Los agentes físicos que consiguen la esterilización de materiales son el calor ,
las radiaciones y la Filtración
1. Esterilización por calor
El calor desnaturaliza estructuras y macromoléculas (membranas, proteínas, etc.).
Todos los microorganismos son susceptibles a la acción del calor. Su sensibilidad varía con la especie y con el estado en que se encuentren
En general las formas vegetativas bacterianas mueren por calentamiento a 50-
70ºC. Las endosporas, (las formas de vida más termo resistentes), requieren mayores temperaturas y tiempo de exposición. El calor puede utilizarse de dos formas en presencia (esterilización por calor húmedo) o ausencia de humedad (esterilización por calor seco).
1.1. Calor húmedo
Los materiales húmedos conducen mejor el calor que los secos: el agua tiene mayor coeficiente de transferencia de calor que el aire. Por eso el vapor de agua es más eficaz que el calor seco matando a los microorganismos. Así la esterilización en presencia de vapor de agua requiere menos temperatura y tiempo que sin agua. La autoclave de vapor utiliza calor húmedo para la esterilización.
1.1.1. Autoclave a vapor
Escuela de Extensión y Virtualidad
Trabaja a presión superior a la atmosférica. El agua a presión atmosférica hierve a 100ºC. A presiones superiores, la temperatura de ebullición aumenta por lo que se pueden calentar soluciones acuosas (como los medios de cultivo) a temperaturas superiores a 100ºC. La autoclave permite elevar la presión de una a dos atmósferas sobre la presión atmosférica
El dispositivo trabaja aislado del exterior. En un sistema aislado del exterior, cada elevación de temperatura provoca un aumento de presión. La relación entre temperatura y presión depende de la composición de la atmósfera incluida en el sistema
Cuando en el autoclave el aire es reemplazado por vapor de agua purgado del
autoclave), La relación entre temperatura y presión en atmósfera saturada de agua es la indicada en la siguiente tabla
Presión (atm) en Temperatura
el interior °C
0.5 112
1 121
2 133
Si quedan restos de aire son necesarias temperaturas mayores para provocar la
misma presión en el interior
Empleo de la autoclave:
El autoclave de vapor es el aparato más utilizado para la esterilización de medios
de cultivo, soluciones, ropa de laboratorio, y emulsiones que no se desnaturalicen a temperaturas superiores a 100ºC.. En general la esterilización de estos materiales se realiza a (112-121ºC) durante 30-20 minutos. Estas condiciones pueden variar en función del tipo de material, carga microbiana y volúmenes a esterilizar.
Escuela de Extensión y Virtualidad
Ventajas
Rápido calentamiento y penetración del calor, destrucción de bacterias y
endosporas en corto tiempo, no deja residuos tóxicos, poco deterioro del material expuesto, es económico.
Desventajas
Corrosivo sobre ciertos materiales metálicos, no útil para material termo sensible.
1.1.2. Tindalización
o esterilización fraccionada a vapor fluente, El material se calienta a 80-100º durante
30 minutos, en días sucesivos, con periodos de incubación entre ellos. De esta manera se destruyen las células vegetativas, pero no las endosporas termo resistentes.
Las endosporas que sobrevivieron pueden germinar en el periodo de incubación.
desdiferenciadas como células vegetativas son destruidas en el calentamiento posterior. Esta técnica se puede emplear para esterilizar medios de cultivo que no se pueden calentar a temperaturas superiores a 100º sin alterar sus propiedades. El principal inconveniente de esta técnica es el consumo de tiempo. Actualmente tiene muy poco uso
1.1.3. Pasteurización:
Es un método que reduce la cantidad de microorganismos viables. No es un método
de esterilización pues no destruye esporas bacterianas. Es utilizada en la industria alimentaria. Hay dos tipos de tratamiento: la pasteurización a baja temperatura y mayor tiempo (63ºC/30 minutos) y la pasteurización a alta temperatura y corto tiempo (72ºC/15 segundos).
1.1.4. Uperización.
Variante de la pasteurización (ultrarrápida) en la que la temperatura se eleva por
encima de 150°C durante unos segundos
Escuela de Extensión y Virtualidad
1.2. Calor Seco
Su acción letal se debe a la oxidación de componentes celulares. El aire es mal
conductor del calor y el aire caliente entra más lentamente que el vapor en los materiales. Por ello se requiere más temperatura y tiempo de exposición que en la esterilización con calor húmedo. Puede utilizarse mediante flameado (incineración) o con hornos de aire caliente.
1.3. Flameado
Se aplica directamente la llama de un mechero. Se utiliza para la esterilización de
asas e hilos de siembra, pinzas, así como las bocas de tubos y matraces antes y después de utilizarlos. La incineración se emplea para destruir materiales de desecho contaminados.
1.4. Hornos de aire caliente
Alcanzan temperaturas mayores a 150ºC. Las condiciones usuales de esterilización
son de 160-180ºC durante 1-2 horas. Las ventajas son que penetra en materiales insolubles en agua (aceites, grasas) y es menos corrosivo sobre metales que el calor húmedo. Se utiliza para la esterilización de materiales secos, grasas, aceites y material de vidrio y metales termoresistentes.
1.5. Radiaciones Ultravioleta
Radiación con longitudes de onda entre 100 y 400 nm. Las de mayor actividad microbicida son las comprendidas entre 260-270 nm. Son absorbidas por lo ácidos nucleicos y aminoácidos aromáticos. Afectan a los ácidos nucleicos provocando errores en la duplicación y pérdida de viabilidad. Tienen bajo poder de penetración: solo se utilizan para la esterilización de superficies, (quirófanos, salas de envasado de medicamentos). Producen daños en ojos y piel.
1.6. Radiaciones Ionizantes
Tienen mayor energía que las ultravioleta y por tanto mayor poder de penetración. Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucléicos, proteínas y otros componentes celulares. Se utilizan para la esterilización de materiales termosensibles como jeringas, sondas, suturas, guantes, etc. No se utilizan para medios de cultivo o soluciones porque producen alteraciones de los componentes. Solo se utiliza a escala industrial por el alto costo .
Escuela de Extensión y Virtualidad
1.7. Filtración:
Consiste en el paso de un líquido o gas a través de filtros con poros lo
suficientemente pequeños para retener a los microorganismos por el tamaño. Es un método que no mata a los microorganismos.
Utilizados para esterilizar soluciones termosensibles. Retienen a los
microorganismos en la superficie. Pueden ser de diversos materiales (acetato de celulosa, nitrato de celulosa, policarbonato o teflón) en función del fluido a filtrar. Varían de tamaño de poro (0.22 µm - 0.45 µm) usualmente se utilizan los de 0.22 µm. Hay que tener en cuenta que este filtro usado en el laboratorio no retiene virus ni Micoplasma. La filtración también se utiliza para el recuento de microorganismos cuando están presentes en baja concentración. Una aplicación es el análisis bacteriológico de aguas.
Nota:
Es muy importante tener en cuenta que cada método se utiliza según los recursos disponibles tanto en la institución hospitalaria como en la zona geográfica, así pues hay métodos de los aquí mencionados que se encuentran en desuso en gran parte del territorio Colombiano, sin embargo en algunas zonas donde existe intermitencia en la prestación del servicio eléctrico, están pueden estar aún vigentes.
