diagnstico de
numerosas enfermedades y usted habr de medirla frecuentemente en el
laboratorio.
En el sistema tradicional la fraccin de volumen careca de un nombre especial;
as pues, se daba un nombre distinto a cada una de las diferentes fracciones de
volumen. Por ejemplo, la fraccin de volumen de los eritrocitos se llamaba "volu-
men de sedimentacin globular" o "hematocrito" (y esto era engaoso, puesto
que no se indicaba con claridad la clase de clulas que se haba medido, adems
de que el resultado se expresaba como porcentaje y no como volumen).
Por esta explicacin se deber de percatar de que la fraccin de nmero es
"nmero por un nmero" y la fraccin de volumen es "volumen por un volu-
men"; es decir que ambas son proporciones. Por conveniencia se dice que la
unidad que expresa una proporcin es "uno".
En las pginas siguientes se muestra un cuadro de nombres de magnitudes
nuevos y tradicionales, y de unidades SI y tradicionales, con factores de con-
versin de unas a otras.
8
UNIDADES DE VOLUMEN
Submltiplos equWalantM d*l metro cbico y el litro
concentracin de no. x 1 0 ' / 1 recuento de leucocitos no./mm 3 8 000 mm 3 x 0,001 = 8,0 x 1 0 ' / 1
nmero de leucocitos (sangre) 7,5 x 10 9 /1 x 1 000 = 7 500/mm 3
(sangre) (vase la pg. 360)
concentracin de no. x l O ' / l recuento de trombocitos no./mm 3 220 000/mm 3 x 0,001 = 220 x 1 0 ' / 1
nmero de trombocitos 250 x l O ' / l x 1 000 = 250 000 mm 3
(plaquetas)
En estos ejemplos se indica primeramente la conversin de valores numricos reales, en unidades tradicionales, a valores en unidades SI, y
seguidamente la conversin de unidades SI a unidades tradicionales. Los factores de conversin se han subrayado.
En este caso la fraccin de nmero no se anota como fraccin de 1, sino de 1 000, a fin de evitar valores numricos demasiado pequeos e
inconvenientes.
9
Nueva nomenclatura Unidades Nomenclatura tradicional Unidades Factores de conversin y ejemplos*
de magnitudes SI de magnitudes tradicionales
glucosa, concentracin mmol/l glucosa, concentracin mg/100 mi 81 mg/100 ml x 0,0555 = 4,5 mmol/l
de sustancia (sangre y de masa* (sangre y
lquido cefalorraqudeo) lquido cefalorraqudeo) 4,2 mmol/l x 18,02 = 75,7 mg/100 mi
hemoglobina (Fe) mmol/l concentracin globular %' 35% x 0,621 =21,7 mmol/l
medir en eritrocitos, media de hemoglobina 22 mmol/l x 1,611 =35,4%
concentracin (v.g., concentracin
de sustancia c de masa)
urea, concentracin mmol/l urea, concentracin mg/100 mi 15 mg/100 ml x 0,167 = 2,5 mmol/l
de sustancia (sangre) de masa*
" En estos ejemplos se indica primeramente la conversin de valores numricos reales, en unidades tradicionales, a valores en unidades SI, v
seguidamente la conversin de unidades SI a unidades tradicionales. Los factores de conversin se han subrayado.
Se acostumbraba medir efectivamente la concentracin de masa, aunque por lo general no se empleaba esta denominacin.
Vase la explicacin en el texto.
La concentracin globular media de hemoglobina se expresaba algunas veces como fraccin decimal en vez de porcentaje; por ejemplo, 0,35 en
lugar de 35%. En este caso cada uno de los factores de conversin anotados se debe multiplicar por 100 o dividir entre 100, como se indica en los
ejemplos siguientes:
0.35 x 62,1 =21,7 mmol/l
22 mmol/l x 0,01611 = 0,354
0,35 x 1 000 = 350 g/l
298 g'/i x 0,001 = 0,298
En el sistema tradicional unas veces se haca referencia a la urea como tal y otras como nitrgeno de urea (o sea el contenido de nitrgeno de la
urea). En el cuadro se incluye una conversin de ambos sistemas.
10
PRIMERA PARTE
Muchas enfermedades prevalecientes en los climas clidos son transmisibles y se propagan por grmenes que a
menudo se pueden observar por medio del microscopio en muestras obtenidas de pacientes. Por lo tanto, la /
microscopia directa es indispensable en los laboratorios de los pases tropicales.
Un laboratorio clnico sin microscopio, o con un microscopio que no se conserva de manera adecuada, no se
puede considerar equipado con propiedad.
A. El sistema de soporte
Consiste en:
1. el pie
2. el bastidor
3. portaobjetivo revlver (cambiador de objetivos)
4. la platina
5. la platina mecnica, que imprime un movimiento
lento y regulado al portaobjetos.
B. El sistema de aumento
Consiste en un conjunto de lentes.
Las lentes del microscopio se encuentran montadas en
dos grupos, uno en cada extremo de un tubo relativa-
mente largo, o tubo del microscopio:
el primer grupo de lentes se halla en el extremo
inferior del tubo, inmediatamente arriba de la pre-
paracin que se va a examinar (el objeto), y se
denomina objetivo
el segundo grupo se encuentra en el extremo
superior del tubo, por donde mira el microscopista,
y se llama ocular.
1. LOS OBJETIVOS
(a) Aumento
El poder de aumento de cada objetivo se indica por
un nmero grabado en la manga de la lente:
el objetivo x 10 aumenta 10 veces
el objetivo x 40 aumenta 40 veces
el objetivo x 100 aumenta 100 veces.
(El objetivo x 100 generalmente se encuentra marcado con un
anillo rojo para indicar que se debe usar con aceite de inmersin.)
2. EL OCULAR
Aumento
El poder de aumento se encuentra marcado en el
ocular:
8*
Un ocular x 4 aumenta 4 veces la imagen
que produce el objetivo
Un ocular x aumenta la imagen 6 veces
Un ocular x 10 aumenta la imagen 10 veces.
Si la imagen del objeto se hace aumentar 40 veces
mediante el objetivo x 40 y en seguida 6 veces
mediante el ocular x 6, el aumento total ser de
6 x 40 - 240.
Para calcular el aumento total de la imagen del objeto
que se observa, multipliqese el poder de aumento
del objetivo por el del ocular.
El poder de aumento de los microscopios utilizados
en los laboratorios mdicos oscila entre 50 y 1000.
15
C. El sistema de iluminacin
1. La fuente luminosa
De preferencia se emplear luz elctrica, pues es ms
fcil de ajustar. Puede proporcionarla un bombillo
contenido en el microscopio por debajo de la platina
o mediante un bombillo exterior colocado frente al
microscopio.
De lo contrario se podr utilizar la luz del da. El
microscopio nunca se debe utilizar ni debe permane-
cer bajo la luz directa del sol. Deber estar bien
iluminado, pero se usar una luz amortiguada. Si la
luz del sol es excesivamente brillante se colocar
frente al microscopio una botella o redoma de vidrio
claro, llena de agua, a fin de reducir la intensidad de
la luz.
2. El espejo
El espejo refleja los rayos de la fuente luminosa
sobre el objeto. Por un lado su superficie es plana y
cncava por el otro. El lado cncavo constituye un
condensador de escaso poder y no se debe usar si ya
se cuenta con un condensador propiamente dicho.
3. El condensador
El condensador lleva los rayos luminosos a un foco
comn sobre el objeto que se habr de examinar.
o
Se encuentra colocado entre el espejo y la platina.
Se puede elevar (iluminacin mxima) y bajar
(iluminacin mnima). Se debe centrar y ajustar
adecuadamente.
El diafragma
El diafragma, que se encuentra dentro del condensa-
dor, se utiliza para reducir o ampliar el ngulo, y,
w
por lo tanto, tambin la cantidad de luz que entra en
w
el condensador.
Cuanto ms se abre el diafragma ms se ampl a el
ngulo y en consecuencia aumenta la AN y se
pueden observar detalles ms pequeos. Sin embargo,
al mismo tiempo se reduce el contraste.
16
5. Filtros
En algunos microscopios se ajustan filtros de colores
(principalmente azules) debajo del condensador. Se
pueden dejar en su sitio o quitarlos, segn el tipo de
preparacin que se vaya a observar.
D. El sistema de ajuste
Este sistema comprende:
1. La cremallera de avance rpido
Es el tornillo mayor. Se utiliza primero para lograr la
aproximacin del enfoque.
2. El tornillo micromtrico de avance lento
Hace que el objetivo se desplace ms lentamente.
Se emplea para conseguir un enfoque perfecto del
objeto.
3. El tornillo de ajuste del condensador
Se utiliza para elevar el condensador y aumentar la
iluminacin o descenderlo y reducir la iluminacin.
4. Los tornillos para centrar el condensador
Puede haber tres tornillos colocados alrededor del
condensador: uno al frente, uno a la izquierda y uno
a la derecha. Se usan para centrar el condensador
exactamente en relacin con el objetivo.
5. El elevador del diafragma iris
Este es un pequeo elevador que se encuentra fijo al
condensador. Se puede mover para cerrar o abrir el
diafragma, reduciendo o aumentando as el ngulo y
la intensidad de la luz.
17
I I . PREPARACIN DEL MICROSCOPIO
3. Posicin de la lmpara
Si se va a usar iluminacin elctrica ponga la lmpara
a una distancia de 20 cm al frente del microscopio,
por delante del espejo, que se colocar en un ngulo
de 4 5 . C ubra el espejo con una pieza de papel.
Ajuste la posicin de la lmpara de manera que la
luz brille en el centro del espejo.
WEiy* ^'ss^viv- ^^^ssw^Yssy^^sssy^s.
19
(e) Por medio de los tornillos para centrar el condensa-
dor haga los ajustes necesarios hasta que el circul
luminoso se halle exactamente en el centro del
campo microscpico. Repita esta operacin con los
dems objetivos.
Ajuste binocular
En los microscopios binoculares la distancia interpupilar (distancia entre las pupilas de los ojos) se puede
ajustar segn la conveniencia del operador.
20
Enfoque de los ojos derecho e izquierdo
Uno de los soportes de los oculares (casi siempre el
izquierdo) est provisto de un anillo para enfoques.
Si este anillo se encuentra en el soporte del ocular
izquierdo, cierre el ojo izquierdo y, empleando el objetivo
x 40, enfoque la imagen para el ojo derecho por el ocular
derecho.
A continuacin cierre el ojo derecho y observe con el
ojo izquierdo a travs del ocular izquierdo. Si la imagen
se encuentra enfocada no se necesitar ajuste alguno. Si
la imagen no es clara, haga girar el anillo de enfoque
hasta aclararla. En este momento el microscopio habr
quedado ajustado de acuerdo con la visin binocular
propia del operador.
^MM^m^ w&
Por medio de la cremallera de avance rpido eleve el
objetivo muy lentamente hasta que aparezca una
imagen borrosa en el campo microscpico. \ \
Busque el enfoque por medio del tornillo micro
mtrico de avance lento. V>i^^^^ mk
Eleve el condensador para obtener suficiente
iluminacin.
Si el microscopio no tiene condensador utilice el lado cncavo del %
jr* ^7
espejo.
3. Empleo del objetivo de inmersin en aceite (x 100}
Se deben utilizar preparaciones teidas completamente secas.
Ponga una pequea gota de aceite de inmersin sobre la porcin que se va a examinar (de preferencia use
aceites sintticos que no se secan, en vez de aceite de madera de cedro, que se seca rpidamente).
El microscopio necesita cuidados cotidianos para conservarlo en buenas condiciones de trabajo y asegurar
resultados confiables en el laboratorio. En los climas clidos y hmedos se requieren cuidados especiales.
1. Equipo
1. Piezas de trapos viejos y un pauelo fino, de lino, que estn limpios
2. Papel de seda especial para lentes o, en su defecto, papel blanco absorbente (papel de tocador)
3. Si es posible, una pieza de piel de gamuza (de lo contrario, un trapo que no desprenda pelusal
4. Un frasco pequeo de xilol (o tolueno)
5. Una cubierta de material plstico
6. Una pequea pera de goma y, si es posible, un pincel fino (o una brocha especial para limpiar lentes)
7. En los climas clidos y hmedos,
en laboratorios que cuentan con electricidad:
-- un armario que est templado, se calienta mediante uno o dos bombillos incandescentes de 40 vatios
en los laboratorios que no cuentan con electricidad;
- si es posible, un secador de 15 - 20 cm de dimetro, con no menos de 250 g de gel de slice azul (que
indica la existencia de humedad al tomar un color rojizo).
I
Laboratorios que cuentan con electricidad
Guarde el microscopio por las noches en el armario
templado. Este es simplemente un armario con una
puerta que se puede cerrar hermticamente, que se
calienta ligeramente por medio de uno o dos bom-
billos incandescentes de 40 vatios (un bombillo basta
para un armario donde se guarden 1-4 microscopios).
Los bombillos debern permanecer encendidos sin 3E3E3C3!Ei3 3E2-;
interrupcin aunque los microscopios no se encuen-
tren en el armario.
Verifique que dentro del armario la temperatura sea
por lo menos 5 0 C ms alta que en el laboratorio.
Por ejemplo:
temperatura del laboratorio: 26 0 C 2-1
temperatura dentro del armario: 32 0 C
Importante: los microscopios se debern guardar en Tapones de gasa o algodn
el armario aunque el laboratorio cuente con un
sistema de calefaccin o enfriamiento del aire.
24
Laboratorios que no cuentan con electricidad
En estos laboratorios se puede conservar el microsco-
pio a/ aire y en la sombra, aunque siempre cerca de
un sitio soleado.
Nunca se debe guardar el microscopio en su estuche
de madera (ni siquiera por las noches); se debe utili-
zar invariablemente una cubierta. No obstante, el
microscopio se debe limpiar diariamente para quitar-
le el polvo.
Idealmente, el laboratorio lo debe visitar cada 3 meses un experto que desarme el microscopio para:
- inspeccionar las superficies de las lentes y el prisma, en busca de los primeros indicios de la presencia de
hongos
- lubricar las partes metlicas con un aceite lquido especial, que posee propiedades limpiadoras.
1. Nunca limpie las lentes de los objetivos o los oculares con etanol.
2. Nunca sumerja los objetivos en xilol o etanol (se aflojaran).
3. Nunca emplee papel ordinario o algodn para limpiar las lentes.
4. Nunca toque los objetivos con los dedos.
5. Nunca limpie los soportes o l platina con xilol.
6. Nunca limpie las lentes internas de los oculares o los objetivos con trapo o papel (esto desprendera la capa
antirreftejante); utilice solamente un pincel fino.
7. Nunca deje el microscopio sin los oculares, a menos que los orificios se taponen.
8. Nunca guarde el microscopio en estuches de madera cerrados si la regin es clida y hmeda.
9. Nunca deje el microscopio con aceite de inmersin en el objetivo.
10. Nunca lleve el microscopio cogindolo por el bastidor con una mano; utilice ambas manos, una en el pie y la
otra en el bastidor.
EL MICROSCOPIO DE McARTHUR
El microscopio de McArthur es un instrumento que, a pesar de que puede proporcionar los mayores aumentos y
servir para muchas formas de trabajo poco usuales, no es ms grande que una cmara fotogrfica de bolsillo, pesa
menos de medio kilogramo y se puede usar en la mano.
Este microscopio se emplea en medicina tropical para examinar: frotis de sangre y disecciones de mosquitos con
el fin-de detectar la malaria en las encuestas de reas rurales; frotis de sangre y lquido cefalorraqudeo de porta-
dores probables de la enfermedad del sueo; orina y heces fecales para descubrir huevos de parsitos, y esputo en
las encuestas de deteccin de la tuberculosis, tambin se utiliza en disecciones de caracoles en los estudios de la
esquistosomiasis, as como para hacer el diagnstico rpido del clera (que se puede realizar en pocos segundos
sin ajuste alguno).
El microscopio de McArthur se enfoca automticamente, produce una imagen directa y no invertida, es de
construccin muy slida y se acompaa de una amplia variedad de accesorios, incluso equipo para inmersin,
iluminacin de campo oscuro y contraste de fase. Se puede utilizar para examinar sedimentos en volmenes con-
siderables de lquidos y en los recuentos sanguneos, y para llevar a cabo una diversidad de operaciones durante
las encuestas de reas rurales, en circunstancias en que ningn otro tipo de microscopio se podra emplear.
26
2. Cristalera y
aparatos pequeos
Tubo de
\J KJ Vw
Utensilios de vidrio para medir volmenes (pipetas, cilindros medidores, matraces volumtricos, etc.): Vanse las secciones siguientes.
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Mechero de Bunsen Trpode con
(llama fuerte) Mechero de Bunsen Mechero de Meker tapa de amianto
"CZ
Cronmetro Frascos goteros Frasco de lavado Termmetro
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3. Limpieza de la cristalera
I. RECIPIENTES DE V I D R I O
A. Utensilios de vidrio nuevos
Los utensilios de vidrio que nunca se utilizaron son
ligeramente alcalinos. Con objeto de neutralizarlos
deben seguirse los procedimientos siguientes:
ponga en una cubeta 3 litros de agua con 60 mi de
cido clorhdrico (es decir, una solucin de este
cido al 2%)
sumerja completamente en esta solucin durante 24
horas ios utensilios de vidrio sin usar
despus enjuagelos dos veces con agua corriente y
una vez con agua desmineralizada
squelos.
4. Enjuague
Saque de la palangana los utensilios, uno a uno. Enjuague
cada uno detenidamente con el chorro de agua del grifo
y a continuacin coloque todos en una palangana con
agua durante 30 minutos. Enjuague de nuevo cada uno
bajo el chorro de agua limpia. (Se debe recordar que las
partculas de detergente que queden en los utensilios de
vidrio pueden causar resultados falsos en el laboratorio.)
5. Para escurrirlos
Coloque los recipientes (vasos, matraces, probetas) en las
clavijas de una gradilla de pared para secado. Ponga los
tubos con las bocas hacia abajo en una canastilla de alambre.
6. Secado
Ponga los utensilios en canastillas de alambre y squelos
en un horno de aire caliente a 60 o C. De lo contrario
coloque las canastillas con los utensilios en un sitio soleado
del laboratorio y cbralos con una pieza de tela delgada.
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7. Taponamiento
El material de vidrio limpio y seco se deber guardar
en una alacena para preservarlo del polvo. Se reco-
mienda que los recipientes se taponen con algodn
no absorbente, guata, o se les cubra la boca con
pequeas tapas hechas de papel de peridico o, de
preferencia, con hojas delgadas de parafina o material
plstico adherente (por ejemplo, Parafilm o Sarn),
, si se encuentran disponibles.
I I . PIPETAS
1. Enjuague inmediato
Tan pronto como se haya usado una pipeta se debe enjuagar con un chorro de agua fra para limpiarla de
sangre, orina, suero, reactivos, etc.
2. Remojo en agua
Despus de enjuagarlas coloque las pipetas en una probeta grande, de material plstico (o una palangana)
llena de agua. Si las pipetas se han utilizado para medir material infeccioso djelas en una probeta llena de
solucin desinfectante (algn compuesto cuaternario de amonio, o fenol al 2%) durante 24 horas.
4 . Pipetas obstruidas
(a) Ponga en un cilindro lleno con una solucin limpiadora de bicromato (reactivo No. 10), depositndolas
con suavidad. Djelas 24 horas en esta solucin.
(b) Al da siguiente traslade la solucin de bicromato a otro cilindro (se puede usar 4 veces).
(c) Coloque el cilindro que contiene las pipetas bajo el chorro de agua del grifo y enjuagelas minuciosa-
mente.
(d) Saque las pipetas, una a una. Verifique que se han eliminado las obstrucciones. A continuacin enjua-
gense nuevamente.
(e) Remoje las pipetas en agua limpia durante 30 minutos, cambie el agua y vulvalas a remojar otros 30
minutos.
Advertencia: La solucin de bicromato es sumamente corrosiva y se debe emplear con cuidado extremo. Si se derrama accidental-
mente sobre la piel, los ojos o la ropa, lvese inmediatamente con cantidades copiosas de agua.
5. Secado
Seque las pipetas de vidrio Pyrex en el h o m o de aire caliente a 60 C y las de vidrio ordinario en la incubadora
a 3 7 0 C o a l aire.
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III. PORTAOBJETOS
A. Portaobjetos nuevos
2. Enjuague en agua
Enjuague cada portaobjetos con agua del grifo y a continuacin con agua limpia durante 15 minutos.
3. Limpieza y secado
Limpie los portaobjetos, uno a uno, con un trapo suave, que no desprenda pelusa. Colquelos separados,
sobre una hoja de filtro de papel, uno a uno. Djelos secar. Posteriormente, examine cada portaobjetos.
Descarte los que se encuentren teidos o raspados y los que tengan un color amarillento o porciones opacas.
4. Envoltura
Junte los portaobjetos en montoncitos de 10 20 y envulvalos con hojas pequeas de papel.
5. Numeracin
En algunos laboratorios se acostumbra numerar los
portaobjetos por anticipado en grupos de cinco
paquetes, de 1 a 100, con un lpiz de diamante (de
esta manera los paquetes contienen portaobjetos del
1 al 20, del 21 al 40, del 41 al 60, del 61 al 80 y del
81 al 100).
B. Portaobjetos sucios
Mtodo rpido
Vacese la palangana de solucin detergente dbil y llnese con agua limpia. Cambese el agua tres veces
agitando vigorosamente la palangana cada vez.
C. Cubreobjetos
Despus de usarlos, los cubreobjetos se pueden recobrar, limpiar y usar nuevamente. Para limpiarlos:
1. Remjense en una solucin dbil de detergente a la que se haya agregado un desinfectante preparado en un
vaso grande de precipitado como se indica a continuacin:
200 mi de agua
3 mi de detergente
15 mi de leja o 5 mi de un desinfectante cuaternario derivado del amonio.
Djense en remojo durante 2 - 3 horas, movindolos suavemente de vez en cuando.
2. Enjuague cuatro veces el vaso donde estaban con agua del grifo, agitndolo suavemente.
3. Lvese por ltimo con agua desmineralizada.
4. Escurra los cubreobjetos colocndolos cuidadosamente de punta sobre una pieza de gasa doblada.
5. Si es posible, seqense en el homo de aire caliente a 60C.
6. Consrvense en una placa de Petri pequea. Para sacarlos utilice una pinza especial para portaobjetos si se
dispone de ella.
3. Agujas obstruidas
Utilice un hilo de nyln remojado en cido actico
al 50%. De lo contrario, emplee un estilete.
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4. Esterilizacin
Esterilizar significa eliminar de un objeto o una sustancia todas las formas de vida, cualesquiera que stas sean.
En consecuencia, el equipo de laboratorio que se ha esterilizado queda libre de microorganismos vivos.
En el laboratorio mdico los materiales se esterilizan con tres propsitos principales:
1. Prepararlos para la recoleccin de muestras (debern estar estriles agujas, jeringas, tubos, etc.).
2. Desinfectar los materiales contaminados.
3. Preparar los utensilios que se emplean en los cultivos bacterianos (cajas de Petri, pipetas Pasteur, tubos, etc.).
En el laboratorio mdico la esterilizacin se logra por medio de calor hmedo (autoclave, ebullicin) o calor seco
(horno de aire caliente, flameado).
I. EL AUTOCLAVE
Principio
En un recipiente cerrado se calienta agua. Esto produce
una saturacin de vapor a presin, con temperatura
superiora 100 o C.
Toda clase de grmenes mueren al calentar los utensilios
durante 20 minutos a 120C en este vapor a presin.
Agujas
Es preferible colocar las agujas por separado en tubos de
ensayo pequeos que se taponarn inmediatamente des-
pus. Coloqese por anticipado una pieza de algodn no
absorbente o guata en el fondo de cada tubo para prote-
ger las puntas de las agujas.
De lo contrario, dispnganse las agujas en bandejas
metlicas, hundiendo las puntas en una pieza de gasa
doblada.
Las bandejas metlicas se colocarn sin tapa en el auto-
clave.
Cristalera
Los tubos para muestras, las cajas de Petri, etc., se envol-
vern en papel de estraza y se atarn con cordeles.
Pipetas Pasteur
Se colocarn en tubos amplios y largos, que se taponarn
inmediatamente despus.
Tambin se pueden envolver con varias hojas de papel de
estraza.
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2. Procedimientos para la esterilizacin
(a) Llene con agua el fondo del autoclave (hasta el soporte de la canasta).
Cercirese de que el agua no toque la canasta. Si es necesario, elimine el exceso de agua abriendo la espita
de drenaje.
(b) Introduzca en el autoclave la canasta con los materiales que se van a esterilizar.
(Se pueden aadir indicadores de la esterilizacin, como ciertas piezas de papel especial que ennegrecen al
lograrse la temperatura adecuada.)
(c) Cierre la tapa del autoclave, cerciorndose de que la arandela de goma se encuentra en su surco. Atornille
a niveles guales los sujetadores de la tapa, con firmeza pero sin apretar demasiado.
(f) Vigile la vlvula de salida del aire hasta que aparezca un chorro de vapor. Aguarde 3 - 4 minutos hasta que
el chorro de vapor sea uniforme y continuo. Esto indicar que todo el aire se ha expulsado del autoclave.
(g) Cierre a continuacin la vlvula de salida del aire. Apritense los sujetadores de la tapa del autoclave y
redzcase la temperatura ligeramente.
(h) Observe el indicador. Cuando se obtenga la temperatura deseada (p.ej. 120 o C) se deber regular el calor
para conservarla. Redzcase el calor hasta que la aguja del indicador permanezca en el grado de tempera-
tura escogido.
Las ollas de presin son cacerolas amplias, construidas para cocinar alimentos con gran rapidez empleando vapor
a presin. En algunos laboratorios pequeos se utilizan para esterilizar los utensilios con que se recolectan las
muestras.
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5. Desecho de muestras y
materiales infectados
Importante: Las muestras examinadas en el laboratorio (heces fecales, pus, esputo, orina, etc.) frecuentemente
son infectantes. Despus de examinarlas se deben destruir de manera que se evite todo riesgo de contaminacin.
Estas muestras se pueden desechar en:
- cajas de cartn o recipientes de material plstico que se pueden destruir (heces fecales, esputo)
- frascos (tarros) de vidrio y matraces que se puedan limpiar, esterilizar y usar nuevamente.
Todos los recipientes desechables se usan solo una vez.
A. Incineracin
Fabricacin de un incinerador
1. Disponga de un barril o latn metlico grande, usado.
2. Fije con firmeza una rejilla de metal resistente (R)
aproximadamente a un tercio de la altura del barril.
3. Corte en el metal una abertura amplia o ventanilla
(V) abajo del nivel que ocupa la rejilla.
4. Procure una tapa suelta (T) para el barril.
Cmo incinerar
1. Al terminar el trabajo de cada maana y cada tarde
coloqense en la rejilla del incinerador todas las
cajas usadas con heces fecales y esputo.
2. El barril metlico deber estar siempre firmemente
cerrado (por medio de la tapa y la ventanilla) excepto
durante la incineracin.
3. Incinrelo una vez por semana o ms frecuente-
mente si es necesario. Llene el fondo del barril con
papeles, palos, virutas, etc.
4. Quite la tapa. Encienda el fuego y alimntelo hasta
que todos los materiales infectados se hayan redu-
cido a cenizas.
5. Estas cenizas no son peligrosas y se pueden arrojar al
basurero.
B. ENTIERRO DE LOS DESECHOS
(a) Abra un foso de 4 - 5 m de profundidad y 1 - 2 m de
anchura.
(b) Fabrique una tapa que se ajuste con firmeza a la
boca del foso. Es conveniente reforzar el borde de la
** boca del foso con un revestimiento de ladrillos o
piedras.
(c) Dos veces al da arroje en el foso las cajas usadas con
heces fecales, esputo u otras materias infectadas.
Coloque inmediatamente la tapa en su lugar.
(d) Una vez por semana cubra los desechos con una capa
(de 10 cm de espesor, aproximadamente) de hojas
secas.
(e) Si es posible, en vez de hojas secas deposite una capa
de cal viva una vez por semana.
Este procedimiento es ms difcil (por lo tanto, siempre que sea posible sense recipientes desechables).
Los frascos (tarros) y matraces pueden contener:
- materias sumamente infecciosas (heces fecales, esputo, pus, lquido cefalorraqudeo)
otras muestras (sangre, orina).
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2. PIPETAS
3. MATRACES VOLUMTRICOS
Tapones
Los matraces volumtricos deben acompaarse de
tapqnes de material plstico (de preferencia) o de vidrio
esmerilado. Se debe tener cuidado de no extraviarlos, as
pues tense al cuello del matraz con un trozo de hilo.
Cosfo
Los matraces volumtricos suelen ser sumamente
costosos, por lo que se deben usar con mucho cuidado.
4. BURETAS
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7. Balanzas
UNIDADES DE PESO
Sensibilidad de la balanza
La sensibilidad de la balanza corresponde a la masa ms pequea que desplace el fiel una divisin en la escala de
medicin. Por ejemplo, si la sensibilidad de la balanza es de 1 mg se necesitar por los menos una masa de 1 mg
para desplazar el fiel.
Para los fines habituales del laboratorio se puede considerar que la sensibilidad de una balanza es la masa ms
pequea que esa balanza puede pesar con precisin.
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2. BALANZA ANALTICA
-/-
49
Instrucciones para usar la balanza analtica
1. El astil siempre se deber encontrar en descanso (con el tornillo liberador apretado) antes de que se coloquen
en los platillos las pesas y la sustancia que se va a pesar.
2. El astil siempre deber quedar nuevamente inmvil antes de retirar de los platillos las pesas y la sustancia que
se ha pesado.
3. C oloque siempre la sustancia que va a pesar sobre una pieza de papel doblada cuatro veces, o bien en un
cristal cncavo (de reloj) o un platillo de porcelana.
4. Utilice siempre pinzas para recoger las pesas.
5. C ompruebe que los platillos se encuentran equilibrados aflojando el tornillo liberador del astil despus de
cerrar el estuche de vidrio.
6. Use los tomillos de ajuste T A I y TA2 para lograr un equilibrio perfecto compensando el peso del receptculo
en que se ha colocado la sustancia que se va a pesar.
C uando estos tornillos se giran hacia afuera del soporte central aumenta el peso.
C uando se giran hacia adentro del soporte central el peso disminuye.
3. BALANZA DE DISPENSARIO
Sensibilidad: 5 1 0 mg.
La balanza de dispensario es ms exacta que la balanza ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' * " ' ' ' ' ' * ' ' ' ' ' ' ' * ' ' * * ' ' ' * * ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' * * ' ' ''''***'
"'"ia?
abierta de dos platillos, pero solo puede pesar hasta 50g.
(Despus de usarla, guarde la balanza en una alacena
cerrada.)
51
8. Centrfugas
Fuerza centrfuga
Hace que un cuerpo se ponga en movimiento circular a
gran velocidad (MC). De este modo se genera una fuerza
que aleja este cuerpo del centro del crculo; se llama'
fuerza centrfuga ig).
Al usar una centrfuga se deben respetar las instrucciones
del fabricante, aunque tambin es posible calcular las
revoluciones por minuto (r/min) que corresponden ag
en una centrfuga. Para esto mdase el radio (r) del brazo
del rotor y apliqese la frmula siguiente:
g = r x (r/min) 2 x 118 x 10" 7
Por ejemplo, si el radio es de 25 cm, 5 0 0 g corresponde-
rn aproximadamente a 1300 r/min.
^ -v
":;;]} m:?m>
r'
A. Centrfuga manual
Esta centrfuga se hace girar por medio de un manubrio.
Contiene de 2 a 4 tubos.
Usos
1. Para examinar sedimentos en la orina
2. Para concentrar ciertos parsitos en las heces fecales.
Su velocidad no es suficiente para separar en la sangre
los glbulos rojos y el plasma.
Importante:
1. Con la prensa de sujecin de la centrfuga de mano fije sta firmemente en un punto de apoyo estable (el
borde de una mesa).
2. Equilibre completamente los dos tubos que se hallan diametralmente opuestos, como se indica en las instruc
clones para el uso de esta clase de centrfuga, en la pgina 54.
3. Mantngase a cierta distancia mientras efecta la centrifugacin.
4. Para detener la centrfuga no reduzca lentamente la velocidad del manubrio. Separe el manubrio de la
mquina con un movimiento brusco.
5. Saque los tubos lenta y cuidadosamente (para no agitar los sedimentos).
6. Lubrique con regularidad el rbol de la centrfuga.
Advertencia: La centrifuga manual puede causar serias lesiones fsicas, por tanto, siga estas instrucciones minuciosamente.
B. Centrfugas elctricas
En algunos sitios se pueden usar centrfugas que funcio-
nan con pilas elctricas.
Las centrfugas elctricas se construyen con dos tipos de
cabezal.
1. Cabezal oscilante
Este cabezal est diseado para que durante la centri-
fugacin los tubos adopten una posicin horizontal.
Este es el tipo de cabezal que se necesita con ms
frecuencia.
53
2. Cabezal oblicuo
Sostiene los tubos en un ngulo de 4 5 , aproximada-
mente, durante la centrifugacin. Es til en la aplica-
cin de ciertas tcnicas, como en los ensayos de
aglutinacin para determinar grupos sanguneos por
el mtodo del tubo de ensayo. Sin embargo, no es
esencial para las tcnicas que se describen en este
manual.
4. Limpieza y lubricacin
Consrvese la olla de la centrfuga muy limpia. Enjuague las cubetas despus de usarlas. Limpie todos los
residuos de sangre, etc.
La lubricacin deber hacerla un experto de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Importante: Si se acostumbra a centrifugar sin equilibrar primero los tubos, la centrfuga se romper muy pronto.
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9. Agua para uso del laboratorio
Para realizar el trabajo en el laboratorio mdico se necesita un suministro adecuado de agua. Se requiere:
1. Agua limpia
2. Agua destilada
3. Agua desmineralizada (si es posible)
4. Agua amortiguada (si es posible).
En algunas reas el agua es escasa y est sumamente contaminada. Cmo se puede obtener agua limpia?
I I 1
AGUA LIMPIA
A. Inspeccin de la calidad
1. Llene una botella con agua. 1
2. Djela reposar durante 3 horas.
3. Examine el fondo de la botella. Si hay un sedimento
ser necesario filtrar el agua.
Filtrado
Filtro de porcelana no vidriada, o de vidrio calizo
(tipo Chamberland u otro semejante)
(a) Este filtro se puede ajustar al grifo.
(b) De lo contrario, se puede conservar sumergido
en el agua que se va a filtrar, en un recipiente
amplio.
Importante: Los filtros de este tipo se deben
desarmar una vez al mes y lavarlos en agua hirviendo
previamente filtrada.
2. Filtro de arena
Este filtro se puede fabricar en el laboratorio. Se
necesitan:
(a) Un depsito (que puede ser un recipiente amplio
como un barril metlico, una olla grande de
barro o una cubeta perforada)
(b) Arena
(c) Grava.
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C. Almacenamiento del agua
Si el agua es escasa o proviene de un tanque o pozo, con-
srvese siempre una reserva abundante, de preferencia,
en depsitos de vidrio o material plstico.
Antes de filtrarla decante el agua almacenada.
D. Suministro de agua
Si en el laboratorio no se dispone de agua corriente
prepare un distribuidor de la manera siguiente:
1. Coloque el depsito de agua en un anaquel alto.
2. Ponga un tubo de goma al depsito, de manera que
el agua descienda por l.
3. Mantenga cerrado el tubo de goma con una grapa de
Mohr o una pequea pinza de tornillo.
AGUA DESTILADA
A. Preparacin
El agua destilada se prepara por medio de una retorta en
que:
se caliente agua normal hasta el punto de ebullicin
el vapor que se produce se enfra al pasar por un
serpentn y se condensa formando agua destilada.
Para este fin existen los aparatos siguientes:
1. Retortas de cobre (alambiques)
2. Retortas de vidrio.
Se calientan con gas, queroseno o electricidad, depen-
diendo del tipo de retorta.
Importante:
(a) Almacnese el agua destilada en un recipiente de
vidrio o material plstico que se encuentre protegido
de la atmsfera.
(b) No destile el ltimo % del agua que se ha calentado.
Importante:
1. No use agua destilada comercial (del tipo empleado para llenar las pilas acumuladoras de los automviles) en
la preparacin de reactivos para el laboratorio.
2. Es preferible el agua destilada que se ha preparado recientement; si no es posible disponer de esta, gurdese el
agua destilada en recipientes de vidrio o material plstico que se lavarn peridicamente.
3. Utilice siempre agua destilada preparada en la misma semana.
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AGUA DESMINERALIZADA
Principio
El agua desmineralizada se prepara haciendo pasar el agua
ordinaria por una columna de resinas de intercambio
inico.
El aparato que se utiliza consiste en un tubo largo
(cartucho) lleno de granulos de resinas de intercambio
inico.
El agua se filtra a travs de la columna de granulos, que
retienen todos los iones minerales (sales minerales disuel-
tas). Este agua, desprovista de iones, se llama agua des-
mineralizada.
A. Preparacin
1. Compruebe que el tubo est completamente lleno
de granulos de la resina de intercambio inico.
Algunos aparatos desmineralizadores tienen dos
tubos (cartuchos) por los que pasa el agua sucesiva-
mente.
2. Conecte el tubo del entrada del aparato al suministro
de agua (el grifo o un pequeo tanque colocado en
un plano alto).
En algunos modelos el agua entra por la parte
superior de la columna y en otros lo hace por el
fondo.
3. Deje que el agua entre despacio.
4. Recoja el agua desmineralizada en un recipiente
cerrado.
Por lo general el agua destilada es cida y el agua desmineralizada se acidifica cuando se expone al aire. Para
algunos procedimientos de laboratorio (preparacin de colorantes, etc.) el pH del agua debe ser de 7,0,
aproximadamente (agua neutra) y conservarse en estas condiciones. Esto se logra, cuando es posible,
disolviendo sales amortiguadoras en el agua (agua amortiguada).
A. Materiales
(a) Probetas de 10 mi y 1000 mi
(b) Un matraz volumtrico de 1000 mi
(c) Un comparador del tipo de Lovibond (UNICEF
ref. No. 931200), si se cuenta con l. Oe lo
contrario, papeles indicadores del pH, de poca
amplitud de deteccin
(d) Agua destilada (o desmineralizada)
(e) Indicador de azul de bromotimol
(f) Hidrofosfato disdico (Na 2 HPO* 2 H 2 O)
(g) Fosfato de potasio y dihidrgeno
(KH2P04).
