MTODOS DE ESTERILIZACIN

Los microbios se eliminan, inhiben o matan por medio de agentes fsicos o agentes qumicos, otros incluyen
los agentes mecnicos.

Los mtodos de esterilizacin comprenden entonces, todos los procedimientos fsicos, mecnicos y qumicos
que se emplean para destruir grmenes patgenos.

Los mas utilizados en la actualidad son los mtodos fsicos (calor, radiaciones, filtracin, centrifugacin) y los
mtodos qumicos (agente qumico)

EBULLICIN
TYNDALIZACION
CALOR PASTEURIZACIN
HMEDO
VAPOR A PRESIN

(AUTOCLAVE)

FLAMEADO
CALOR SECO INCINERACIN
FSICOS HORNO PASTEUR

(AIRE CALIENTE)

RADIACIONES IONIZANTES
RADIACIONES RAYOS GAMMA
RAYOS X
MTODOS DE RAYOS ULTRAVIOLETA

ESTERILIZACIN

MECNICOS FILTRACIN
SEDIMENTACIN

QUMICOS GASES OXIDO DE ETILENO

OTROS

1.- MTODOS FSICOS.

1.1.- Calor Hmedo.

La utilizacin del calor y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos
los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de
protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.

El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben

principalmente a dos razones: 1) El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son
producidas por reacciones que eliminan agua y 2) El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor
mucho ms elevado que el aire.

Ventajas del calor hmedo:

-Rpido calentamiento y penetracin

-Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo

-No deja residuos txicos

-Hay un bajo deterioro del material expuesto

-Econmico
Desventajas:

-No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

-Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

Procedimientos:

a) Ebullicin: Se requiere un recipiente con agua. Es la aplicacin del calor mediante la ebullicin del agua a presin
atmosfrica (100 oC). Mediante este mtodo se esterilizan inyectadoras, agujas e instrumentos de ciruga menor. No
es confiable en su totalidad este mtodo por cuanto quedan las esporas

b) Tyndalizacin: Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua a una temperatura de 100 oC en varias
sesiones. Se basa en el principio de Tyndal. Las bacterias que resisten una sesin de calefaccin, hecha en
determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operacin se repite con intervalos separados y en
varias sesiones. Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea
funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas ms bajas, 56 u 80 ocupara evitar la
descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas.

c) Pasteurizacin: Es la aplicacin de una temperatura inferior a 110 oC durante 30 minutos. La aplicacin del calor
va seguida de un rpido enfriamiento. Se usa para prevenir las infecciones de origen lcteo y retasar la
descomposicin de la leche, ya que las bacterias de la leche no forman esporas (bacilo tuberculoso, salmonella,
estreptococo y brucela)

d) Vapor a presin (autoclave): Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el
de Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el
material durante 20 a 30 minutos. El vapor a presin proporciona temperaturas altas con penetracin y humedad en
abundancia que facilitan la coagulacin de las protenas.

Equipo: Consta de una caldera de cobre, sostenida por una camisa externa metlica, que en la parte inferior recibe
calor por combustin de gas o por una resistencia elctrica, esta se cierra en la parte superior por una tapa de
bronce. Esta tapa posee tres orificios, uno para el manmetro, otro para el escape de vapor en forma de robinete y el
tercero, para una vlvula de seguridad que funciona por contrapeso o a resorte.

Funcionamiento: Se coloca agua en la caldera, procurando que su nivel no alcance a los objetos que se disponen
sobre una rejilla de metal. Se cierra asegurando la tapa, sin ajustar los bulones y se da calor, dejando abierta la
vlvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor en forma de chorro continuo y
abundante.

1.2.- Calor Seco.

El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txicos por niveles elevados de electrolitos, fusin de
membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que
estn en contacto con stos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura
cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja.

Ventajas del calor seco:

-No es corrosivo para metales e instrumentos.

-Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas:

-Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

Entre los mtodos que utilizan el calor seco como medio de esterilizacin se destacan:

a). Flameado: Consiste en la exposicin directa del instrumento a una flama en forma directa por poco tiempo con el
mechero de Bunsen.

b). Incineracin: Consiste en someter el material contaminado a altas temperaturas en hornos especiales para
reducirlo prcticamente a cenizas. Su fin es evitar el vertido de material de alto riesgo en la basura.

c). Estufa (Horno Pasteur de aire caliente) Por medio de las estufas de doble cmara, el aire caliente generado por
una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para
el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable
mediante termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan el circuito elctrico.

1.3.- Radiaciones.

La accin de las radiaciones del tipo de radiacin y el tiempo de exposicin.

a). Radiaciones ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos,
estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos, dando lugar a
mutaciones en los microorganismos que los incapacitan metablicamente para producir una enzima esencial y
sobreviniendo la muerte bacteriana. Las radiaciones tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar
materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por
sus costos.

b). Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa atmica. Este tipo de esterilizacin
se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar
antibiticos, vacunas, alimentos, etc.

c). Rayos X: Penetran bien, pero requieren mucha energa, son pocos operativos para su empleo masivo, su uso es
muy costoso, por lo tanto son muy poco usados con fines de esterilizacin

d). Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. El ADN absorbe una longitud de
onda de 2600 y libera energa ocasionado rearreglo de enlaces qumicos son escasamente penetrantes y se utilizan
para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos.

1.4.- Mecnicos.

a). Filtracin: En la filtracin se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro
depender del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se utilizan pueden no retener virus o
micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice.

La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites,
algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos,
medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas. Este mtodo es til para identificar
microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias. Tambin l aire puede ser sometido a una limpieza
exhaustiva provocando su paso a travs de materiales capaces de retener los microorganismos y partculas en
suspensin

Tipos de filtros:

1.- Filtros profundos o Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado,
activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por
una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz.

2.- Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de la
partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriza del filtro debido a efectos
electrostticos.

3.- Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas
por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que
atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao
mayor al del poro.

b). Sedimentacin: Es un mtodo por el cual los microorganismos son eliminados de depsitos hdricos. Se
fundamenta e el hecho de que la densidad de muchas bacterias es algo mayor de 1.0; en consecuencia, se depositan
en el fondo del recipiente que las contiene quedando el lquido sobrenadamente no estril del todo, pero su poblacin
microbiana disminuye notablemente. En el laboratorio la sedimentacin se acelera por centrifugacin. Es utilizado
este mtodo para identificar microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias.

2.- MTODOS QUMICOS.

Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos.

a). Oxido de etileno: Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen
grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Destruye todos los
microorganismos incluso virus; es un agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria en estado
vegetativo, incluyendo al bacilo de la tuberculosis, las esporas y los virus. Sirve para esterilizar material
termosensibles como el descartable (goma, plstico, papel, etc.), equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias,
metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancerigeno.

-Otros:

b). Aldehdos: Son agentes alquilantes que actan sobre las protenas, provocando una modificacin irreversible en
enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas.

c). Glutaraldehdo: Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30
minutos, y luego un enjuague de 10 minutos.
Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma,
vidrio, metal, etc.

d) Formaldehdo: Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja
envueltas en gasa o algodn, que despus pueden ser expuesta al calor para una rpida esterilizacin (accin del
gas formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se
colocan las pastillas y se calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc. Las
pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.

e). Esterilizacin por gas-plasma de Perxido de Hidrgeno: Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual
consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma (estado entre lquido y gas), que ejerce la accin
biocida.

Posee como ventajas:

No deja ningn residuo txico.

Se convierte en agua y oxgeno al final del proceso.

El material no precisa aireacin.

El ciclo de esterilizacin dura entre 54 y 75 minutos.

Desventajas:

No se pueden esterilizar objetos que contengan celulosa, algodn, lquidos, humedad, madera o instrumental con
lmenes largos y estrechos.

