EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DEL ACEITE ESENCIAL DE LA SEMILLA DE

LA CHOLUPA (PASSIFLORA MALIFORMIS) DE LA REGION DEL HUILA

Andrade Angie, Cifuentes Roberto, Londoo Carlos, Posada Javier, Valencia Hanna

PROBLEMA.
Basados en estudios anteriormente realizados a la Passiflora maliformis (cholupa), la
cual es cosechada en la regin suroccidental de Colombia (departamento del Huila),
se ha encontrado que la extraccin realizada a la semilla para la obtencin del aceite
esencial usando el mtodo de extraccin alcohlica presenta un bajo porcentaje de
recuperacin, por lo cual se propone mejorar la extraccin, caracterizacin y
determinacin de la actividad bactericida o factores farmacuticos (funcionalidad
antioxidante) del aceite esencial, por dos mtodos de extraccin, con el fin de mejorar
dicha obtencin.
OBJETIVOS GENERALES.
-

Extraccin de aceite esencial de la semilla de la cholupa por dos diferentes

tcnicas
Caracterizacin fsico qumica del aceite esencial extrado de la semilla de la
cholupa
Determinacin del factor antioxidante

OBJETIVOS ESPECIFICOS.
Extraccin del aceite esencial de la semilla de la cholupa por cuatro tcnicas
1. Destilacin por arrastre con vapor de agua
2. Extraccin con solventes voltiles
Caracterizacin fisicoqumica de aceite esencial extrado por medio de los siguientes
mtodos.
- Determinacin de la composicin qumica del aceite esencial extrado mediante
tcnicas instrumentales (cromatografa de gases acoplada a masas, HPLC, UV o UVvis, NIR)
- Caractersticas organolpticas
- Solubilidad
- pH
- Prueba de humo
-Viscosidad
- Cenizas
- Densidad

- ndice de refraccin
- Pureza
- ndice de acidez
- ndice de perxido
- ndice de yodo
- ndice de saponificacin
- Determinacin de la cantidad antioxidante por mtodos espectrofotomtricos (ABTS,
DPPH y DMPD)

MARCO TEORICO.
Colombia se destaca por su gran diversidad de germoplasma, el cual da a nuestro
pas un gran recurso gentico, en el cual existe el mayor nmero de especies de la
familia Passifloraceae, gracias a la gran variedad de hbitats que son posibles por el
clima.
Con el fin de conservarlo en cualquiera de sus forma reproductivas
(semillas, esquejes, tubrculos, etc) se han establecido en el mundo los
llamados bancos de germoplasma, en Colombia llamado ICA (Instituto Colombiano
Agropecuario): su misin consiste en ubicar, recolectar, conservar y caracterizar el
plasma germinal de las plantas que, por sus atributos son consideradas de inters
prioritario para beneficio de la humanidad. Los Fitomejoradores en Colombia
comenzaron las colectas de especies con potencial agrcola dirigido al mejoramiento
de plantas desde el ao 1942 hasta la fecha actual, con el objetivo de seleccionar
semillas de diferentes especies como coleccin, dando paso a la creacin inicialmente
a las colecciones de trabajo para cruzamientos y obtencin de nuevas variedades
De la familia Passiflorace, estas colecciones han sido muy importantes para el
desarrollo agrcola y animal del pas y esta labor la cumpli el ICA entre 1962 y 1994.
A partir de este ao el Instituto fue constituido como ente de Inspeccin Vigilancia y
control Sanitario y Fitosanitario del pas y la funcin de investigacin pas a la
Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria, CORPOICA. El ICA
entonces convirti las colecciones de trabajo que se recolectaron despus de casi
medio siglo en el SISTEMA DE BANCOS DE GERMOPLASMA PARA LA
ALIMENTACIN Y LA AGRICULTURA, cuyo objetivo es resguardar las semillas o sus
derivados de las diferentes especies y evitar que se pierdan o se extingan por la labor
agrcola que se ejerce en el campo colombiano o que sean desplazados por el desuso
a travs del avance de la tecnologa.
El ICA, Mediante la firma de un convenio interadministrativo de cooperacin tcnico
cientfica con la Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria Corpoica, ha
logrado mantener y conservar vivos todos los recursos de la Nacin dando paso a tres
subsistemas que conforman los bancos de Germoplasma para el sostenimiento del
agro mediante continuos monitoreos e investigaciones bsicas. A pesar de todos estos
estudios quedan gran variedad de especies vegetales que no han sido investigadas a
fondo pero que tienen gran potencial como la pasiflora maliformis, originaria del Sur
Macizo Colombiano, la cual por ser parte de las frutas tropicales su aporte de
constituyentes qumicos tales como antocianinas, flavonoides, vitamina C, A, E,