B. Mtodo
1. Pese con precisin 3,76 g del fosfato disdico.
2. Pselo a un matraz volumtrico de 1000 m con un
embudo.
ggs^r i
63
10. Manufactura de utensilios de vidrio
El vidrio se produce por la fusin, a temperaturas muy elevadas, de una mezcla de arena y potasio (o sodio). De
este modo se forma un silicato {vidrio ordinario, de cal y soda). Cuando se agrega cido brico a stos ingredientes
se produce vidrio de borosilicato (Pyrex, etc.), que es menos quebradizo y ms resistente al calor. En el
laboratorio se pueden manufacturar ciertas piezas del equipo que se suele usar, calentando vidrio ordinario.
A. MATERIALES
fy*ipir
B
Doblados defectuosos
(A) El vidrio se calent demasiado.
(B) El vidrio no se calent suficientemente. L
Se necesitan:
un matraz redondo
dos trozos de tubo de vidrio
un tapn de corcho o goma.
Perfore el tapn con una broca. Humedezca los extremos
de los tubos con algunas gotas de agua (cuando se use
tapn de corcho) o glicerol (si se usa tapn de goma)
antes de insertarlos en las perforaciones. Protjase las
manos con una pieza de tela.
11. Recipientes para muestras
En el laboratorio se emplean distintos recipientes para recolectar muestras de heces fecales, sangre, orina y esputo.
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(b) Tubos con heparna
Este anticoagulante es costoso y poco estable en
los climas clidos. Los tubos con heparina se pueden
obtener en el comercio o prepararseen laboratorios
centrales; tienen marcas indicadoras del nivel hasta
donde se deben llenar con sangre.
(c) Citrato trisdico al 3JB%
Preparacin: vase el reactivo No. 52.
Se usa para determinar la velocidad de sedimentacin
de los eritrocitos. Emplese 1 mi de solucin de
citrato trisdico por cada 4 mi de sangre ( 0,4 mi
por cada 1,6 mi de sangre).
Importante: Nunca se hagan recuentos de clulas
sangu neas con citrato.
El procedimiento mejor para los anlisis de orina consiste en que los pacientes las recojan cerca del laboratorio.
Use matraces de boca ancha de Erlenmeyer limpios y secos, con capacidad para 2 5 0 m l , o frascos limpios de
boca amplia para efectuar los exmenes directos y los ensayos bioqumicos habituales (vase la pgina 305).
Recoleccin de agua para examen bacteriolgico (vase la pgina 279).
Frascos para recolectar lquido cefalorraqudeo (vase la pgina 350).
69
IV. CAJAS Y TARROS PARA RECOLECTAR
MUESTRAS DE ESPUTO
Los laboratorios perifricos suelen enviar muestras a los laboratorios de referencia o a otros ms especializados
con el fin de que efecten exmenes que ellos no estn en condiciones de realizar. Por ejemplo:
anlisis serolgicos de treponematosis o tifoidea; cultivos de heces fecales para detectar el vibrin del clera;
exmenes histolgicos de materiales obtenidos en bipsias.
El cuadro siguiente indica, para cada tipo de muestra y cada examen:
el recipiente y el preservativo (cuando sea necesario) que se deben usar
la cantidad de muestra que se debe enviar
el tiempo que se pueden conservar las muestras.
71
Tipo de Tipo de examen Recipiente y Cantidad
muestra de laboratorio preservativo de muestra Duracin
72
Tipo de Tipo de examen Recipiente y Cantidad
muestra de laboratorio preservativo de muestra Duracin
PELOS, UAS, Bsqueda de hongos Sobre de papel o frasco con tapa de rosca (no se usen Por lo
TEJIDO CUTNEO (micosis) tubos con tapn de caucho ni taponados con algodn) menos una
semana (a
veces, ms)
73
EMPAQUETADO
Respete siempre los reglamentos en vigor en el pas.
Coloque las muestras en empaques dobles.
Las muestras se metern en frascos o tubos cerrados
hermticamente (fijando el tapn con cinta adhesiva).
Compruebe que el recipiente tenga una etiqueta con el
nombre del paciente.
74
13. Fijacin y envo de material de bipsias
para estudios de patologa
Biopsia
Para diagnosticar algunas enfermedades de los rganos el mdico extrae un fragmento de tejido con una pinza
o un bistur especiales. Esta pieza de tejido se llama muestra de biopsia. Se examina al microscopio despus de
cortar una porcin delgada y tratarla con una tincin especial.
Histologa - Patologa
Las clulas de los tejidos y las muestras de bipsias de los rganos se pueden estudiar con el microscopio. El
examen microscpico de las clulas se llama histopatologa.
La patologa es el estudio de las modificaciones y deformidades de las clulas causadas por diversas enfermedades.
Los exmenes de este tipo pueden ser sumamente importantes, especialmente para el diagnstico del cncer.
El tcnico de laboratorio deber ser capaz de fijar la muestra de biopsia, y asegurar que se enve de la manera
apropiada y llegue al laboratorio de patologa en condiciones de conservacin satisfactorias.
El fragmento de tejido se sumerje en un lquido fijador. Este procedimiento deber permitir que se conserve
hasta donde sea posible en condiciones semejantes a las del tejido vivo, protegindolo de la accin de las
bacterias, la autolisis, el encogimiento, etc.
El recipiente ms adecuado para esta clase de muestras es un frasco de material plstico, de boca ancha, con tapa
(frasco para tabletas). Se puede obtener en tamaos de 60 mi, 45 mi, 30 mi y 15 mi.
Fijadores
Los fijadores que se preparan ms fcilmente son:
Solucin salina de formaldehido (reactivo No. 25)
Fijador de Zenker (reactivo No. 61). Inmediatamente antes de usar este fijador aada 5 mi de cido actico
glacial por cada 100 mi de la solucin de Zenker.
3. Etiquetado
Corte un rectngulo pequeo (aproximadamente
^-^ t
de 3 x 1 cm) de papel duro. Con un lpiz de plomo
escriba en el papel el nombre del paciente, la fecha
en que se ha obtenido la muestra, etc. Pegue la
pieza de papel en el recipiente que contiene el W0
fijador.
Tiempo de fijacin
El tiempo vara segn el fijador que se utilice. Con
los dos fijadores que se han mencionado pueden
transcurrir de 24 a 48 horas antes de que la muestra
se corte y tina, aunque se puede dejar en el lquido
por lo menos durante una semana. El material ya
fijado se debe enviar al laboratorio de patologa sin
tardanza, aunque un transporte prolongado no
daar a las muestras.
5. Envo
Asegure la tapa o el tapn del recipiente con cinta
adhesiva.
Coloque el recipiente en un tubo o una caja de
metal, junto con el informe correspondiente
(nombre, fecha, enfermedad sospechada, tipo de
tejido que se enva, investigacin que se solicita).
A continuacin ponga el tubo o la caja con el
informe en un estuche pequeo de madera o cartn,
rellene el espacio vaco con algodn no absorbente iiimiMin:
y envelo inmediatamente. 'Uiiiiiiniii
C. TCNICA DEL EXAMEN HISTOLGICO:
GENERALIDADES
3. Corte
El bloque en que se ha incluido el tejido se corta
en secciones suficientemente delgadas para poderlas
examinar con el microscopio.
El instrumento que se utiliza para hacer estos
cortes se llama " m i c r o t o m o " y con l se pueden
obtener las secciones sumamente delgadas que se
necesitan.
El espesor promedio de los cortes es de 3-5/m
(micrometros).
4. Tincin
Los cortes se colocan en portaobjetos y se secan,
la parafina se desprende aplicando un solvente
(por ejemplo, xilol). A continuacin los cortes
se deshidratan y tien. Existen varios tipos de
tincin; el patlogo elige, segn la naturaleza de
la muestra y la enfermedad que se sospecha.
A medida que lleguen al laboratorio se debe hacer una relacin numerada de todas las muestras y anotar los
resultados de todas las investigaciones. De esta manera:
se evita el riesgo de confundir muestras
se puede localizar cualquier resultado
se tienen a mano los resultados para el fomento de la salud pblica.
Los registros del laboratorio comprendern una serie de cuadernos de notas con pginas numeradas y cubiertas
duras. Se asignar a cada muestra el nmero correspondiente en el registro para ese tipo de muestra.
Se sugiere la serie de registros siguiente:
Hematologa
Qumica sangunea
Transfusin sangunea
Donadores de sangre
Parasitologa
Anlisis de orina y I quido cefalorraqu ideo; pruebas de embarazo
Bacteriologa, micologa, anlisis de aguas
Serologa (si las muestras son escasas incorprense en el registro de bacteriologa; de lo contrario utilice
otro libro de registro).
Los ejemplos de los registros que figuran en las pginas siguientes se modificarn segn las necesidades. Por
ejemplo, puede ser ms conveniente contar con registros separados para los anlisis de orina y los de lquido
cefalorraqu ideo, y para las pruebas de embarazo.
Es t i l , y ahorra tiempo, contar con sellos de goma para estampar las pruebas y resultados ms frecuentes.
Por ejemplo:
Para el V D R L : NO REACTIVO
78
REGISTRO DE HEMATOLOGIA*
Fecha No. Paciente Enviado Hb' Eritrocitos Fracc. de Cone. med Leucocitos Paludismo Ot ras Resultados
por (9/1) No.de de Hb en prueoas enviados
Fracc. Veloc. de Cone. de Morfologa retic.6 eritr. (g/l) c Cone. de Fraccin de nmero de los tipos en (fecha)
de vol. sedim. No. No.
(mm/h) (x 1012/l) (x107l) Neut. Linf. Mono. Eos. Otros
Ene. 1 1 MJ...R DrR. 117 23 Aniso ++ 124 - 4,2 0,48 0,35 0,13 0,04 Numerosos Ene. 1
Poiq + trofs. de
Poli++ P.falciparum
Ene. 1 2 KA...S Consulta 58 0,21 52 Aniso ++ 71 276 5,7 0,32 0,56 0,04 0,08 N a moderado Ene. 1
externa Poiq++ de trofs. de
Hipo++ P.falciparum
Poli +
* Para obtener una explicacin de los encabezados de los cuadros y columnas vanse las secciones correspondientes del texto. En estos encabezados el uso de abreviaturas se ha impuesto por la falta
de espacio y no se debe tomar como recomendacin de que se haga lo mismo en la prctica.
La hemoglobina tambin se puede expresar como concentracin de sustancia; as, el encabezado de la columna sera "Hb(Fe) (mmol/l)". En este caso los valores que se indican en los ejemplos
(Nos. 1 y 2) seran 7,3 y 3,6, respectivamente.
En este ejemplo los reticulocitos se expresan como fraccin de nmero. Tambin se pueden expresar como concentracin de nmero, o sea su nmero por litro. As, el encabezado de la columna
sera "concentracin de nmero de reticulocitos (x lO'/O" y las cifras dependeran de las concentraciones de nmero de los eritrocitos (que no se indican en los ejemplos puestos en este cuadro).
c
La concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos tambin se puede expresar como concentracin de sustancia; de este modo el encabezado de la columna sera "Conc. med. Hb(Fe) eri.
(mmol/l)". En este caso, el ejemplo que se cita (No. 2) tendra un valor de 17,1.
(O
REGISTRO DE TRANSFUSIN SANGUNEA
Fecha Nmero Nombre Enviado por Grupo sanguneo del paciente Grupo
del ABO
paciente Rhesus
Anti- Anti- Anti- Anti- Clulas Clulas Clulas
A B AB D A B 0
1 Enero 1 MO...C DrR. 1.008 7,0 Leuco. 20-30/CPC. Escasos moldes hialinos
1 Enero 2 LA...B Sala md. 2 1,012 6,8 Leuco. 5-10/CPC. Escasas clulas epit.
EXAMEN DE LIQUIDO CEFALORRAQUDEO (en el registro del anlisis de orina o por separado)
Fecha Nmero Nombre Enviado Aspecto Examen microscpico
del por microscpico directo
paciente
2 Enero 1 FE...W DrG. Turbio Gram: abundantes leucocitos
Escasos diplococos intracelulares
gramneg.
80
Grupo del No. del Cantidad Pruebas cruzadas Prueba de hemollsina Firma
donador frasco del cotejada para donadores
GPO
Salina Albmina Auto Auto
salina albmina
A Pos. 5 540 mi - - - -
BPos. 9 250 mi - - - -
OPos. 4 540 mi - - -
OPos. 7 540 mi - - - - Anti A: Sin hemolisis
Anti B: Sin hemolisis
81
LIBRO DE DONADORES DE SANGRE (pequeo cuaderno rayado para ejercicios)
Fecha Nombre del donador Grupo sanguneo Hemoglobina Nmero del
(g/D donador
REGISTRO DE BACTERIOLOGIA
Fecha Nmero Nombre del Enviado por Muestra Examen Resultados Resultados
paciente solicitado enviados en:
(fecha)
3 Enero 6 LA...R Sala Md. 1 LCR Tincin de Muy escasos leuco.; no hay 3 Enero
Gram erit,; muy escasas clulas
epiteliales; no se observan
microorganismos
82
REGISTRO DE PARASITOLOGIA
Fecha Nmero Nombre del Enviado por Muestra Examen Resultados Resultados
paciente solicitado enviados en:
(fecha)
REGISTRO DE SEROLOGIA
Fecha Nmero Nombre del Enviado por Muestra Examen Resultados Resultados
paciente solicitado enviados en:
(fecha)
83
C. EL INFORME MENSUAL
Al final del mes el laboratorio presentar un informe al director de los servicios centrales de laboratorio o, si esta
posicin no existe, elevar el informe al Departamento de Salud Pblica a nivel provincial y central.
Valor del informe mensual:
(a) Ayuda a llevar cuenta de las actividades de los laboratorios y es provechoso para conseguir el personal
adecuado, solicitar suministros a los expendios centrales y elaborar el presupuesto de los servicios de
laboratorio en el plano nacional. Los informes que se basan en el nmero de pruebas realizadas son los ms
convenientes para la administracin de los laboratorios.
(b) Es de gran ayuda para la supervisin de la salud pblica en el rea que abarca el laboratorio, ya que notifica
el nmero de resultados positivos concernientes a diversas enfermedades transmisibles.
A continuacin se proporciona un ejemplo de informe mensual.
LABORATORIO
MES TERMINADO EL
LABORATORIO
1. Nmero de exmenes realizados
Hematologa Exmenes generales 1235
Qumica sangunea 27
Donadores de sangre 34
Servicios de transfusin sangunea 38
Anlisis de orina:
exmenes directos 287
qumica 43
Pruebas de embarazo 17
LCR:
exmenes directos 3
qumica 3
Parasitologa:
heces fecales 162
sangre 802
otros 2 (tripanosomas
en ganglios
linfticos)
Bacteriologa:
tinciones de Gram 63
tinciones A-F 41
tinciones de Wayson 11
micologa 3
Serologa:
V D R L : cualitativo 114
cuantitativo 16
1. Exmenes bacteriolgicos
Gonorrea 11
Lepra , 0
Peste infecciosa 0
Tuberculosis 7
2. Exmenes parasitolgicos
Amebiasis 14
Ascaridiasis . 22
Filariasis 1
Ancilostomiasis 80
Paludismo 253
Oncocercosis 0
Esquistosomiasis 2
"La lista de enfermedades de notificacin obligatoria vara de un pas a otro. Las autoridades centrales de salud pblica la formulan
teniendo en cuenta:
(a) Los reglamentos internacionales para la notificacin de enfermedades transmisibles
(b) Las enfermedades prevalecientes en el rea.
84
15. Almacenamiento, inventaro, pedidos de suministros
A. ALMACENAMIENTO
1. Utensilios de vidrio
Gurdense los utensilios de vidrio en los anaqueles
de un armario, protegidos del polvo. Los matraces
de Erlenmeyer y los de fondo redondo se deban
taponar con algodn no absorbente o cubrir con
papel de estraza (o, de preferencia, con hojas
delgadas de parafina encerada o material plstico
adherente, como Parafilm o Sarn, si se cuenta con
ellos) y ordenarlos por tipos y tamaos. Las pipetas
graduadas se guardarn en gavetas (cajones) divididas
en secciones.
3. Instrumentos pesados
Algunos instrumentos, como los espectrofotmetros, se conservarn en una habitacin provista de un sistema
de enfriamiento de aire si el clima es clido y hmedo. Para guardar los microscopios consltense las pginas
24 y 25.
FICHA DE EXISTENCIAS
2 frascos
85
Cuando se pida un artculo, ndquese:
en la columna encabezada "Pedido a " dnde se envi el pedido
en la columna encabezada "Pedido" la fecha y la cantidad pedida.
Clasif quense las fichas de existencias en orden alfabtico estricto y consrvense en una caja o un archivero. Se
asignar un nmero a cada artculo que se anotar en la ficha de existencias, junto a " A r t c u l o No.".
2. Inventaro
Cada 6 meses se har un inventario de todos los suministros del laboratorio. Deber contarse la cantidad o los
nmeros de los artculos que se tengan en existencia y se comprobar que la cifra corresponde a la que figura
en la columna "Existencia" de la ficha.
C. PEDIDO DE SUMINISTROS
Un laboratorio adecuadamente organizado har un pedido de suministros a los expendios centrales cada 3
meses. Para elaborar cada pedido examnense las fichas de existencias, una por una.
Es ms fcil calcular las cantidades que se necesitan si en la parte inferior de cada ficha de existencias se
aade un cuadro como el siguiente:
CANTIDAD USADA Enero Febrero Marzo Abril Mayo Junio Julio Agosto Sept. Octubre Nov. Dic.
POR MES
19...
19...
19...
En el caso de las sustancias qumicas, las tinciones y los reactivos, pdanse las cantidades que se suelen usar en
3 meses, tomando en cuenta cualesquiera aumentos o disminuciones recientes en tales cantidades. Por ejemplo:
En un ao se han usado 8 frascos de tincin'de Giemsa
Esto equivale a una medida de 2 frascos cada 3 meses
Pdanse 2 frascos cada 3 meses ( 4 frascos cada 6 meses si los pedidos se elaboran dos veces al ao).
Fechas de vencimiento
Algunos reactivos (antisueros para grupos sanguneos, V D R L y otros antgenos, etc.) se deben emplear antes de
que se cumplan sus fechas de vencimiento. Antense las fechas de vencimiento en las fichas de existencias.
86
16. Electricidad: montaje de
equipo elctrico sencillo
No es esencial que exista un suministro exterior de energa elctrica en el laboratorio perifrico; casi todas las
tcnicas que se describen en este manual se pueden llevar a cabo prescindiendo de tal suministro y utilizando
equipo que se haga funcionar por medio de pilas elctricas o gas. Sin embargo, si el laboratorio cuenta con un
suministro exterior de corriente se podr emplear el equipo siguiente, que es sumamente provechoso:
Una lmpara elctrica para el microscopio (la iluminacin estable facilita los ajustes).
Una centrfuga elctrica (que es mucho ms rpida que la de tipo manual).
Una centrfuga para microhematocrito (deteccin rpida de la anemia).
Un espectrofotmetro o colormetro (para efectuar determinaciones de hemoglobina mucho ms exactas).
Un esterilizador elctrico, un baomara, etc.
Es posible que en el laboratorio sea necesario llevar a cabo conexiones o reparaciones sencillas. Las explicaciones
que se exponen a continuacin tienen por objeto ayudar al tcnico laboratorista a realizar estas tareas y se
limitan a los pasos que se deben dar en cada caso. Se recomienda que las personas inexpertas acten en un inicio
acompaadas por un instructor.
NOTA: En numerosos pases el equipo elctrico es diferente del que aqu se describe, que solo se ha escogido
como ejemplo para ilustrar los principios bsicos.
El botn y el interruptor que indican " A P A G A D O " tambin pueden abrir el circuito automticamente, cortando
la corriente cuando ste se encuentra sobrecargado. Cuando as ocurra, oprima el botn verde o conecte de
nuevo el interruptor para restablecer la corriente despus de haber averiguado y corregido la causa de la falla que
produjo la interrupcin.
A. MONTAJE DE UNA PIEZA NUEVA DEL EQUIPO
1. Voltaje
Confirme que el voltaje que se indica en el
instrumento es el mismo que hay en el suministro
externo de electricidad. En algn sitio del nuevo
instrumento habr un letrero que indique el voltaje
que se debe usar. El voltaje del suministro externo
se indica en el c ontador.
2 2 0 - 24,0.
Segn el instrumento, el aditamento que se menciona
puede ser: f^ ) (L-)
(a) una palanc a que se desplaza a la posicin de 110 V
220 V, etc .
n /?,
(b) un tomacorriente sin cable, que se puede c ambiar
de la posic in de 110 V a la de 220 V, etc .
(c) un t o m i l l o que se hace girar hasta la posic in de
eg
1 1 0 V , 2 2 0 V , etc .
88
4. Uso del transformador
Si el instrumento se ha construido para emplearlo con un voltaje diferente al del circuito del laboratorio, se
deber usar con un transformador. Por ejemplo:
la centrfuga adquirida solo funciona con 110 V
el voltaje del suministro de electricidad es de 220 V
obtngase un transformador de 110 V 220 V, indicando los vatios de la centrfuga.
Herramientas tiles
un destornillador
pinzas para cortar alambre
alicates de picos chatos o piramidales
alambre para fusible
diversos accesorios (enchufes, interruptores, etc.)
ANTES DE HACER ALGO
Corte la corriente:
oprimiendo el botn o tirando del interruptor que
indican " A P A G A D O " en el contador de electricidad,
o bien
quite el fusible del suministro de corriente.
1. Cambio de fusible
Levntese la tapa de la caja del fusible.
Si el fusible es de tornillos, el alambre se encontrar
extendido entre dos de ellos. Si el alambre se ha roto
o fundido la corriente elctrica no podr pasar; el fusible
se ha quemado. Afljense los dos tornillos. Qutese el
alambre averiado.
Sustituya el alambre averiado con alambre nuevo para fusible, del mismo calibre (grosor), o ms delgado si no
se consigue alambre del mismo grosor. Monte el alambre dndole forma de " S " , con una vuelta en cada extremo.
Si el fusible es de tornillos (vase la ilustracin anterior), el alambre deber pasar debajo de las pequeas arandelas
protectoras.
90
m y^-^
% > *
2. El enchufe
^ iiiOiss; >
El alambre de tierra del cable est envuelto en material aislante de color verde o verde y amarillo (T).
Proporciona un escape a la corriente elctrica en caso de que haya un aislamiento defectuoso, evitando que pase
por el cuerpo humano.
(a) Interruptores
Existen muchos tipos diferentes de interruptores.
Si se desea confirmar que funcionen adecuadamente
se deben desatornillar y abrir. Cercirese de que los
dos alambres del cable de entrada y los dos de salida
se encuentren firmemente montados en sus
respectivas terminales por medio de los tornillos
1,2, 3 y 4.
(b) Extensin
Una extensin es un cable provisto de un enchufe
macho (M) en un extremo y una entrada hembra (H)
en el otro. La entrada hembra se conecta al cable
principal por medio de dos terminales que posee
en su interior, exactamente igual que el enchufe
macho normal.
4. Contactos de pared
Para revisar un contacto de pared enchfese una lmpara que se encuentre en buenas condiciones de funciona-
miento. Algunos contactos estn provistos de un pequeo fusible que se puede sustituir. En caso contrario
conviene conseguir un electricista para reparar el contacto de pared.
92
c. MONTAJE DE UNA LAMPARA PARA EL
MICROSCOPIO
ppppE
93
17. Fontanera: procedimientos simples
Los defectos en la fontanera del laboratorio (un grifo que gotea, un vertedero obstruido, etc.) pueden afectar
el trabajo considerablemente. A continuacin se describen algunos procedimientos simples para resolver estos
problemas cuando no se pueda conseguir fcilmente un fontanero.
A. MATERIALES
B. EL GRIFO DE AGUA
97
18. Primeros auxilios en accidentes
ocurridos en el laboratorio
ACCIDENTES EN EL LABORATORIO
98
Tambin puede poner la cabeza inclinada bajo el
grifo, de modo que el chorro de agua le caiga sobre
el ojo.
(b) Despus de haber lavado el ojo, ponga en l 4
gotas de solucin acuosa de bicarbonato sdico
al 2%.
(c) Procrese la atencin de un mdico. Siga
aplicando la solucin de bicarbonato al ojo
mientras se consigue el auxilio mdico.
3. Ingestin de cidos
Al usar una pipeta se pueden ingerir cidos accidentalmente:
(a) Llmese un mdico.
(b) Haga que el paciente beba inmediatamente cierta cantidad de la solucin jabonosa al 5% (o bien haga que
ingiera dos claras de huevo mezcladas con 500 m! de agua o leche). Si no se cuenta con estos recursos el
paciente deber beber agua corriente.
(c) Iridquese al paciente que haga grgaras con la solucin jabonosa.
(d) Adminstrense al paciente 3 4 vasos de agua corriente.
(e) Si el cido ha quemado los labios y la lengua:
enjuagense profusamente con agua
humedzcanse con solucin acuosa de bicarbonato sdico al 2%.
3. Ingestin de lcalis
Al usar una pipeta se pueden deglutir lcalis accidentalmente:
(a) Bsquese un mdico.
(b) Hgase que el paciente beba inmediatamente:
solucin de cido actico al 5% (o bien, zumo de limn o vinagre diluido, a razn de una parte de
vinagre por cada tres partes de agua).
(c) Indquese al paciente que haga grgaras con la misma solucin de cido actico.
(d) Adminstrense al paciente tres o cuatro vasos de agua corriente.
(e) Si el lcali ha quemado los labios y la lengua:
enjuagense profusamente con agua
humedzcanse con cido actico al 5%.
99
Intoxicaciones
Las intoxicaciones pueden ocurrir por:
inhalar vapores o gases txicos (por ejemplo, cloroformo)
deglutir accidentalmente una solucin txica que se est aspirando con una pipeta.
1. Quemaduras graves
(a) Si la vctima est envuelta en llamas (por ejemplo, cuando se ha salpicado con ter u otro solvente
inflamable que se encuentre en combustin), cbrase rpidamente con una frazada (manta, cobertor) o
un sobretodo para aminorar el fuego.
(b) Infrmese inmediatamente al mdico que se encuentre de guardia en el departamento de urgencias,
explicando con claridad que hay un paciente con quemaduras graves que debe ser atendido.
(c) Acustese la vctima en el suelo. No se quiten sus ropas. Cbrase la vctima si siente fro.
(d) No se aplique tratamiento alguno a las quemaduras; esto deber quedar a cargo del mdico.
2. Quemaduras menores
(a) Sumrjase la parte afectada en agua fra o helada para mitigar el dolor.
(b) Apliqese mercurocromo (o tintura de yodo) a la quemadura.
(c) Coloqese un vendaje de gasa seca, sin apretarlo.
(d) Si la quemadura se infecta o no cura, envise el paciente a un mdico. Nunca se rompan las ampollas
que se forman en las quemaduras.
100
Lesiones orgnicas por choque elctrico
En el laboratorio se suele usar una corriente elctrica alterna de bajo voltaje (120 6 220 V) y los choques
elctricos son raros. Estos pueden ocurrir cuando se maneja equipo defectuoso, particularmente con las manos
hmedas. Los sntomas son prdida del conocimeinto y asfixia.
3. Lquidos inflamables
En el laboratorio solo se deben conservar cantidades reducidas de lquidos inflamables, como ter, etanol,
acetona, benceno, tolueno y bisulfuro carbnico.
ADVERTENCIA: El ter puede incendiarse aunque se encuentre a varios metros de distancia de una llama.
Nunca coloque un frasco con ter sobre una mesa de trabajo en que haya una llama descubierta (mechero
Bunsen, lmpara de alcohol, etc.). El bisulfuro carbnico es an ms peligroso.
4. Gas butano
Para encender un mechero de gas prndase primeramente un fsforo y apliqese al mechero, abriendo a
continuacin la llave del gas. Cada noche se cerrarn las vlvulas principales de todos los depsitos de gas
butano. Se cambiarn las conexiones de goma una vez al ao.
19. Plano de un laboratorio mdico perifrico
El ptano que figura en esta pgina indica la distribucin de espacio de un laboratorio mdico perifrico anexo
a un centro de salud. Corresponde a una instalacin en que se puedan llevar a cabo algunas o todas las tcnicas
que s describen en este manual. Se limita a una habitacin, ya que, con frecuencia, ste es todo el espacio de
que se dispone para el laboratorio. La habitacin deber medir, por lo menos, 5 x 6 m.
Asientos para
pacientes
Si se cuenta con dos habitaciones se recomienda que el servicio de transfusin sangunea se organice en la
segunda. Si no existe este servicio, la segunda habitacin se podr utilizar para lavabos y esterilizaciones. ILos
materiales sucios y contaminados se debern eliminar del lugar de trabajo del laboratorio con toda la rapidez
posible afin de proteger la salud de los operadores y evitar confusiones o contaminaciones cruzadas.
102
En esta figura se indica otra distribucin para la instalacin de un laboratorio perifrico. Es evidente que se
modificar segn las circunstancias.
103
20. Relacin de aparatos necesarios
para equipar un laboratorio perifrico
A continuacin se presenta una relacin de los aparatos necesarios para equipar un laboratorio que sea capaz
de efectuar todos los ensayos que se describen en este manual. Por lo general este tipo de laboratorio se instalar
en un hospital rural pequeo (hospital de distrito) que tenga entre 60 y 100 camas. Cuando el laboratorio se
encuentra anexo a un centro de salud y no a un hospital necesita menor cantidad de equipo, ya que probable-
mente no habr que llevar a cabo transfusiones sanguneas, pruebas V D R L , etc.
Las cantidades de los diferentes artculos que se proponen bastan para que un laboratorio que cuente con uno o
dos tcnicos realice 20-50 ensayos por da en lapsos de 6 meses.
I. INSTRUMENTOS DE LABORATORIO
A. Artculos esenciales
1. Microscopios
Un microscopio con tubo binocular inclinado, platina mecnica, 3 objetivos (x 10, x 40, x 100), oculares
(x 5, x 10), condensador y espejo planocncavo. Si existe suministro de electricidad, una lmpara
elctrica de microscopio, que se usar en los ensayos de hematologa.
Un microscopio con tubo monocular inclinado y los accesorios que se han indicado anteriormente, que
se emplear en las dems secciones del laboratorio (parasitologa, anlisis de orina, bacteriologa, etc.).
Si el laboratorio se encuentra en un centro de salud, un microscopio monocular ser suficiente.
2. Centrfugas
Una centrfuga elctrica con aditamento especial para microhematocrito en el cabezal y cuadrante
indicador.
Una centrfuga manual con cuatro cubetas.
3. Balanza
Si los reactivos se han de elaborar en el laboratorio, se necesitar una balanza analtica. Accesorios: un juego
de pesas.
4. Frigorficos
Siempre que se establezca un servicio de transfusin sangunea se deber contar con un frigorfico exclusivo
para tal servicio. Otros reactivos ( V D R L , pruebas de embarazo, etc.) y materiales (algunos medios de
transporte, muestras, etc.) se podrn conservar en un compartimiento del frigorfico del hospital o centro
de salud.
7. Contador diferencial
Si bien se puede utilizar una tarja manual para recuentos, con un contador diferencial se ahorra tiempo y se
logra mayor eficiencia.
8. Fotmetro o colormetro
Son necesarios para realizar ensayos de qumica sangunea y determinaciones precisas de hemoglobina.
La UNICEF proporciona un modelo alimentado por pilas elctricas (ref. 09-309 98, 09-310-00).
B. Artculos adicionales
1. Autoclave
Si el laboratorio se encuentra instalado en un hospital, se podr utilizar el servicio de esterilizacin de ste.
Si se halla en un centro de salud, se necesitar uno de los esterilizadores siguientes:
una olla de presin
un autoclave pequeo (elctrico o calentado en estufa de aceite o gas butano).
Jeringas graduadas, de 20 mi 2
Jeringas graduadas, de 10 mi 10
Jeringas graduadas, de 5 mi 20
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 18G (1,2 mm) x 40 mm 6x12
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 19G (1,0-1,1 mm) x 40 mm 6x12
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 20G (0,9 mm) x 40 mm 2x12
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 22G (0,7 mm) x 40 mm 6x12
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 23G (0,6 mm) x 32 mm 2x12
Agujas (con entrada que se adapte a las jeringas) tamao 25G (0,5 mm) x 16 mm 3x12
Tubo de goma para aplicar torniquetes, calibre 2-5 mm 2 piezas
Lancetas para extraer sangre capilar 10x12
Algodn blanco, absorbente 2 x 500 g
Algodn blanco, no absorbente 2 x 500 g
Frascos de inyecciones ( 5 , 1 0 , 20 mi) que hayan contenido antibiticos, reactivos, etc cuantos sea
posible
Equipo adicional conveniente
Agujas estriles, desechables, para extraer sangre las necesarias
Agujas con retn, 18G 12
Lancetas estriles, disponibles, para extraer sangre capilar las necesarias
Bistur' de hojas desechables (para lepra) 1
Pinzas curvas, sin dientes (para lepra) 1
Cajas desechables, de material o cartn, para recoger muestras 500
Aplicadores de madera (12cm x 1 mm) (se pueden fabricar en el laboratorio) 500
Frascos de 2,5 mi y 5 mi, preferiblemente de material plstico 50
Frascos de vidrio blanco, de boca amplia, de 50 m i , con tapa de rosca
y arandela de goma, para recoger esputo 25
Frascos de vidrio blanco, de 25 mi, con tapa de rosca y arandela de
goma, para recoger diversas muestras 25
Frascos de boca amplia, de todas variedades, para recoger orina 20-40
Pinzas de sacabocado para bipsias de piel (para oncocercosis) 1
Abatelenguas de madera 50
I I I . UTENSILIOS DE V I D R I O
Otros artculos
Placas de Petri, de vidrio:
de 112 mm de dimetro 4
de 156 mm de dimetro 4
Platos para evaporacin, de 75 mm (75 mi) 2
Para ensayos del V D R L :
frascos de vidrio claro, de 30 mi, con tapn de vidrio esmerilado,
de 35 mm de dimetro, con fondo plano 3
pipetas graduadas hasta el extremo inferior: de 1 mi (divididas en 0,1 mi) 5
de 0.2 mi (divididas en 0,05 mi) 30
V I I I . DIVERSOS
Introduccin
,;H
w ::\>\
112
1. Naturaleza de las observaciones.
Recoleccin de heces fecales
1. EXAMEN PARASITOLGICO
2. EXAMEN BACTERIOLGICO
3. EXAMEN QUMICO
113
RECOLECCIN DE LAS HECES FECALES
114
LO QUE NO SE DEBE HACER
1. Nunca deje las muestras de heces expuestas al aire en recipientes sin tapa.
2. Nunca deje muestras para examinarlas al terminar la maana (2 3 horas despus).
3. Nunca acepte muestras mezcladas con orina (por ejemplo, un orinal o chata).
4. Nunca coloque el recipiente que contiene la muestra de heces sobre la plantilla de solicitud de examen.
Para la recoleccin de muestras de heces con preservativos para exmenes bacteriolgicos (cultivo del vibrin del
clera o de otras bacterias causantes de disentera) vase la pgina 268.
1
2. Preparacin de los portaobjetos
MATERIALES
MTODO
1. En un portaobjetos coloqese:
; 1 gota de solucin de cloruro sdico, en la mitad
del lado izquierdo
1 gota de solucin yodada en la mitad del lado
derecho.
118
3. Tcnica especial para huevos de oxiuros
Principio
Los huevos de oxiuros (Enterobius vermiculars) se
suelen recoger (en especial en nios) en los pliegues de la
piel que rodea el ano. Raras veces se hallan en las
materias fecales.
MATERIALES
MTODO
119
4. Sostenga el hisopo formado con la mano derecha,
presione firmemente el portaobjetos contra el
mango de la cucharilla.
120
8. Observe con el microscopio, con abertura reducida
del condensador y utilizando objetivo x 10, en busca
de los huevos de E. vermicularis, que tienen las
caractersticas siguientes:
Forma: oval, aunque asimtrica (aplanada en un
lado y redonda en el lado opuesto)
Tamao: 50-60//m
Envoltura: lisa y delgada, aunque con una lnea
doble visible
Contenido: puede ser una masa granulosa (1) o un
embrin del helminto, plegado sobre
s mismo (2)
Color: transparente, incoloro
Vanse fotografas de estos huevos en la pgina 129.
(Segn el mtodo de Melvin, D. y Brooke, M. Laboratory
procedures for the diagnosis of intestinal parasites, Atlanta,
Secretara de Salud y Servicios Humanos de los EUA, Centros
para el Control de Enfermedades, 1969, pg. 138).
Orden numrico
Los huevos se numeran siguiendo el orden alfabtico y en este mismo orden se describen e ilustran. Al final de la
seccin (pginas 140 y 141) hay un cuadro completo formado por lminas de huevos que se puede utilizar para
hacer comparaciones iniciales rpidas.
Envoltura (con
pared doble)
Envoltura (con.
pared simple)
Contenido
granuloso
Embrin ciliado
Embrin
Espoln
lateral Cilios
Oprculo
Envoltura interna
Envoltura externa
Espcula
(botn o giba)
Membrana
(envoltura interna)
124
Gua para la identificacin de los huevos de helmintos ms frecuentes en las regiones tropicales
125
Pases
Ancilostoma
clidos
1. Ancylostoma duodenale
Tamao: 50-60 jum
Forma: oval, con polos redondos y ligeramente
aplanados (con frecuencia, un polo es
ms plano que el otro)
Envoltura: sumamente delgada; se observa como
una lnea oscura
Color: las clulas que hay en su interior son de
color gris plido (la solucin de yodo
las tie de pardo oscuro)
Contenido: vara segn el grado de maduracin.
126
2. Ascaris lumbricoides
Tamao:
Forma:
25-30 ixm
caracterstica (vase la ilustracin)
Asia
0
Envoltura: lisa y suave, aunque sumamente gruesa
(lnea doble)
Oprculo: fcilmente visible en el extremo delgado del
huevo, ajustado dentro de un engrosamiento
anular de la envoltura
Giba: pequeo botn situado en el extremo
ancho del huevo (P)
Contenido: un embrin ciliado, bien organizado
Color: la envoltura es parda, ligeramente amarilla,
y el contenido es amarillo plido.
Todo el
mundo
'Huevos en trnsito: El paciente ha ingerido hgado de carnero o res infectado por el parsito. Los huevos no se digieren y, a pesar
de que se encuentren en las heces fecales, el paciente no se infecta. Repita el examen 8 di'as despus, e indique al paciente que,
mientras tanto, no coma hgado o productos derivados de ste.
Especialmentei
pases fros O
5. Diphyllobothrium I atum
Tamao: 70 /m
Forma: oval, uniforme
Envoltura: lisa y delgada
Oprculo: difcilmente visible cuando no se encuentra
levantado
Giba: sumamente pequea, situada en el extremo
opuesto al del oprculo
Contenido: una masa de clulas pequeas ordenadas
alrededor de una clula central voluminosa
Color: amarillo plido.