Es el mtodo de esterilizacin ms caro de entre los descritos.

3. AGENTES QUMICOS ESTERILIZANTES

los agentes qumicos esterilizantes que destruyen patgenos suelen denominarse desinfectantes, los cuales
en su gran mayora son txicos para el ser humano; sin embargo, son tiles para destruir microorganismos en el
medio humano o animal. Los agentes desinfectantes que pueden aplicarse tpicamente en la superficie corporal se
les designa con el nombre de antisptico.

Alcoholes

Iodo

Antispticos Agentes catinicos, aninicos y anfteros

rgano Mercuriales

Colorantes

Cloro y Compuestos clorados

Desinfectantes y/o Aldehdos

sterilizantes Oxido de Etileno

Compuestos Fenlicos
 Acidos y Alcalis

4. FACTORES QUE AFECTAN A LOS DESINFECTANTES.

Los factores que se estudian influyen en la capacidad de los desinfectantes qumicos para actuar sobre os
microorganismos, as como la duracin de esta accin.

CONCENTRACIN TIEMPO TEMPERATURA PH ESTADO DE VIDA

Varia de un microorganismo
a otro y de un desinfectante
a otro; uno demasiado
concentrado puede originar
la coagulacin en la
superficie de las materias
orgnicas e impide la
penetracin del producto en
el interior de la bacteria y
puede ser irritante,
corrosivo y costoso. Por el
contrario, un producto es
menos activo cuanto ms
diluido est. Es
imprescindible emplear las
concentraciones
recomendadas.
ACCESIBILIDAD DE LAS
BACTERIAS
Para que el producto sea
efectivo debe alcanzar la
clula bacteriana; de no
hacerlo su utilizacin es
intil.
Mecanismo de Accin:
Y CLASE DE MICRO
ORGANISMO
La desinfeccin es un A altas temperaturas se En la interaccin de los Existen en los
proceso gradual que incrementa la accin desinfectantes con los microorganismos algunas
requiere tiempo para bacteriana. La mayora se microorganismos es variaciones en la
consolidarse, el llevan a temperatura importante la acidez y la susceptibilidad, se clasifican en
desinfectante ha de ambiente. alcalinidad del medio, y los tres grupos:
permanecer en contacto pueden aumentar o
con el material disminuir su accin. Para
contaminado el tiempo cada producto debe GRUPO A: Formas vegetativas
suficiente para que sea considerarse por y virus con cubierta que se
efectivo. separado la accin del pH destruyen fcilmente con los
productos.
GRUPO B: Los ms difciles de
destruir,
GRUPO C: Esporas
bacterianas y virus resistentes,
entre ellos los que causan la
hepatitis.
NUMERO DE PRESENCIA DE EXPOSICIN DETERIORO DEL
BACTERIAS A SUSTANCIAS EXTRAAS ADECUADA DESINFECTANTE
ELIMINAR
A mayor numero se debe La tierra, sangre y pus Se debe asegurar que Siempre deben reemplazarse
incrementar el tiempo de pueden reaccionar con todas las reas a depuse del segundo dia ya que
exposicin algunos desinfectantes y desinfectar tengan una se deterioran progresivamente
disminuir su capacidad exposicin adecuada al
para interactuar con los producto (envases
microorganismos. Debe cerrados)
limpiarse bien el rea que
se ha de desinfectar