taninos y cidos orgnicos es alto, por lo que se han encontrado en ellas mltiples
funcionalidades biolgicas; razn por la cual se hall un gran inters en ella y en iniciar
esta investigacin.
Entre una gran variedad de especies con que cuenta el gnero Pasiflora, se
encuentra la Cholupa, un fruto redondeado de entre 4 a 5 cm de dimetro, de cascara
quebradiza marrn verdoso y cuando madura se torna de un color morado. Su interior
est compuesto por mltiples semillas envueltas en arilo carnoso de color amarillo y un
sabor acidulento, hacindolo agradable al paladar. Esta es una planta trepadora que
alcanza hasta 10 metros de longitud, posee hojas perennes ovaladas y flores
fragantes con ptalos de colores llamativos como el violeta y rojo. Esta es una fruta
poco conocida por todo el pas, a excepcin del suroccidente, en especial el
departamento del Huila de donde proviene la muestra para su estudio. En esta regin
se consume y se vende tmidamente en los mercados debido a que su cultivo es poco
productivo. A pesar de esto, es interesante determinar y estudiar el aceite extrado de
las semillas que al igual que la maracuy posee ciertos factores antioxidantes y
bactericidas. Este aceite esencial que es una fraccin voltil con sustancias
responsables de la aroma de la planta y con un potencial alto en la industria
cosmtica, de alimentos y farmacutico, se ha estudiado poco, razn por la cual se
desea mejorar su rendimiento de obtencin del aceite mediante tcnicas muy
conocidas como lo es arrastre por vapor de agua, extraccin con solventes etc.
METODOLOGIA
PREPARACION DE LA MUESTRA (SEMILLA).
La semilla se somete a un proceso de secado para evitar que la humedad afecte de
alguna forma la extraccin, para esto se deja en un horno a una temperatura entre 4050 C, por 3das; luego se tritura la semilla para aumentar la superficie de contacto y
obtener una mejor extraccin.
EXTRACCION POR ARRASTRE DE VAPOR.
Realizar el montaje del equipo como se muestra en la figura 1. Colocar
aproximadamente 500 mLde agua destilada en unKitazato(generador de vapor); en un
matraz de 500 mL con desprendimiento lateral colocar la muestra previamente
preparada y colocarlo en una manta de calor. Al tapar el matraz, cuidar que la
conexin de vidrio no se obstruya con trozos de la muestra pues de ser as, no habr
paso de la corriente de vapor.
Caliente con el mechero el Kitazato hasta ebullicin, con el fin de generar el vapor que
pasar por el matraz, extrayndose de esta manera el aceite esencial, el cual es
inmediatamente arrastrado por el vapor de agua en un proceso de codestilacin. Se
debe suspender el calentamiento cuando el volumen del destilado sea de 100 o 150
mL aproximadamente.
Del destilado extraer totalmente el aceite esencial colocando en un embudo de
separacin el destilado y separando la mayor parte de la fraccin acuosa. Al aceite
sobrenadante (unas cuantas gotas), agregue 5 mL de acetato de etilo para facilitar su
separacin.La fase acuosa se desecha y el extracto orgnico se colecta en un
Erlenmeyer o un vaso de precipitado, agregar la cantidad necesaria de sulfato de
sodio anhidro para eliminar el agua remanente. Filtre o decante el extracto seco y
colquelo en un vaso de precipitado.

Figura
1.
Montaje
equipo
de
extraccin

por arrastre de vapor de agua.