128
Todo el
mundo
6. Dipylidium caninum
N**
Oxiuro
7. Enterobius vermicularis
Asia
9. Fasciolopsis buski
Todo el
mundo
Tamao: 45-50 nm
Forma: oval, casi redonda
Envoltura: doble; membrana externa delgada y
membrana interna frecuentemente ms
gruesa en los polos, con filamentos que se
extienden a partir de stos (redzcase la
iluminacin para poderlos observar), mez-
clados con granulos que ocupan el espacio
que hay entre las dos membranas
Color: gris muy plido
Contenido: una masa redonda (el embrin) con 6
garfios que refractan la luz, dispuestos en
forma de abanico y, con frecuencia,
algunos granulos claramente definidos en
el centro.
Importante: Antese en el registro si los huevos encon-
trados son abundantes o escasos.
Pa ses
clidos
13 Necator americanus
O
Huevo semejante a los de Clonorchis sinensis y Lejano
Heterophyes heterophyes Oriente
t
Tamao: 25-30 im
Forma: oval, son salientes notables
Envoltura: sumamente gruesa (la ms gruesa de los
3 huevos)
Oprculo: ms redondo que el de fi. heterophyes; se
traslapa menos que el de C. sinensis
Giba: sumamente pequea o invisible; situada en
el polo contrario al del oprculo
Contenido: un embrin ciliado.
132
15. Opistorchis felineus
Es sumamente difcil distinguir los huevos de los cuatro parsitos lanceolados orientales:
Clonorchis sinensis: redondeado, con oprculo que se traslapa claramente
Heterophyes heterophyes: redondeado, de color ms oscuro
Metagonimus yokogawai: envoltura ms gruesa
Opisthorchis felineus: delgado, frecuentemente asimtrico, sin giba visible.
31
Africa
Sur del m\
I Sahara l ^ J
133
Esquistosoma vesical Africa (3)
Mediterrneo Oriental
Esquistosoma rectal
Africa
134
Esquistosoma oriental Lejano
Oriente
(3
Tamao: 70-80/im
Forma: oval, casi redonda
Color: transparente o amarillo plido
Espoln: difcil de descubrir, lateral y sumamente
pequeo; puede estar oculto por granulos
(P) que frecuentemente se encuentran en
la superficie del huevo
Contenido: un embrin ciliado muy amplio.
2 1 . Schistosoma mansoni
Tricocfalo Todo el
mundo
Tamao: 50 nm
Forma: elipsoidal
Envoltura: ms bien gruesa y lisa, con dos capas
Color: envoltura anaranjada; contenido amarillo
Otros
caracteres: un tapn redondo y transparente en cada
polo
Contenido: una masa granulosa uniforme (que en las
heces "viejas" a veces se halla dividida).
Importante: especifique si se observan huevos
abundantes o escasos.
137
NO CONFUNDIR CON HUEVOS DE PARSITOS
3. Jabones
Tamao: 20-1000 im
Forma: redonda, ovalada o irregular (semejante al
corte de un tronco de rbol)
Color: pardo amarillento o incoloro
Contenido: I neas que irradian desde el centro, visibles
cerca de los bordes; centro vaco.
i!|L
139
HUEVOS MAS FRECUENTES y algunas estructuras microscpicas que pueden producir confusiones
1
13
26 12 23
24
i
Trchuris trichiura
(tricocfalo) H. nana
zm
Taenia solium
y
Taenia saginata Enterobius vermicularis
(oxiuro)
18 21 22
Strongyloides stercoralis
S. haematobium S. mansoni (larva) Pelo vegetal
140
HUEVOS MENOS FRECUENTES HUEVOS ENCONTRADOS EN ASIA
4 20
11 10 15
22 25 14
i
Strongyloides stercoralis Fragmento de carne
(huevo) (fibra muscular) Trichostrongylus M. yokogawai
19 16 8
141
COMO SE PRODUCEN LAS INFECCIONES POR PARSITOS INTESTINALES
Es muy conveniente que el tcnico de laboratorio comprenda como se producen las infecciones por parsitos
intestinales a fin de que pueda proporcionar informacin sobre higiene a quienes le rodean y adems, sepa l
mismo como evitar estas infecciones, especialmente en el propio laboratorio.
Parasitosis por: Se produce por:
Ancylostoma caminar descalzo en terrenos contaminados con heces fecales; jugar en el suelo (nios)
Ascaris comer vegetales y ensaladas crudos sin haberlos lavado adecuadamente; jugar en
terrenos infectados (nios)
Strongyloides caminar descalzo en terrenos contaminados con materias fecales; autoinfeccin;*
tocar con las manos, en el laboratorio, heces fecales
Esquistosomas baarse en arroyos o estanques contaminados con heces fecales u orina
Diphyllobothrum comer peces de lagos o ros sin suficiente coccin
Distomas:
F. heptica o
gigantica comer ensaladas sin haberlas lavado
Paragonimus comer cangrejos de ro sin suficiente coccin
Dicrocoelium deglutir accidentalmente hormigas infectadas (en ensaladas sin lavar o jugando los
nios en el csped)
Clonorchis comer peces de ro sin suficiente coccin
Oxiuros tener contactos con personas infectadas cuyas manos se encuentren sucias (nios que
juegan juntos); autoinfeccin
Tenias de la res
y el cerdo comer carne infectada sin suficiente coccin
Cisticercos de la
tenia del cerdo comer vegetales crudos sin lavar; autoinfeccin
Dipylidium caninum deglutir pulgas de perros infectados (nios)
Hymenolepis nana comer vegetales contaminados; tener contactos con personas infectadas; manipular
las muestras en el laboratorio sin las debidas precauciones
Hymenolepis
diminuta deglutir pulgas de ratas
Tricocfalos comer vegetales y ensaladas sin lavar
Trichostrongylus comer ensaladas sin lavar (Asia).
Protozorios**
Entamoeba histolytica y Giardia lamblia
por beber agua contaminada, comer ensaladas sin lavar, tener contactos con personas infectadas cuyas manos se
encuentren sucias y no respetar los reglamentos de limpieza del laboratorio.
Balantidium coli por comer vegetales sin lavar; por tener contactos con cerdos (en granjas).
142
5. Helmintos adultos que se encuentran en las heces fecales
Examen
1. Examine una cadena de segmentos para observar
el orden de los poros laterales.
2. Examine un solo segmento aplanado suavemente
entre dos portaobjetos.
Segmentos rectangulares Pequeas cadenas de 3-4 Pequeo helminto de 2-4 cm Helminto de 5-30 cm de
separados que suelen hallarse segmentos rectangulares de longitud longitud
entre la ropa personal o de que se hallan en las heces
cama; salen por el ano inde- fecales
pendientemente de las heces
fecales
Poros colocados alterna Poros colocados general- Todos los poros se encuentran Un poro de cada lado de
e irregularmente mente alterna y uniforme- en el mismo sitio los segmentos
mente
Segmentos color marfilino, Segmentos de color azul 1 mm de anchura Segmentos color rojizo,
de 1 -2 cm plido, de 0,5-1,5 cm de 0,3-0,5 cm
145
D. OTROS HELMINTOS
Raras veces se observan en las heces fecales. Ocasionalmente se hallan en los rganos del paciente durante una
operacin quirrgica. En el hgado y los intestinos puede haber distomas.
Ancytesftema
Pequeo helminto redondo (semejante a un trozo de
hilo).
Longitud: 1-1,5cm
Color: blanco o rojo si contiene sangre.
Se asemeja al oxiuro.
Examnese la cabeza con el microscopio (con objetivo
x 10).
Trtoecfae
Pequeo helminto delgado
Longitud: 3-5 cm
Color: blanco.
Semeja un pequeo ltigo; le tercera parte de su cuerpo
es relativamente gruesa y el resto es filiforme.
Este helminto habita en la pared del ciego o bien,
ocasionalmente, en el recto.
Distema
Helminto plano provisto de dos ventosas; semeja una
hoja.
Distoma grande de 2-3 cm de longitud, relativamente
ancho, de color rojo pardo o blanco
opaco (DG)
Distoma pequeo de 0,5-1 cm de longitud, menos
ancho, transparente, de color rojo
sucio (dp).
Esquisto soma
Pequeo helminto delgado
Longitud: 0,5-1,5 cm
Color: blanco.
El macho, que es plano, se enrolla en la hembra fili-
forme, que es ligeramente ms larga. Cada helminto
posee dos ventosas cerca de la cabeza.
146
6. Amebas, flagelados y ciliados: formas mviles
Definiciones
Los protozorios son microorganismos compuestos por
una sola clula. En las heces fecales se pueden encontrar
en su forma mvil (trofozoitos) o como quistes.
El movimiento de los trofozoitos obedece:
a desplazamientos lentos de la clula (amebas) o
a que estn dotados de flagelos (largos hilos que
semejan ltigos) o cilios (pelos numerosos y cortos)
que se mueven rpidamente.
En su forma mvil los protozorios se encuentran
principalemente en:
heces fecales lquidas
heces con moco
heces blandas, no formadas.
Clasificacin
Sin flagelos ni cilios AMEBAS
Con flagelos FLAGELADOS
Con cilios CILIADOS
147
Relacin de protozorios intestinales
Algunos protozorios intestinales son patgenos; otros lo son menos, o son inocuos. Estos parsitos se
encuentran en todas partes del mundo.
A. AMEBAS
1. Entamoeba histolytica Esta ameba, que puede causar disentera o abscesos, es la nica comnmente
patgena para el ser humano.
2. Entamoeba coli No es patgena, aunque es sumamente abundante
3. Otras amebas: No son patgenas.
Entamoeba hartmanni Son difciles de distinguir unas de otras, aunque esto no es realmente importante;
Endolimax nana basta poderlas diferenciar de E. histolytica.
lodamoeba buetschlii
Dientamoeba fragilis
B. FLAGELADOS
1. Giardia lamblia Patgeno
2. Trichomonas hominis No patgeno
3. Chilomastix mesnili No patgeno.
C. CILIADOS
1. Balantidium coli Patgeno.
148
Algunas caractersticas tiles para reconocer formas mviles de protozorios intestinales
Citoplasma
Ncleo
Seudopio
Ectoplasma
Endoplasma
Vacuola
Cuerpos de inclusin
(a) glbulos rojos
Cuerpos de inclusin:
(b) bacterias, levaduras,
residuos
Cariosoma
nuclear
Flagelo
Membrana ondulante
149
A. AMEBAS
1. Entameefaa histolytica (ameba de la disentera)
Tamao: vara entre 12 y 35pm (generalmente tiene
igual longitud que 3 6 4 glbulos rojos)
Forma: cuando est en movimiento se alarga y
cambia de forma; de lo contrario es
redonda
Movilidad: se mueve en una sola direccin; emite un
seudopodio que la hace avanzar y el endo
plasma entra rpidamente en l, y lo llena
Citoplasma: el ectoplasma es transparente y se puede
distinguir claramente del endoplasma,
que tiene una composicin granulosa
fina (gris, con matices verdes amarillentos),
en la que puede haber vacuolas
Ncleo: no es visible en la forma mvil, pero al teir
el parsito con solucin de yodo se observa
claramente que posee una membrana
uniforme y un cariosoma cehtral, pequeo
y denso (punto negro).
En las heces fecales lquidas o diarreicas se pueden
encontrar dos formas mviles de E. histolytica:
(a) la forma magna, que mide 2035 tim, con vacuolas
que contienen eritrocitos ms o menos digeridos
(de 1 a 20, de diferentes tamaos) que ponen de
manifiesto su actividad hematfaga (es decir, que se
alimenta con sangre) y, por lo tanto, su capacidad
patgena ;
(b) la forma minuta, no patgena, que prolifera en la
cavidad intestinal, donde se alimenta de bacterias
u otras materias locales que se pueden observar en
el interior de las vacuolas; mide 1220(m.
2. Entamoeba coli
Tamao: 2040 fim (generalmente es mayor que
E. histolytica)
Forma: oval o alargada, y ms bien irregular
Movilidad: con frecuencia se encuentra inmvil o se
desplaza con suma lentitud, emitiendo
seudopodios romos en todas direcciones,
a tientas
Citoplasma: e difcil diferenciar el ectoplasma del
endoplasma granuloso
Cuerpos de
inclusin: son numerosos y variados (bacterias, leva
duras, residuos de diferentes clases), pero
nunca glbulos rojos
Ncleo: visible en preparaciones frescas, sin tincin.
La membrana es irregular y granulosa
(semeja un collar de cuentecillas); el
cariosoma es grande y excntrico.
150
Ameba de la disentera Ameba del colon
Entamoeba histolytca Entamoeba coli
151
3. Otras amebas
Entamoeba hartmanni
Endolimax nana
lodamoeba buetschlii
Dientamoeba fragilis
152
B. FLAGELADOS
Todos estos parsitos, exceptuando Trichomonas
hominis, se pueden encontrar en su forma vegetativa,
flagelada y activa, o como quistes inactivos. Los quistes
se describen en la pgina 158.
Importante:
el movimiento caracterstico de este flagelado solo
se observa en heces fecales lquidas y frescas
en las heces I quidas los depsitos de moco frecuen
temente contienen grupos numerosos de G. lamblia
en las heces fecales blandas es frecuente encontrar
juntas las formas vegetativa y qustica del parsito.
2. Trichomonas hominis
;(
*
t '") A
Membrana solo se encuentra en un lado; es sumamente
ondulante: mvil (efecta rpidos movimientos
Ncleo:
ondulatorios)
un ncleo, difcil de identificar
??=
Flagelos: generalmente 4.
Trichomonas es el flagelado ms resistente. C onserva
su movilidad an en las heces fecales "viejas".
K
153
3. Chilomastix mesnili
C. CILIADOS
Los quistes son pequeas formas inmviles y resistentes de ciertos protozorios intestinales (en cuanto a las
formas mviles vase la pgina 147). Pueden tener uno o varios ncleos.
Examen en portaobjetos
1. Preparacin en solucin de cloruro sdico (reactivo
No. 48)
Los quistes se pueden observar como glbulos
transparentes que refractan la luz y se distinguen
claramente contra el fondo de color gris. Poseen
envolturas bien definidas.
2. Preparacin en solucin de yodo (reactivo No. 35
diluido 5 veces)
Al teirse los ncleos, examnense con el objetivo
x40.
3. Recuento de los ncleos
Grese el tornillo de ajuste lento del microscopio.
4. Identificacin
Nunca es suficiente reconocer un solo quiste; la
identificacin depende de que se observen varios
quistes sucesivamente.
5. Concentracin
Si es necesario, sese el mtodo de concentracin
de formaldehido y ter (vase la pgina 165) para
observar un nmero mayor de quistes y lograr una
identificacin ms firme.
En la misma muestra de heces fecales se pueden
encontrar quistes de especies diferentes.
155
Algunas caractersticas tiles para reconocer quistes de protozorios intestinales
Citoplasma
Ncleos
Membrana nuclear
(cromatina)
Cromatina Cromatina
uniforme irregular
y delgada y gruesa
Cariosoma
Cariosoma Cariosoma
pequeo voluminoso
y central y excntrico
Cuerpo cromatoide
(refracta la luz)
Cuerpo Cuerpo
cromatoide cromatoide
redondeado agudo y serrado
Vacuola de glucgeno
(teida de pardo rojizo
por la solucin de yodo)
Fibrillas
(vestigios de flagelos)
156
QUISTES DE AMEBAS
Entamoeba histolytica
1. Entamoeba coli
Tamao: 12-20/im (2-21/2 glbulos rojos; un poco
mayor que el quiste de E. histolytica)
Forma: redonda o ligeramente oval; algunas veces
es irregular
Ncleos: 1-8 ncleos:
membrana irregular, engrosada en
algunas partes; no forma un crculo
perfecto
cariosoma voluminoso, difuso, fre-
cuentemente excntrico
Citoplasma: (con solucin de yodo) amarillo plido,
brillante (en comparacin con el de E.
histolytica)
Cuerpos ero-
matoides: extremos agudos o mellados (en forma de
cuchillo o aguja); no se encuentran en
todos los quistes
Vacuola: algunas veces existe una vacuola suma-
mente voluminosa (teida de rojo pardo
por la solucin de yodo) que comprime dos
ncleos, uno en cada polo.
2. Entamoeba hartmanni
4. lodamoeba buetschlii
5. Dientamoeba fragilis
1. Giardia lamblia
Tamao: 8-12 pm
Forma: oval, con un polo ms redondeado que o t r o ;
con frecuencia se observa una gruesa
envoltura de pared doble; en realidad, la
pared es la membrana citoplsmica
Ncleos: 2-4 ncleos ovales:
membrana: sumamente delgada
cariosoma: pequeo, central, de color
tnue
Citoplasma: claro, refracta la luz cuando no se ha
teido; verde amarillento o azulado al
aplicar la solucin de yodo
Fibrilla: refracta la luz; semeja un cabello; es
plegada o toma forma de " S " ; recorre el
quiste a lo largo, por el centro (ajstese
el microscopio).
2. Chilomastix mesnili
Conclusin
Es en extremo importante que se logre identificar:
- los quistes de ENTAMOEBA HISTOL YTICA
- los quistes de GIARDIA LAMBLIA
- y los quistes de BALANTIDIUM COZ./.
OBJETOS* QUE NO SE DEBEN CONFUNDIR CON QUISTES
1. Blastoquistes
Tamao: vara entre 5 y 20im (promedio: 10/im)
Forma: redonda u oval; algunas veces poseen
bordes angulosos e irregulares
Contenido: una vacuola voluminosa que ocupa casi
toda la clula; el citoplasma, comprimido,
forma un anillo granuloso alrededor de ella
Color: refractan intensamente la luz cuando no se
encuentran teidos; la solucin de yodo no
tie la vacuola, pero la periferia adquiere
un color amarillo plido
Algunos mdicos solicitan que se comunique la presen-
cia de los Blastoquistes, particularmente en heces fecales
de nios.
2. Levaduras
Tamao: pequeas (5-8/im)
Forma: oval, frecuentemente con brotes
Contenido: con frecuencia un grupo de 3-6 granulos en
posicin excntrica
Color: (con solucin de yodo) rojo pardo.
Algunas otras formas de levaduras son rectangulares,
con un citoplasma oval sumamente claro; se denominan
artrosporas.
3. Leucocitos
Tamao: 10-20 /um
Forma: redonda o ligeramente alargada, de
contorno irregular
Contenido: citoplasma que refracta la luz, claro y
granuloso, con vacuolas pequeas
Ncleo: escasamente notable; algunas veces
contiene un "falso cariosoma" con forma
de estrella.
"Objetos: otras cosas, vivas o artificiales, que se encuentran en las
heces que no son parsitos y pueden confundir al laboratorista.
160
4. Pus
El pus se puede observar a simple vista y tiene el aspecto
de vetas opacas, de color grisceo (no transparente,
como el moco). Con el microscopio se observa como
una masa de leucocitos ms o menos degenerados
(comuniqese su presencia).
5. Coccidios
Los coccidios son protozorios que pueden parasitar al
ser humano (sin causar efectos patgenos importantes)
o encontrarse de paso en las heces fecales consecutiva-
mente a la ingestin de alimentos contaminados (peces,
conejos, etc.). Aparecen en las heces con formas seme-
jantes a quistes (se denominan ooquistes o esporo-
quistes).
Tamao: 15-20 Aim, dependiendo de la especie
Forma: valo alargado que a veces se adelgaza en
uno de los polos
Color: incoloros y transparentes o, a veces,
amarillentos
Envoltura: una lnea doble, que refracta ligeramente la
luz y se puede distinguir claramente;
algunas veces se observa cierto tipo de
oprculo en uno de los polos
Contenido: es de tres tipos:
(a) 4 esporozoitos bastoncillos de extremos
redondeados que contienen pequeos
ncleos esfricos; a veces se encuentran
algunos granulos voluminosos en uno de
los polos
(b) una clula voluminosa, redonda y
granulosa
(c) granulos que refractan la luz y llenan
completamente el interior del protozorio.
8. Eleccin del mtodo de concentracin de parsitos
Importante:
Antes de preparar una concentracin de parsitos se debe realizar invariablemente un examen microscpico
directo de las heces fecales. (En las preparaciones concentradas no se encuentran formas mviles de protozorios.)
TCNICAS
162
9. Mtodo de concentracin por el uso de
solucin de cloruro sdico (Wiilis)
H
\ 7 \ /
Principio
Las heces fecales se mezclan con una solucin saturada
de cloruro sdico (aumentando la gravedad especifica).
El peso de los huevos es menor y flotan en la superficie,
de donde se pueden recoger.
^
MATERIALES
m
aplicadores de madera
cubreobjetos de vidrio
etanol
ter
una caja de Petri
solucin de Wiilis (reactivo No. 58).
MTODO
164
10. Mtodo de concentracin por
el uso de formaldehido y ter o MIF
Se recomienda para:
Toda clase de huevos y larvas, especialmente quistes de No es adecuado para:
protozorios. Formas mviles de amebas y flagelados.
MATERIALES
REACTIVOS
=> >
V V
4. Aada 10 ml de solucin de formaldehido (reactivo
No. 25) al sedimento (hasta la marca de 10 mi).
vi r
1 %
* ft
V
10. Mezcle muy bien el lquido restante con el sedimen-
to golpeando suavemente el tubo.
Proceda de la misma manera que con el mtodo del formaidehido y ter, pero sustituya los 10 mi de solucin de
formaidehido al 10% por 10mi de MIF. Contine inmediatamente aadiendo 3 mi de ter, etc.
Este mtodo es excelente para preservar formas vegetativas de amebas, aunque el reactivo es costoso.
167
11. Mtodo para concentrar larvas de SUongyloides
(Harada y Mor)
Principio
Las larvas de Strongyloides que se encuentran en las heces fecales se desplazan contra la corriente de agua que,
por movimiento capilar, asciende por una tira de papel que se ha sumergido parcialmente en un tubo de ensayo,
y se acumulan en el fondo del tubo.
MATERIALES
TCNICA
(a) Extienda con la esptula una pequea cantidad de la muestra de heces a lo largo de una tira de filtro de papel
(que previamente se habr doblado a lo largo para mantenerla recta), dejando limpios los ltimos 4 5 c m
para sumergirlos en agua.
(b) Introduzca la tira de filtro de papel, por el extremo limpio, en un tubo de ensayo que contenga 2,5-3cm de
agua filtrada o hervida; el extremo de la tira no deber tocar el fondo del tubo.
(c) Marque en el tubo el nmero o el nombre del paciente en forma indeleble.
(d) Conserve el tubo durante 7-8 das a la temperatura ambiente, protegido con un tapn de algodn o, an
mejor, sellado con cinta de celofn.
(e) Busque las larvas que pueda haber en el fondo del tubo y examnelas despus de tratarlas con solucin
yodada para poder distinguir las de Strongyloides y las de Ancylostoma (vase la pgina siguiente).
Nota: Las larvas de Strongyloides pueden llegar a la etapa infectante en estas condiciones, produciendo larvas filariformes, o
convertirse en helmintos adultos.
168
LARVAS QUE SE ENCUENTRAN EN LAS HECES FECALES
Las larvas que se encuentran con ms frecuencia en las heces fecales son las de Strongyloides. Algunas veces
tambin hay larvas de Ancylostoma.
Larvas de Strongyloides: se hallan en heces fecales frescas y "viejas".
Larvas de Ancylostoma: solo se encuentran en heces fecales "viejas" (de 2448 horas).
Las diferencias que existen entre ambas se pueden observar con el microscopio despus de aplicar una tincin de
solucin yodada.
# B 1It
LARVAS STRONGYLOIDES ANCYLOSTOMA E
longitud 200300 n 200300*1 mi M
anchura
ensanchamientos*
dos
15p
ensanchamientos*
iff ra
i:
boca (B) corta: 4/J
(Vi eritrocito)
amplia: 15/i
(2 eritrocitos)
11?LRG RG
HI)
extremo ligeramente muy m Wm
posterior agudo agudo
Y f
PA
rudimento grande y pequeno
genital (RG) notable (22i) (7p)
169
12. Cmo registrar los resultados de exmenes de heces fecales
Ejemplo:
Sr. Amala Examen de heces 8.5.79.
2. ANOMALIAS
3. PARSITOS
Especie huevos de helmintos: antense, de preferencia, los nombres cientficos internacionales para
hacer referencia a la especie, escribindolos correctamente.
protozorios: notif quense por su nombre cientfico internacional.
Nombre
cientfico el primer nombre (gnero) se escribe con mayscula; por ejemplo, Sc'nistosoma.
el segundo nombre (especie) se escribe con minscula; por ejemplo, mansoni.
Etapa de
desarrollo huevos, larvas, formas vegetativas, segmentos del helminto, etc. Al referirse a E. histolytica
especif quese invariablemente si contiene glbulos rojos en su interior.
Cantidad sumamente escasa (1-2 huevos por cada portaobjetos); escasa (3-5); moderada (6-12); abundante
(ms de 12).
Cuando no se encuentren parsitos antese: "No se observan huevos ni parsitos" y expliqese si este resultado
se obtuvo por examen directo o por mtodo de concentracin (indiquese asimismo el mtodo de concentracin
empleado). Nunca se escriba categricamente: " N o hay parsitos".
170
EJEMPLOS DE NOTIFICACIN DE RESULTADOS DE LOS EXAMENES DE HECES FECALES
El tcnico deber poner una seal en la palabra o las palabras que correspondan a los resultados y llenar los
espacios pertinentes.
Nombre
Fecha de recibo
EXAMEN MICROSCPICO
por concentracin
mtodo (s):
Fecha Firma
En algunos pases las planillas para informe comprenden una lista de los tipos principales de parsitos que se
encuentran en la regin. Por ejemplo:
Parsitos que se encontraron: El tcnico debe colocar una marca en la palabra o las palabras que correspondan
a los resultados, como se indica a continuacin:
172
13. Envo de heces fecales para la deteccin de parsitos
Las heces fecales se pueden enviar a laboratorios especializados con el fin de que se identifiquen parsitos raros,
que son difciles de reconocer.
Se utilizan los preservativos siguientes:
1. Solucin de formaldehido al 10% (reactivo No. 25),
para hacer preparaciones lquidas
2. MIF (reactivo No. 38), para hacer preparaciones
lquidas
3. APV (alcohol polivinlico), para hacer tinciones
permanentes.
2. USO DE MIF
1
No. 35).
(a) En un frasco
(b) En un portaobjetos
Principio
Cuando la hemoglobina de la sangre se pone en contacto
con perxido de hidrgeno se libera oxgeno. Este
oxgeno liberado reacciona con aminofenazona
(aminopirina) y se forma una coloracin azul.
MATERIALES Y REACTIVOS
Una centrfuga
Tubos cnicos para centrifugacin
Aplicadores
Una probeta de 20 mi
Tubos de ensayo
Acido actico al 10% (reactivo No. 2)
Perxido de hidrgeno (solucin fresca, de 10 vol.)
Etanol al 95%
Aminofenazona cristalina.
MTODO
f
2. C oloque una porcin de la muestra de heces fecales
de 4 mi ( 4 c m 3 ) aproximadamente en un tubo para
centrifugacin.
tfl
^
6
4
A
Kt.CK '
A continuacin agregue:
10 gotas de la solucin de perxido de
E2
rrrr*>
D
\^_^/
hidrgeno de lOvol.
w
%^lf
No se mezcle.
Djela reposar un minuto.
Reaccin positiva
Entre las dos capas de I quido aparece una coloracin
azul:
azul plido = reaccin positiva+
azul oscuro = reaccin positiva ntensaH
azul negruzco = reaccin positiva sumamente
intensa+++.
Reaccin negativa
No ocurre cambio alguno en el color.
176
PRECAUCIONES EN EL LABORATORIO
177
15. Bsqueda de huevos de Schistosoma haematobium en l orina
MATERIALES
OBTENCIN DE LA MUESTRA
Ejercicios preliminares
Justo antes de recolectar la muestra pida al paciente que
ejecute rpidamente 20 "sentadillas", corra alrededor
de 100 metros o suba y baje las escaleras corriendo
varias veces (de este modo se excretar mayor cantidad
de huevos).
Conservacin de la orina
Si se retrasa el examen de orina, agregue a cada 1 0 0 m i :
1 mi de cido clorhdrico (20 gotas)
2 mi de lej a comercial (40 gotas).
dHC
A A
De esta manera la orina se podr mantener a la
temperatura ambiente por tiempo indefinido.
178
i Jwl
A. EXAMEN DIRECTO
180
16. Otros parsitos que se encuentran en la orina
Aparte de los huevos de Schistosoma (vase pgina 178) que se suelen detectar en Africa y Medio Oriente es raro
hallar helmintos adultos en la orina.
En los sedimentos de orina, despus de la centrifugacin, se pueden encontrar:
1. Protozorios flagelados Trichomonas vaginalis
2. Microfilarias Wucherera bancrofti y otras
3. Espiroquetas Leptospira cterohaemorrhagiae
Trichomonas vaginalis
Estos protozorios se suelen detectar en las secreciones
genitourinarias (vase la pgina 186).
No obstante, tambin se pueden hallar, dotados an de
movilidad y reconocibles, en sedimentos de orina
fresca.
Tamao: 15/im
Forma: redonda, globulosa
Movilidad: giran y se vuelven; vibran
Membrana
ondulante: lateral, sumamente mvil; semeja la aleta
de un pez
Flagelos: 4
2. MICROFILARIAS
Wucherera bancrofti
El aspecto de la orina es lechoso, debido a que contiene
quilo (que proviene de los vasos lesionados por una
afeccin denominada "quiluria"). Las microfilarias
(tamao: 200-300//m de longitud y Bum de grosor)
todava conservan su movilidad, se mueven en curvas
uniformes. En cuanto a su descripcin, vase la pgina
212.
La envoltura de los parsitos es visible en la orina.
Por lo general tambin se encuentran leucocitos
abundantes.
Onchocerca volvulus
En raras ocasiones (alrededor de 5-10% de los casos)
las microfilarias de la oncocercosis pasan a la orina.
Cuando se las encuentra an tienen movilidad.
Tamao: 200-300(im de longitud y Sfim de grosor.
Curvas rgidas. Sin envoltura. La cabeza es ms ancha;
vase la descripcin, en la pgina 218.
La identificacin se puede confirmar examinando un
frotis cutneo en una preparacin hmeda.
181
MicrofHaras sanguneas que se encuentran accidental-
mente en la orina
Los pacientes que sufren de esquistosomiasis pueden
estar infectados al mismo tiempo por filiarias. La
infeccin por esquistosomas causa derrames de sangre en
el interior de la vejiga urinaria, que llevan a la orina
microfilarias sanguneas como W. bancrofti. Loa loa y
D. perstans (vanse las descripciones correspondientes
en las pginas 212 y 213).
En estos casos tambin se suelen encontrar abundantes
eritrocitos en la orina.
3. ESPIROQUETAS
Leptospira icterohaemorrhagiae
La leptospirosis es transmitida por las ratas. Esta enfer-
medad es muy frecuente en Asia. Si se sospecha que
existe leptospirosis se puede examinar directamente el
sedimento de la orina en una preparacin hmeda con
iluminacin para campo oscuro o en una preparacin
con tincin de Giemsa.
Longitud: vara considerablemente; promedio:
10-20Mm
Forma: espiral: 20-40 vueltas; semeja un resorte
aplanado
Extremos: agudos; frecuentemente con forma de
gancho
Movilidad: efecta movimientos rotatorios y
ondulatorios
Tincin: dbilmente grampositiva; se colorea ms
intensamente con la tincin de Giemsa.
Leptospira se puede aislar por cultivos en medios
especiales.
Materiales
Una centrfuga
Tubos cnicos para centrifugacin
Un agitador de vidrio
Una asa de alambre para siembra
Un portaobjetos
Cubreobjetos
Solucin de hidrxido sdico al 3%
(reactivo No. 44).
Mtodo
1. Aada al receptculo donde se ha recogido el esputo
una cantidad igual de hidrxido sdico al 3%.
3 min
M 0> fh
2. Mezcle muy bien durante 3 minutos.
JXJH
, .VMK
\
183
3. Vierta toda la mezcla en un tubo para centrifuga-
cin. Centrifugue durante 5 minutos a alta 5 min
velocidad.
Scolex hidatdico
Algunas veces, los pacientes infectados por
Echinococcus granulosas (una tenia de los perros)
pueden tener un quiste hidatdico del pulmn. Si este
quiste se rompe y vierte su contenido en los bronquios
se encontrarn scolex en el esputo, que puede ser
sanguinolento.
Tamao: aproximadamente ISOjim
Forma: redonda, irregular u oval, con un polo
ligeramente aplanado
Contenido: incoloro y transparente, con finas granula-
ciones y un anillo de ganchos (10-30
ganchos), claramente visible.
Los quistes hidatdicos se suelen encontrar en regiones
donde abunda el ganado ovino; por ejemplo, en
Argentina, Australia, Chile, Egipto, Nueva Zelandia,
el norte de Africa, Arabia Saudita y Uruguay.
185
18. Trichomonas: examen directo del exudado genitourinario, etc.
Principio
Trichomonas vaginalis es un protozorio que puede causar secreciones (exudado) genitourinarias, principal-
mente en la mujer y ocasionalmente en el hombre. Se puede detectar con el microscopio en preparaciones
hmedas.
El exudado es claro y blanquecino, o puede ser gris verduzco y espumoso.
MATERIALES
Portaobjetos
Cubreobjetos
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48) tibia (a 37C, si es posible)
Un asa de alambre para siembra.
OBTENCIN DE LA MUESTRA
En la mujer: La secrecin se debe entregar al laboratorio inmediatamente despus de haberse recogido (en un
tubo de ensayo o un portaobjetos). Es preferible utilizar un hisopo de algodn que se coloca en el interior de un
tubo de ensayo con solucin de cloruro sdico; de este modo Trichomonas conserva su movilidad durante algn
tiempo (generalmente varias horas).
En el hombre: Obtngase la muestra en el laboratorio empleando el mtodo descrito para los gonococos (vase
la pgina 243). Examnese inmediatamente.
MTODO
188
19. Preparacin de gota gruesa de sangre y
aplicacin de la tincin de Field
Propsito
Deteccin de parsitos en la sangre
1. En un portaobjetos se deposita una gota de sangre obtenida de un dedo, se extiende y se deja secar.
2. Se tie y se examina con el microscopio en busca de:
parsitos del paludismo
microfilarias
tripanosomas
borrelias.
3. Gracias al mtodo de gota gruesa de sangre es posible encontrar parsitos:
ms rpidamente
a pesar de que sean muy escasos.
Principio
1. Al teir la gota de sangre seca la hemoglobina de los eritrocitos se disuelve y es arrastrada por el agua de la
solucin que contiene el reactivo.
Materiales
Portaobjetos limpios (vanse los procedimientos
para limpiarlos en la pgina 31)
Una lanceta estril
Metanol
Algodn
Un lpiz graso.
Mtodo
Puncin del dedo
1. Bsquese un sitio:
en los dedos cordial o anular de la mano
izquierda
en el lado externo del dedo, donde la sensibi-
lidad es menor que en la punta, como se indica
en la ilustracin.
189
En los nios menores de seis meses:
puncinese el taln o el dedo gordo del pie.
Ennumerosas partes del mundo se utilizan las tinciones A y B de Field en las gotas gruesas de sangre porque:
la tincin se hace rpidamente
no se necesita diluir los materiales de tincin
estos materiales se pueden usar durante varios das (fltrense cada dos das; cambense cuando los resultados
dejen de ser satisfactorios)
no se necesita agua amortiguada; se puede emplear agua corriente, limpia, para lavar los frotis.
La tincin de Giemsa diluida que se emplea en las extensiones sangu neas se puede usar tambin en las gotas
gruesas (vase la pgina 393).
Materiales
Colorante A de Field (reactivo No. 22A)
Colorante B de Field (reactivo No. 22B)
Dos recipientes con agua limpia
Una gradilla para escurrir.
191
Mtodo
1. Sumerja la gota gruesa, seca, en el colorante A de
Field:
cuente hasta 10.
Escrrase.
Enjuagese en uno de los recipientes con agua
limpia.
RESULTADOS
La extensin sangunea deber tomar un color malva. As ser ms fcil reconocer los trofozoitos de parsitos
del paludismo:
los anillos citoplsmicos se tien de azul
la cromatina se tie de rojo oscuro.
Para el diagnstico de laboratorio por especies vanse las pginas 200 y 2 0 1 .
En las gotas de sangre gruesas tambin se pueden reconocer:
leucocitos, incluso su tipo y la cantidad aproximada de ellos
ncleos de normoblastos, que se tien de rojo oscuro
reticulocitos, que se observan como reas circulares de puntos azules.
192
20. Coloracin de gota gruesa y
extensiones sanguneas con tincin de Giemsa
Importante:
Para reconocer fracciones de nmero de diversos tipos de leucocitos ("recuento diferencial de leucocitos")
las extensiones de sangre se colorean mejor con las tinciones de May y Grnwald, y de Giemsa (vase la pgina
393).
MATERIALES
Importante:
Colorense las preparaciones de gotas gruesas inmediatamente con
tincin de Giemsa diluida. Las extensiones sanguneas se deben
fijar primero durante 2-3 minutos con metanol (vase la pgina
391).
1. Haga una dilucin de colorante de Giemsa al 1 x 10.
Ejemplo
Utilice 18 mi de agua amortiguada y 2 mi del
colorante; bastarn para 4 frotis. Aumente el
volumen si es necesario teir ms frotis.
\ * V \ \
3. Para encuestas
Prepare:
solo 1 portaobjetos por cada individuo con una
gota gruesa y una extensin sangunea en el
mismo portaobjetos.
TINCIN
Fijacin
Antes de teirlas fjense las extensiones solo con
metanol. Evtese que este alcohol toque las gotas
gruesas.
(Vanse las tcnicas de tincin en las pginas 191 y
393).
196
lUtIM IIIIUAUIUIM U b KAKASITOS U b L P A L U D I S M O
ETAPAS DE DESARROLLO Los parsitos que se encuentran en la sangre tienen distintas etapas de desarrollo.
ncleo
anillo delgado
Etapa inicial, con
de citoplasma
1 ncleo; habita
1. Trofozoito dentro del glbulo
rojo
adulto
citoplasma citoplasma
ms compacto ameboide
ncleos frecuentemente
ordenados en circulo,
Trofozoito maduro con formando una roseta
ncleo dividido en otros
2. Esquizonte 824 ncleos. Llena la
mayor parte del glbulo
rojo. cada ncleo se encuentra envuelto por
cierta cantidad de citoplasma formando
un merozoito
197
GLBULOS ROJOS INFECTADOS
En extensiones sanguneas
Los glbulos rojos infectados pueden no sufrir modificacin alguna, o bien pueden cambiar de color o forma,
o contener puntos de rosceos (manchas de Schffner).
glbulo rojo sin glbulo rojo glbulo rojo glbulo rojo glbulo rojo glbulo rojo punteado
modificaciones teido ms crecido ovalado con bordes (perforaciones
intensamente mellados o manchas)
parasito
manchas de
Schffner
En gota gruesa
Los glbulos rojos casi han desaparecido. leucocito
Las manchas rosceas de Schffner an se
pueden observar alrededor del parsito.