1.- Absorcin superficial por

coloides proteicos

Unin del producto a

grupos activos de las
protenas extraas2.-

5.- PRINCIPALES GRUPOS DE DESINFECTANTES QUMICOS

FENOL Y SUS DERIVADOS CRESOLES HEXACLOROFENO

El fenol es un producto tambin llamado cido
carblico, es completamente toxico para los
tejidos, es corrosivo y de olor desagradable. En
soluciones diluidas es eficaz en la piel y no daa
los tejidos si su exposicin es menor a una hora
Se obtienen de la destilacin del carbn. Se
pueden mezclar con jabones sin perder su
efectividad germicida
Es eficaz contra estafilococos y estreptococos,
se puede mezclar con jabones, no es irritante
para la piel y deja una pelcula protectora en la
piel despus de su aplicacin. Es bactericida a
altas concentraciones y bacteriosttico a bajas
concentraciones. Estos productos se emplean
ampliamente en hospitales y clnicas. Por los
posibles daos al cerebro (absorcin y paso al
torrente sanguneo) su uso se ha restringido un
poco.

SOLVENTES ORGNICOS METALES PESADOS DETERGENTES COLORANTES

Incluye el tolueno y los alcoholes.
Su accin es alterar la estructura y
funcin de las membranas
plasmticas y desnaturalizar
protenas. El cloroformo y el
tolueno son empleados como
aditivos en soluciones que se
desean mantener libres de
Causan dao a os microorganismos,
ya que actan desnaturalizndolos al
combinarse con las protenas
celulares. Los mas efectivos son el
mercurio (mercuriocromo y
mertiolate), plata (nitrito de plata) y
cobre (sales)
Los jabones reducen la tensin
superficial en incrementan el
poder humectante del agua, el
agua jabonosa tiene la propiedad
de emulsionar y dispensar
aceites y polvo, los
microorganismos son atrapados
por el jabn y arrastrados por el
Son empleados para la tincin
de bacterias o indicadores, por
su actividad bacteriosttica y
bactericida tienen aplicabilidad
en medicina. Hay dos clases de
compuestos colorantes que
tienen especial inters como
agentes antimicrobianos y son
 grmenes. Los alcoholes
corresponden a los desinfectantes
y antispticos, son eficaces contra
clulas bacterianas vegetativas,
pero no son eficaces contra las
esporas. Tienen los alcoholes
accin limpiadora al remover los
lpidos acumulados
HALGENOS: el cloro y el yodo se
emplean como antispticos y
desinfectantes el cloro es germicida
inespecfico potente, de accin
rpida, el Yodo tiene propiedades
esporicidas, fungidas y antivirales
importantes, se presume que
involucra la halogenizacin de las
unidades de tirosina de las enzimas
y otras protenas para su actividad
por una parte, y liberando oxgeno
por otra produciendo la oxidacin de
los constituyentes celulares de los
microorganismos.
agua los colorantes del trifenilmetano
y algunos derivados de la
acridina. En el laboratorio, os
colorantes se emplean para la
identificacin de bacterias. En el
campo de la medicina se les usa
en el tratamiento de las
quemaduras y heridas, en
aplicaciones oftlmicas, as
como en irrigaciones de la vejiga

6.- EVALUACIN DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS:

El mtodo oficial para evaluar un desinfectante es el mtodo de coeficiente de fenol. Este mtodo compara la
eficacia de los desinfectantes a probar contra la del fenol para cepas bacterianas de Salmonella Typhi,
Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. Las condiciones de esterilizacin de este mtodo son descritas
en el procedimiento oficial y deben ser obedecidas para obtener resultados vlidos.

7.- PRECAUCIONES CON LOS DESINFECTANTES

- Todas las soluciones deben ser preparadas por personal especializado y en un ambiente adecuado.

- Las soluciones de desinfectantes deben ser estriles y manipularse aspticamente.

- Los frascos deben ser de vidrio con tapn antirreflujo. Debidamente esterilizado antes de introducir la
solucin.

- Los tapones de corcho no deben utilizarse, pues son permeables a los grmenes.

- Todos los frascos debern ser debidamente identificados en su superficie.

8.- MTODOS DE ESTERILIZACIN UTILIZADOS EN EL HOSPITAL UNIVERSITARIO DE CARACAS.