Los leucocitos se conservan sin modificaciones.
La densidad de los parsitos es el nmero de ellos que se cuenta en cada campo microscpico.
Generalmente vara con la especie y, por lo tanto, puede ser provechoso considerar esta densidad en la gota
gruesa.
Es importante notificar la densidad de los parsitos en el informe correspondiente (vase la pgina 203).
198
Plasmodium falciparum
ESPECIES DE PARSITOS Plasmodium malarae
Plasmodium ovale
Existen 4 especies diferentes de parsitos que causan Plasmodium vivax
paludismo en el hombre.
Por ejemplo:
El paludismo causado por/ 5 , falciparum
Para el pronstico y el tratamiento de la enfermedad es mucho ms grave que el causado por
es importante que se identifique la especie en el
P. malarae y algunas veces causa la muerte.
laboratorio. Cuando no es posible notif quese de todos
modos, invariablemente, la existencia de cualesquiera Sin embargo, si no se trata adecuada-
parsitos del paludismo que se observen. mente, una infeccin por P. malarae
puede durar mucho ms que una infeccin
por/ 5 , falciparum.
Por ejemplo:
Un paciente puede albergar ms de una especie de Plasmodium falciparum y
parsitos del paludismo al mismo tiempo. Plasmodium malarae
Plasmodium falciparum y
Plasmodium vivax
DISTRIBUCIN GEOGRFICA
199
IDENTIFICACIN DE LAS CUATRO ESPECIES DE PARSITOS
O
O ^
1- (Se detecta frecuentemente en esta (Se detecta frecuentemente en esta
etapa) etapa)
Citoplasma: anillo delgado y Citoplasma: anillo grueso y denso,
O
u.O
o-> pequeo, de color azul plido de color azul, con algunos granulos
oc de pigmento negro
Cromatina: 1 2 manchas rojas,
pequeas Cromatina: 1 gran mancha roja
UI
(Se detecta con bastante frecuencia) (Se detecta con bastante frecuencia) 4k
Forma: parece un pltano 0 una Forma: voluminosa, oval 0
O hoz redondeada
1-
O Color: azul (macho), azul fuerte Color: azul intenso (hembra)
O (hembra) azul plido (macho)
1-
Ncleo: rojizo Ncleo: una mancha redonda
LU de cromatina roja
Pigmento: granulos escasos de color situada en uno de los
< negro azulado en el centro bordes
del citoplasma 0 disemi-
nados en l Pigmento: granulos negros grandes
repartidos en el cito-
plasma
5 De tamao normal
De tamao y forma normales
Muchos pueden ser dentados y con-
tener trofozoitos maduros; a menudo Por lo general no se observan
presentan algunas manchas rojas manchas rojas en ellos
de tamao y forma irregulares
<P
UJ ce
* Q-
Con frecuencia la densidad es muy
elevada
@
Densidad reducida
0
* En cualquier regin la densidad de los parsitos depende principalmente de que el paludismo ocurra en algunas estaciones del
ao o sea endmico. Los individuos adultos en especial suelen desarrollar inmunidad en las regiones endmicas y, en conse-
cuencia, se reduce la densidad de los parsitos.
200
DEL PALUDISMO EN EXTENSIONES SANGUNEAS
La identidad del
P. ovale se debe
PLASMODIUM VI VAX PLASMODIUM OVALE confirmar mediante
examen de una
extensin sangunea
2 l
O (Se detecta frecuentemente en esta
H etapa) Citoplasma: anillo uniforme y
Citoplasma: anillo deforme, muy denso, de color azul
0
u-O grueso, de color azul Cromatina: una mancha roja,
tamao mediano
o-- Cromatina: una mancha roja ms
ce bien grande
Itt
Ooc tculas de pigmento castao
tculas de pigmento castao
Od anaranjado Cromatina: 1 gran mancha roja
LU
H (Se detecta muy frecuentemente) Merozoitos: 8-14 granulos rojos
Z
O Merozoitos; 12-18 granulos rojos, grandes, forman una roseta que
N
voluminosos y compactos, que se rodea un conglomerado central de
observan sobre el fondo del cito- partculas de pigmento castao
O
co plasma, azul plido
LU
Densidad mediana
Densidad mediana
201
COMPARACIN DE CLULAS INFECTADAS EN EXTENSIONES DE SANGRE
TAMAO
del trofozoito
joven en compara-
cin con el di-
metro de un gl-
bulo rojo (en la
misma etapa de
desarrollo) 1/4 a 2/3 del di-
metro, aunque fre- 1/4 a 2/3 del 1/4 a 2/3 del
1/5 a 1/3 del
cuentemente se dimetro dimetro
dimetro
observa una forma
en banda
ASPECTO
del glbulo rojo
infectado
Sin cambios o
empequeecido y
algunas veces Crecido y fre- Crecido, oval, con
teido con mayor cuentemente te- bordes rasgados y
Sin cambios intensidad ido con palidez mellados
MANCHAS
que se encuen-
tran en el glbu-
lo rojo infectado
NOTA:
Aspecto de los monocitos (en casos de paludismo de larga duracin):
con frecuencia el citoplasma contiene cuerpos de color castao o negro verduzco (siderfilos)
Aspecto de los parsitos del paludismo despus de inyectar un medicamento antipaldico:
los parsitos se tien dbilmente, se hallan deformes y son difciles de diferenciar.
* En algunos glbulos rojos infectados con trofozoitos adultos de P. falciparum se puede encontrar cierta cantidad
de granulos rosceos, ms bien voluminosos, denominados "hendiduras de Maurer".
202
COMUNICACIN DE LOS RESULTADOS
Resultado positivo
Especifique:
1. La especie de los parsitos encontrados
2. La etapa de desarrollo de los parsitos
3. La densidad de los parsitos*.
Fjemplo
Resultado positivo del examen de parsitos del
paludismo.
Plasmodium falciparm
Abundantes trofozoitos
Escasos gametocitos.
Resultado negativo
Indique: No se observaron parsitos.
* Si los parsitos son muy abundantes (es decir, si la densidad de parsitos es muy elevada) el enfermo se debe tratar urgentemente.
Por lo tanto, si se encuentra una densidad de parsitos elevada, indique claramente este resultado en el informe y envese sin tar-
danza al mdico.
203
22. Microfilarias sanguneas:
examen de preparaciones hmedas; concentracin
Principio
Sangre capilar
Mzclese un frotis fresco de sangre capilar obtenida de un dedo con solucin de cloruro sdico; coloqese entre
un portaobjetos y un cubreobjetos y examnese con el microscopio buscando microfilarias mviles.
Sangre venosa
Las microfilarias tambin se pueden concentrar empleando sangre venosa.
W.bancrofti En la noche (entre las 22h y las 4 h) Africa tropical, Asia, Mesoamrica,
Sudamrica, Ocano Indico
Loa loa Durante el da (entre las lOh y las 16h) Africa Occidental y Central
Filarlas
dudosamente patgenas:
D. perstans Cualquier hora Africa tropical
M. ozzardl Cualquier hora Amrica tropical
Materiales
Una lanceta para extraer sangre
Hisopos de algodn
Un portaobjetos
Un cubreobjetos
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48)
204
Mtodo
1. Desinfecte con etanol el dedo que se va a puncionar.
Escoja el dedo cordial. Seqese completamente.
Funcione con la lanceta.
206
B. EXAMEN DE LA CONCENTRACIN DE PARSITOS EN SANGRE
VENOSA DESPUS DE LA HEMOLISIS
Materiales
Una jeringa de 5 mi
Agujas para puncin venosa
Anticoagulante: solucin de citrato trisdico
(reactivo No. 52)
Solucin de formaldehido al 2%
Una centrfuga
Tubos cnicos para centrifugacin.
Mtodo
1. Extraiga 4 mi de sangre venosa.
Depostese en un frasco que contenga 1 mi de la
solucin de citrato trisdico.
Mzclese.
Principio
Para poder identificar las microfilarias con seguridad primero se deben teir.
MATERIALES - REACTIVO
A. GOTA GRUESA
B. SEPARACIN DE LA HEMOGLOBINA
8m 8jim
(aproximadamente el de (aproximadamente el de
1 leucocito**) 1 leucocito**)
1
Grosor
Envoltura
C ^
Curvas
15^
del cuerpo
Cola
Principalmente
A cualquier hora A cualquier hora
durante la noche
1^
Sin envoltura Color de rosa muy intenso Sin envoltura
caEB^jfF0^
K/ -tiaM*
^
Doble hilera de ncleos 2 ncleos separados ampliamente Una hilera de ncleos que
hasta la punta en el extremo de la cola llega casi hasta la punta
- .r
XSsg^
Recta con punta roma Curva y n nuy delgada Recta y delgada
213
ALGUNOS ASPECTOS QUE SE DEBEN RECORDAR AL IDENTIFICAR MICROFILARIAS
La identificacin de las especies de microfilarias puede ser difcil y se sabe por experiencia que a menudo se
conneten errores. No obstante, si se estudian sistemticamente todas las caractersticas que se han mencionado,
deber ser posible identificar con seguridad la especie que se observe. Esta identificacin no se debe basar en una
sola particularidad, sino en todas las caractersticas juntas.
1. La cola
Si la cola de W. baero fti se encuentra rota o enrollada
parecer que los ncleos llegan hasta la punta, como los
de Loa loa.
2. La envoltura
A veces la envoltura se ha roto o es casi incolora. Por
ejemplo, en LTfla loa solo se observa como un espacio
incoloro entre la cola y los eritrocitos.
3. El tamao
Algunos especmenes de D. perstans son sumamente
largos (200/im) y algunos de W. bancrofti y Loa loa
son pequeos (250nm).
4. Las curvas
Si se daan durante la preparacin del frotis de sangre
W. bancrofti puede aparecer retorcida y Loa loa sufrir
una disminucin en el nmero de curvas.
5. La distribucin geogrfica
Tenga en cuenta invariablemente del lugar de donde
proviene el paciente. Si es de:
la cuenca del ro Zaire, Nigeria Oriental o Camern,
es probable que el parsito sea Loa loa
Senegal, Gana, las Antillas Menores o la India, es
probable que sea W. bancrofti
Tailandia, el parsito puede ser B. malayi
Guyana, puede ser M. ozzardi.
6. Extensiones sanguneas
No se recomienda intentar la identificacin de las micro-
filaras en extensiones sanguneas teidas; los parsitos
se suelen encoger y deformar, de modo que es difcil
reconocerlos.
214
24. Oncocercosis: observacin de microfilaras en la piel
Examen en el laboratorio
Se utiliza una muestra sumamente pequea de la piel
del paciente. Para observar las microfilaras, que se
encuentran dotadas de gran movilidad, se examinan
en una preparacin hmeda, entre un portaobjetos y
un cubreobjetos, por medio del microscopio.
MATERIALES
OBTENCIN DE LA MUESTRA
(a) Preparativos
1. Flamee en etanol el bistur (o la hoja de afeitar) y
la aguja.
2. C oloque una gota de solucin de cloruro sdico en
un portaobjetos.
3. Desinfecte la piel del rea escogida con un cojincillo
de gasa humedecido con etanol.
^mifc. *
RSSiiSSiiiSS mm S S ^
Jlll
fe:j^:^:;^:;^^;;;|;ig^j;ig
mmmm Wm ll M I t "i'l1 i1 Pl11 'I
(b) Mtodo
, mm 11 ywI
ililll
ii:
1. C on la mano izquierda perfore la piel introduciendo
la punta de la aguja hasta una profundidad de "
2 3 mm.
^jljP mmmmmmmmmi
JIIF
wmmmrnmmmmii
Con la mano derecha coloque el filo de la hoja del
bistur o de la hoja de afeitar sobre la piel estirada,
por arriba de la punta de la aguja.
Dipetaionema streptocerca
Este helminto, sumamente raro, puede no ser patgeno.
La microfilaria se encuentra en la piel y tiene las carac
tersticas siguientes:
es menos ancha ( 5 i m , equivalente a 1/2 eritrocito)
es menos larga (200/im)
el extremo anterior no est ensanchado
la cola termina en un gancho romo
los ncleos son ms pequeos y llegan hasta la
punta de la cola.
EN C ASO DE D U D A
1. Examine entre un portaobjetos y un cubreobjetos una muestra de sangre fresca extrada de un dedo, en
busca de microfilarias sanguneas (vase la pgina 205).
2. Si el resultado de este examen es positivo preprense un frotis de piel y otro de sangre en gota gruesa (vase
la pgina 193), ambos teidos, para identificar la especie.
218
RECOLECCIN DE MUESTRAS EN EL CAMPO
Algunas veces las microfilarias emigran a los ojos, donde las puede detectar un oftalmlogo por medio de instru-
mentos especiales.
219
25. Tripanosomas: detencin en la sangre; concentracin
Principio Importante:
Los tripanosomas se detectan en la sangre:
En la tripanosomiasis africana los parsitos aparecen en
en preparaciones hmedas la sangre a intervalos, durante algunos das, principal-
en gota gruesa, despus de teirlos mente durante los primeros tres meses de la enfermedad
despus de concentrarlos por centrifugacin repetida. y, en especial, durante los ataques de fiebre.
Se pueden hallar en la sangre de pacientes:
con tripanosomiasis africana (enfermedad del sueo)
con tripanosomiasis sudamericana (enfermedad de
Chagas).
A. EXAMEN DIRECTO
MATERIALES
MTODO
220
4. Er, el otro portaobjetos:
extienda la gota de sangre formando una gota
gruesa (vase la tcnica en la pgina 189).
222
B. MTODO DE CONCENTRACIN EN SANGRE
VENOSA
Examen despus de centrifugar 3 veces
Materiales
Una centrfuga elctrica
Tubos cnicos para centrifugacin
Una pipeta de Pasteur
Solucin de citrato trisdico al 3.8%,
(reactivo No. 52).
Extraiga:
9 mi de sangre venosa
y depostelos en el tubo con el citrato (hasta la
marca de 10 mi).
A A= .
r 0 223
5. Extraiga del tubo 2 todo el lquido flotante, dejando
el sedimento en su sitio.
Deposite este lquido en un tercer tubo (tubo 3).
Centrifugelo a alta velocidad durante 10 minutos.
224
C. TRIPANOSOMIASIS SUDAMERICANA O ENFERMEDAD DE CHAGAS
La enfermedad de Chagas, que se encuentra en Mesoamrica y Sudamrica, es causada por Trypanosoma cruzi
y transmitida por insectos. Casi en las mismas regiones se puede hallar otro tripanosoma, T. rangeli, que infecta
al hombre. Aunque no es patgeno, este parsito se debe identificar y distinguir de T. cruzi para diagnosticar la
enfermedad de Chagas.
Importante:
Los tripanosomas mviles se observan microscpicamente en la sangre durante la etapa aguda de la enfermedad
y raras veces despus. En la etapa crnica el diagnstico se basa principalmente en mtodos inmunolgicos.
225
26. Tripanosomas: examen del lquido de los nodulos linfticos
MATERIALES
OBTENCIN DE LA MUESTRA
vU_
m
Preparativos
Prepare la jeringa tirando el mbolo hacia atrs, hasta
/ -
donde sea posible.
Prepare asimismo 3 portaobjetos, colocando una gota de
la solucin de cloruro sdico en cada uno.
Lvese las manos con agua y jabn.
Haga que el enfermo se siente.
/iS^S^Sfi^^^i-:-:-:/
El tripanosoma
Tamao: 15 - 25 /m ( 2 - 3 veces la longitud de un
eritrocito)
Forma: semeja un pez ondulante
Aspecto: (en preparaciones hmedas) claro; refracta
la luz muy intensamente.
230
B. BACTERIOLOGIA
Introduccin
El examen directo de frotis bacterianos generalmente no basta para identificar una especie de bacterias; la iden-
tificacin precisa solo se puede lograr por medio de cultivos. Esto pone de relieve la importancia de enviar a los
laboratorios de referencia las muestras obtenidas. Sin embargo, el examen microscpico directo de frotis teidos
constituye una manera eficiente de estudiar la presencia de bacterias en medios biolgicos que normalmente son
estriles, como los lquidos cefalorraqudeo (LCR) y pleural, y en muestras de otros orgenes. Este procedi-
miento puede aportar informacin sumamente til para el diagnstico, el tratamiento inmediato y el dominio
de una enfermedad. Por ejemplo:
en muestras de casos de uretritis masculina en etapa inicial se puede diagnosticar con un grado razonable
de seguridad una infeccin por gonococos (en la mujer esto es considerablemente ms difcil)
se considera que la microscopa directa es la tcnica ms prctica y efectiva para detectar casos infec-
ciosos de tuberculosis y, por lo tanto, es de gran importancia para la epidemiologa
el examen microscpico del lquido cefalorraqudeo, de frotis de ste debidamente teidos y de. la mor-
fologa de cualesquiera bacterias que se encuentren en ellos puede ayudar a que se reconozca una menin-
gitis (meningoccica, neumoccica o por M. tuberculosis).
El diagnstico de algunas enfermedades tambin es posible por medio de la serologa; un ejemplo es la sfilis.
Las tcnicas serologicas tambin son importantes para la vigilancia de las reacciones del suero sanguneo con fines
epidemiolgicos.
231
27. Preparacin de frotis. Fijacin
Principio
La muestra que se va a examinar (pus, esputo, orina centrifugada, lquido cefalorraqudeo, etc.) se trata de la
manera siguiente:
se extiende, en una capa fina, sobre un porta-
objetos de cristal
se deja secar completamente
se fija en el portaobjetos, calentndola antes de
teirla.
MATERIALES
Mechero de Bunsen.
FIJACIN
iii***^
/
r
V'
^r^
_--' , B
234
28. Tincin de Gram
Ventajas
Gracias a la tincin de Gram las bacterias se pueden
clasificar en dos grupos:
grampositivas, que se tien de morado oscuro
gramnegativas, que se tien de color de rosa.
Esto hace ms fcil su identificacin.
TCNICA
SE DEBERN BUSCAR:
Bacterias = teidas de violeta oscuro, o grampositivas,
como estafilococos, estreptococos, micrococos, neumo-
cocos, enterococos, bacilos de la difteria y bacilos del
ntrax.
Bacterias = teidas de color de rosa, o gramnegativas,
como gonococos, meningococos, bacilos coliformes,
shigelas, salmonelas o vibriones del clera.
Para el examen directo de bacterias vase la pgina 238.
Bacterias Bacterias
gramnegativas grampositivas
3. El etanol al 95%:
Decolora ciertas bacterias cuando la solucin
de yodo no ha fijado firmemente la tincin
violeta
No decolora otras bacterias si la solucin de'
yodo ha fijado firmemente la tincin violeta.
A #
Los grmenes son microorganismos sumamente pequeos (0,5 - 5/im y, cuando mucho, 10/Ltm). Casi todos los
que se intentan detectar por microscopa o en cultivos son bacterias y de ah que las observaciones de esta clase
se llamen "exmenes bacteriolgicos". La deteccin de otros tipos de grmenes (rickettsias, virus, etc.) se lleva
a cabo en laboratorios especializados.
Bacterias no patgenas
Son inocuas y las hay en nmeros incontables en la
naturaleza. Algunas se multiplican normalmente en el
hombre sin afectar su salud y se denominan "saprofitas".
Los cultivos son esenciales para determinar la identidad exacta de las bacterias y, ms especialmente, para
reconocer si los microorganismos que se han encontrado en una muestra son patgenos o inocuos. Con objeto de
identificar los microorganismos que se han cultivado se emplean ensayos bioqumicos, serolgicos (aglutinacin)
y otros.
Cuando sea necesario efectuar cultivos, nunca se debe omitir el envo de muestras a los laboratorios especializados
(para lo relacionado con la remisin de muestras vanse las pginas 268 y 273).
'Nota: Bacterias patgenas obligatorias y facultativas. Bacterias patgenas obligatorias son las que invariablemente causan enferme-
dades (por ejemplo, el bacilo de la tuberculosis). Las bacterias patgenas facultativas son inocuas en ciertas regiones del organismo
(por ejemplo, los bacilos coliformes, que normalmente son saprofitas del intestino), pero pueden causar enfermedades cuando
invaden otras regiones (los bacilos coliformes pueden producir infecciones en el aparato urinario).
238
valor del examen directo
El examen directo "es extremadamente til para reconocer el tipo de microorganismo del caso y, otras veces,
para establecer diagnstico de una enfermedad (tuberculosis, lepra, gonorrea, etc.)
Por eso es esencial que se suministre una descripcin detallada de los microorganismos que se han observado y de
todos los dems elementos encontrados (leucocitos, eritrocitos, clulas epiteliales, etc.) (vase la pgina 242).
Bacilos gramnegativos
Son de tamao variable, con extremos redondeados
o agudos. Pueden ser largos y rectos (bacilos coli-
formes), con forma de coma (vibriones) o cortos y
gruesos (Proteus). En este grupo figuran numerosas
especies.
5. Cocobacilos gramnegativos
Su forma es sumamente variable; no son tan redon-
dos como los cocos, ni tan alargados como los baci-
los normales (peste, Haemophilus). Se pueden en-
contrar en muy diversas muestras.
6. Levaduras y actinomicetos
(a) Levaduras
Son de tamao variable, aunque mayores que las
bacterias. Al observarlas se pueden hallar en el
proceso gemacin. Generalmente se detectan como
contaminantes, aunque algunas veces son patgenas
(exudado genital, esputo, etc.)
(b) Actinomicetos
Granulos voluminosos que a veces se pueden obser-
var a simple vista (su color vara entre blanco y
amarillo).
El centro es gramnegativo y la periferia gramposi-
tiva. Se encuentran en muestras de pus cutneo,
esputo, etc.
240
7. Espiroquetas
Treponema y Borrelia
Tienen forma de una espiral irregular y suelta; se
tien dbilmente como gramnegativas.
(a) Treponema vincent (anteriormente, Borrelia
vincent)
Se encuentra junto con los bacilos fusiformes gram-
negativos, que tienen forma de cigarro habano, en
muestras de la faringe y la cavidad bucal (angina de
Vincent) (vase la pgina 272).
En casos de enfermedad todas estas reas pueden estar infectadas por microorganismos patgenos
241
REGISTRO DE LOS RESULTADOS DE EXAMENES BACTERIOLGICOS DIRECTOS
El informe del laboratorio deber contener una descripcin detallada de todos los elementos y microorganismos
encontrados e indicar su cantidad.
Elementos
Tipo: leucocitos, eritrocitos, clulas epiteliales
Microorganismos
Forma cocos, bacilos, etc.
Arreglo pares, cadenas, racimos
Afinidades
de tincin Gram, Ziehl y Neelsen
Caractersticas
especiales esporas, granulos, etc.
Cantidad sumamente escasos, escasos, cantidad
moderada, abundantes.
Ejemplos de informes
Importante:
Raras veces es posible diagnosticar una enfermedad en el laboratorio basndose en la identificacin de los micro-
organismos encontrados por examen bacteriolgico directo de una muestra. Sin embargo, los resultados de tal
examen pueden ayudar al mdico a establecer un diagnstico al estudiarlos junto con las manifestaciones clnicas
del paciente.
242
30. Gonococos: examen directo del pus uretral. Sfilis
GONORREA
Exudado genitourinario
Pus amarillo y denso: gonococos?
Lquido claro, blanquecino: Trichomonas* .
Exudado blanco y denso: hongos?*
Otros tipos de exudado: uretritis inespecfica (no
identificable por examen directo).
Principio
Los frotis de pus uretral toman la tincin de Gram. Los
gonococos se pueden reconocer por tres caractersticas:
1. Son diplococos (se agrupan en pares)
2. Son gramnegativos
3. Son intracelulares (se hallan dentro de los leucocitos).
243
Obtencin de muestras en la mujer
La muestra debe ser tomada del conducto cervical por u mdico o una enfermera especialista. En los casos de
gonorrea crnica se deber tomar inmediatamente antes o inmediatamente despus del periodo menstrual.
El examen directo es de gran valor para el diagnstico de la gonorrea en el hombre; en la mujer su utilidad es
considerablemente menor. Por lo tanto, el cultivo es necesario para aislar e identificar los gonococos en muestras
obtenidas de mujeres.
En la mujer
Se suele encontrar toda clase de microorganismos en los frotis de la mujer, particularmente:
Bacilos grampositivos
Cocos gramnegativos (saprofitas).
244
Remisin de muestras para efectuar cultivos
A. Empleo del medio "Transgrow" de Martin y Lester*
; ' '
SFILIS
246
Bsqueda de treponemas en la sfilis y la frambesia por examen directo de preparaciones hmedas
Este examen se puede llevar a cabo solo por personal experto, en un laboratorio provisto de un microscopio
con condensador para campo oscuro.
El examen carece de valor si el paciente ha tratado la lesin con algn unguento. En este caso se deben esperar
tres das para efectuar el examen.
248
31. Bacilos de la tuberculosis.
Tincin de Ziehl y Neelsen: mtodo caliente
Principio
El bacilo de la tuberculosis, Mycobacterium tuberculosis, es resistente a los cidos y se tie de rojo con la
coloracin de Ziehl y Neelsen (vase la pgina 253), en tanto que casi todos los dems microorganismos se tien
de azul.
La tcnica que se describe ms adelante se basa en: Smithwick, R.W. Laboratory manual for acid-fast microscopy, 2a. ed., Atlanta,
Secretara de Salud y Servicios Humanos de los EUA, Centros para el Control de Enfermedades, 1976. Vase tambin: Unin
Internacional contra la Tuberculosis, Technical guide for collecton, storage and transpon of sputum specimens and examination
for tuberculosis by direct microscopy, Pars IUAT, 1976.
MATERIALES
Portaobjetos de vidrio (si es posible, nuevos, que no
estn rayados)
Asa para siembra
Taco de algodn colocado en un alambre para
flamear
Cronmetro con campanilla
(S
REACTIVOS
Fucsina fenicada para tincin de Ziehl y Neelsen
(reactivo No. 21)
Mezcla de cido y etanol (reactivo No. 4)
Azul de metileno acuoso (reactivo No. 37)
Alcohol metlico (para quemar)
Frasco de lavado con agua destilada.
Importante:
Cuando haya terminado de preparar los frotis sumerja
las asas para siembra en un antisptico lquido y sac-
dalas dentro para quitar los residuos de esputo. A
continuacin coloque las asas junto a la llama, espere
a que se sequen y, acto seguido, las pasa a travs de sta.
As se evitar que el esputo infectado se disemine en
el aire al exponerlo a la llama.
Fijacin
Deje secar los frotis al aire y enseguida los fija
pasando los portaobjetos tres veces a travs de la
llama.
Importante:
Otro bacilo patgeno resistente a los cidos es el
causante de la lepra (vase la pgina 262). En la natura
leza, incluso el agua corriente, se suelen encontrar
diversos bacilos que son ms o menos resistentes a los
cidos. Algunas veces provocan resultados incorrectos
en el laboratorio.
y......,.,.. ^:i
'Mtodo de los Centros para el Control de Enfermedades y la OMS, en: Smithwick, R.W. Laboratory manual for acid-fast
microscopy, 2a. ed., Atlanta, Secretara t"? Salud y Servicios Humanos de los EUA, Centros para el Control de Enfermedades, 1976.
252
PRINCIPIO DEL MTODO
DE TINCIN DE ZIEHL Y NEELSEN
Microorganismos Bacilos de la
que no son resistentes tuberculosis
a los cidos
* 9
i
/
^
fe
Jn i v
Fucsina fenicada:
tie de rojo todos los microorganismos que se V/ o
encuentran en el esputo.
Azul de metileno:
tie de azul todos los microorganismos y elementos
decolorados por la mezcla de cido y etanol, pero
los bacilos acidorresistentes se conservan teidos de
rojo.
1
C
(a) Neumococos: Son diplococos grampositivos. Cada par se
encuentra rodeado por una cpsula que se conserva incolora.
(b) Hongos: Son levaduras o filamentos de micelio provistos de
esporas o sin ellas. Pueden ser patgenos (es necesario que se
haga su identificacin en un laboratorio especializado) o %
X Q
saprofitas que se han multiplicado en la muestra despus de
obtenerla.
(c) Actinomicetos (granulos): Vase la pgina 240.
Asimismo es posible encontrar parsitos en las preparaciones
sin tincin; por ejemplo, huevos del distoma pulmonar y,
muy raras veces, huevos de esquistosomas y Syngamus.
253
OBTENCIN DE LA MUESTRA
254
Tarros y cajas para recolectar esputo
Para recolectar muestras en el sitio donde se encuentre
el paciente emplense tarros que se puedan usar nueva
mente, o cajas de papel rgido fabricadas en el propio
laboratorio (vase la pgina 70). Para la limpieza y
desinfeccin de los receptculos vase la pgina 40.
Importante:
La saliva espumosa y las secreciones nasales y farngeas
no son expectoraciones aceptables. Debe obtenerse otra
muestra del esputo del paciente.
Medio de transporte lquido v^ ^^y
Un frasco de boca ancha y tapa de rosca, que contenga:
25 mi de una solucin de bromuro de cetilpiridinio
al 0,6% en agua destilada.
Obtencin de la muestra
El paciente deber expectorar directamente en el
lquido contenido en el frasco. Atornille la tapa y
efecte la remisin de la muestra.
Esta preparacin se conserva por lo menos durante 10
das.
255
El diagnstico de tuberculosis pulmonar tambin se puede hacer por:
1. Examen directo (y cultivo) de lquidos obtenidos por lavado del estmago (especialmente en nios):
centrifguense estos lquidos a alta velocidad durante 20 minutos, hgase un frotis con el sedimento y
tase del mismo modo que el esputo.
2. Cultivo de exudados larngeos.
Para investigar otros sitios de infeccin se intenta detectar los bacilos en:
1. La orina (tuberculosis renal)vase la pgina 305.
2. El pus de abcesos cerrados (tuberculosis sea).
3. El lquido cefalorraqudeo (meningitis tuberculosa, especialmente en nios); vase la pgina 349.
4. Lquidos aspirados de glndulas.
No se recomienda examinar heces fecales en busca de bacilos de la tuberculosis.
256
32. Bacilos de la tuberculosis.
Tincin de Kinyoun: mtodo fro
Principio
Con el mtodo en fro se requieren los mismos reactivos,
pero se emplea una solucin ms concentrada de fucsina
fenicada que hace innecesario el calentamiento.
Los bacilos de la tuberculosis (y de la lepra) se tien
de rojo y se destacan sobre un fondo azul.
Ventajas
Esta tcnica es ms simple y rpida que el mtodo en
caliente (vase la pgina 249). Facilita adems el examen
de gran nmero de muestras (por ejemplo, en las
encuestas epidemiolgicas).
Sin embargo, se utiliza una cantidad considerable de
fucsina fenicada. Para el trabajo habitual, en un labora-
torio general, es ms adecuado el mtodo en caliente.
MATERIALES
Un cronmetro
Fucsina fenicada de Kinyoun (reactivo No. 32)
Mezcla de cido y etanol (reactivo No. 4)
Azul de metileno (reactivo No. 37).
TINCIN
258
33. Lepra: bsqueda de bacilos en nodulos y
lesiones de la piel
Principio
En los casos de lepra lepromatosa se observan:
pequeos nodulos en los lbulos y bordes de las orejas
nodulos y placas de mayor tamao en la cara y el cuerpo.
El bacilo de la lepra suele encontrarse en gran nmero en las lesiones lepromatosas, pero generalmente es muy
escaso o no se observa en las lesiones tuberculoides. Se llama Mycobacterium leprae o bacilo de Hansen.
Se incide superficialmente una lesin, sin causar hemorragia. El material seroso de la incisin se extiende sobre
un portaobjetos, se deja secar al aire, se fija durante 3 minutos en vapores de formaldehido y se examina con el
microscopio despus de teirlo mediante una modificacin del mtodo de Ziehl y Neelsen. Mycobacterium
leprae es resistente a los cidos.
MATERIALES
Un bistur
Si es posible, una pinza de puntas romas, sin dientes,
o una pinza curva sin dientes, o una pinza para
tejidos
Una caja de Petri grande
Portaobjetos
Gasa
Etanol
Formaldehido comercial (al 37%)
Reactivos necesarios para la tincin de Ziehl y
Neelsen modificada, que se indican a continuacin.
REACTIVOS
259
MUESTRAS OBTENIDAS DE LA OREJA
262
Si el resultado es positivo, indquese el grado:
Cultivo
No se dispone de mtodo alguno para cultivar in vitro Mycobacterium leprae. Sin embargo, este microorganismo
se puede multiplicar en la almohadilla plantar del ratn y en el armadillo.
34. Lepra: bsqueda de bacilos en frotis de exudado nasal
MATERIALES
X
Cuando se encuentren completamente secos, fije
los frotis con vapores de formaldehido (vase la
"~^7
pgina 261).
Tanse por medio de la tcnica de Ziehl y Neelsen ^ )
modificada (vase la pgina 261).
6. Examnelos con el microscopio y registre los
resultados como se ha indicado en lo relativo al
examen de los bacilos en nodulos y lesiones de la
piel (vase la pgina 263).
iJ " ^ ^ ^
**-4-j
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS DEL EXAMEN DE EXUDADO NASAL
Importante:
La bsqueda del bacilo de la lepra se debe llevar a cabo
principalmente en el material obtenido de la raspadura
de las lesiones cutneas (orejas, cara, cuerpo). La tcnica
correspondiente se describe en la pgina 259. En todos
los casos se deber examinar tambin el exudado nasal.
Sin embargo, tmese nota de que algunas veces los
exudados nasales contienen bacilos no patgenos,
resistentes a los cidos, que no son M. leprae.
264
35. Peste: bsqueda de bacilos
Principio
Para confirmar que existe un caso de peste infecciosa se
requiere que se aisle e identifique el bacilo causante,
Yersinia pestis. Con frecuencia, durante las epidemias
o epizootias es posible elaborar un diagnstico por
presuncin basado en la presencia de bacilos de la peste,
que se colorean caractersticamente por su forma
bipolar con la tincin de Wayson (reactivo No. 57) en
muestras obtenidas de bubas por aspiracin.
Materiales
Una jeringa de 10 mi 20 mi con aguja de calibre
18 (1,2 mm) o calibre 1 9 ( 1 , 0 - 1 , 1 mm)
Tintura de yodo
Etanol al 70%
Solucin de cloruro sdico (reactivo No. 48)
Portaobjetos de vidrio.
Mtodo
1. Desinfecte la piel de la buba con tintura de yodo.
2. Aspire con la aguja y la jeringa algunos milmetros
de solucin de cloruro sdico.
3. Sosteniendo la jeringa entre el ndice y el pulgar de
la mano derecha introduzca la aguja en la buba.
4. Con la mano izquierda tire lentamente del mbolo
de la jeringa. Deber entrar en sta un lquido que
puede ser sanguinolento.
En el caso de que no entre lquido alguno en la
jeringa inyecte la solucin de cloruro sdico en la
buba, empuje suavemente el mbolo con el pulgar.
Imprmase a la aguja introducida en la buba un
movimiento circular. A continuacin tire nueva-
mente del mbolo hasta que se llene, si es posible,
la mitad de la jeringa.
5. Retire la jeringa y limpie con una pieza de algodn
impregnada de etanol el sitio donde se hizo la
puncin.
6. Sostenga la jeringa en posicin vertical, con la aguja
hacia abajo, y deje que escurran por sta una o dos
gotas sobre un portaobjetos para preparar un frotis
como se indica en la pgina 232.
7. Si el lquido de la buba se va a enviar a un labora-
torio especializado para realizar cultivos se debern
depositar algunos mililitros en medio de transporte
de Cary y Blair (reactivo No. 13) y despachar el
frasco, con la tapa enroscada hermticamente, en
un empaque doble (vase la pgina 74).
8. Sumerja la jeringa y la aguja en fenol al 5%, extra-
yendo suavemente el mbolo (vase la pgina 39
en cuanto al desecho de los materiales infectados).
Materiales
Metanol (qumicamente puro)
Portaobjetos de vidrio
Tincin de Wayson (reactivo No. 57)
Agua corriente.
Mtodo
1. Fijacin
(a) Coloque durante 5 minutos los frotis, que se habrn
dejado secar previamente al aire, en una cubeta para
tincin llena con metanol qumicamente puro.
XjX
w
(b) Saque los portaobjetos de la cubeta y djelos secar al
aire antes de proceder a teirlos.
2. Tincin
(a) Despus de haberlos fijado de la manera descrita,
cubra los frotis con colorante de Wayson durante
1 0 - 20 segundos.
Resultados
Con el colorante de Wayson los cuerpos polares de
V. pestis se tien de azul y el resto del frotis toma un
color rojizo.
267
36. Envo de muestres de heces fecales
Con frecuencia es necesario enviar muestras de heces fecales a otros laboratorios con objeto de que se realicen
cultivos:
para detectar vibriones del clera
para identificar otras bacterias que causan disentera (Salmonella, Shigella, etc.)
Se puede utilizar para ambos propsitos la misma forma de transporte, en el medio de Cary y Blair
(reactivo No. 13).
269
37. Examen directo de muestras obtenidas en la garganta.
Envo de las muestras
Ventajas
Los exmenes microscpicos de frotis teidos que se
han preparado con muestras obtenidas en la garganta
proporcionan a veces indicios de los microorganismos
que causan una infeccin. Para determinar con certeza
la identidad de estos microorganismos se necesita
efectuar cultivos bacterianos.
MATERIALES
Candida
Este hongo es causante de la moniliasis (principalmente
en nios). Se puede encontrar en las formas siguientes:
(a) Levaduras: esporas ovales o redondas, de 2 - 4/Lim de
dimetro y paredes delgadas; se observan botones o
brotes. Son acusadamente grampositivas.
(b) Filamentos miceloides: de longitud variable y 4fim
de anchura, con extremos redondeados.
Para observar ms claramente estas formas hgase
una preparacin hmeda impregnando el hisopo que
contiene la muestra con una gota de solucin de
cloruro sdico y examnese entre un portaobjetos
y un cubreobjetos.
272
ENVIO DE MUESTRAS OBTENIDAS
DE LA GARGANTA
(a un laboratorio bacteriolgico para efectuar cultivos)
274
38. Examen bacteriolgico directo de la orina
Utilidad
En los individuos sanos la orina casi no contiene micro-
organismos. Se pueden encontrar bacterias:
cuando existe una infeccin en alguna porcin del
aparato urinario (en el conducto inferior, uretritis;
en la vejiga, cistitis; en los rones, nefritis), o bien,
cuando se excretan en la orina bacterias de una
infeccin que afecta otra parte del organismo.
M A T E R I A L E S - REACTIVOS
OBTENCIN DE LA ORINA
MTODO
5. Para teirlos:
el portaobjetos 1, con la tcnica de Gram (vase
la pgina 235)
el portaobjetos 2, con la tcnica de Ziehl y Neelsen
(vase la pgina 249).
276
Examine con el microscopio el frotis que se ha teido
con la tcnica de Gram (usando el objetivo x 100, de
inmersin en aceite).
Bsquese pus: numerosos leucocitos teidos de rojo.
Bsquense asimismo microorganismos como:
1. Bacilos gramnegativos
2. Cocos grampositivos
3. Bacilos difteroides grampositivos
4. Levaduras grampositivas.
Vanse las descripciones de estos microorganismos en
la pgina 239.
Bacilos de la tuberculosis: vase ms adelante.
RESULTADOS
Indique si se han observado leucocitos o pus. Haga una
descripcin precisa de los microorganismos encontrados.
Ejemplo
Abundantes leucocitos
Escasos eritrocitos
Escasas clulas epiteliales
Abundantes cocos grampositivos en racimos
O bien.
Escasos leucocitos
Muy escasos eritrocitos
Escasas clulas epiteliales
Escasos bacilos gramnegativos
Gonococos
Nunca elabore un diagnstico de gonococia basado en
el examen del sedimento urinario. Los gonococos se
deben localizar en el pus uretral (vase la pgina 243).
BACILOS DE LA TUBERCULOSIS
El portaobjetos teido con la tcnica de Ziehl y Neelsen
se examina en busca de bacilos de la tuberculosis.
Si este examen se ha solicitado especficamente:
centrifugue 10 mi de orina a alta velocidad
durante 20 minutos.
Los bacilos de la tuberculosis se tien de rojo oscuro.
Se agrupan formando hileras.
277
CULTIVOS DE O R I N A
<3 Bacilos grampositivos o flora mixta Muestras contaminadas o que no son frescas
278
39. Muestreo de aguas para exmenes bacteriolgicos
Principio
Son varios los ensayos bacteriolgicos que se deben llevar a cabo para determinar si el agua es inocua para
consumo del ser humano. Estos ensayos tienen por objeto identificar y contar el nmero de microorganismos
que contaminan el agua. Generalmente se realizan en laboratorios especializados.
Los tcnicos que trabajan en laboratorios que se encuentran en el campo deben estar capacitados para recoger
muestras de agua adecuadamente y enviarlas al laboratorio ms apropiado (bacteriolgico, de salud pblica,
etc.) para su examen.
Las muestras de agua se deben recoger en condiciones de esterilidad, a fin de garantizar que no se contaminen
con microorganismos provenientes del exterior.
MATERIALES
Un frasco de vidrio blanco de 250 mi con tapn de vidrio esmerilado, lavado y enjuagado
con agua destilada
Papel de estraza para envoltura
Cordel
Solucin de tiosulfato sdico en proporcin de 30 g/l (reactivo No. 47)
Algodn
Etanol al 70%
Un termmetro con escala de 0 - 50 o C.
La muestra de agua se puede recoger en:
el grifo
un pozo
una fuente abierta, que puede ser un lago o un ro.
MTODO
<
HF2 ^g^^m^
iJJIZ^^^H
mm^vK^sm^ms
Coloque inmediatamente el tapn en el frasco.
Vuelva a colocar el papel de estraza sobre el tapn
L -
y telo alrededor del cuello del frasco..
B. Obtencin de la muestra
1. Abra el paquete esterilizado ante el pozo, sin tocar
el contenido.
Frtese las manos con etanol al 70%.
Quite el tapn del frasco para muestreo. Colquelo
sobre el papel esterilizado que se us para envolver
el conjunto.
B. Obtencin de la muestra
1. Tmese el frasco cerca del fondo y sumrjase unos
20 cm en el agua, con el cuello hacia abajo.
282
Voltee el frasco hasta que el cuello apunte ligera-
mente hacia arriba, colocando la boca contra la
corriente, si sta existe.
jBtbK
dMK^
1\)0-4P
Una vez que se recoja la muestra ponga el tapn
al frasco. Coloque el papel para envoltura nueva-
mente sobre el tapn y tese alrededor del cuello
del frasco. Pegue al frasco una etiqueta con los datos
r*
>
^
S
correspondientes claramente escritos y envie la
muestra sin tardanza al laboratorio.
S
n
Envo
Haga el envo en el mismo da. Conserve las muestras de agua en el frigorfico mientras tanto.
ARRIBA
1. Empaqese en una caja de madera: URGENTE
ABAJO
provista de tapa
con soportes de madera en l interior para conservar
los frascos en posicin vertical.
284
C. SEROLOGIA
Suero
Los ensayos serolgicos se llevan a cabo con el fin de determinar si la sangre contiene anticuerpos contra
diversas enfermedades infecciosas.
La sangre se centrifuga para separar el suero de los eritrocitos coagulados. El suero se debe conservar en
condiciones de esterilidad.
Sangre seca
Algunos ensayos serolgicos se pueden realizar en gotas de sangre recogidas en piezas de filtro de papel en las
que se han dejado secar. Poco antes del ensayo se absorbe la sangre en un solvente.
SUERO
Materiales
Equipo para la extraccin de sangre
Una centrfuga
Un tubo para centrifugacin, de 10 mi, de fondo redondo,
con tapa de rosca o tapn de goma; un tubo "Vacutainer"
estril, o una jeringa estril y seca
Pipetas de Pasteur estriles
Chupetes
Una pinza
Un frasco estril, de 10 mi, con tapa hermtica a prueba
de aire (arandela de goma)
Un mechero Bunsen.
Envo
1. Pegue una etiqueta al frasco, con el nombre del
paciente y la fecha.
2. Selle la tapa del frasco con cinta adhesiva.
3. Envuelva el frasco con papel absorbente o gasa.
4. Coloque el frasco en un envase de aluminio y sujtelo
en su sitio por medio de dos cojincillos de algodn.
5. Ponga el envase en una caja de cartn o madera.
6. Asegrese que el tiempo de transporte no sea mayor de
3 das.
Las muestras que se enven en transportes terrestres se
empacarn en cajas hicieras.
Conservacin
La mayor parte de los sueros que se emplean en ensayos serolgcos se puede conservar en el compartimiento
congelador del frigorfico a 2C o temperaturas inferiores, por lo menos durante un mes.
286
OBTENCIN Y ENVIO DE SANGRE SECA
Materiales
Lancetas estriles para extraer sangre
Filtro de papel de Whatman, No. 4 (o filtro de papel
ordinario, delgado), cortado en rectngulos de 4 x 3 cm
Bolsas pequeas de plstico, si es posible.
Mtodo
1. Extraiga sangre capilar de un dedo, de la manera habitual
(pgina 189).
2. Recoja una gota grande de sangre en la porcin media
de la tira de filtro de papel. Deje que ste absorba
completamente la sangre. Djese secar al aire.
Envo
Escriba el nombre del paciente y el nmero de la muestra
en la pieza de filtro de papel. Deposite ste en una bolsa de
material plstico pequea, o en un sobre de papel ordinario.
Conservacin
Las muestras se conservan por lo menos durante 2 - 3
semanas a la temperatura ambiente en todos los climas.
Propsito
La sangre seca se emplea particularmente para:
elaborar el diagnstico serolgico de la frambesia y la
sfilis (ensayo de inmunofluorescencia de los treponemas)
detectar la IgM en la tripanosomiasis, etc.
287
41. Ensayo de VDRL
V D R L significa Venereal Disease Research Laboratory, donde se elabor originalmente este ensayo.
Principio
1. Se examina el suero en busca de reaginas, anticuerpos que
se producen en las treponematosis (sfilis, frambesia, mal
del pinto).
2. La existencia de estos anticuerpos se pone de manifiesto
por un antgeno lipoide (no treponmico), que es una
suspensin de partculas minsculas.
3. La reaccin que ocurre entre este antgeno y los anti-
cuerpos produce una floculacin de la suspensin
(microaglutinacin). En las regiones tropicales el ensayo
del V D R L se debe efectuar, de preferencia, a temperaturas
de 23 - 29 0 C.
Materiales
Un baomara a 56C
Una maquinilla de rotacin (180 r/min)
Un microscopio con oculares x 4 a x 6, un objetivo so-ol foi yo' xe'~
a 10 y platina mecnica
Lminas para V D R L con anillos de fondo plano, de
cermica o parafina, de 14 mm de dimetro Oii i LQ
Una jeringa de 2 mi (del tipo usado para insulina)
Una aguja especial sin bisel, que siministre 60 gotas
por mi (aguja de calibre 18 (1,2 mm), a la que se oooo
haya cortado la punta con una sierra, o pipeta
capilar de Pasteur calibrada para suministrar 60 oooo
gotas por mi)
Pipetas de 0,2 mi con graduaciones de 0,05 mi
(o pipetas de 1,0 mi con graduaciones de 1/100)
oooo
Vasos para anlisis.
Reactivos
Antgeno V D R L , preparado el mismo da en que se use.
Sueros positivos conocidos, como testigos positivos y
dbilmente positivos.
Sueros negativos conocidos, como testigos negativos.
288
Materiales para preparar la suspensin de antgeno
Un frasco de 31 mi, de boca estrecha, con tapn
de vidrio esmerilado redondo, de 35 mm de
dimetro en el fondo
Una pipeta graduada con capacidad para 5 mi
Dos pipetas graduadas con capacidad para 1 mi
Un reloj con manecilla segundera
Antgeno V D R L
Solucin amortiguadora para VDRL, que general-
mente se suministra junto con el antgeno (reactivo
No. 7).
Examine el antgeno sostenindolo contra la luz. Si
contiene partculas o un precipitado no se debe usar.
0.4 mi
4.1 mi
290
A. ENSAYO CUALITATIVO DEL V D R L EN EL
SUERO POR MEDIO DE LAMINAS
1. Examine el suero que va a ensayar, para determinar:
si es claro
si se encuentra turbio
si hay hemolisis (se observar un color rosceo;
no use el suero).
4 mih
SSSS
292
Resultados de la microscopia
Haga este ensayo cuantitativo en todos los sueros que hayan resultado reactivos o dbilmente reactivos en el
ensayo cualitativo del V D R L . Las diluciones de los sueros que se ensayen sern: no diluido (1:1), 1:2, 1:4,
1:8, 1:16 y 1:32. En una sola lmina se pueden preparar dos ensayos.
Materiales
Equipo adicional necesario para el ensayo cuantitativo: debe confirmar con cada aguja antes de iniciar
Tubos de ensayo y gradillas el ensayo)
Pipetas de 0,2 mi divididas en graduaciones de Una aguja de calibre 23 (0,6 mm) sin bisel (deber
0,01 mi suministrar 100 gotas d solucin de cloruro
Pipetas graduadas, de 0,1 mi sdico por mililitro cuando jeringa y aguja se
Una aguja de calibre 19 ( 1 , 0 - 1 , 1 mm) sin bisel sostengan en posicin vertical, pero esto se deber
(deber suministrar 75 gotas de la suspensin de confirmar con cada aguja antes de iniciar el
antgeno por mililitro cuando la jeringa y la ensayo)
aguja se sostengan en posicin vertical, y esto se Solucin de cloruro sdico.
Mtodo
1. Coloque en.la hilera frontal de una gradilla los tubos
con el suero en que se har el ensayo cuantitativo
y directamente detrs de cada uno ponga un tubo
que contenga 0,7 mi de solucin de cloruro sdico.
(7)
1.2
f^
y 6, respectivamente, de una nueva lmina para ^ 0 * 1 mi
V D R L cuyos anillos se hayan numerado como se
indica en la ilustracin. Vierta en el tubo de dilucin
{* N
3
el residuo de suero soplando en la boca de la pipeta. 1:4 ' v y V/
-l:3i
mm m
mm @>
mmmm
Cogiendo las lminas con ambas manos imprima un
movimiento rotatorio, aproximadamente durante
15 segundos, para mezclar los sueros y la solucin.
295
0 13 0
S~~7x STk /^~~^k s-\
(>
0 0 00
9. Con la aguja especial de calibre 19 montada en una
jeringa aada una gota de suspensin de antgeno
a cada anillo.
00 00
Resultados
Notifique los resultados en trminos de la mayor dilucin de suero en que se haya servido reactividad.
Ejemplo
R = reactivo
D = dbilmente reactivo
N = no reactivo
296
D. MICOLOGIA
MATERIALES
MTODO
Cultivo
Hasta la fecha no se ha logrado preparar cultivos.
Tincin con solucin de yodo. La solucin de yodo produce descamacin de la piel y se observan principalmente
filamentos de micelio. No se recomienda este mtodo.
299
43. Ua: examen directo
MATERIALES
OBTENCIN DE LA MUESTRA
EXAMEN MICROSCPICO
Importante:
Estos exmenes pueden ser difciles, especialmente en
las primeras etapas de la enfermedad.
En caso de duda tome un pelo aparentemente normal,
de la misma longitud que el pelo enfermo, y colquelo
sobre el portaobjetos al lado del pelo infectado, para
compararlos. Solamente por medio de cultivos se puede
determinar con exactitud la especie de hongo que causa
la infeccin.
305
HIGIENE PERSONAL PREVIA A LA OBTENCIN DE
LA ORINA
Mujeres: las pacientes debern lavar el rea genital en
todos los casos.
Evtese la recoleccin de muestras de orina
durante los periodos menstruales.
Hombres: el lavado solo es necesario cuando se han de
efectuar exmenes bacteriolgicos.
MTODOS DE RECOLECCIN
Nios:
La orina se puede recoger en una bolsa de material
plstico con boca adhesiva. Esta bolsa se fija alrededor de
los rganos genitales del nio durante 1 - 3 horas,
dependiendo del examen solicitado. Se pueden emplear
las bolsas para colostoma.
ASPECTO DE LA ORINA
Descrbase el aspecto de la orina:
el color, ya sea amarillo, oscuro, castao o incoloro
indquese si la orina es clara o turbia.
306
2. Gravedad especifica y pH de la orina
Materiales
1 urinmetro
1 termmetro (de 0 - 50 o C)
1 probeta (50 mi).
Se necesitan por lo menos 40 mi de orina.
Mtodo
1. Vierta aproximadamente 40 mi de orina en la probeta.
2. Descienda suavemente el urinmetro en la orina, y
sultese.
3. Espere a que el urinmetro se detenga. No deber
tocar las paredes ni el fondo del cilindro.
307
Lase la GE que indique la escala del urinmetro en la
superficie de la orina (punto ms inferior del
menisco).
Retire el urinmetro. Mida la temperatura de 4a orina
inmediatamente con el termmetro.
Clculos
Observe la temperatura a que se encuentra catibrado el urinmetro (el fabricante la indica marcndola en el
instrumento). Habitualmente es de 20C. Tome nota de la temperatura que se ha medido en la orina.
Aada a la GE registrada:
- 0,001 por cada 30C que mida la temperatura de la orina por arriba de la temperatura de calibracin del
urinmetro.
En el caso contrario reste de la GE que se ha registrado:
0,001 por cada 3oC que tenga la temperatura de la orina por debajo de la temperatura de calibracin.
Ejemplo
El urinmetro se ha calibrado a 20C.
La temperatura de la orina es de 26C.
La GE medida es de 1,021.
La temperatura de la orina es 60C mayor que la temperatura de calibracin.
Aada a la GE:
6 x 0,001 = 2 x 0,001 = 0,002
3
Por lo tanto, la GE real de la orina ser:
1,021 +0,002=1,023.
Resultados
GE normal: 1,020 (variacin normal: 1,010-1.025).
GE baja: menos de 1,010* (trastornos renales o endocrinos).
GE elevada: superiora 1,025 (glucosuria, proteinuria).
*Una cifra reducida carece de importancia si el paciente ha ingerido una gran cantidad de lquidos antes del ensayo.
Materiales
Cristales de reloj
1 gotero
1 tenacilla
Papeles indicadores de tipo universal (para medir pH
de 1 a 10)
Papeles indicadores de graduacin limitada:
para el intervalo de 5,0 7,0 y el intervalo de
6,0 - 8,0.
La orina en que se haga el ensayo deber ser fresca.
Mtodo
En un cristal de reloj ponga una tira de papel
indicador de tipo universal (pH 1 10).
Deposite en el papel indicador algunas gotas de orina
fresca.
Resultados
pH normal aproximadamente 6,0 (lmite del intervalo normal, de 5,0 a 7,0 durante el da).
pH cido 4,5 . 5,5 (si persiste, puede obedecer a algunas formas de diabetes, fatiga muscular, o acidosis).
pH alcalino 7,8 - 8,0 (infecciones del aparato urinario; alimentacin vegetariana).
pH y depsitos de cristales
La determinacin del pH de la orina es til para identificar depsitos de cristales (vanse las pginas 3 3 2 - 3 3 5 ) .
Algunos cristales se depositan solo en la orina cida; otros lo hacen solamente en la orina alcalina.
Por ejemplo:
Orina cida: oxalatos, cido rico.
- Orina alcalina: fosfatos, carbonatos.
310
3. Deteccin y clculo de glucosa en la orina
Principio
La glucosa (azcar que se encuentra en la orina de los diabticos) es una sustancia reductora: reduce el sulfato
cprico, de color azul, de la solucin de Benedict, a xido cprico rojo,que es insoluble.
MTODO DE BENEDICT
Materiales
Tubos de ensayo de vidrio Pyrex
Un porta tubos de madera
Un vaso para anlisis
Un mechero Bunsen
Frascos para penicilina
Una pipeta
Solucin cualitativa de Benedict (reactivo No. 9)
5 mi
Mtodo
1. Con una pipeta deposite 5 mi de solucin de
Benedict en un tubo de ensayo.
311
Resultados
Azul Negativo 0
Verde Huellas 14
Verde con + 28
precipitado amarillo
Desde amarillo ++ 56
hasta verde oscuro
Castao +++ 83
Nota: Para detectar azcar en la orina por medio de tiras reactivas vase la pgina 323.
312
4. Deteccin y clculo de protenas en la orina
Principio
Cuando se agrega cido sulfosaliclico a una muestra de orina que contenga protenas se forma un precipitado
blanco.
Orina
La orina deber ser clara. Si es turbia fltrese con un filtro de papel o utilice el lquido flotante de una muestra que
se haya centrifugado.
Materiales
Tubos de ensayo
Una pipeta de 5 mi, graduada
Solucin acuosa de cido sulfosaliclico en proporcin
de 300 g/l (reactivo No. 50).
^>o<oo 5 ^
Mtodo es?
1. Con una pipeta depostense 5 mi de orina en un D C5 c^cTlllrx
tubo de ensayo.
P
Z><=> C D O
5\ A
2. Mediante una pipeta con gotero aada 2 gotas de
solucin de cido sulfosaliclico a la orina contenida =><=> O eO
en el tubo de ensayo. ^
313
Resultados
Resultado positivo
Al aadir el reactivo se forma un precipitado blanco.
Esta tcnica es til cuando se debe efectuar el ensayo
con numerosas muestras. Notiffquense los resultados de
la manera siguiente:
+ huellas
++ cantidad pequea
+++ cantidad mediana
111 i gran cantidad (aspecto opaco).
Resultado negativo
No se forma el precipitado blanco al agregar el reactivo.
Nota: Para la deteccin de protenas mediante cintas reactivas vase la pgina 323.
Principio
Este es un ensayo cuantitativo en que se usan el mtodo del cido sulfosaliclico y tubos estandarizados con
protenas (proteinmetros) para calcular la cantidad de albmina por comparaciones visuales.
Materiales
Solucin de cido sulfosaliclico en proporcin de 30 g/l (3%) (reactivo No. 51)
Tubos estandarizados con protenas.
Mtodo
1. Con una pipeta depostese 1 mi de orina en un tubo
pequeo, del mismo calibre que los tubos estandarizados.
2. Adanse 3 mi de solucin de cido sulfosaliclico.
Mzclese y djese reposar 5 minutos.
314
Resultados
Notifique la cantidad de albmina en g/l.* Si ei
resultado es superior a 1 g/l, diluya la orina con solucin
de cloruro sdico y repita el ensayo, haciendo los ajustes
necesarios en los clculos.
Ejemplo:
Para una dilucin de orina de 1 x 4 utilice 0,25 mi de
orina y 0,75 mi de solucin de cloruro sdico.
Mzclense. Multiplique por 4 el resultado que se obtenga.
315
5. Pigmentos biliares en la orina
Principio
Cuando se aade yodo (solucin yodurada de Lugol o tintura de yodo) a orina que contenga pigmentos biliares
se forma un color verde.
Mtodo
1. En un tubo de ensayo coloqense:
4 mi de orina.
2. Agregue:
4 gotas de solucin yodurada de Lugol.
Agtese el tubo.
Observe el color que se forme inmediatamente.
316
Resultados
Resultado negativo
Se forma un tnue color castao amarillento.
Resultado positivo +
Se produce un color verde:
verde plido: +
verde intenso: ++
Mtodo
1. Mezcle en un tubo de ensayo:
5 mi de orina
2,25 mi de solucin de cloruro brico.
Se formar un precipitado.
2. Filtre la mezcla.
El precipitado (que contiene los pigmentos biliares)
se quedar en el filtro de papel.
317
Desdoble el filtro de papel.
Agregense al precipitado detenido en el filtro:
2 gotas de reactivo de Fouchet.
Resultados
Resultado negativo: el color no cambia.
Resultado positivo: el precipitado toma un color verde.
318
6. Urobilingeno en la orina
MATERIALES
MTODO
z> <z> o o f^
2. Aada 0,5 mi de reactivo de Ehrlich.
=> o o o M
"te
"K^
O G> o LJ \
1J<=A
3. Djese reposar 5 minutos.
o o <=> 1
RESULTADOS
Principio
Cuando se aade pentacianonitrosilferrato ( 2 ) sdico (llamado tambin nitroprusido sdico)* a orina que
contenga cuerpos cetnicos, se vuelve de un color violeta.
MATERIALES
Tubos de ensayo
Una gradilla
Una probeta de 10 mi
Una pipeta gotera
Pentacianonitrosilferrato (2-) sdico (cristales)
Acido actico glacial
Amonaco.
MTODO
1. Preparacin de la solucin de
pentacianonitrosilferrato (2-) sdico
Inmediatamente antes de llevar a cabo el ensayo
deposite algunos cristales de pentacianonitrosil-
ferrato (2-) sdico en un tubo de ensayo (solo
los suficientes para cubrir el fondo del tubo).
*En la etiqueta del frasco de que disponga en su laboratorio pueden figurar el nombre recomendado internacionalmente,
pentacianonitrosilferrato (2-) sdico, o el ms antiguo y ampliamente usado, aunque no recomendado, nitroprusido. Ambos
nombres corresponden a la misma sustancia, pero diferentes fabricantes usan uno u otro.
320
3. En otro tubo de ensayo mdanse:
10 mi de orina.
/= = * ^ Y
ACIDO
ACTlo
5. A continuacin agregue:
10 gotas de la solucin recientemente preparada
de pentacianonitrosilferrato (2-) sdico.
6. Mzclese bien.
+
RESULTADOS
m
IP
Resultado negativo: ei color no cambia.
Resultado positivo: se forma un anillo de color violeta
en ia superficie.
Anillo de color de rosa: +. Anillo rojo: ++.
Anillo violeta intenso: +++.
Nota: Vase el uso de tabletas o papeles indicadores en la
pgina 323.
322
8. Uso de tabletas y papeles indicadores
en los exmenes de orina
Principio
Estos reactivos son productos comerciales. Pueden ser:
cintas de papel que se sumergen en la orina
tabletas sobre las cuales se depositan gotas de orina
tabletas que se ponen en contacto con la orina.
Cuando el resultado es positivo hay un cambio de color.
Instrucciones y precauciones
Conservacin: conserve estos productos en lugares muy secos. Coloque el tapn en el frasco correspondiente
inmediatamente despus de usarlos.
Siga las instrucciones del fabricante.
Utilidad
Ventajas: este mtodo es rpido, fcil y no requiere utensilios de vidrio, balanzas o sustancias qumicas.
Inconvenientes: estos reactivos suelen ser costosos. Algunos resultados son difciles de interpretar. En ciertos
casos las cintas o tabletas son poco estables y no reaccionan.
A. Cintas reactivas
Siga las instrucciones del fabricante.
B. Tabletas
La manera de usarlas depende del ensayo que se pretenda realizar; vase ms adelante.
Ventajas
Las cintas de papel tratadas con glucosa oxidasa son especficas pralos ensayos de la glucosa. Se pueden utilizar
para confirmar un resultado dbilmente positivo que se haya obtenido por medio de ensayos que no sean
especficos.
2. Ensayo de la proteinuria
Papeles (impregnados con azul de tetrabromofenol).
Resultado positivo: por lo general el papel toma un color verde amarillento (huellas de protenas) o verde
azulado (resultado intensamente positivo).
Inconveniente
Con frecuencia, los papeles para el ensayo de protenas son demasiado sensibles y pueden dar resultados
dbilmente positivos que son falsos.
*En todos los casos respete absolutamente las instrucciones del fabricante. 323
3. Ensayo de cuerpos cetnicos
Papeles (impregnados con pentacianonitrosilferrato (2-) sdico).
Resultado positivo: en el papel se forma un color violeta en menos de 30 segundos.
Tabletas (mtodo habitual):
coloqese la tableta en un cristal de reloj
depostese un gota de orina en la tableta.
Resultado positivo: se forma un color violeta en menos de 30 segundos.
Ensayo de sangre
Papeles (impregnados con ortotolidina).
Resultado positivo: casi siempre aparece en el papel
en menos de 1 minuto un color azul.
9. Sedimentos urinarios
Principio
La orina contiene elementos microscpicos en suspensin (clulas, cristales, etc.). Estos elementos se recogen por
centrifugacin y para examinarlos se pone una gota del sedimento formado entre un portaobjetos y un
cubreobjetos.
Como todos estos elementos en suspensin se sedimentan en la orina, si sta se deja en reposo durante algunas
horas, se les llama sedimentos urinarios.
Obtencin da la orina
Examine una muestra producida en una sola miccin.
Examine asimismo tan pronto como sea posible una muestra de orina fresca obtenida a la mitad de la miccin;
esta muestra deber ser:
obtenida en el mismo laboratorio, o bien
llevada rpidamente del cuarto del paciente al laboratorio (antes de que transcurran 2 horas desde la miccin).
El recipiente ser proporcionado por el laboratorio.
A las mujeres se les indicar se laven sus rganos genitales antes de orinar (vase la pgina 306).
Nunca se examinen muestras de orina que se hayan conservado en el frigorfico.
Utilidad
En ciertas enfermedades del aparato urinario los sedimentos se alteran considerablemente. En estas condiciones
se pueden encontrar los elementos siguientes:
pus
nmero anormal de eritrocitos
cristales anormales, etc.
diversas formas de parsitos.
Preservacin de la orina mediante solucin de formaldehido
Para efectuar el examen de sedimento la orina se puede preservar agregando:
8 gotas de solucin de formaldehido al 10% por cada 300 mi de orina.
La orina tratada de esta manera no se puede utilizar en otros ensayos, sea cual fuere su naturaleza.
MATERIALES
2.
3.
Vierta inmediatamente en un tubo para
centrifugacin hasta llenar % de su capacidad.
eritrocitos
leucocitos
levaduras
Trichomonas
espermatozoides
clulas epiteliales
cilindros
huevos y larvas de parsitos
cristales.
A. i Eritrocitos
Pueden estar:
(a) intactos: pequeos discos amarillentos, ms oscuros
en los bordes (8 /m)
(b) festoneados: con bordes espinosos y dimetro
reducido (5 6 fim)
(c) henchidos: crculos de poco espesor y dimetro
aumentado (9 10 im).
Normalmente no hay eritrocitos en la orina.
327
Cmo expresar la cantidad de eritrocitos y leucocitos encontrados en los sedimentos de orina
Es importante que se indique la cantidad de los diversos elementos que se observen.
Tambin es importante que se use un solo mtodo para expresar las cantidades halladas.
Utilice:
1 gota de sedimento urinario (1/50 mi)
1 cubreobjetos de 20 x 20 mi
el objetivo x 40 y oculares x 5 6 x 6
y examine con el microscopio:
Eritrocitos
Leucocitos
C. Levaduras
No se deben confundir con eritrocitos.
Tamao: 5 1 2 nm
Forma: cuerpos redondeados u ovales de varios
tamaos, que se hallan juntos. Se pueden
observar brotes.
No son solubles en cido actico.
Las levaduras se observan ocasionalmente en muestras
de orina que contienen glucosa. Verifique que la orina
sea fresca.
328
D. Trichomonas
Tamao: 15 fim (equivalente a 2 eritrocitos)
Forma: redonda, globular
Movilidad: mviles en la orina fresca (giran y se
vuelven)
Membrana
undulante: lateral
Flagelos: 4 flagelos ms o menos visibles.
Vase tambin la pgina 187.
E. Espermatozoides
Se encuentran ocasionalmente en la orina de hombres.
Cabeza: muy pequea (5 xm)
Flagelo: largo y flexible (50 tm)
Movilidad: mviles en la orina muy fresca.
F. Clulas epiteliales
1. Clulas epiteliales escamosas
Grandes y rectangulares; provienen de la descamacin
(desprendimiento de clulas del epitelio de los
conductos y rganos urinarios).
Se originan en:
el urter, o
la vagina.
5. Clula' renales
Las clulas renales son pequeas:
su tamao es el de 1 - 2 leucocitos (L)
son sumamente granulosas.
Los ncleos refractan la luz y son claramente visibles.
Casi siempre se encuentran junto con las protenas
urinarias.
G. Cilindros
Los cilindros son cilindricos y alargados, y cruzan casi
todo el campo cuando se examinan con el objetivo x 40.
Se forman durante las enfermedades de los tbulos
renales, que se pueden llenar de sangre, de otras clulas
y de depsitos de sustancias qumicas.
1. Cilindros hialinos
Son transparentes y refractan ligeramente la luz;
los extremos pueden ser redondeados o delgados.
(Se suelen encontrar en individuos sanos despus
de esfuerzos musculares intensos.)
2. Cilindros granulosos
Estos cilindros son ms bien cortos, llenos de
granulos voluminosos, de color amarillento y
extremos redondeados.
Los granulos provienen de clulas epiteliales
degeneradas de los tbulos renales.
330
Cilindros de granulos finos
Los granulos de estos cilindros son ms pequeos y
no llenan el molde completamente. No se deben
confundir con los cilindros hialinos (H), que se
hallan cubiertos parcialmente por cristales amorfos
de fosfatos.
Cilindros sanguneos
Estos cilindros se encuentran llenos de eritrocitos
ms o menos degenerados, de color acastaado.
5. Cilindros de pus
Contienen leucocitos degenerados. Los verdaderos
cilindros de pus se llenan completamente de
leucocitos (a).
Los cilindros hialinos pueden contener algunos
leucocitos (b).
I. Cristales
Los cristales tienen formas geomtricas uniformes (A),
a.diferencia de los residuos amorfos, que consisten en
acumulaciones de granulos pequeos sin forma
definida (B).
dispersos.
Estos granulos son solubles en una solucin de < *4r *m ^
cido actico de 100 g/l (1 gota por cada gota de <
sedimento).
334
4. Sulfonamidas acetiladas (en orina neutra o cida)
Se observan en pacientes que estn siendo tratados
con sulfonamidas.
Los cristales de sulfonamidas tienen formas variadas,
aunque suelen formar ruedecillas o agujas. Si se
observan en la orina cantidades importantes de
cristales no identificados, averigese si el paciente
se est tratando con sulfonamidas.
Se debe notificar la existencia de estos cristales, ya
que pueden causar lesionaes renales.
10. Pruebas del embarazo
Es posible determinar si una mujer se encuentra o no embarazada mediante ensayos que se realizan en la orina,
ya sea empleando reactivos comerciales (ensayo inmunoqumico), o
inyectando la orina a un animal de laboratorio (ensayo biolgico).
A . ENSAYO INMUNOQUMICO
Resultado positivo
Con la mayor parte de los reactivos comerciales
disponibles se forma un anillo uniforme, de color roju
parduzco, en el fondo del tubo.
Resultado negativo
El lquido contina siendo homogneo; no se forma
un anillo.
B. ENSAYO BIOLGICO
Para este ensayo se emplean diversos animales, pero casi siempre se prefieren ranas y sapos machos. La orina en
que se va a realizar el ensayo se inyecta al batracio. Si la mujer est embarazada, las hormonas de la orina
estimulan al animal, que produce una eyaculacin de espermatozoides visibles con el microscopio. Los tcnicos
laboratoristas deben estar muy bien capacitados por un instructor experto en este procedimiento y obedecer sus
indicaciones sobre.la eleccin del tipo de batracio, la cantidad de orina que se debe inyectar, el tiempo de
incubacin y el examen microscpico del lquido de la cloaca del animal.
Los resultados positivos se suelen obtener 9 - 1 5 das despus de que ha faltado el primer periodo menstrual,
dependiendo de los reactivos y del tipo de ensayo que se aplique.
336
DETECCIN DE SANGRE EN LA ORINA
En la orina fresca se puede detectar sangre entera cuando se buscan eritrocitos con el microscopio en el
sedimento de una muestra que se ha centrifugado (vase la pgina 327).
No se recomiendan los ensayos qumicos con bencidina, puesto que se ha reconocido que este agente qumico es
carcingeno.
Existen cintas reactivas para detectar sangre en la orina (vase la pgina 324).
337
B. EXAMEN DEL LIQUIDO CEFALORRAQUDEO
( *
fe
1.-.
i
p
1l
340
PRECAUCIONES QUE SE DEBEN TOMAR AL EXAMINAR EL LCR EN EL LABORATORIO
1. No se aplace el estudio del L CR
Las clulas y los tripanosomas se destruyen rpidamente por lisis en el LCR que se ha extrado. Asimismo
la glucosa se descompone con suma rapidez a menos que se preserve con oxalato de fluoro (vase la
pgina 344).
2. Actese con cuidado y economa
Es frecuente que solo se pueda disponer de una pequea cantidad de LCR para el estudio. Las muestras son
difciles de obtener, de manera que se debe evitar cualquier desperdicio.
3. El LCR puede contener microorganismos virulentos
Por lo tanto, sense pipetas taponadas con algodn no absorbente, o extrigase el lquido montando una
perilla de goma en la pipeta.
12. Concentracin de leucocitos en el LCR
Principio
En ciertas enfermedades el LCR puede contener leucocitos en cantidades variables.
El LCR se examina para determinar:
1. el nmero total de leucocitos: concentracin ("recuento") de glbulos blancos (empleando una cmara
para recuento).
2. los tipos de leucocitos observados: identificacin (despus de aplicar la tincin de Romanowski).
Importante:
El recuento se debe efectuar con la mayor prontitud posible despus de extraer la muestra, ya que las clulas
se destruyen rpidamente.
CONCENTRACIN T O T A L DE LEUCOCITOS EN
EL LCR
Materiales
una cmara para recuento de Fuchs y Rosenthal
(si no se dispone de ella, se puede emplear una
cmara de Neubauer mejorada, para recuento)
una pipeta de Pasteur con perilla de goma
Solucin de Trk (reactivo No. 54).
Mtodo
1. Tape la cmara para recuento con la laminilla de
vidrio que la acompaa.
342
La cmara cuadriculada de Fuchs y Rosenthal para
recuento tiene un rea de 9 m m 2 (cmara modificada),
o de 16 m m 2 . Su profundidad es de 0,2 mm.
Cuente las clulas en 5 mm 2 empleando los cuadros
1,4, 7,13 y 16.
--
'-
^
'l
\ *v
Si se usa LCR sin diluir no se necesita hacer clculo
alguno; el nmero de clulas que se haya contado dar
el nmero correspondiente por milmetro cbico de
LCR. i\ w i\ r.
Si se emplea LCR diluido, el nmero de clulas contadas
-ii f \f- ->-
multiplicado por 20 dar el nmero de clulas por mm 3
de LCR. - .
Al emplear la cmara de Neubauer mejorada cuente las -4k- -4Q -11- -dO.
clulas que haya en toda el rea cuadriculada, que es ^7 T^o -fl- -i
de9mm2.
Si se usa LCR sin diluir multiplique las clulas contadas
por 10 y divida entre 9 para obtener el nmero de
clulas oor m m 3 de LCR. 4fiL_ Me HA 0
111 iCr
1 1 -io1 ===^*= = =t a= === =
Si se emplea LCR diluido multiplique las clulas contadas
por 200 y divida entre 9 para obtener el nmero de clulas
por mm3 de LCR.
Resultados
LCR normal: menos de 5 x 10 6 leucocitos por litro (menos de 5 por m m 3 )
343
13. Clculo de la glucosa en el LCR
Principio
En la meningitis (especialmente la meningitis purulenta) se reduce considerablemente la cantidad de glucosa
en el LCR.
MATERIALES
Los mismos que se utilizan para calcular la glucosa en la sangre (vase la pgina 429).
MTODO
El mismo que se emplea para calcular la glucosa sangunea, con la diferencia de que se necesita una cantidad de
LCR cuatro veces mayor.
En los individuos sanos la cantidad de glucosa del LCR es de 2,5 - 4,2 mmol/l.*
Importante:
Ya que la glucosa del LCR se descompone rpidamente una vez que se ha recogido el lquido, es importante que
esta determinacin se efecte tan pronto como sea posible.
Si existe la posibilidad de una tardanza, el LCR se deber preservar con oxalato de flor (vase el reactivo No. 23).
344
14. Protenas en el LCR
Principio
La cantidad total de protenas del LC R se mide diluyendo ste en cido sulfosaliclico al 3% y comparando la
turbidez que se produce con la de un juego de tubos que contienen protenas estandarizadas.
Por medio de la prueba de Pandy se determina el aumento de las globulinas en el LC R, agregando ste a una
solucin de fenol.
MATERIALES
Resultados
El total de protenas del LC R normal es de
0,1 0,45 g/l.*
Las protenas del LC R aumentan:
en la meningitis, las hemorragias subaracnoideas y
las compresiones vertebrales
en la tripanosomiasis africana
*En unidades tradicionales, 10 45 mg/100 mi.
345
PRUEBA DE PANDY PARA LAS GLOBULINAS
Mtodo
1. En un tubo de ensayo pequeo mida:
1 mi de reactivo de Pandy.
2.
3.
Coloque el tubo frente a una pieza de cartn negro.
Con la pipeta gotera agregue lentamente:
- 3 gotas de LCR.
Examine la solucin despus de agregar cada gota.
II
4. Analice los resultados inmediatamente.
Resultados
Resultado positivo
Se forma una zona blanca a medida que las gotas de
LCR se mezclan con el reactivo.
Resultado negativo
No se forma la zona blanca al mezclarse las gotas de
LCR con el reactivo, o bien solo se produce una
ligera turbidez que se disuelve en seguida.
Notifique los resultados como:
"prueba de Pandy positiva", o
"prueba de Pandy negativa".