Los mtodos de esterilizacin utilizados en el rea hospitalaria tendrn como fin eliminar o inhibir los
microorganismos patgenos, van a comprender estos mtodos todos los procedimientos fsicos qumicos.

8.1.- MTODOS FSICOS.

8.1.1 Calor Hmedo.

La utilizacin del calor hmedo, sobre todo el mtodo de la Ebullicin (recipiente con agua a presin
atmosfrica de 100 oC) y la Tyndalizacin (esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua a una temperatura
de 100 oC en varias sesiones) dej de utilizarse desde hace mucho tiempo en el rea hospitalaria, sobre todo por los
nuevos avances en tcnicas de esterilizacin y desinfeccin.

Del mtodo del calor hmedo solo se utiliza en el rea hospitalaria el vapor a presin a travs del autoclave
(esterilizacin por el vapor de agua a presin que esteriliza a 120 a una atmsfera de presin dejando el material
durante 20 a 30 minutos). Se utiliza por ser un mtodo rpido y efectivo ya que el vapor a presin proporciona
temperaturas altas con penetracin y humedad en abundancia que facilitan la coagulacin de las protenas de los
microorganismos.

8.1.2.- Calor Seco.

El calor seco tambin es de poco uso en el rea hospitalaria, sobre todo por el hecho de que requiere mayor
tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo y debido a la baja penetracin del calor.
 Entre los mtodos que utilizan el calor seco como medio de esterilizacin el flameado an se utilizan en el
Hospital Universitario, sobre todo en los laboratorios y en las tomas de muestra para hemocultivos (flameado de la
punta de la inyectadora antes de vaciar el contenido en el medio de cultivo). Durante un tiempo de utiliz para flamear
las agujas en la aplicacin de vacunas, debido al auge de las inyectadoras desechables sta practica se elimin.
8.1.3.- Radiaciones.

Las radiaciones en el rea hospitalaria son utilizadas, pero no con fines de esterilizacin

8.1.4.- Mecnicos.

El mtodo de la filtracin solo es utilizado en el rea de laboratorios de microbiologa del hospital. La

sedimentacin tambin es utilizada en el rea de laboratorio, sobre todo por medio de la centrifugacin.

8.2.- MTODOS QUMICOS.

En el Hospital Universitario se utilizan los gases para esterilizar, en especfico el Oxido de etileno, que como se dijo
antes, es un agente alquilante. Se utiliza por su efectividad ya que destruye todos los microorganismos, por ser un
agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria en estado vegetativo, incluyendo las esporas y los virus.
Se utiliza para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plstico, papel, etc.), equipos
electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. del rea quirrgica del Hospital. Su uso est restringido al rea
de quirfanos por su peligrosidad (es inflamable, explosivo, cancerigeno y corrosivo. El oxido de etileno provoca la
perdida de viabilidad de los microorganismos.

8.3. AGENTES QUMICOS ESTERILIZANTES

En el rea hospitalaria del Clnico Universitario se utilizan desinfectantes (cloro, detergentes, jabones) y
antispticos (alcohol, yodo, gerdex, povidine), con el fin de destruir agentes patgenos.

Los alcoholes corresponden a los desinfectantes y antispticos, son eficaces contra clulas bacterianas vegetativas,
pero no son eficaces contra las esporas. Tienen los alcoholes accin limpiadora al remover los lpidos acumulados.

El povidine es una mezcla de jabn y yodo, es eficaz como antisptico. El cloro y el yodo se emplean como
antispticos y desinfectantes el cloro es germicida inespecfico potente, de accin rpida, el Yodo tiene propiedades
esporicidas, fungidas y antivirales importantes, se presume que involucra la halogenizacin de las unidades de
tirosina de las enzimas y otras protenas para su actividad por una parte. Los jabones reducen la tensin superficial
en incrementan el poder humectante del agua, el agua jabonosa tiene la propiedad de emulsionar y dispensar aceites
y polvo, los microorganismos son atrapados por el jabn y arrastrados por el agua