346
15. Examen microscpico del LCR
Resultados
El descubrimiento de tripanosomas mviles en el LCR
indica que la enfermedad ha llegado a su etapa tarda en
que el sistema nervioso se encuentra infectado. Por
medio de la prueba de Pandy se determina si existe un
aumento en las protenas del LCR. Asimismo el lquido
contiene una cantidad mayor de leucocitos.
Resultados
La presencia de cualesquiera microorganismos que se
observen en el frotis con la tincin de Gram se deber
notificar, indicando:
su reaccin al mtodo de Gram: positiva o negativa
su morfologa: cocos, diplococos, bacilos, etc.
la cantidad observada.
No es posible identificar con claridad las especies
empleando solamente el frotis teido. Se necesita
cultivar los microorganismos.
A. Meningococos
gramnegativos
diplococos que se sitan uno al lado de otro
intracelulares; se hallan en el interior de los
neutrfilos.
Ocasionalmente se observan afuera de los leucocitos
en cantidad reducida.
B. Neumococos
grampositivos
diplococos que se juntan por los extremos
se rodean de una cpsula que no es visible con
la tincin de Gram
generalmente son numerosos.
348
En todas estas formas de meningitis los leucocitos que se observan son neutrfilos.
Bacilos grampositivos
Se observan raras veces. Pueden pertenecer al grupo de Listeria. Su cultivo es esencial.
Resultados
Si se observan microorganismos, informe que en el frotis
se han encontrado "bacilos resistentes a los cidos".
4. HONGOS EN EL LCR
0
M Q
G s
o. ?
349
ENVIO DE LCR PARA EFECTUAR CULTIVOS BACTERIANOS
Antes de hacer el envio, conserve ei LCR en una incubadora a 37C. No se guarde en ei frigorfico.
Utilice el medio "Transgrow" si se cuenta con l; de lo contrario, use el medio de transporte modificado de Stuart
(reactivo No. 49).
350
C. HEMATOLOGIA
16. Las clulas sanguneas
La hematologa es el estudio de la sangre, que comprende las clulas sanguneas y el lquido que las rodea.
O *
3. Plaquetas o trombocitos
Aspecto: fragmentos de clulas de formas
variadas (triangulares, estrelladas,
ovales, etc.), con granulos *
Tamao: 2 - 5 nm e
Concentracin aproximadamente 300 x 10 9 por
de nmero: litro (300 000 x m m 3 ) de sangre
Funcin: son importantes para la coagulacin
4
de la sangre
Volumen de sangre del cuerpo humano
Un adulto que pese 60 kilogramos posee aproximada-
mente 4y2 litros de sangre.
Por lo tanto, no existe peligro alguno en que se extraiga
72 litro de sangre para efectuar una transfusin, ni en
llenar dos o ms tubos de ensayo de 10 mi para su
estudio. Se debe explicar esto a los pacientes que se
muestren atemorizados al extraerles sangre.
Coagulacin de la sangre
Cuando la sangre se coloca en un tubo de vidrio se
solidifica en 5 - 10 minutos, formando un cogulo; en
otras palabras, la sangre se ha coagulado.
Si se aade a la sangre un anticoagulante especial tan
pronto como se extraiga, se evitar que se coagule y
seguir siendo lquida. Entre otros anticoagulantes se
encuentran el oxalato de fluoro, el citrato trisdico, la
solucin salina bipotsica de EDTA y la mezcla de
Wintrobe (vanse las pginas 465 y siguientes).
i
Qu ocurre a la sangre que no se coagula?
La sangre tratada con un anticoagulante se separa en
dos componentes lquidos:
1. el plasma, un lquido amarillo
2. las clulas sanguneas, que se sedimentan y forman:
una capa delgada de leucocitos y un precipitado
de eritrocitos.
352
17. Obtencin de sangre venosa
Principio
La sangre venosa se extrae de una vena del brazo por
medio de una aguja y una jeringa.
MATERIALES
vs^
Prepare el frasco o el tubo adecuado, que se usar en
el ensayo correspondiente.
Antes de extraer la sangre lvese las manos con agua y
jabn.
354
Uso de la jeringa
1. Monte la aguja en la jeringa, sin tocar ms que la
base de la aguja. Pruebe aguja y jeringa para
cerciorarse de que no est obstruida y la jeringa
es hermtica.
Cubra el extremo de la aguja con el tubo estril
hasta que se use.
Aplique el torniquete.
355
Con el dedo ndice de la mano izquierda palpe la
vena en que introducir la aguja.
Importante:
Nunca se intente puncionar una vena por un lado.
Nunca se introduzca la aguja con el bisel hacia abajo.
356
Se sentir que la aguja atraviesa:
(a) la piel, que es resistente
(b) inmediatamente despus, la pared de la vena, que es
menos resistente (ms elstica).
Se pueden utilizar:
lancetas desechables
lancetas estriles
agujas de Hagedorn (Nos. 7 u 8).
En relacin con el mtodo para la extraccin de sangre
capilar vase la pgina 189.
358
ESTERILIZACIN DE LANCETAS Y AGUJAS
359
18. Concentracin de nmero de leucocitos
La concentracin de nmero de leucocitos (glbulos blancos) es el nmero de ellos que se encuentra en un litro
de sangre. (En unidades tradicionales se expresa como el nmero de leucocitos por milmetro cbico y se llama
"recuento" de leucocitos o glbulos blancos.)
Principio
La sangre se deposita en un lquido para diluir leucocitos, que:
destruye los eritrocitos (hemolisis)
deja intactos los glbulos blancos.
A continuacin se cuentan los leucocitos (glbulos blancos) en una cmara para recuento, por medio del
microscopio, y se calcula el nmero que existe en cada litro de sangre.
Utilidad
En ciertas enfermedades se altera el nmero de leucocitos. Por ejemplo, durante algunas infecciones ocurre un
aumento.
MATERIALES
Pipetas
360
MTODO
o
O'i
361
Mezcle bien la sangre diluida.
Por medio de una pipeta de Pasteur llene la cmara
para recuento. Evite llenara ms all del rea
cuadriculada.
Importante: Si el I quido se derrama en el canal que
se encuentra entre las dos cmaras, la operacin se
deber repetir: quite y limpie la laminilla de vidrio;
limpie tambin la cmara para recuento y llnela
con otra gota.
&W8-
^SSwiSftWKijKwaM
7. Deje reposar la cmara para recuento sobre la mesa C i i i S r " ^ tf'^VwS&essl
de trabajo durante 3 minutos a fin de que las clulas
se asienten. t:-:?:"! S&^SSK*
: : : : :
!^^@ : : :^^^ : :^^^S'
8. Coloque la cmara en la platina del microscopio.
Utilice el objetivo x 10 (con oculares x 6 x 10). WmmL
Reduzca la cantidad de luz que entre en el ^lr*^ - ^ J * 1
^
condensador, ajustando el diafragma iris.
Enfoque la cuadrcula de la cmara y los leucocitos. Hr
No se confundan los leucocitos con partculas de
polvo. "JKsfia
362
Recuento de leucocitos
(a) Uso de la cmara cuadriculada de Neubauer mejorada
rea de la cmara = 9 mm2
Profundidad de la cmara = 0,1 mm
Cuente las clulas en un rea de 4 m m 2 utilizando
los cuadros numerados 1, 3, 7 y 9, como se indica
en la figura. c
ni
-
ji i,
%
Incluya en este recuento las clulas que se observen
sobre las lneas de dos lados de cada cuadro revisado
L _ j n_
J
como se indica a continuacin: Este cuadro repre
senta uno de los cuatro revisados, o sean los cuadros
1,3, 7 y 9. L
j
um i
a .~ .
%
<& \ _
9 <d
9 0
_
= \\\\\\m
@
i
m
% i 1
*
Ejemplo:
Nmero de clulas contadas = 1 8 8
Clulas que hay en un litro = (188 x 0,05) x 10 9
Resultado que se notifica: 9,4 x 10 9 /1
Clulas por litro = < * ' " ' " contada x 10 x 20 x 106
= clulas contadas x 50 x 10 6
= clulas contadas x 0,05 x 10 9
Ejemplo:
En los cuatro cuadros se cuentan 188 clulas. Por lo tanto, el nmero de clulas por milmetro cbico de sangre
sin diluir es:
El clculo y el ejemplo se han expresado en unidades SI. Sin embargo, en el texto tambin se explica la unidad tradicional (nmero
de clulas por milmetro cubico). (La multiplicacin del nmero de clulas contadas x 50 proporciona el nmero de clulas por
milmetro cbico.)
363
"I s
i vL
q . p
RESULTADOS
Mrgenes normales
Valores elevados
El aumento del nmero total de leucocitos circulantes se llama leucocitosis. Se observa en el curso de algunas
infecciones bacterianas pigenas. En la leucemia se pueden encontrar concentraciones de nmero de leucocitos
que varan desde 50 x 10 9 /l hasta 400 x 10 9 /l ( 5 0 0 0 0 / m m 3 a 4 0 0 0 0 0 / m m 3 ) y an ms. Por lo tanto, se
necesita emplear una dilucin mayor de sangre para determinar la concentracin de nmero; por ejemplo,
0,05 mi de sangre y 1,95 mi del lquido para dilucin, de modo que se obtenga una dilucin de 1 x 40. Si se
emplea esta dilucin el nmero de clulas contadas se deber multiplicar por 0,1 en vez de 0,05 para obtener
el nmero por 10 9 por litro (si se usan unidades tradicionales, multiplique por 100 en vez de 50 para obtener
el nmero por m m 3 ) .
Valores reducidos
La disminucin del nmero total de leucocitos circulantes se denomina leucopenia. Se observa en algunas
infecciones como la tifoidea y el paludismo, y despus de usar durante cierto tiempo algunos medicamentos.
Cuando la concentracin de nmero de leucocitos es muy reducida, el grado de dilucin de la sangre deber
ser menor; por ejemplo, 0,05 mi de sangre y 0,45 mi del lquido para dilucin, con lo que se obtendr una
dilucin de 1 x 10. Si se emplea esta dilucin, el nmero de clulas contadas se deber multiplicar por 0,25 en
vez de 0,05 para obtener el nmero por 10 9 por litro (si se usan unidades tradicionales multiplique por 25 en
vez de 50 para obtener el nmero por m m 3 ) .
Ejemplo
Si se cuentan 50 normoblastos y la concentracin de nmero de leucocitos es 6 x 1 0 9 / l , la concentracin de
nmero de normoblastos ser:
50
x 16 = 5,3 x 10 9 /l
100 + 50
y la concentracin de nmero de leucocitos corregida ser: 16 5,3 = 10,7 x 1 0 9 / l .
* En unidades tradicionales las concentraciones de normoblastos y leucocitos se expresan por milmetro cbico. En tales unidades
el clculo correspondiente al ejemplo que se ha dado sera:
50
x 16000=5300/mm3
100 + 50
El nmero de eritrocitos (glbulos rojos) contenidos en un litro de sangre se denomina concentracin de nmero
de eritrocitos. (En unidades tradicionales se expresa como el nmero de clulas por milmetro cbico y se llama
"recuento" de eritrocitos o glbulos rojos.) Es difcil lograr determinaciones precisas de la concentracin de
nmero de eritrocitos con una cmara para recuento, y se recomienda que en vez de intentarlas se determinen
la fraccin de volumen de eritrocitos (hematocrito o volumen de sedimentacin globular) y la concentracin
de hemoglobina. Sin embargo, en este manual se describe el recuento de glbulos rojos considerando que existen
lugares donde no es posible determinar la fraccin de volumen.
Principio
La sangre se diluye por medio del lquido para diluir
eritrocitos.
Los eritrocitos se cuentan con el microscopio en una
cmara para recuento y se calcula el nmero por litro
de sangre.
MATERIALES
Pipetas:
(a) Una pipeta para sangre (conocida tambin como
pipeta de Sahli) graduada hasta 0,02 mi
(20 m m 3 2 0 / i l ) , con tubo de goma y boquilla.
No se recomienda el uso de pipetas con perilla, ya que
son imprecisas, difciles de emplear y limpiar, y ms
costosas.
(b) Una pipeta de 5 m i , graduada.
Una cmara para recuento. Se pueden emplear
diversos tipos de cmara; aqu se describe el uso de
la cmara cuadriculada de Neubauer mejorada.
Lquido para dilucin: solucin de citrato y
formaldehido (reactivo No. 24).
Un contador manual para recuento, si es posible.
MTODO
366
Limpie el exterior de la pipeta con papel absorbente.
Verifique que la sangre contina en el mismo nivel.
Wk
6. Deje reposar la cmara para recuento en la mesa de
jp
mF
trabajo durante 3 minutos, de modo que las clulas
5
se asienten.
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Ejemplo:
Nmero de clulas contadas en (a) la primera cmara cuadriculada = 390
Nmero de clulas contadas en (b) la segunda cmara cuadriculada = 370
Clulas por litro en (a) = ( 3 9 0 x 0 , 0 1 ) x 10 12 = 3,9 x 10 12
Clulas por litro en (b) = (370 x 0,01) x 10 12 = 3,7 x 10 1 2
Promedio (resultado que se notifica) = 3,8 x 1 0 ' 2 /I
Ejemplo:
En los primeros cinco cuadros se cuentan 390 clulas. Por lo tanto, el nmero de clulas en 1 mm 3 de sangre
sin diluir es 390 x 0,01 x 10 6 = 3,9 millones. La concentracin por litro de sangre sin dilures 390 x 0,01 x 10 1 2 ,
3,9x 1012/l.
368
RESULTADOS
Mrgenes normales
Unidades tradicionales
Unidades SI: millones de clulas
clulas x 10 12 por litro por milmetro cbico
Observe que las cifras son iguales en unidades SI y unidades tradicionales; por ejemplo, 5,0 x 10 , 2 /l 5,0 millones/mm 3 . Sin
embargo, algunas veces los valores expresados en unidades tradicionales se escriben completos; por ejemplo, 5 000 000/mm 3 .
Concentraciones bajas
Se encontrarn concentraciones bajas en pacientes con anemia causada por prdida de eritrocitos o hemolisis.
Concentraciones elevadas
Se observarn concentraciones elevadas de eritrocitos en pacientes con deshidratacin o policitemia.
(c) Secado
Si es posible sese una incubadora, dejando en
ella las pipetas toda una noche a 37 0 C en un
recipiente acojinado con algodn no absorbente.
Si se necesita una pipeta inmediatamente, utilice:
agua, preferiblemente destilada
ter.
deje secar completamente la pipeta al aire.
369
3. Pipetas: limpieza mensual (o ms frecuente, si se necesita)
(a) Sumerja las pipetas, aproximadamente durante 12
horas, en un vaso para anlisis que contenga solucin
limpiadora de bicromato.
(b) Enjuague primeramente el exterior y, a continuacin,
el interior de cada pipeta con agua corriente.
(c) Sumerja las pipetas durante 12 horas en un vaso para
anlisis que contenga una solucin dbil de bicar-
bonato sdico (aproximadamente 10 g/l; 1%)
(d) Limpie las pipetas como se ha indicado en "limpieza
diaria".
Pipetas obstruidas
Introduzca un hilo delgado de nylon (tipo 000) por
la punta de la pipeta al mismo tiempo que se
succiona por el extremo contrario.
Si de este modo no se consiguen resultados, sumerja
la pipeta durante 12 horas en un vaso para anlisis
que contenga solucin limpiadora de bicromato.
Cuando se van a llevar a cabo varios estudios, limpie la cmara tan pronto como sea posible despus de cada
ensayo, enjuagndola con agua y secndola con una pieza de gnero suave y limpia. Es necesario que la cmara se
limpie ms minuciosamente una vez al mes, como se ha indicado anteriormente.
370
20. Hemoglobina: clculo de la cianometahemoglobina,
mtodo fotomtrico
La hemoglobina es el pigmento rojo que se encuentra en los eritrocitos. Se compone de cadenas de protenas y
molculas que contienen hierro. Transporta oxgeno a las clulas de los tejidos del organismo.
Unidades de medicin
Estrictamente, la unidad SI para expresar las concentraciones de hemoglobina es el milimol por litro (mmol/l).
Cuando se usa esta unidad se necesita especificar la estructura qumica a la que se aplica. En la prctica esto
significa que se debe emplear el trmino "hemoglobina (Fe)" en vez de la palabra "hemoglobina" sola. Sin
embargo, como medida temporal antes de hacer el cambio a mmol/l, algunos laboratorios utilizan la unidad
"gramo por litro" (g/l). Cuando se usa esta unidad basta el trmino simple "hemoglobina" y no se necesita decir
"hemoglobina (Fe)". Los valores en gramos por litro se pueden convertir en valores expresados en mmol/l
multiplicndolos por 0,062. Ejemplo:
hemoglobina, 150 g/l x 0,062 = hemoglobina (Fe) 9,3 mmol/l
En este manual los clculos y valores se expresan generalmente en ambas formas. Tmese nota de que si se usa
la unidad "gramo por litro" los valores son 10 veces mayores que cuando se usa la unidad tradicional "gramo
por 100 mi". Por ejemplo, 150 g/l = 15,0/100 mi.
Principio
La sangre se diluye en I iquido de Drabkin, que destruye los eritrocitos y convierte la hemoglobina en cianometa-
hemoglobina. La solucin que se produce se examina por medio de un espectrofotmetro o un colormetro. Su
grado de absorbencia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre.
El mtodo fotoelctrico de la cianometahemoglobina permite hacer los clculos ms precisos de la cantidad de
hemoglobina existente. Se debe usar siempre que sea posible.
MATERIALES
Antes de usar el colormetro para calcular la hemoglobina se debe elaborar una curva de calibracin. Con esta
curva se pueden preparar un grfico y un cuadro de valores de la hemoglobina.
Mtodo
1. Calcule la concentracin de hemoglobina de la solucin de referencia en gramos por litro empleando la
frmula siguiente:
(Nota: 10 es el factor que convierte 100 mi en 1 litro; 1000 es el factor que convierte miligramos en gramos
y 251 es el factor de dilucin cuando 0,02 mi de sangre se diluyen con 5 mi del lquido de Drabkin).
Ya que 10 x 251/1000 es casi 2,5, la frmula anterior se puede simplificar de la manera siguiente:*
contenido de hemoglobina de la solucin de referencia en gramos por litro = concentracin en
mg/100ml x 2,5
Ejemplo
Concentracin de la solucin de referencia = 60 mg/100 mi
*S se emplea una dilucin de 1 x 200 (por ejemplo, 0,02 mi de sangre y 4 mi de lquido de Drabkin), multiplique por 2,0 en vez
de 2,5.
Tubo nmero 1 2 3 4
Solucin
estandarizada 4,0 mi 2,0 mi 1,3 mi 1,0 mi
Lquido de
Drabkin 2,0 mi 2,7 mi 3,0 mi
Dilucin de la
solucin
estandarizada Sin diluir 1 x2 1 x3 1 x4
372
3. Mezcle y deje reposar durante 5 minutos.
f
i
Ejemplo 4 : 4 4
i
La concentracin de la solucin de referencia se ha
calculado en 15 g/l
in
:
;
M
Solucin
estandarizada
Concentracin
de hemoglobina
Absorbencia
:
y
ri...
r\
(g/D
y
-\-.-
CD
P
:
i
% i : i
....;...
1 x3 IfSso 11,5 : \
1 10 _ x
1 x4 f = 37.5 8,5
'
! :
nf i 1 ! J
Con el grfico que se ha preparado: 0 50 1()0 1S0
elabore un cuadro de valores de la hemoglobina,
Hemog obina g/l)
que abarque desde 20 g/l hasta 180 g/l.
Importante:
Al comenzar cada da:
limpie los tubos de ensayo o cubetas para colormetro
llene uno de los tubos limpios con I quido de Drabkin fresco, que se usar para poner el colormetro en cero
ensaye con una solucin de referencia y lea el resultado en el tablero. Se pueden emplear:
(a) la solucin de referencia de la cianometahemoglobina, fresca, que se utiliza para calibrar el aparato, o
(b) una solucin de referencia de color gris calibrada anticipadamente por comparacin con la solucin
de referencia de la cianometahemoglobina.
373
CALCULO DE LA HEMOGLOBINA EN LA SANGRE
DE LOS PACIENTES (mtodo de la cianometa-
hemoglobina)
1. Con una pipeta deposite 5 mi de lquido de Drabkin
para dilucin en tubo de ensayo.
Aspire sangre venosa o capilar hasta la marca de
0,02 mi de una pipeta de Sahli. Evite la entrada de
burbujas. Si se usa sangre venosa asegrese que se
mezcle adecuadamente invirtiendo el frasco en que
se ha depositado junto con el anticoagulante (vase
la pgina 68) varias veces, aproximadamente durante
un minuto, inmediatemente antes de aspirarla con
la pipeta.
374
21. Clculo de la hemoglobina por medio
del comparador de colores
Principio
Este es un mtodo visual para calcular la hemoglobina.
La solucin de ensayo se compara con una serie estanda-
rizada de cristales de colores que indican la cantidad de
hemoglobina existente.
MATERIALES
MTODO
1
8. Se debe usar la luz del da, pero sin colocar el
comparador directamente bajo los rayos del sol.
376
22. Clculo de la hemoglobina por el mtodo de Sahli
MATERIALES
Un hemoglobinmetro de Sahli
Una pipeta de Sahli (graduada hasta 2 0 m m 3 ;
es decir, 0,02 mi, 20^1)
Una varilla de vidrio, pequea
Una pipeta gotera
Papel absorbente
Acido clorhdrico (HCL) en concentracin
de 0,1 mol/1 (0,1 N) (reactivo No. 14).
MTODO
377
Coloque el tubo graduado en el hemo-
globinmetro.
Sostngalo ante una ventana.
Compare el color del tubo que contiene la
sangre diluida con el color del tubo de
referencia.
Si el color del primer tubo es igual que el
del tubo de referencia o ms plido, la
concentracin de hemoglobina ser de
40 g/l o menos.
Principio
El volumen total que ocupan los eritrocitos (glbulos rojos) en un volumen dado de sangre, dividido entre el
volumen de sangre, se denomina fraccin de volumen de eritrocitos. Por ejemplo, si el volumen de los eritrocitos
en 1 litro (1000 mi) de sangre es de 450 mi, la fraccin de volumen de eritrocitos ser 450 ml/1000 mi = 0,45
(ya que la fraccin consiste en mililitros divididos entre mililitros, la unidad " m i " se cancela y el resultado es una
fraccin decimal simple, sin unidad). El resto de la sangre se compone casi completamente de plasma, junto con
una reducida cantidad de glbulos blancos (leucocitos). Si estos se pasan por alto, la fraccin de volumen del
plasma de este ejemplo ser 550 ml/1000 mi = 0,55 (obsrvese que 0,45 + 0,55 = 1,0 o sea que la fraccin de
volumen de eritrocitos ms la fraccin de volumen de plasma = 1). Por lo tanto, la fraccin de volumen de
eritrocitos es una forma de medir la proporcin de stos en el plasma. Se usa para calcular la concentracin
media de hemoglobina en los eritrocitos (vase la pgina 386) y se aprovecha tambin para elaborar el
diagnstico en pacientes que sufren de deshidratacin, choque o quemaduras.
Antes de la introduccin de las unidades SI, la fraccin de volumen de eritrocitos se denominaba "hematocrito"
o "volumen de sedimentacin globular" (VSG) y se notificaba como un porcentaje, y no como una fraccin
decimal. Segn el sistema tradicional, el "volumen de sedimentacin globular" correspondiente al ejemplo dado
sera de 45%. Tmese nota de que al emplear las unidades SI el valor numrico no cambia, pero se convierte en
0,45 en vez de 45%.
Macroescala
La sangre (mezclada con un anticoagulante) se coloca en
un tubo graduado y se centrifuga con el fin de que los
eritrocitos se sedimenten. A continuacin, en el tubo
graduado se mide directamente el nivel de la columna
de glbulos rojos.
Microescala
La sangre se deposita en un tubo capilar largo y se
centrifuga empleando un "cabezal para micro-
hematocrito". A continuacin se mide el nivel de
la columna de eritrocitos por medio de una escala
especial.
Se debe preferir este mtodo; es ms rpido y se puede
emplear sangre extrada de un dedo.
379
MTODO: MICROESCALA
Materiales
Una centrfuga (elctrica) para "microhematocrito"
con cabezal plano para girar a alta velocidad
Una escala especial para medir los resultados
(generalmente se suministra junto con la centrfuga)
Tubos capilares con heparina:
de 75 mm de longitud, y
de 1,5 mm de dimetro interior
(estos tubos contienen un depsito de heparina seca
como anticoagulante).
Si se usa sangre venosa mezclada con sal bipotsica de EDTA no
ser necesario que los tubos capilares contengan heparina; se
pueden emplear tubos ordinarios.
Cera blanda o arcilla plstica para modelar (o una
lmpara de alcohol)
Una lanceta y etanol, para la extraccin de sangre
capilar.
Si no se cuenta con una escala u otro tipo de utensilio pa ra efectuar la medicin se puede preparar uno utiliza ndo
papel milimtrico de 15 - 20 cm de anchura. En la orilla izquierda del papel, comenzando desde abajo, ma rque
10 puntos con una distancia de 4 mm entre uno y otro. En la orilla derecha ma rque 10 puntos con espacios de
6 mm. Con una regla trace 10 lneas que unan cada punto de la orilla izquierda con el punto correspondiente
de la orilla derecha . En la orilla izquierda , junto al punto donde comience la lnea horizonta l ms inferior, escriba
"0". Contine ha cia arriba por la orilla izquierda , numerando ca da lnea tra za da en el siguiente orden: 0,1, 0,2,
0,3, etc.; la lnea ms alta tendr por nmero 1,0. En la orilla derecha escriba los mismos nmeros junto al
extremo de las I neas trazadas. A continuacin, nuevamente con una regla trace una sucesin de I neas
horizontales mucho ms tnues que las primeras. Cada una de estas I neas tnues se deber tra za r precisa mente a
la mitad de la distancia entre dos lneas gruesas. Por ltimo, siguiendo las lneas impresas en el papel milimtrico
trace I neas verticales gruesas, separadas por espacios de unos 3 cm. La escala resultante deber ser similar a la
que se ilustra en la parte inferior de esta pgina. (Si se desea, en vez de elaborar una escala se puede usar la que
se ha impreso en esta pgina, para determinar la s fracciones de volumen de eritrocitos.)
^-~~^z\ 10
P^^EE^^--'- 09
--^--^EEEEr---- -----^^Z^^- OS
1.0
0.7
09 06
08
Q7
05
06
Q5
0.4
03
Q2
P==i ^ ^ ^ ^ = ,
04
03
02
0.1
O
0 0
382
Cmo usar la escala
1.Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el
fondo de la columna de eritrocitos (no el extremo
inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel
de la I nea horizontal correspondiente al 0.
2. Desplace el tubo a travs de la escala hasta que la TOPE DE L A COLUMNA DE PLASMA
lnea marcada con el nmero 1,0 quede al nivel del
tope de la columna de plasma. Vigile que el fondo
de la columna de eritrocitos contine sobre la 09
lnea 0; tambin verifique (por medio de las lneas 08
verticales gruesas) que el tubo se encuentre en
posicin completamente vertical. 07
3. La lnea que pase al nivel del tope de la columna de 07 as
eritrocitos indicar la fraccin de volumen de stos
(en la figura es 0,4). Las lneas tnues intermedias OS 05
corresponden a intervalos de 0,05; si el tope de la 05 04
columna de eritrocitos no se encuentra sobre una 04
-JOPE DE LA COLUMNA
lnea, sino entre una lnea gruesa y una tnue, DE ERITROCITOS 03
calcule su posicin por el 0,01 ms prximo. 03
02
0(2
Nota: La misma escala se puede utilizar aunque el laboratorio
no haya adoptado todava las unidades SI y contine ai 01
empleando el sistema tradicional. Simplemente tnganse en
cuenta los nmeros como porcentajes en vez de fracciones. ^tr
Por ejemplo, en lugar de "fraccin de volumen de eritrocitos: FONDO DE LA COLUMNA DE ERITROCITOS
0,4", antese "volumen de sedimentacin globular: 40%".
Resultados
Se suelen encontrar valores reducidos en los pacientes que sufren de anemia; en los hombres, la fraccin de
volumen de eritrocitos es inferior a 0,4 y en las mujeres desciende a menos de 0,37 (los respectivos volmenes
de sedimentacin globular son 40% y 37%).
Se suelen observar fracciones de volumen de eritrocitos elevadas en casos de prdida de plasma, quemaduras
graves, deshidratacin, diarrea infantil y clera (tambin, aunque raras veces, en la policitemia).
MTODO: MACROESCALA
Materiales
Una centrfuga elctrica ordinaria, capaz de generar
una fuerza sostenida de 2 3 0 0 g en la base de las
cubetas
Tubos especiales, graduados (tubos de Wintrobe):
calibre: 0,6 cm
longitud: 9,5 cm
calibraciones: 0 - 1 0 0
Una pipeta capilar Pasteur larga y delgada (de
longitud suficiente para llegar al fondo del tubo) con
perilla de goma.
Obtencin de la muestra
Extraiga sangre venosa y depostela en un tubo que
contenga un anticoagulante (sal bipotsica de EDTA o
solucin de Wintrobe).
383
Mtodo
1. Con la pipeta capilar llnese con sangre el tubo:
hasta la marca de 100
asegrese que no se formen burbujas.
Resultados
Los valores normales son iguales a los que se han
indicado al tratar el mtodo de microescala.
Normalmente la concentracin de nmero de eritrocitos (clulas x 1 0 n por litro) guarda cierta relacin con la
fraccin de volumen de eritrocitos. Si la primera es C, la fraccin de volumen de eritrocitos se encontrar
generalmente entre (C -0,2)/10 y (C -0,4)/10.
Ejemplo:
Si la concentracin de nmero de leucocitos es 5 x 10 1 2 /l, la fraccin de volumen oscilar normalmente entre
(5 -0,2)/10 y (5 - 0 , 4 ) / 1 0 ; es decir, entre 0,48 y 0,46.
(En unidades tradicionales esta relacin es similar, pero la frmula para calcularla es ligeramente distinta: si
C es el recuento de eritrocitos (glbulos rojos) el volumen de sedimentacin globular (hematocrito), como
porcentaje, estar normalmente entre (C x 10) - 2 y (C x 10) -4.)
384
RELACIN ENTRE LA FRACCIN DE VOLUMEN DE ERITROCITOS Y LA CONCENTRACIN DE
HEMOGLOBINA
La fraccin de volumen de eritrocitos es, normalmente, unas 0,003 veces mayor que la concentracin de
hemoglobina cuando sta se expresa en gramos por litro. Si la concentracin de hemoglobina se expresa en
milimoles de hemoglobina (Fe) por litro, la fraccin de volumen de eritrocitos ser ms o menos 0,05 veces
mayor que la cifra obtenida.
Ejemplo:
Una persona cuya concentracin de hemoglobina sea de 130 g/l tendr normalmente una fraccin de volumen
de eritrocitos de 130 x 0,003 = 0,39. En trminos de hemoglobina (Fe), tal concentracin ser aproximadamente
de 8,0 mmol/l, y la fraccin de volumen de eritrocitos ser aproximadamente de 8,0 x 0,05 = 0,4.
385
24. Concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos
La concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos es una medida del contenido promedio de esta
sustancia en los glbulos rojos. Se expresa en gramos de hemoglobina por litro o en milimoles de hemoglobina
(Fe) por litro,* y se calcula dividiendo la concentracin de hemoglobina de la sangre entre la fraccin de
volumen de eritrocitos.
Ejemplos
(1) Si la hemoglobina se expresa en gramos de hemoglobina por litro:
hemoglobina = 150 g/l; fraccin de volumen de eritrocitos = 0,43
concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos = 150/0,43 = 349 g/l
(2) Si la hemoglobina se expresa en milimoles de hemoglobina (Fe) por litro:
hemoglobina (Fe) = 9,3 mmol/l; fraccin de volumen de eritrocitos = 0,43
concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos = 9,3/0,43 = 21,7 mmol/l
(Nota: para convertir valores en g/l a valores en mmol/l multiplique por 0,062 06.
As, empleando el ejemplo anterior, 349 g/l x 0,06206 = 21,7 mmol/l.)
RESULTADOS
Normalmente la concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos se encuentra entre los lmites siguientes:
(a) lmite inferior: hemoglobina, 322 g/l o hemoglobina (Fe), 20 m m o l / l ; (b) lmite superior: hemoglobina, 371 g/l o
hemoglobina (Fe), 23 mmol/l. Cuando la cifra se halla entre estos lmites se dice que los glbulos rojos son
"normocrmicos" (de color normal). Si los valores descienden debajo del lmite inferior de los mrgenes
normales indicarn que los eritrocitos son "hipocrmicos" (de color menos intenso que el de los eritrocitos
normales), como ocurre en las anemias hipocrmicas. Si los valores son ms altos que el lmite superior de los
mrgenes normales debern despertar sospechas y se habr de determinar nuevamente la concentracin media
de hemoglobina en los eritrocitos. Los glbulos rojos nunca son "hipercrmicos" (de color ms intenso que el
normal), pero pueden aumentar de tamao y, en estas condiciones, contener mayor cantidad de hemoglobina
que los eritrocitos normales; en este caso la concentracin media de hemoglobina puede ascender hasta 380 g/l
(hemoglobina (Fe) = 23,6 mmol/l), aunque nunca es superior a esta cifra.
Unidades tradicionales
En el sistema tradicional la concentracin media de hemoglobina en los eritrocitos se denominaba "concen-
tracin globular media de hemoglobina" (abrevindola generalmente como CGMH) y se expresaba por un
porcentaje. Se calculaba dividiendo la concentracin de hemoglobina de la sangre expresada en gramos por
100 mi entre el volumen de sedimentacin globular expresado como un porcentaje y multiplicando por 100.
Ejemplo: concentracin de hemoglobina, 15,0 g/100 m i ; volumen de sedimentaciqn globular, 43%; concen-
tracin globular media de hemoglobina = (15,0/43) x 100 = 34%. En este sistema los mrgenes normales son de
3 2 - 3 6 % y los valores nunca ascienden a ms de 38%.
386
25. Preparacin de extensiones de sangre
Principio
La extensin se prepara repartiendo uniformemente una
gota pequea de sangre sobre un portaobjetos de manera
que solo se deposite una capa de clulas.
Despus de teirlas, las extensiones de sangre se usan:
para determinar las fracciones de nmero de los
tipos de leucocitos
para detectar glbulos rojos anormales
para identificar ciertos parsitos.
MATERIALES
2Z3
Cmo hacer un instrumento para extender el frotis
1. Seleccione un portaobjetos cuyos bordes estn
completamente lisos.
2. Con una sierra pequea marque diagonalmente hasta
cierta profundidad dos esquinas de uno de los
extremos del portaobjetos.
3. Corte estas dos esquinas.
PREPARACIN DE PORTAOBJETOS
387
OBTENCIN DE LAS MUESTRAS DE SANGRE
Obtenga la sangre:
del dedo cordial o el anular
en una cara lateral de estos dedos.
Deje que la sangre salga libremente. Recoja primero las
muestras en que se determinarn las concentraciones de
nmero de las clulas sanguneas (si se han solicitado).
Uso de anticoagulantes
Utilice solamente solucin salina bipotsica de EDTA
seca; otros anticoagulantes alteran la conformacin de
los leucocitos. No se debe dejar la sangre con el anti
coagulante en reposo antes de preparar el frotis.
PREPARACIN DE LA EXTENSIN
388
4. Deje que la gota de sangre se extienda por el borde
del portaobjetos recortado.
SECADO DE LA EXTENSIN
389
Marque la extensin ya seca con el nombre o el nmero
del paciente. Escriba sta con un lpiz de grafito en la
porcin gruesa de la extensin sangunea que no se
utilizar para el examen.
FIJACIN
Si la extensin se ha preparado para determinar fracciones de nmero de los tipos de leucocitos se deber fijar
con metanol, o directamente por medio de la tincin de May-Grnwald (vase la pgina 393).
Para la deteccin de parsitos (empleando las tinciones de Giemsa o Field, la extensin se fijar con metanol
(vanse las pginas 393 y 395).
CONSERVACIN
390 \
26. Tincin de extensiones de sangre
Principio
Las extensiones de sangre se colorean con las tinciones de Romanowski, que contienen azul de metileno y eosina.
Entre las tinciones de Romanowski ms ampliamente usadas figuran:
La de Leishman y la de Wright, que proporcionan resultados similares y se emplean como tinciones
individuales
La de MayGrnwald y la de Jenner, cuyos resultados son semejantes y se emplean con la tincin de Giemsa
La de Giemsa, que se puede usar como tincin individual o junto con la de MayGrnwald o la de Jenner
Las de Field, A y B, que se preparan con agua a diferencia de las otras tinciones mencionadas, que se
elaboran con metanol. Las tinciones de Field se usan por igual en extensiones de sangre y de gota gruesa.
El colorante de Romanowski con metanol se pueden utilizar para fijar las extensiones antes de diluirlo en los
portaobjetos para la tincin. Los mejores resultados se obtienen haciendo primero la fijacin con metanol y
coloreando a continuacin con colorantes diluidos, preparados anticipadamente como se indica ms abajo.
TINCIN DE LEISHMAN
Materiales
Dos varillas de vidrio colocadas a travs del fregadero
o sobre una cubeta para tincin
Una probeta de 50 mi 100 mi
Un frasco de lavado con agua amortiguada (reactivo
No. 5)
Un cronmetro para marcar los intervalos
Una gradilla para secar los portaobjetos
Tincin de Leishman (reactivo No. 34)
Metanol.
J^P
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Mtodo
1. Fije la extensin de sangre con metanol durante 2 3
minutos.
391
3. Cubra el portaobjetos con el colorante diluido
durante 7 - 1 0 minutos
iM''^^j^
.
IIMP
^^ssiR $:%fyr
^ ^^mmSi IMT
^^&-'''$?$^\'&'!y' y
Escurra el agua y coloque el portaobjetos en una ^i^s
gradilla hasta que se seque.
Resultados
En una extensin adecuadamente teida:
Neutrfilos el citoplasma se tie de color rosceo y en su interior se observan granulos pequeos
de color malva
Eosinfilos el citoplasma se tie de color rosceo y en su interior se observan granulos voluminosos
de color rojo
Monocitos el citoplasma se tie de color azul grisceo
Linfocitos (grandes) el citoplasma se tie de color azul claro
(pequeos) el citoplasma se tie de color azul oscuro
Basfilos numerosos granulos de color azul malva oscuro llenan la clula
Eritrocitos se tien de color rojo plido
Plaquetas se tien de color malva rosceo.
392
TINCIONES DE MAY-GRNWALD Y DE GIEMSA
Materiales
Los mismos que se usan para la tincin de Leishman.
Tincin de May-Grnwald (reactivo No. 36)
Tincin de Giemsa (reactivo No. 28)
Agua amortiguada (reactivo No. 5).
Mtodo
1. Fije la extensin con metanol durante 2 - 3 minutos.
393
5. Lave el colorante con una comente de agua
amortiguada.
No se escurra el colorante porque dejara un
depsito la extensin.
4$.
^^K
^
i ^^^P
fe^
^mWmKjr
7. Escurra el agua y coloque el portaobjetos en una
gradilla hasta que se seque.
S*ir
Resultados
Similares a los que se obtienen con la tincin de
Leishman (vase la pgina 391).
394
TINCIN RPIDA DE EXTENSIONES
CON EL MTODO DE FIELD
Materiales
Colorantes A y B de Field (reactivo No. 22).
Frascos o vasos para anlisis con agua limpia (no se
necesita agua amortiguada).
Mtodo
1. Fije la extensin con metanol durante 2 - 3 minutos.
Resultados
Similares a los que se obtienen con la tincin de
Leishman (pgina 392).
Evite la formacin de depsitos de colorante. En las extensiones tienen el aspecto de acumulaciones de manchas
negras y pequeas.
Evite las tinciones defectuosas, que dan por resultado extensiones demasiado azules, demasiado rojizas o
demasiado oscuras.
1. Utensilios de vidrio completamente limpios. Lvense todos los das. No utilice cidos. Elimine los depsitos
de colorantes con metanol.
2. Agua neutra (amortiguada, si es posible). Vase la tcnica para su preparacin en la pgina 6 1 . El agua
cida hace que el frotis sea demasiado rojo; el agua alcalina hace que sea demasiado azul. El agua neutra que
se use se deber haber preparado recientemente, ya que se acidifica al exponerse al aire.
3. Mezcla de Giemsa. Preprese con lentitud y cuidado. Los sacudimientos producen precipitaciones en los
colorantes.
1. Depsitos de colorantes
Son causados por la tincin de May-Grnwald o el agua neutra y se pueden observar a simple vista en el
lquido que se encuentra sobre el portaobjetos. Escurra el colorante. Enjuague el portaobjetos dos veces con
metanol. Djese secar y talo de nuevo con colorantes de May-Grnwald frescos o filtrados.
Se pueden observar a simple vista o con el microscopio. Enjuague el portaobjetos con metanol, como en el
caso anterior, pero lave inmediatamente despus con agua neutra. Djelo secar y repita el procedimiento de
tincin desde e) principio.
396
27. Fraccin de nmero y examen del tipo de leucocitos
No todos los leucocitos (glbulos blancos) que circulan en la sangre son idnticos. Hay cinco tipos principales,
que se diferencian por el tamao, la forma del ncleo, el color de los granulos del citoplasma y otros caracteres.
La proporcin de cada tipo de leucocitos es importante para el diagnstico. Esta proporcin se denomina
fraccin de nmero del tipo de leucocitos.
Principio
Se cuentan 100 leucocitos y se anota el nmero que se
ha encontrado de cada tipo de ellos. La proporcin de
cada tipo de leucocitos se expresa como una fraccin
decimal.*
Ejemplo:
neutrfilos 0,56
linfocitos 0,25
eosinfilos 0,12
monocitos 0,06
basfilos 0,01
La suma de todas las fracciones deber ser igual a 1 .
MATERIALES
MTODO
Examen de la extensin
Empleando el objetivo x 100, de inmersin en aceite,
verifique que los glbulos blancos se encuentran
uniformemente distribuidos en la extensin.
En un frotis defectuosamente extendido es posible que
los neutrfilos se hallen agrupados en la ltima porcin.
397
Recuento de leucocitos
1. Inicie el recuento en la ltima porcin de la
extensin, precisamente donde se observe que los
eritrocitos comienzan a agruparse y sobreponerse.
2. Examine una porcin rectangular de la extensin
mediante un movimiento ordenado, de un campo al
siguiente, como se indica en la ilustracin. Tome
nota del tipo de leucocitos que se observe en cada
campo.
3. Cuente un total de 100 leucocitos.
3. BASFILOS POLIMORFONUCLEARES
Este es el tipo ms raro de los granulocitos.
Tamao: 11 - 1 3 //m
Forma: redonda
Grnulos: muy voluminosos, redondos, de color
morado oscuro, abundantes pero menos
estrechamente agrupados que los granulos
de los eosinfilos
Ncleo: difcil de observar, pues se halla cubierto
por los granulos
Vacuolas: en el citoplasma se encuentran escasas
vacuolas incoloras y pequeas.
4. LINFOCITOS PEQUEOS
Tamao: 7 - 10/im
Forma: redonda
Ncleo: voluminoso; ocupa la mayor parte de la
clula; la cromatina es de color morado
oscuro, y densa
Citoplasma: la cantidad visible es reducida, de color
azul y sin granulos.
5. LINFOCITOS GRANDES
Tamao: lO-IS/im
Forma: redonda o irregular
Ncleo: oval o redondo; puede ocupar un lado de
la clula
Citoplasma: abundante, de color azul plido
Grnulos: escasos, voluminosos y azurfilos (de
color rojo oscuro).
6. MONOCITOS
Tamao: 15 - 25 jum; son los leucocitos ms
voluminosos
Forma: irregular
Ncleo: variable, frecuentemente con forma de
rion; la cromatina se dispone en cordones
irregulares de color malva plido
Granulos: sumamente pequeos; semejan partculas
de polvo; generalmente rojizos
Vacuolas: casi siempre hay vacuolas en el citoplasma.
En los pacientes que sufren de paludismo el citoplasma suele contener
depsitos de color negro castao, formados por el pigmento paldico.
9. GRANULOCITOS INMADUROS
Durante algunas enfermedades (infecciones bacterianas
graves) los granulocitos polimorfonucleares inmaduros
emigran de la mdula sea al torrente sanguneo. Se
pueden distinguir por los caracteres siguientes:
Tamao: 1 2 - IS^im
Ncleo: un solo ncleo sin lbulos, con cromatina
de color que vara entre el rojo oscuro y
el morado
Citoplasma: de color azul plido o rosceo
Granulos: abundantes, voluminosos, de color malva
o rojo oscuro. A veces se puede observar
una granulacin txica con granulos muy
voluminosos que se tien de color oscuro.
Tambin es posible que se detecten leucocitos
inmaduros de este tipo, sin granulos, pero con nuclolos
(vase el nmero 12, ms adelante).
12. MIELOBLASTOS
Constituyen el tipo ms joven (e inmaduro) de todos los
leucocitos. Se observan en extensiones sanguneas de
pacientes con leucemia.
Tamao: voluminoso, de 15 - 25 /im
Ncleo: grande, redondo, de color malva plido,
provisto invariablemente de 1 - 5 nuclolos
Citoplasma: de color azul oscuro, con un rea clara
que no se tie, situada alrededor del ncleo.
13. MEGACAflOCITOS
Son los precursores de las plaquetas en la mdula sea.
Tamao: muy voluminosos, de 60 - lOO/im
Ncleo: sumamente irregular, denso y con
abundantes lbulos
Citoplasma: lleno de granulos pequeos, principalmente
azurfilos, y de plaquetas. La pared celular
no est claramente definida.
(Muy raras veces se encuentran en la sangre.)
404
MTODOS DE RECUENTO
Lpiz y papel
Para registrar los diversos tipos de leucocitos a medida
que se cuentan, proceda de la manera siguiente:
Trace un cuadro con:
(a) 5 columnas verticales (N, E, B, L y M) y
(b) 10 lneas horizontales (vase la figura).
Una vez que se hayan hecho 10 marcas en la primera
lnea, pase a la siguiente. De este modo, cuando se haya
llenado la dcima lnea se habrn contado 100 leucocitos.
A continuacin sume las marcas de las columnas
verticales.
En lugar de la fraccin de nmero de cada tipo de leucocitos se puede notificar su concentracin de numero
(nmero de clulas por litro). Esta se calcula multiplicando la fraccin de nmero de un tipo de leucocitos por
la concentracin de nmero del total de leucocitos. Ejemplo:**
Concentracin de nmero de leucocitos = 5 x 1 0 /I
Fraccin de nmero de neutrfilos =0,42
Concentracin de nmero de neutrfilos = 0,42 x 5 x 109 2,1 x 10 /I
Resultados anormales
(a) NEUTROFILIA: aumento de la proporcin de neutrfilos (ms de 0,65). Ocurre especialmente en las
infecciones agudas.
(b) EOSINOFILIA: aumento de la proporcin de eosinfilos (arriba de 0,05). Casi siempre sugiere que existe
en los tejidos una infestacin por parsitos: esquistosomas, filarias, ancilostomas, ascaris, etc. Tambin puede
obedecer a una alergia.
(c) LINFOCITOSIS: aumento de la proporcin de linfocitos (por encima de 0,35). Se suele observar en algunas
infecciones vricas (sarampin, etc.), ciertas infecciones crnicas (paludismo, tuberculosis, etc.) y vanos
estados txicos.
(d) MONOCITOSIS: aumento de la proporcin de monocitos (arriba de 0,06). Se observa en algunas infecciones
bacterianas y parasitarias como la fiebre tifoidea, el paludismo y la leishmaniasis visceral.
(e) NEUTROPENIA: disminucin del nmero de neutrfilos. Puede ocurrir en ciertas infecciones y algunas
otras enfermedades..
Estos valores se indican en unidades SI; es decir, como fracciones de nmero. Para obtener los valores correspondientes en
unidades tradicionales (expresados como porcentajes) multipliqese cada cifra por 100.
" E n unidades tradicionales este clculo se hace multiplicando el porcentaje de neutrfilos por el total de los leucocitos que se
han contado y dividiendo a continuacin entre 100. Ejemplo:
Total de leucocitos contados = 5000/mm
Porcentaje de neutrfilos = 42%
"Recuento absoluto de neutrfilos" = (42 x 5000)/100 = 2 100/mm
406
28. Eritrocitos anormales: examen microscpico
EXAMEN MICROSCPICO
Error
En esta porcin la extensin es demasiado gruesa;
los eritrocitos se aglomeran.
Error
En esta porcin los eritrocitos son demasiado
escasos.
407
ERITROCITOS NORMALES
Tamao: 7 - 8/im
Forma: redonda o ligeramente irregular
irregular
Tincin: la periferia se tie de color de rosa intenso;
el centro lo hace de color rosa plido, o
bien es casi incoloro.
ERITROCITOS ANILLADOS
Tamao: 6-8 /xm
Forma: redonda o ligeramente irregular
Tincin: el centro y la orilla se tien intensamente,
pero entre ambos se observa un anillo
incoloro.
Este tipo de eritrocitos se suele encontrar en la talasemia,
la anemia drepanoctica y otras anemias causadas por la
existencia de hemoglobinas anmalas, as como en la
anemia ferropnica.
ERITROCITOS FALCIFORMES
Forma: alargada y estrecha, frecuentemente con
uno o ambos extremos curvos.
Se suelen hallar en la anemia falciforme o drepanoctica
y latalasemia falciforme junto con eritrocitos nucleados,
eritrocitos normales y muchas veces tambin macrocitos.
El examen de los eritrocitos falciformes en prepara-
ciones hmedas se describe en la pgina 4 1 1 .
408
ANISOCITOSIS
Este trmino se emplea para sealar una afeccin en que
hay eritrocitos de tamaos diferentes en la misma sangre;
por ejemplo, eritrocitos de 9 /im mezclados con
pequeos glbulos rojos de 6 fim.
Se observan en anemias de numerosos tipos.
POIQUILOCITOS
Los poiquilocitos son eritrocitos de formas diferentes
que se encuentran en la misma sangre; por ejemplo,
puede haber una mezcla de clulas redondas, ovales,
triangulares, piriformes y dentadas.
Se encuentran en numerosos tipos de anemias.
MICfOCITOS (m)
Los microcitos son eritrocitos pequeos, que miden
aproximadamente 5 jm.
Se suelen observar en la anemia ferropnica.
MACROC/TOS (M)
Son eritrocitos grandes que miden 9-10 /jm.
Se observan en las anemias macrocticas causadas por
deficiencias de cido flico o vitamina B-12 y en ciertos
padecimientos hepticos.
Los eritrocitos voluminosos que se tien de color malva
azulado (policromasia) se denominan reticulocitos
(vase la pgina 414).
ESFEROCITOS (E)
Tamao: pequeo (6 ^m)
Forma: completamente redonda
Tincin: uniforme; todo el eritrocito se tie
intensamente.
Se suelen encontrar en las anemias hemolticas.
409
ELIPTOCITOS
Tamao: normal (8 /im)
Forma: oval
Tincin: ms oscura en la periferia (especialmente
en los polos)
Se observan muy raras veces. Se hallan en la eliptocitosis
hereditaria.
410
29. Estudio de los eritrocitos falciformes
Principio
En un portaobjetos se mezcla una gota de sangre con
una gota de un reactivo elaborado a base de metabisul-
fito sdico. Si los eritrocitos contienen una hemoglobina
anormal denominada hemoglobina S, adoptan formas de
hoz o media luna.
El reactivo mencionado desplaza el oxgeno de los
eritrocitos, con lo que sobreviene el cambio de forma
de stos.
La hemoglobina S es un compuesto anormal de tipo
hereditario. Si se hereda de ambos progenitores produce
anemia falciforme (drepanoctica), una enfermedad
grave. Cuando solo se hereda de un progenitor determina
una propensin gentica a la formacin de clulas
falciformes, aunque generalmente no causa la enfermedad.
En el frotis para la prueba de los eritrocitos falciformes
no se distingue entre la anemia falciforme propiamente
dicha y la propensin gentica a ella.
La hemoglobina S se suele encontrar en las regiones
tropicales de Africa, aunque tambin se observa en
el Oriente Medio y entre los negros de las Amricas.
7]
rP-H
MATERIALES
RESULTADOS
Resultado negativo: los eritrocitos conservan su forma
redonda.
Z
sustituir con una gota de una suspensin densa de
bacilos coliformes (Escherchia colil obtenida de una
muestra de heces fecales que se haya mezclado con
una solucin de cloruro sdico.
Importante:
Si el resultado del frotis es positivo se deber examinar
una extensin de sangre. En los pacientes que sufren de
anemia falciforme se suelen encontrar al mismo tiempo
clulas con forma irreversible de hoz, eritrocitos nuclea-
dos, eritrocitos anillados, abundantes poiquilocitos y,
con frecuencia, tambin numerosos macrocitos. Por lo
general, los pacientes que tienen el rasgo gentico
falciforme no son anmicos y la morfologa de sus
glbulos rojos es normal. Siempre que sea posible se
deber efectuar un estudio de la hemoglobina por
electroforesis para confirmar el diagnstico de anemia
falciforme. Tal estudio se har en un laboratorio de
referencia.
30. Reticulocitos
Los reticulocitos son glbulos rojos inmaduros que emigran de la medula sea al torrente sanguneo. La cantidad
de reticulocitos que se encuentre en la sangre indicar el grado de actividad de la mdula sea, y cuando sta es
muy activa (como ocurre en las anemias) su nmero aumenta.
Principio
Los reticulocitos contienen granulos pequeos que se pueden teir con azul de cresil brillante. Este colorante se
aplica a una extensin de sangre y a continuacin se observa con el microscopio cierto nmero de eritrocitos. Con
este examen se calculan: a) el nmero de reticulocitos por litro de sangre, o b) la proporcin de glbulos rojos
que integran los reticulocitos.
MATERIALES
Portaobjetos (desgrasados)
Un portaobjetos recortado, para la extensin
Tubos de ensayo pequeos
Un embudo
Filtro de papel
Dos pipetas Pasteur con chupetes
Si es posible, un contador manual
Solucin saturada de azul de cresil brillante
(reactivo No. 15).
MTODO
2.
414
Con una pipeta de Pasteur aspire algunas gotas de
sangre de un dedo, o utilice sangre venosa que se
haya recogido en un recipiente con sal bipotsica
de EDTA, mezclndola completamente.
si w
3. En el tubo que contiene las 2 gotas de la solucin de
azul de cresil deposite:
2 gotas de sangre.
1
1
/
1 ^ "7 \
^ , \
A
M
1 / \
1 x^\:
/ \ \ / %
4. Haga la mezcla sacudiendo suavemente el tubo. 1 1 \ i i >\-A
1 /
Tape ste con algodn no absorbente.
\ ' \W^w
"J
Djelo reposar 15 minutos. 'w ^
7. Squela al aire.
415
Examine el frotis con el objetivo de inmersin en
aceite. Observe la porcin cercana al extremo donde
termina la extensin, en que los eritrocitos suelen
estar muy bien separados.
Los eritrocitos se tien de color azul plido.
os reticuiocitos son glbulos rojos en cuyo interior
se observan pequeos granulos que se tien de color
violeta oscuro, y forman una red (retculo). Los
retculos pueden contener: 1) granulos, o
2) filamentos.
9 Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo x 100 de inmersin en aceite. Cuente cuidadosamente:
a) la cantidad total de glbulos rojos examinados, y b) el nmero total de reticuiocitos que haya entre ellos.
(Estos recuentos se efectan ms fcilmente si se reduce el tamao del campo microscpico. Tal cosa se logra
colocando en el ocular una pieza de papel negro y rgido en la que se haya abierto un orificio de unos 5 mm
de dimetro.)
Nota: Si se examinan ms de 500 eritrocitos en la extensin de sangre, el clculo se deber ajustar proporcionalmente.
Mrgenes normales
concentracin de nmero fraccin de nmero
de reticuiocitos " de reticuiocitos
'Estos clculos (y el cuadro de mrgenes normales) se expresan aqu en unidades SI. En el sistema tradicional la cant.dad de
reticuiocitos se indicaba mediante un porcentaje (el porcentaje de reticuiocitos integrantes del total de eritrocitos circulantes).
As si se han observado 500 eritrocitos en la extensin sangunea y n de ellos son reticuiocitos, el porcentaie correspondiente
se calcular multiplicando n x 0,2. Ejemplo: de 500 eritrocitos estudiados, 25 son reticuiocitos; en consecuencia, el porcentaie
de reticuiocitos ser 25 x 0,2 = 5%. En los recin nacidos los mrgenes normales son de 2,0-6,0%; en los nios y los adultos son
de 0,2- 2,0%.
**Estas son cifras aproximadas^La concentracin depende de la concentracin de nmero de eritrocitos; vase el cuadro de la
pgina 369.
416
OTRAS ESTRUCTURAS QUE SE OBSERVAN EN EL FROTIS DE SANGRE
Es posible que tambin se observen las estructuras siguientes en la extensin de sangre teida con azul de cresil
brillante que se utiliza en la determinacin de los reticulocitos:
Cuerpos de hemoglobina H. Cuando los hay son pequeas manchas de color azul plido, de tamao variable
0 d IOS r e t c u l c i t 0 S
non^TL T ': ' . o b s e r v a n en la mayor parte de los glbulos rojos de la extensin
sangunea. Se suelen encontrar en la talasemia y la hemoglobinopata H.
f?f?, f * He'?Z S ' ? ^ f" la exte 1 ns l in distinguen como unos granulos azules de tamao variable que se
agrupan en un lado de la clula, cerca de la membrana. Se suelen encontrar en la deficiencia de dehidrogenasa de
la glucosa6fosfato consecutiva al empleo de ciertos medicamentos
417
31. Velocidad de sedimentacin de los eritrocitos (VSE)
Principio
La sangre recogida en un recipiente que contiene un
anticoagulante se deposita en un tubo largo y graduado,
que se mantiene en posicin vertical.
Los eritrocitos se sedimentan en el fondo del tubo y
sobre este sedimento se forma una columna de plasma.
La altura de la columna de plasma, medida despus de
una hora, indica la velocidad de sedimentacin de los
eritrocitos (glbulos rojos).
MATERIALES
MTODO
420
32. Tiempo de sangrado: mtodo de Duke
Principio
Con una lanceta se hace una pequea incisin en el
lbulo de la oreja. La sangre fluye por esta incisin y
se mide el tiempo que transcurre hasta que se detiene
el sangrado.
Este ensayo se lleva a cabo:
para diagnosticar ciertos padecimientos hemorrgicos
antes de realizar operaciones quirrgicas
antes de efectuar una puncin en el hgado o el bazo.
MATERIALES
Una lanceta estril
ter
Un portaobjetos
Filtro de papel (o papel secante)
Si es posible, un cronmetro o, en su lugar un reloj
con segundero.
MTODO
3. Despus de 30 segundos:
Recoja la primera gota de sangre en una esquina del
papel secante.
No toque la piel con el papel.
421
4. Espere otros 30 segundos y:
Recoja la segunda gota de sangre con el papel
secante, un poco ms adelante de la primera.
RESULTADOS
Mrgenes normales
1 - 5 minutos.
Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una exten-
sin de sangre teida segn el mtodo de Romanowski
(vase la pgina 391) para observar si las plaquetas son
escasas (se debe usar sangre venosa).
422
33. Tiempo de coagulacin de la sangre entera:
mtodo de Lee y White
Principio
Se recoge sangre venosa en un tubo de ensayo.
Se toma nota del tiempo que tarda la sangre para
coagularse.
La utilidad de este ensayo es limitada, ya que solo
sirve para detectar deficiencias graves del factor de
coagulacin.
MATERIALES
MTODO
RESULTADOS
424
34. Tiempo deretracciny Iisis del cogulo
Principio
El tiempo de coagulacin de la sangre intacta se mide
como se ha indicado en la pgina 423.
Los tubos de ensayo que contienen la sangre se
guardan para:
observar la retraccin del cogulo
medir el tiempo en que el cogulo se disuelve (Iisis).
Estas observaciones se hacen:
para establecer el diagnstico de ciertos
padecimientos hemorrgicos
antes y despus de las operaciones quirrgicas.
MTODO
o
1. C oloque en el baomarfa los tubos que contienen la
sangre (o djelos a la temperatura ambiente).
Examine el cogulo:
a la hora -iD-fT-T^)
-~>
a las 2 horas
a las 3 horas
^ i b>
a las 4 horas. >_
RESULTADOS
(a) Retraccin normal
El cogulo rojo se separa completamente y en su
parte ms alta se adhiere a la superficie interior del
tubo de ensayo.
En el fondo del tubo se suele formar un pequeo
sedimento de glbulos rojos; su espesor no debe ser
mayor de 5 mm.
425
iSmresTasajgSSi
I
^^35^S!K;^(
427
D. QUMICA SANGUNEA
35. Clculo de la glucosa en la sangre y en el LCR:
mtodo de la ortotoluidina
Principio
Primeramente se provoca la precipitacin de las protenas de la sangre por medio de cido tricloroactico. En el
producto resultante, filtrado, la glucosa reacciona con la ortotoluidina y se forma un color verde, cuya intensidad
se mide en un colormetro fotoelctrico.
La determinacin de la glucosa (azcar) sangu nea es necesaria para establecer el diagnstico de la diabetes
mellitus y otras enfermedades en que existen alteraciones en el metabolismo de los carbohidratos. En la diabetes
mellitus hay una deficiencia de insulina,.hormona que regula el proceso metablico del azcar en el organismo.
En el curso de esta enfermedad se suele encontrar glucosa en la orina {vase la pgina 311). La determinacin
de azcar en el LC R es necesaria para diagnosticar casos de meningitis (vase la pgina 344).
MATERIALES
Reactivos para glucosa (reactivo No. 29)
(a) cido tricloroactico en solucin de 30 g/l (3%)
(b) reactivo de ortotoluidina
(c) cido benzoico en concentracin de 1 g/l (0,1%)
(d) solucin normal de referencia para glucosa
(e) referencia para trabajar con glucosa
Un colormetro
Sangre entera (capilar o venosa), plasma o suero obtenidos del paciente en ayunas*
Tubos cnicos para centrifugacin y tubos de ensayo de mayor tamao (con capacidad para 20 mi)
Pipetas graduadas de 0,1 mi (100 //m), 1,0 m i , 5,0 mi
Un baomara en ebullicin
Suero testigo. Se deber usar un suero testigo con cada lote de muestras para ensayo. Si los resultados
obtenidos con el suero testigo son correctos, se podr suponer que tambin lo sern los que se obtengan
con la sangre del paciente.
*S se emplea sangre venosa es conveniente utilizar oxalato de flor (reactivo No. 23) como anticoagulante. De este modo se
evitar que la glucosa se descomponga en la sangre.
J A
i
2 I
MTODO
T P
7. Prepare 3 tubos de ensayo grandes (o ms, si se
necesitan) y margelos de la manera siguiente:
Tubo testigo: T
Tubo de referencia: R
Tubo del paciente: P
8. Con las pipetas deposite en cada tubo lo siguiente: Nota: el reactivo de ortotoluidina es corrosivo; si es posible,
utilice una perilla de goma para aspirar el lquido al interior
En el tubo testigo: de la pipeta.
1,0 mi de agua destilada y
5,0 mi del reactivo de ortotoluidina
En el tubo de referencia:
1,0 mi de solucin de referencia para trabajar
con glucosa y
5,0 mi del reactivo de ortotoluidina
En el tubo del paciente:
1,0 mi del lquido sobrenadante y
5,0 mi del reactivo de ortotoluidina
Nota: si se ha incluido un suero testigo haga el clculo que le corresponde, exactamente de la misma manera, pero sustituya Ac
(absorbencia de la solucin testigo) por Ap en la frmula.
Mrgenes normales
Los mrgenes normales de concentracin de glucosa en la sangre de pacientes en ayunas son aproximadamente
los siguientes:
sangre venosa, suero o plasma: 3 5 mmol/l
sangre capilar: 3,3 5,5 mmol/l
En el lquido cefalorraqudeo estos mrgenes son, aproximadamente, 2,54,2 mmol/l.
Estos clculos se expresan en unidades SI. En unidades tradicionales las concentraciones de glucosa en la sangre se calculan por
medio de la frmula W p / 4 R ) x 200 = concentracin en mg/100 mi; las concentraciones de glucosa en el LCR se calculan por la
frmula \.Ap/A) x 50 = concentracin en mg/100 mi. Los mrgenes normales aproximados son: en la sangre venosa
55 90 mg/100 mi; en la sangre capilar, 6 0 1 0 0 mg/100 mi; en el lquido cefalorraqudeo, 4 5 7 5 mg/100 mi
431
36. Clculo de la urea: mtodo de la dlacetil
monoxima/tiosemicarbacida
Principio
Primeramente se precipitan las protenas de la sangre por medio de cido tricloroactico. La urea que se
encuentra en el producto filtrado reacciona con la diacetilmonoxima en presencia del cido, del reactivo
oxidante y de la tiosemicarbacida, formndose un color rojo en la solucin. La intensidad del color se mide en
un colormetro fotoelctrico.
La urea es un producto de desecho, que se forma en el hgado por la degradacin de las protenas. Pasa a la
sangre, se filtra en los rones y se excreta en la orina.
Si los rones no eliminan la urea, aumenta su concentracin en la sangre. Esto puede ocurrir cuando se lesionan
los t bu I os renales o disminuye la irrigacin sangunea de los rones.
MATERIALES
MTODO
1. Prepare el reactivo colorante inmediatamente antes de usarlo, depositando una solucin de trabajo de
diacetiimonoxima/tiosemicarbacida al 1 x 6 en el reactivo cido.
Ejemplo: Se necesitarn 5 mi del reactivo colorante, respectivamente, para el tubo testigo, el de referencia
y el que corresponda al paciente.
Diacetilmonoxima/
Reactivo cido tiosemicarbacida
para trabajo
M
T p
4. Tome 3 tubos de ensayo grandes (o ms, si se
necesitan) y mrquelos como se indica a continuacin:
Tubo testigo: T
Tubo de referencia: R
Tubo del paciente: P.
CALCULO
Mrgenes normales
Los mrgenes normales de la concentracin de urea en la sangre son, aproximadamente, de 3 - 7 mmol/l.
Concentraciones elevadas
Si se obtienen cifras superiores a 25 mmol/l, repita todo el ensayo empleando 0,1 mi de sangre total tratada con
sal bipotsica de EDTA, o bien suero o plasma, y 0,9 mi de agua destilada en el paso 2 del procedimiento.
Efecte el ensayo y calcule el resultado exactamente de la misma manera que se ha descrito anteriormente, pero
esta vez divida el resultado entre 2 para obtener la concentracin real de urea.
"Este clculo se expresa en unidades SI. En unidades tradicionales las concentraciones de urea en la sangre se calculan por la
frmula {AP/AR) X 100 = concentracin de urea en miligramos por 100 mililitros (mg/100 mi). En las unidades tradicionales los
mrgenes normales son aproximadamente de 2 0 - 4 0 mg/100 mi. Los ensayos se deben repetir si se obtienen cifras superiores a
150 mg/100 mi.
434
E. TRANSFUSIN DE SANGRE
El propsito de las transfusiones sanguneas consiste en lograr que el paciente reciba sangre sin sufrir riesgos.
Esto implica:
que se determine el grupo o tipo de sangre que posee
que se estudie cuidadosamente la compatibilidad de su sangre con la sangre de un donador escogido
(compatibilidad sangunea).
Grupo sanguneo
del individuo
anti-A
Y
Anticuerpos que se hallan anti-B anti-A anti-B
en el plasma
El antgeno A se halla en dos formas: un antgeno que reacciona intensamente, denominado A, y otro que
reacciona dbilmente y se denomina A j . Por esta razn, los grupos A y AB se dividen en los subgrupos A , ,
A, B, A2 y A j B .
Rh positivo Rh negativo
Los individuos que pertenecen al grupo Rh negativo no poseen normalmente el anticuerpo anti D en el plasma.
Se pueden producir anticuerpos Rhesus en las personas que no los tenan al recibir antgenos Rhesus. Esto puede
ocurrir a consecuencia de una transfusin sangunea o un embarazo.
*EI sistema Rhesus es complejo y no solo comprende el antgeno D, sino tambin otros antgenos Rhesus; por ejemplo, C, E, c y e.
435
REACCIONES CONSECUTIVAS A TRANSFUSIONES
SANGUNEAS: SISTEMA ABO
PREVENCIN DE ACCIDENTES
1. Determine con cuidado extremo los grupos sanguneos de cada donador y cada receptor:
probando los glbulos rojos (para reconocer sus antgenos) con sueros clasificadores conocidos, anti A,
anti B y anti AB (vase la pgina 437)
probando el plasma o el suero (para identificar sus anticuerpos) con eritrocitos de ensayo conocidos,
pertenecientes a los grupos A, B y O (vase la pgina 443)
probando los glbulos rojos, con respecto a la ndole del factor Rh, con un suero anti D conocido
(vase la pgina 448) y, cuando sea necesario, tambin con otros antisueros especficamente contrarios
al sistema Rhesus (en laboratorios especializados).
2. Seleccione la sangre del grupo adecuado, que se pueda administrar al paciente. Siempre que sea posible el
paciente deber recibir sangre de su propio grupo.
En los hospitales pequeos y especialmente en casos de urgencia puede ser que el paciente deba recibir sangre
de un grupo distinto al suyo. Apliqense las reglas siguientes:
Paciente del grupo A Deber recibir sangre del grupo A y, si no se dispone de ella, se usar sangre
del grupo O
Paciente del grupo B Deber recibir sangre del grupo B; si no se dispone de ella, se utilizar sangre
del grupo O
Paciente del grupo AB Deber recibir sangre del grupo AB; si no se dispone de ella se podr usar sangre
del grupo A, del grupo B o del grupo O (en este orden)
Paciente del grupo O Solamente podr recibir sangre del grupo 0 .
3. Estudie cuidadosamente la compatibilidad del suero del paciente con los glbulos rojos del donador (prueba
de compatibilidad) para estar seguro que la transfusin no significa riesgos.
4. Haga estos estudios junto con un experto hasta que tenga los conocimientos tericos y prcticos suficientes
para trabajar con seguridad y responsabilidad.
436
38. Clasificacin de los gaipos A, B y O
por medio de antisueros
Principio
Los eritrocitos se ensayan con 3 antisueros:
suero anti A
suero anti B
suero anti AB.
El estudio se puede efectuar:
en un portaobjetos, o bien
en un tubo de ensayo (especialmente en los casos
dudosos).
Aada nuevamente:
2 mi de solucin fresca de cloruro sdico.
Agite el tubo con suavidad.
De este modo se obtendr una suspensin de
glbulos rojos al 10%.
Resultados
Portaobjetos 1 Portaobjetos 2 Portaobjetos 3 Grupo sanguneo
anti A anti B anti AB del paciente
+ - + Grupo A Importante:
- + + Grupo B No es posible determinar un grupo sanguneo
solo por este mtodo (con antisueros).
+ + + Grupo AB Se debe efectuar un segundo ensayo del plasma
- - - Grupo 0
o el suero del paciente empleando glbulos rojos
conocidos (vase la pgina 443).
439
B. MTODO DEL TUBO DE ENSAYO
La clasificacin de grupos sanguneos por el mtodo del tubo de ensayo tarda ms tiempo y requiere una
cantidad mayor de equipo, pero los resultados son ms confiables. Por esta razn, en muchos centros de trans
fusin sangunea solo se usa la tcnica del tubo de ensayo. Cuando se emplea el mtodo del portaobjetos todos
los casos dudosos y los resultados difciles de reconocer se deben estudiar nuevamente, por el mtodo del tubo
de ensayo.
Materiales
Los mismos que se usan en el mtodo del portaobjetos,
ms:
tubos de ensayo pequeos, con una gradilla
un espejo cncavo para microscopio
1 gota de
suero anti A
1 gota de
suero anti B
1 gota de
suero anti AB
w J
r - ft
i
w
i%
i t
Agregue a cada t u b o :
1 gota de la suspensin de eritrocitos al 2% que se
va a ensayar. w 0 <<
440
3. Incubacin sin centrifugacin
Deje reposar los tubos durante 1 hora a la
temperatura ambiente.
5. Examen de la reaccin
Sacudiendo ligeramente el fondo del tubo de ensayo
examine el sedimento de glbulos rojos. Se puede
usar el espejo cncavo de microscopio.
TESTIGOS
441
REACCIONES DUDOSAS - ERRORES
442
39. Clasificacin de los grupos A, B y O
por medio de eritrocitos estandarizados
Principio
El suero o plasma cuyo grupo se pretende identificar
se ensaya con tres suspensiones de eritrocitos conocidos:
eritrocitos del grupo A i
eritrocitos del grupo B
eritrocitos del grupo O.
Sangre degrupo A i
Ensaye varias muestras de sangre del grupo A cor: el
suero anti A , , como se indica en la pgina 437 (mtodo
del portaobjetos) o en la pgina 440 (mtodo del tubo
de ensayo).
Con el mtodo del portaobjetos la aglutinacin ocurre
en menos de 30 segundos si la sangre ensayada pertenece
al grupo A , .
443
Lavado de los eritrocitos de referencia
Lave los 3 tipos de eritrocitos de referencia en 3 tubos
de ensayo. En cada tubo mezcle:
1 mi de sangre entera (con anticoagulante) y
4 mi de solucin de cloruro sdico,
o bien,
0,5 mi de eritrocitos sedimentados y
4,5 mi de solucin de cloruro sdico.
F\ Fr ~\
Preservativo para los eritrocitos lavados
u
Despus de lavarlo, haga una suspensin del sedimento
de eritrocitos en una solucin conservadora que puede 0
ser:
1$
i *
solucin ACD, o ^ACDi
solucin de cloruro sdico,
siempre en las mismas proporciones:
4,5 mi de la solucin y
0,5 mi de glbulos rojos lavados (sedimento).
Realizacin de la prueba
Prepare 3 portaobjetos marcados con las identificaciones
A , , B y O.
Coloque:
Resultados
Eritrocitos Eritrocitos Eritrocitos Grupo del
A, B 0 paciente
- + - Grupo A
+ - - Grupo B
- - - Grupo AB
Compare estos resultados con los que se obtienen en el
+ + - Grupo 0 ensayo con antisueros. Debern ser iguales con ambas
tcnicas. Si no es as repita los ensayos.
Reacciones dudosas
Examine la preparacin con el microscopio.
La formacin de "columnas de monedas" se puede
identificar como se indica en la pgina 442.
445
B. MTODO DEL TUBO DE ENSAYO
Realizacin de la prueba
YII
Marque 3 tubos de ensayo con las identificaciones
A , , B y O.
' \
4, B O
Coloque: en el tubo A i en el tubo B en el tubo O
2 gotas 2 gotas 2 gotas
Examen de la reaccin
Sacudiendo el tubo con suavidad, observe si ha
ocurrido la aglutinacin:
Aglutinacin positiva:
los eritrocitos forman pequeos conglomerados.
Aglutinacin negativa:
los eritrocitos se suspenden nuevamente con faci-
lidad, sin que se formen conglomerados visibles.
446
Combinacin de resaltados
Grupo A + - + +
Grupo B - + + +
Grupo AB + + + - -
Grupo 0 - - - + + -
Por medio de esta prueba se logra confirmar que el suero del paciente no contenga anticuerpos anormales que
aglutinen todos los tipos de glbulos rojos.
Si existe alguna duda, lleve a cabo un nuevo ensayo para detectar estos anticuerpos. Deposite en una pipeta:
2 gotas del suero del paciente
1 gota de los eritrocitos del paciente en suspensin al 2%.
Incube durante 1 hora a la temperatura ambiente y examine para determinar si ha sobrevenido la aglutinacin.
La reaccin positiva denotar la existencia de autoanticuerpos. Los resultados que se obtengan de la clasificacin
de grupos empleando los glbulos rojos del paciente lavados indicarn cul es verdaderament el grupo sanguneo
del caso.
El suero y los glbulos rojos del paciente se debern enviar a un laboratorio de referencia a fin de que se efecte
la investigacin correspondiente si se sospecha que existen autoanticuerpos o el ensayo realizado con antisueros
y eritrocitos de referencia no produce los resultados que figuran en el cuadro anterior.
Grupo AB 4% 13% 4%
447
40. Clasificacin del grupo Rhesus
Principio
Se hace un ensayo de los eritrocitos para detectar el
antgeno D, empleando el suero anti D.
Se dice que los individuos son Rhesus (Rh) positivos
cuando son portadores del antgeno D.
Son Rhesus (Rh) negativos los individuos que carecen
del antgeno D.
Materiales
Portaobjetos
Una pipeta capilar
Un calentador elctrico "de cajn"
Suero anti D*
Muestras testigos para sangre Rh positiva y
Rh negativa (si es posible).
Importante:
Si se usa suero anti D comercial se deber aplicar el mtodo de
ensayo que indique el fabricante. Puede ser diferente del que
se describe en este manual.
449
Resultados
Aglutinacin = Rh positivo
En el centro y la periferia de la mezcla se observa
claramente un gran nmero de pequeas aglutinaciones
de eritrocitos. Estas aglutinaciones se debern formar en
menos de 3 minutos.
Testigos
Se recomienda que para cada serie de ensayos cotidianos
se disponga de:
un testigo positivo de sangre Rh positiva y
un testigo de sangre Rh negativa (si se puede
conseguir).
Para comprobar que la sangre estudiada es Rh positiva
y sospechosa de causar autoaglutinacin, se puede
efectuar un ensayo de los glbulos rojos del paciente en
su propio suero.
2. Aglutinacin dbil
Primero pruebe el suero anti D con sangre Rh positiva
conocida para cerciorarse de que produzca una aglutinacin
intensa.
Tambin pueden ocurrir reacciones dbiles porque:
la sangre pertenezca a un subgrupo Rh (Du), o bien
existan en la sangre anticuerpos poco frecuentes.
Corrobore los resultados dudosos por el mtodo del tubo de
ensayo (vase la descripcin que se hace ms adelante, en B).
En los laboratorios especializados se efectan, adems, otros
ensayos (prueba de Coombs, tcnicas enzimticas, etc.)
450
B. MTODO DEL TUBO DE ENSAYO
1. Prepare una suspensin de eritrocitos al 2% en su
propio suero o plasma.
11l
V
2. En un tubo de ensayo pequeo coloque: I=I
Reaccin fh positiva
Se observan pequeas aglutinaciones de eritrocitos en
un lquido claro.
Reaccin Rh negativa
Los eritrocitos permanecen suspendidos y no se
observan aglutinaciones.
Examen microscpico
En caso de duda, caliente un portaobjetos, aspire una
gota del sedimento de eritrocitos con una pipeta Pasteur
y prepare un frotis. Examnelo con el microscopio
(empleando el objetivo x 10).
451
c. ERRORES QUE SE PUEDEN COMETER EN LA
DETERMINACIN DE LOS GRUPOS Rh
D. U T I L I D A D DE LA IDENTIFICACIN DE LOS
GRUPOS RHESUS
1. En transfusiones repetidas
Ejemplo: el paciente es O, Rh negativo
primera transfusin: se le administra sangre O, Rh positiva y se forman anticuerpos anti D;
segunda transfusin: nuevamente se le administra sangre O, Rh positiva y los anticuerpos anti D
que se han formado pueden aglutinar los eritrocitos Rh positivos (D) del donador.
452
41. Estudio de la compatibilidad sangunea
Principio
El estudio de la compatibilidad sangunea se lleva a cabo
para evitar que ocurran reacciones consecutivas a las
transfusiones de sangre. El objeto de esta clase de
estudio consiste en determinar si el suero del paciente
contiene algunos anticuerpos que puedan aglutinar los
eritrocitos del donador.
MATERIALES
PROCEDIMIENTO HABITUAL
1
(vase la pgina 436).
1
1. Prepare una suspensin al 2 - 5% de eritrocitos
lavados del donador, como se indica a continuacin:
coloque una etiqueta en un tubo de ensayo de
tamao mediano, en que se indiquen el nombre
d
y el nmero del donador
deposite en este tubo aproximadamente 4 mi
de solucin de cloruro sdico
agregue 3 gotas de eritrocitos del donador
mezcle
lave los eritrocitos 3 veces como se indica en
la pgina 440.
en el tubo 3 y el tubo 4 :
2 gotas de suero del paciente y
- 2 gotas de la suspensin al 2 - 5% de eritrocitos
del paciente lavados.
p
30 min
se
<
c ^jjlgj
20min
Solo hay aglutinacin La sangre es incompatible y no se debe administrar. Es probable que el paciente
en el tubo 2 posea anticuerpos inmunitarios; por ejemplo, anti D si es Rhesus negativo y se ha
empleado sangre Rhesus positiva.
Hay aglutinacin El suero del paciente contiene autoanticuerpos. Se deber obtener el consejo de
en los 4 tubos un centro especializado y, si es posible, el estudio de la compatibilidad sangunea
deber efectuarlo ese mismo centro.
"Columna de monedas' La formacin de abundantes "columnas de monedas" puede ser difcil de distinguir
de la aglutinacin verdadera. Es frecuente que las "columnas de monedas" sean
menos numerosas en los tubos que contienen albmina. Al agregar solucin de
cloruro sdico a la suspensin de eritrocitos que se encuentra en el portaobjetos
las "columnas de monedas" se suelen dispersar suficientemente para que se
reconozca la diferencia (vase la pgina 442).
En casos de urgencia es probable que no se puedan incubar los tubos durante el tiempo necesario. Si se cuenta con
menos de 45 minutos, examine el tubo 1:
centrifugelo durante 1 minuto a baja velocidad
a continuacin, examine con el microscopio el sedimento de eritrocitos.
Si no existe aglutinacin se puede aceptar la sangre para el paciente, escribiendo con claridad en la etiqueta:
"Sangre compatible segn estudio urgente". De cualquier manera invariablemente efecte el estudio de la
compatibilidad sangunea por el mtodo del tubo de ensayo.
42. Deteccin de donadores pertenecientes al grupo O
que pueden constituir riesgos
Importante
En los casos de urgencia algunas veces se debe administrar sangre del grupo O a pacientes que pertenecen a los
grupos A, B, o AB. En ciertos individuos del grupo O el plasma contiene cantidades crecidas de anticuerpos
anti A y, ms frecuentemente, anticuerpos anti B que pueden reaccionar con los eritrocitos A, B, o AB del
paciente receptor. Por lo tanto, es necesario que se detecten estos individuos del grupo 0 , para evitar que se
empleen como "donadores universales".
La sangre que contiene cantidades mayores de anticuerpos anti A o anti B solo se debe utilizar en pacientes
del grupo O.
Principio
El suero fresco del donador se incuba con una cantidad sumamente pequea de eritrocitos A , y B. Si la
titulacin de anticuerpos anti A y anti B es elevada sobrevendr una hemolisis y el suero tomar un color rojizo.
MTODO
Prepare:
una suspensin de eritrocitos A ! al 5% en solucin
de cloruro sdico
una suspensin de eritrocitos B al 5% en solucin
de cloruro sdico
(Ponga en prctica las instrucciones que se han dado
para preparar eritrocitos de referencia, en la pgina 443).
Lave los eritrocitos dos veces.
1
M
g
2. Deposite en dos tubos:
En el tubo A , En el tubo B
4
*i 9
suero fresco del donador 9 gotas 9 gotas ^-^ & B
v
suspensin de eritrocitos A i al 5% 1 gota - ' LU
\^j/ vS
suspensin de eritrocitos B al 5% 1 gota
456
3. Deje los tubos:
en una incubadora o un baomara durante
2 horas a 37 C.
RESULTADOS
1. Si el color es amarillo :
Habr un sedimento de eritrocitos.
El individuo se podr utilizar como "donador
universal".
Si el color es rosceo:
Habr hemolisis de todos, o la mayor parte de los
glbulos rojos y solo quedar un reducido sedimento.
La sangre de este donador perteneciente al grupo O
nicamente se podr administrar a pacientes del
grupo O.
En este caso escriba en la etiqueta del frasco que
contiene la sangre:
DONADOR DEL GRUPO O QUE CONSTITUYE
RIESGO.
SESE UNICAMENTE EN PACIENTES DEL
GRUPO O.
457
43. Obtencin y conservacin de la sangre
DONADORES DE SANGRE
Requisitos:
adultos sanos, no menores de 18 aos ni mayores
de 50 aos de edad
la concentracin de hemoglobina deber ser superior
a 125 g/l, o la de hemoglobina (Fe) deber ser
mayor de 7,8 mmol/l.
Las mujeres embarazadas no deben donar sangre.
Una persona puede donar sangre cada 4 6 meses.
Determnese el grupo sanguneo del donador por el
mtodo del portaobjetos (vanse las pginas 437 y
443).
OBTENCIN DE LA SANGRE
Materiales
Algodn y etanol Un frasco piloto que contenga 1 mi de solucin
Un esfigmomanmetro de AC D (reactivo No. 1; vase la pgina 444),
Un frasco para recolectar sangre ( o un envase anexo al frasco recolector
especial de material plstico) Un tubo de ensayo para suero, si la sangre
Una aguja extractora de aire, para el frasco pertenece al grupo .
recolector
Un juego para recolectar sangre, que contenga
120 mi de solucin d AC D
Un objeto que el donador pueda apretar con la
mano
Una pinza
Unas tijeras
C inta adhesiva
Mtodo
1. Diga al donador que se acueste en una cama y
que apoye la cabeza en un cojn.
458
3. Coloque el esfigmomanmetro en la parte superior
del brazo del donador.
Suba la presin a 8 0 - lOOmmHg (11 -13,5kPa) y
palpe la vena. (Para efectuar la puncin venosa
vase la pgina 353).
460
11. Saque la aguja del frasco piloto. Coloque la tapa
del frasco en su lugar.
Mezcle la sangre con el anticoagulante que contiene
el frasco piloto, invirtiendo ste varias veces.
461
EXAMEN DE LA SANGRE DE LOS DONADORES
Algunas enfermedades se transmiten por medio de la sangre; para prevenirlas se pueden necesitar algunos
exmenes:
En la sangre puede haber parsitos del paludismo, especialmente en las reas endmicas.'Por lo general, en
estas reas es preferible administrar un tratamiento a base de cloroquina a los receptores en vez de desechar
la sangre en que se descubran estos parsitos. Los parsitos del paludismo no se destruyen en la sangre que
se ha guardado a 4 o C- 6 o C.
Treponema pallidum, causante de la sfilis, puede ser viable en la sangre hasta 48 horas. Por lo tanto, si la
sangre se guarda ms de 2 das esta enfermedad no se transmite. De cualquier manera, siempre que sea
posible se efectuar el ensayo dl VDRL.
En las reas endmicas se deber examinar la sangre tratando de detectar los microorganismos causantes
de la tripanosomiasis africana o sudamericana con el mtodo de gota gruesa teida con el mtodo de
Romanowski. Para descubrir la presencia de T. cruzi se requieren habitualmente ensayos serolgicos, ya que
en la sangre solo circula un nmero pequeo de estos microorganismos. En el caso de la tripanosomiasis
africana suele ser provechoso que se estudie la velocidad de sedimentacin de los eritrocitos y se haga un
examen con el mtodo de gota gruesa de sangre.
Leishmania donovani, causante de la leishmaniasis visceral, se deber investigar en las reas endmicas
mediante el ensayo de coagulacin del suero sanguneo por medio de formaldehido.* Si el resultado es
positivo no se deber utilizar la sangre afectada.
Las microfilarias patgenas pueden causar reacciones alrgicas, aunque la enfermedad no se transmite.
La hepatitis vrica se puede transmitir por transfusin sangunea. Si se cuenta con los medios apropiados es
aconsejable que se lleve a cabo el ensayo del antgeno de Australia para detectar la presencia de virus.
'Tcnica: Deposite una gota de formaldehido al 40% (comercial) en 1 mi de suero sanguneo. Si el resultado es positivo, el suero se
coagular completamente en pocos segundos (no escurrir al invertir el tubo de ensayo). La mezcla se enturbiar en 20
minutos. Esta reaccin ouede ser lenta en la primera etapa de la enfermedad.
462
44. Clasificacin de grupos sanguneos y estudio de la compatibilidad:
resumen del plan de trabajo
Anti-D
3. Mezcle.
1 gota de anti-D
4. Coloque el portaobjetos con la preparacin
anti-D en el calentador. 1 gota de eritrocitos del paciente
(suspensin en suero)
5. Examine los resultados:
A Pos + - + - + - +
BPos - + + + - - +
ABPos + + + - - - +
OPos - - - + + - +
W
eritrocitos
O
u del
paciente
(suspensin en suero).
3. Mezcle.
4. Incube el tubo de ensayo con la preparacin anti-D a 37 0 C.
5. Deje todos los tubos en reposo durante 2 horas.
6. Examine los resultados, corroborando con el microscopio los que sean negativos.
463
ESTUDIO DE LA COMPATIBILIDAD
Estudio habitual
1. Prepare una suspensin de eritrocitos del donador y el paciente en solucin de cloruro sdico al 2%.
2. Disponga de 4 tubos de ensayo, numrelos y, por medio de pipetas, deposite:
Estudio de la compati- Estudio de anticuerpos
bilidad en albmina del paciente en albmina
2 gotas de suero 2 2 gotas de suero
del paciente; del paciente;
1 gota de eritrocitos 1 gota de eritrocitos
\ l del donador I , del paciente
3. Mezcle.
4. Coloque en la incubadora todos los tubos a 37 0 C durante 1 hora.
5. Agregue 2 gotas de albmina bovina al 20% en los tubos 2 y 4. NO SE MEZCLE.
6. Deje los tubos a 37 0 C durante otros 20 minutos.
7. Examine con el microscopio el sedimento de glbulos rojos de cada tubo.
Si no se produce aglutinacin, la sangre ser compatible. Mande con la etiqueta correspondiente al estudio
habitual de la compatibilidad.
Si hay aglutinacin, vase la pgina 455 para interpretarla.
Anote todos los resultados en el libro de registro de transfusiones sanguneas.
Importante:
Complete el estudio de compatibilidad segn los pasos
5, 6 y 7 que se explican en la pgina 454. Si se observa
cualquier grado de aglutinacin informe al mdico
inmediatamente.
464
Losreactivosy su elaboracin
Orden
La relacin de reactivos se ha dispuesto en orden alfabtico. Por ejemplo:
r
sdico, carbonato se encuentra en .... S
A cada reactivo se ha dado un nmero, que figura inmediatamente despus del nombre
(estos nmeros tambin se encuentran junto a las descripciones de las tcnicas).
Frmulas qumicas
Las frmulas qumicas de los compuestos empleados
se indican, por lo general, inmediatamente despus de
los nombres:
sdico, cloruro (NaCI)
potsico, hidrxido (KOH)
sulfrico, cido (H2 SO4)
etc.
Esto puede ser til para comparar la etiqueta del frasco
correspondiente.
Una solucin acuosa es la que se prepara con un
compuesto disuelto en agua.
ACD, SOLUCIN DE (No. 1 ) *
Glucosa 2,45 g
Citrato trisdico 2,20 g
Acido ctrico 0.89 g
Agua destilada : . . . 100 mi
A M O R T I G U A D A , AGUA (No. 5)
Solucin amortiguadora para las tinciones de May-Grnwald, de Giemsa
y de Leishman.
Hidrofosfato disdico (Na 2 HPO4. 2H 2 O) 3,76 g
Fosfato de potasio y dihidrgeno ( K H 2 P 0 4 ) anhidro 2,1 g
Agua destilada q.s. 1 000 mi
Mida el pH por medio de cintas de papel reactivo de graduacin reducida o
de un comparador, como se indica en la pgina 6 1 . El pH deber oscilar
entre 7,0 y 7,2.
A continuacin:
Solucin A lOml
Solucin B 90 mi
Advertencia: esta solucin es sumamente corrosiva y txica.
COLORANTE A DE FIELD:
Elaboracin a partir de polvos preparados:
Polvos para colorante A de Field 5,0 g
Agua destilada caliente q.s. 600 mi
Mezcle hasta que los polvos se disuelvan. Filtre cuando se haya enfriado.
REACTIVO DE ORTOTOLUIDINA
Tiourea 0,75 g
Acido actico glacial 470 mi
Ortotoluidina 30 mi
Disuelva la tiourea en el cido actico glacial. (Si esto resulta difcil, coloque
el matraz en un recipiente con agua caliente). Aada la ortotoluidina y
mezcle bien. Vace en un frasco oscuro y consrvese a la temperatura
ambiente.
Advertencia: evite tocar estos agentes qumicos; el cido actico glacial es sumamente
corrosivo.
M I F ( N o . 38)
1. Prepare una solucin madre:
Tintura de tiomersal, 1:1000 (Merthiolate, Lilly) 200 mi
Solucin de formaldehido (No. 25) 25 mi
Gliceroi 5 m|
Agua destilada 250 mi
Consrvese en un frasco oscuro hasta 3 meses.
2. Elaboracin de solucin yodurada die Lugol, 50 g/l (5% ):
Yodo. 5g
Yoduro potsico (Kl) 10 g
Agua destilada q.s. 100 mi
Preprela de la misma manera que la solucin yodurada de Lugol
(No. 35). Se debe guardar durante un mes solamente en un frasco oscuro.
3. El da en que se vaya a usar, mezcle:
Solucin madre de tiomersal 9,4 mi
Solucin yodurada de Lugol; 50 g/l (5%) 0,6 mi
Advertencia: el formaldehido es corrosivo y txico.
TIOSEMICARBACIDA ESTANDARIZADA
Tiosemicarbacida 0,63 g
Agua destilada q.s. 250 mi
Disulvase la tiosemicarbacida en el agua destilada. Esta solucin es
estable a la temperatura ambiente.
475
SOLUCIN DE C U R A T O TRISODICO AL 5%
Citrato trisdico 5 9
Agua destilada P-s-100 mi
B
mtodo del tubo de ensayo,
440-441,446.463
Accidentes, 98
prevencin de, 101
ACD, solucin de, 444,458,466
Actico, cido, 175, 331, 334,466
Acido, reactivo, 432,466 Bacilos, cidorresistentes, 249, 252
Acido y etanol, 249, 253, 257,466 ntrax, 239
modificado, 259 difteria, 270, 271
Actinomicetos, 240 gramnegativos, 240, 244
Agitadores, fabricacin, 66 grampositivos, 239, 244
Agua, amortiguada, 61-63,466 lepra, 252, 259-263, 264
desmineralizada, 59 peste, 265-267
destilada, 57 ttanos, 239
limpia, 56 tuberculosis, 249-258, 277
muestreo para anlisis, 279-284 Balanzas, 48-57
para usar en el laboratorio, 56 Balantidium coli, quiste, 155,159
pHdel, 58, 60, 61-63 forma mvil, 148, 159
Agujas, 105,226,265 Brico, solucin acuosa de cloruro, 100 g/l,
esterilizacin, 34 317,467
limpieza, 32 Basfilos polimorfonucleares, 401
para ensayo del VDRL, 288, 294 Basof licos, granulos, 410
puncin venosa, 353 Bencidina, ensayo de la, 177
Aire caliente, homo de, 37 Benedict, mtodo para determinar glucosa en
Alcohol polivinlico, 73, 173, 174 la orina, 311-312
Amebas, 73 Benedict, solucin cualitativa, 311, 467
formas mviles, 147-148, 150-152, 165 Benzoico, cido, 429,471
quistes, 157-158 Bicromato, solucin limpiadora de, 30, 369,
Ancylostoma duodenale, 123, 142 467
helmintos, 146 Biliares, pigmentos en la orina, 316-318
huevos, 125, 126,163 Biopsia, material de, fijacin y envo, 73,
larvas, 169 75-77
Anillados, eritrocitos, 408,413 Blanco, reactivo (cido tricloroactico), 432,
Anisocitosis, 409 467
Anticoagulantes, 68-69, 72, 352,466, 469, Blastoquistes, en las heces fecales, 160
470, 475, 477 Borrelia. 241
Antgeno D, 435,448 Bovina, albmina, al 20%, 453, 464, 467
distribucin geogrfica, 452 Brugia malayi, 213, 214
ntrax, bacilos, 239 Buretas, 46
APV, vase Alcohol polivinlico Burker, cmara cuadriculada de, para
Asa para siembra, fabricacin, 232 recuentos de clulas sanguneas, 364
479
c
Dicrccoelium, 123,142
helmintos, 146
huevos, 128, 141, 163
Dientamoeba frgilis, 158
forma mvil, 148, 152
Difteria, bacilos, 271
Cabot, cuerpos de, 410 Dipetalonema perstans, 213
Candida, 270, 272, 349 Dlpetalonema streptocerca, 218
Cantidades, nombres de, 7-10 Diphyllobothrum latum, 123, 142
Cary y Blair, medio de transporte de, 265, huevos, 128,141
268,468 Diplococos, gramnegativos, 239, 243
Centrfugas, 52-55 Dipylldium caninum, 123.142
vase tambin Microhematocrito, helmintos, 129
centrfuga para huevos, 145
Chagas, enfermedad de Drabkin, lquido para dilucin, 371,468
vase Tripanosomiasis americana Duke, mtodo para el tiempo de sangrado,
Chilomastix mesnili, 154 421 422
formas mviles, 148, 154
quistes, 158
Ciliados, 147, 156
formas mviles, 147, 148
quistes, 155, 158
Cilindros, en sedimentos urinarios, 330-332
Clono rchis sinensis. 123
helmintos, 146
huevos, 125, 128, 141,163
E
Clorhdrico, cido, 0,1 mol/1, 377,468
Coagulacin, tiempo de, 421-422
sangre entera, 423-427 Echinococcus granulosas, 185
Cogulo, tiempo de retraccin y tisis, 425-427 EDTA, solucin salina bipotsica, 68, 72, 352,
Coccidios, en las heces fecales, 161 380, 383, 388, 413,414, 418,433,437,
Cocobacilos, gramnegativos, 240 448,469
Cocos, gramnegativos, 244 Ehrlich, reactivo de, 319,469
grampositivos, 239, 244 Elctrico, equipo, instalacin y conservacin,
Clera, vibrin del, 72, 268, 269 87-93
"Columnas de monedas", formacin de, 442, Elctrico, choque, 101
450,455 Eliptocitos, 410
Compatibilidad sangunea, ensayo de la, Embarazo, pruebas dei, 336
453-455, 464 Endofimax nana, 152
Compatibilidad sangunea, ensayo para trans- forma mvil, 152
fusiones, 453-455,464 quistes, 158
Concentracin, mtodos de, 223-225 Enfermedad de Chagas,
de microfilarias, 223-225 vase Tripanosomiasis americana
de parsitos en las heces fecales, 162-169 Entamoeba coli, 148,150
de tripanosomas, 207-208 forma mvil, 150, 151
Corynebacterium diphtheriae, 270, 271 quistes, 157
Cresil brillante, azul de, 414, 417,468 Entamoeba hartmanni, 148
Cristalera, utensilios de, 27-32, 34, 37, forma mvil, 152
64-67, 105,369-370 quistes, 157
Cristales, en los sedimentos urinarios, 332-335 Entamoeba histoly tica, 142, 148, 150
forma mvil, 148, 150, 151
quistes, 155, 157, 159
En terobius vermicularis, 123, 129
helmintos, 143
huevos, 125, 129, 140
recoleccin de huevos, 119-121
480
Eritrocitos, concentracin de nmero, Fijacin de frotis bacterianos, 232-235, 250,
9, 366-370, 384 261,266
Eritrocitos, recuento, extensiones de sangre, preparacin de,
vase Eritrocitos, concentracin 387-390, 393, 395
de nmero gota gruesa, preparacin de, 189-192
Eritrocitos, fraccin de volumen, tejidos de bipsias, 73, 75-78
8, 9, 379-385 tincin, 193-195,391-396
Eritrocitos, velocidad de sedimentacin Filarias, vase Microfilarias
(VSE), 418-420 Flagelados, 153-154
Esferocitos, 409 en las heces fecales, 158
Espermatozoides, en los sedimentos urinarios, formas mviles, 148, 153-154, 165
329 quistes, 158
Espiroquetas, 182, 241, 246-248, 272 rasgos para reconocerlos, 156
Esputo, 254 en la orina, 181
bacilos de la tuberculosis en el, 249 Fluoro, oxalato de, 341, 344, 352, 429, 470
examen de las preparaciones, 252 Fontanera, procedimientos simples, 94-97
huevos en el, 183-184 Formaldehido, solucin al 10%, 73,165, 173,
preparacin del frotis, 249-251 325, 470
recoleccin, 254 Formaldehido, solucin de citrato de, 366,470
remisin del, 72, 255 Formaldehido, solucin salina, 73, 75,470
Esquizonte, 197, 200-201 Formaldehido y ter, tcnica de concentracin,
Estafilococos, 239 162,165-167
Esterilizacin, 33-38 Fouchet, reactivo de, 317,470
Estreptococos, 239 Frotis, para examen bacteriolgico,
Examen bacteriolgico, 231-234 fijacin, 233-234
agua, envo de, para efectuar el, 279-284 preparacin, 232-233
gonorrea, 243-244 tincin, 234
heces fecales, envo de, para efectuar el, Frambesia o pian, 246,247, 287, 288
268-269 Fuchs y Rcsentha!, cmara para recuento, 343
lepra, 259-264
muestras de exudado farngeo, 270-272
peste, 265-267
sfilis, 246-248
tincin, 235-237
tuberculosis, 249-258
urinario, 275-277
G
Gametocitos. 197, 200-201
Giardia lamblia,
481
H I
Haemophilus nfluenzae, 348 Intoxicacin, 100
Hansen, bacilo de, Informes, del examen bacteriolgico, 242
vase Mycobacterium leprae del examen de heces fecales, 172
Harada y Mori, tcnica para la concentracin mensual, del laboratorio, 84
de heces fecales, 162,168-169 lodamoeba butschli,
Heces fecales, forma mvil, 148, 152
concentracin de parsitos en, 162-169 quistes, 158
envo, 71-74, 173-174, 268-269
examen, 113, 170-172
helmintos, adultos, en, 143-146
huevos en, 122-141
recoleccin, 114
sangre oculta en, 175-177
Helmintos,
adultos, en las heces fecales, 143-146
vase tambin Huevos
Hematocrito,
J
vase Eritrocitos, fraccin de volumen
Hemoglobina, concentracin de, 385 Jenner, tincin de,
clculo por el mtodo fotomtrico de la vase Tincin, Jenner
cianometahemoglobina, 371-374 Jeringas, 105
clculo por el mtodo de Sahli, 377-378 esterilizacin, 34
clculo por el uso de un comparador,
375-376
unidades de medicin, 371
Hemoglobina H, cuerpos de, 417
Hemoglobina S, 411
K
Heinz, cuerpos de, 417
Heparina, 69, 380
Heterophyes heterophyes, 123,131
helmintos, 146
huevos, 131, 141,163
Hipocrmicos, eritrocitos, 409
Hisopos, preparacin de, 274 Kala-azar (leishmaniasis visceral), ensayo
Hongos, de la sangre en, 462
en el exudado genitourinario, 188 Kinyoun, fucsina fenicada de, 257,472
en las heces fecales (levaduras), 160
en el lquido cefalorraqudeo, 349
en los sedimentos urinarios (levaduras),
328
Howell y Jolly, cuerpos de, 410
Huevos en el esputo, 183-185
en las heces fecales, relacin alfa-
btica, 123
aspecto microscpico, 121,
126-137,140-141
L
hallazgos que no se deben confun-
dir, 138-140 Laboratorio, aparatos y equipo del,
gua para su identificacin, 27-28,104-107
mtodos de concentracin, 163-169 Laboratorio, utensilios de vidrio del, 27
trminos empleados, 124 fabricacin, 64-68
en la orina, 178-180 limpieza, 29-32
Hymenolepis diminuta, 123, 142 Laboratorio, planos del, 102-103
huevos, 131,141 Laboratorio, ejemplos de registros del, 78-83
Hymenolepis nana, 123, 142 Lactofenol, solucin de azul algodn de,
helmintos, 145 300, 472
huevos, 125, 132,140, 163 Lavado, matraz, preparacin de, 67
482
LCR, vase Lquido cefalorraqudeo Mansonella ozzardi, 213, 214
Lee y White, mtodo de, para medir el tiempo May y Grunwald, tincin de,
de coagulacin en la sangre intacta, 423-424 vase Tincin, May y Grunwald
Leishman, tincin de, McArthur, microscopio de, 26
vase Tincin, Leishman Media, concentracin globular de hemo-
Leishmania donovani, 462 globina,
Lepra, 259-264 vase Media, concentracin de hemo-
Lepra, bacilos de la, en los frotis de exudado globina en los eritrocitos
nasal, 264 Media, concentracin de hemoglobina en los
Leptospira icterohaemorrhagiae, en la orina eritrocitos, 10, 386
182 Medios de transporte, para esputo, 255
Leptospirosis, 182 para gonococos, 245-246
Leucocitos, 351 para heces fecales, 268-269
en las heces fecales, 160 para lquido cefalorraqudeo, 350
en el lquido cefalorraqudeo, 342 para muestras de exudado farngeo, 273
en los sedimentos urinarios, 327 Megacariocitos, 404
examen, 398-404 Meningitis, 339, 344, 347-349, 429
recuento, 363, 405-406 Meningococos, 239
Leucocitos, concentracin de nmero, en el lquido cefalorraqudeo, 347-
9, 360-365 Mensual, informe, ejemplo de, 84
Leucocitos, fraccin de nmero del tipo de, Metagonimus yokogawai, 123
8,9, 193,343,397-398 helmintos, 146
Leucocitos, recuento, huevos, 132, 141, 163
vase Leucocitos, concentracin Metileno, azul de, acuoso, 249, 253, 257, 473
de nmero modificado, 259
Leucocitosis, 364 Micelio, filamentos de, en elexudado genito-
Leucopenia, 364 urinario, 188
Levaduras, 240 Microcitos, 409
en el exudado genitourinario, 188 Microfilarias, cutneas, 215-219
en las heces fecales, 160 del lquido ganglionar, 230
en los sedimentos urinarios, 328 del ojo, 219
Linfocitos, 401-402, 404 de la orina, 181-182
Linfocitosis, 406 sanguneas, concentracin, 207-208
Lquido cefalorraqudeo, aspecto, 340 especies, 212-214
clculo de la glucosa en el, 344, 429 horas ms adecuadas para obtener
concentracin de leucocitos en el, 342 las muestras, 204
envo de muestras del, 7 1 , 350 preparacin hmeda, 204-206
examen microscpico del, 347 rasgos para reconocerlas, 210-214
hongos en el, 349 tincin, 209
meningococos en el, 348 Microhematocrito, centrfuga para 208 224
neumococos en el, 348 379-383
obtencin de, 339 Microscopio, 13-26
protenas en el, 345-346 enfoque del objeto, 21
registro, 80 medidas cotidianas de conservacin, 23
tripanosomas en el, 347 precauciones al usarlo, 24
Ziehl y Neelsen, tincin con la tcnica preparacin, 18
de, 349 sistema de ajuste, 17
Loa loa, 212, 214 sistema de aumento, 14
Loeffler, medio de cultivo de, 2 7 1 , 273 sistema de iluminacin, 16
Lovibond, comparador de, 61 sistema de soporte, 13
Lugol, ensayo con la solucin yodurada de, Mieloblastos, 404
316 M I F , solucin de, 73, 165, 173, 473
Lugol, solucin yodurada de, 116, 147, 155, M I F , tcnica de concentracin en heces
165, 1 7 3 , 3 1 6 , 4 7 2 fecales, 162, 167
Moniliasis, 272
Monocitos, 402
en el paludismo, 202
M Monocitosis, 406
Mosca tsetse, vase Glossina
Mviles, formas de protozorios en las heces
fecales, 147-154
aspecto microscpico, 150-154
Macrocitos, 409 examen en portaobjetos, 147'
Mal de pinto, 288 rasgos para reconocerlos, 149
Muestras, envo de, 71-73 Ortotoluidina, mtodo de la, para la determi-
desecho de, 3 9 - 4 1 nacin de la glucosa, 429-431
empaque de.. 74 Ortotoluidina, reactivo de, 429, 471
registro de, 78 Oxiuro, vase Enterobius vermiculahs
Mycobacterium lepras, 259
Mycobacterium tuberculosis, 249, 253
P
N
Paludismo, parsitos del, 1S6-203
densidad, 198, 203
Necator amercanus, 123, 142 distribucin geogrfica, 199
helmintos, 146 en la sangre de los donadores, 462
huevos, 125, 132, 140,163 etapas de desarrollo, 197
Neissera gonorrhoeae, 243 preparacin de frotis de sangre, 196
Neubauer, cmara cuadricu'ada de, para extensiones sanguneas, 387-390
recuentos de clulas sanguneas, 363, 368 frotis de gota gruesa, 189-192
Neutrofilia, 406 rasgos distintivos, 200-202
Neutrfilos polimorfonucleares, 400 Pandy, ensayo de globulinas en el LCR por el
en cayado, 4 0 0 mtodo de, 346
inmaduros, 400 Pandy, reactivo de, 346, 473
Meutropenia, 406 Paragonimus westermani, 123
Normoblastos, 364, 4 0 3 , 408 huevos, 125, 133, 141, 163, 183-184
Parsitos, 111
concentracin en las heces fecales, 162
en la orina, 178-182
vanse tambin los parsitos especficos
de cada caso
Q
Sangre,
clculo de la glucosa en la, 4 2 9 - 4 3 1
en el lquido cefalorraqudeo, 340
en la orina, 337
envo de, 72, 285-287
oculta, en las heces fecales, 175-177
Quemaduras, por cidos, 98 capilar, recoleccin de, 189-190, 358,
por lcalis, 99 388
por calor, 100 venosa, 353-358, 437, 4 5 8 - 4 6 1
Quistes, aspecto microscpico, 157-159 seca, 287
en las heces fecales, 155-161 urea en la, 4 3 2 - 4 3 4
examen en portaobjetos, 155 Sangre, coagulacin de la, 325
objetos, no confundir con hongos, 160, 161 ensayos de, 421-427
rasgos distintivos, 156 Sangre, compatibilidades de la, 4 5 3 - 4 5 5 , 464
Sangre, donadores de, 458
riesgos del grupo O, 456-457
registro, 82
Sangre, extensiones de, fijacin, 390
R preparacin, 387-390
tincin, 391-396
Sangre, gota gruesa de, preparacin, 189-192
tincin, 191-196
Sangre, plaquetas, vase Trombocitos
Reactivos, preparacin, 465-477 Sangre, plasma, vase Plasma, sangre
Recipientes para muestras, 68-73 Sangre, suero, vase Suero, sangre
agua, 279 Sangre, transfusin de, 435-464
desecho y esterilizacin, 39-41 Sanguneos, grupos, 4 3 5 - 4 3 6
esputo, 70, 255 clasificacin, 437-452
exudado farngeo, 7 1 , 273 plan de trabajo, 463-464
heces fecales, 72-73, 114, 268 sistema ABO, 437-447
lquido cefalorraqudeo, 7 1 , 350 sistema Rhesus, 4 4 8 - 4 5 2
orina, 73, 305 Saprofitas, 238, 239, 2 4 1 , 244
sangre, 6 8 - 6 9 , 72, 286-287, 461 Scolex hidatdico, 185
tejidos para bipsias, 73, 76 Schistosoma bovis, 123, 142
Recuento de glbulos blancos, helmintos, 146
vase Leucocitos, concentracin de huevos, 133, 163
nmero Schistosoma haematobium, 123, 125, 142
Recuento de glbulos rojos, helmintos, 146
vase Eritrocitos, concentracin de huevos, 125, 134, 140, 163, 178-180,
nmero 332
Schistosoma ntercalatum, 123,142 Taenia solium, 123,142
helmintos, 146 helmintos, 144, 145
huevos, 134, 141,163 huevos, 125, 137, 140, 163
Schistosoma japonicum, 123, 142 Ttano, bacilo del, 239
helmintos, 146 Tiempo de lisis de los cogulos de sangre, 426
huevos, 125, 135,141, 163 Tincin, Field, A y B, 191, 196, 222,
Schistosoma mansoni, 123,142 390 395
helmintos, 146 Giemsa, 191, 193-196, 207, 209, 218
huevos, 122,125, 135, 140, 163,180 222,230,241,390,393
Sedimentos urinrios, aspecto microscpico, Gram. 235-238, 242, 244, 253
327-335 270, 275
cilindros, 330-332 Jenner, 391
cristales en los, 332-335 Kinyoun, 257-258
preparacin, 326 Leishman, 391
Sfilis, 246-248, 287, 288 May y Grnwald, 193, 390, 393
Shigella. 268 Romanowski, 391
Simulium, 215 Wayson, 265'-267
Sdico, carbonato, 98,474 Wright, 391
Sdico, nitroprsido, Ziehf y Neelsen, 238, 242, 249, 253,
vase Sdico, pentacianonitrosilferrato 259, 262, 264, 275, 349
(2-) Tina, examen directo, 300-302
Sdico, pentacianonitrosilferrato ( 2 - ) , 320 Tiosemicarbacida, reactivo de, 432, 476
Sdico, solucin acuosa de hidrxido, 30 g/l, Transgrow, medio de transporte, 71, 245,
183,474 273, 350
solucin acuosa, 100 g/l, 178,474 Treponema pallidum, 246, 462
Sdico, solucin acuosa de metabisulfito, Treponema pertenue, 246
20 g/l, 411,474 Treponema vincentii, 241, 272
Sdico, solucin acuosa de tiosulfato, 30 g/l, Tricloroactico, cido, 30 g/l, 429,471
279,474 100 g/l, 432, 476
Sdico, solucin de cloruro, 8,5 g/, 116, 121, Trchomonas hominis, forma mvil, 148, 153
147,155, 165,186,204,209,215,220, Trchomonas vaginalis, en el exudado genito-
226, 264, 265, 288, 437, 453,463, 474 urinario, 186-187
Solucin salina isotnica, en la orina, 181
vase Sdico, solucin de cloruro, 8,5 g/l en los sedimentos urinarios, 329
Strongyloides stercoralis, 123,142 Trchostrongylus, 123, 142
huevos, 125, 136,141 huevos, 137, 141
larvas, 136, 140,163,168-169 Trchurs trchiura, 123, 142
Sueo, enfermedad del, helmintos, 146
vase Tripanosomiasis africana huevos, 125,137, 140
Suero, sangre, 352 Tripanosomas, en el lquido cefalorraqudeo,
color en la sangre del donador, 457 347
envo de, 286 en el lquido de los nodulos linfticos,
preservacin del, 286 226-230
recoleccin de, 285-286 en la sangre, 220-224, 287, 462
Stuart, medio de transporte de, modificado, rasgos con que se reconocen, 221, 222,
246, 273, 350,474 225, 229, 230
Sulfosaliclico, cido, solucin acuosa de, Tripanosomiasis, Africana, 220, 226
30 g/l, 345,475 Americana, 220, 225
solucin acuosa, 300 g/l, 313,475 Trisdico, solucin acuosa de citrato, 20 g/l,
Suministros, inventario, 85 207, 208, 475
almacn, 85 solucin acuosa, 38 g/l, 69, 72, 352,
pedidos, 86 418,438,475
Trofozoitos, 197, 200-201
Trombocitos (plaquetas), 203, 351, 398,426
Trombocitos, concentracin de nmero,
9,351
Trombocitos, recuento,
Y
V Yersinia pests, 265, 267
z
288
solucin amortiguadora para, 289,46
Vidrio, utensilios de,
vase Cristalera
Vincent, angina de, 241, 272
Violeta cristal de Hucker, modificado,
235,468
Volumen de sedimentacin globular, Zenker, fijador de, 73, 75, 477
vase Eritrocitos, fraccin de volumen de
Volumen, medicin del, 42-47
VSE,
vase Eritrocitos, velocidad de sedimen-
tacin de
w
Willis, tcnica de concentracin de,
162 164
Willis, solucin de, 163, 477
Wintrobe, mezcla de, 352, 383,477
Wright, tincin de,
vase Tincin, Wright
Wuchereria bancrofti, 212, 214
en la orina, 181
en los sedimentos urinarios, 332
PXT02
Precio: US$15,00 ISBN - 92 75 31439 X