Tabla 1. Materiales y reactivos necesarios para la extraccin por arrastre de vapor.
Material
Kitazato de 500 mL
Matraz con desprendimiento lateral de 250 mL
Condensador
Termmetro
Embudo de separacin
Probeta de 250 mL
Beaker de 250 mL
Pipeta de 10 mL
Manta de calentamiento

Unid
1
1
1
1
1
1
2
1
1

Material
Pinza nuez
Aro metlico
Placa
Mechero
Reactivos
Sulfato de sodio anhidro
Acetato de etilo
Semilla de cholupa

Unid
2
1
1
1
0,1 g
5 mL

EXTRACCION POR SOLVENTES.

Medir en una probeta 110 mL de agua destilada y verter en el baln de tres bocas que
se acopla al equipo soxhlet, luego adicionar 140 mL de tolueno y verter en el baln.
Se ensambla el equipo como se ilustra en la figura 2. En un papel filtro se coloca
aproximadamente 100 g delasemilla previamente preparada y se envuelve en
diferentes proporciones, luego se coloca dentro del equipo soxhlet que se sostienecon
una pinza metlica, se acopla con un condensador de bolas; se coloca el solvente y
las perlas de ebullicin dentro del baln de tres bocas, y se asegura el baln a una
pinza metlica, en uno de los lados del baln colocar un termmetro y en el otro lado
un tapn, ponerlas mangueras en el condensador y abrir la llave del agua, verificar que
el agua de enfriamiento se encuentre circulando con un caudal moderado, luego
calentar en una plancha.

Figura 2. Montaje equipo soxhlet para extraccin con solventes voltiles.

Tabla 2. Materiales y reactivos necesarios para la extraccin por solventes.
Material
Baln de tres bocas de 500 mL
Equipo soxhlet
Condensador de bola
Plancha de calentamiento
Cartucho poroso
Pinza nuez
Probeta de 250 mL
Beaker de 250 mL

Unid
1
1
1
1
1
2
2
2

Reactivos
Tolueno
Agua destilada
Perlas de ebullicin

CARACTERIZACION FISICOQUIMICA DEL ACEITE EXTRAIDO.

Pruebas fsicas.
Color
1. Agregar un mL. De muestra en un tubo de hemlisis y observar a tras luz.
2. Anotar el color de la muestra as como cualquier cambio de color que pueda ocurrir
durante todo el proceso.
Olor
1. Agregar un mL. De muestra en un tubo de hemlisis.
2. Determinar cuidadosamente el olor de la muestra.
Solubilidad.
Se determinar en cada uno de los siguientes solventes de acuerdo a la tabla de
solubilidades de la farmacopea 24: (ver anexo tabla 1)

- Benceno
- Alcohol
- Agua
- Agua caliente
- Hexano
pH
1. Tomar el pH utilizando un pH-metro previamente estandarizado con solucin buffer
pH 9.0 y 4.0.
2. Colocar 3 mL. De muestra en un beaker e Introducir el electrodo a la muestra y
tomar el pH.
3. Enjuagar los electrodos del pHmetro previo a cada lectura y tambin tomar en
cuenta que tanto la solucin buffer como la muestra deben tener una temperatura de
25C al tomar la lectura.
Densidad
1. Pesar el picnmetro vaco y seco.
2. Llenar el picnmetro de aceite y enfriar a 25 C.
3. Colocar el tapn y verificar que no hayan burbujas.
4. Secar el exterior y la boca del capilar.
5. Pesar el picnmetro.
6. Calcular la densidad
ndice de refraccin.
1. Tomar la temperatura de trabajo (Temperatura Ambiente)
2. Colocar una gota de muestra en el prisma de medicin evitando la formacin de
burbujas
3. Determinar la lectura en el equipo.
4. Corregir la lectura mediante la siguiente formula:

corregido = observado +[(T ambiente T terica ) x 4 x 104 ]

Punto de humo
1. Colocar 5mL. De muestra en un baln de destilacin
2. Colocar un termmetro en la parte superior del baln de destilacin.
3. Colocar el baln en un bao de arena.

4. Colocar un mechero directamente en el bao, hasta observar la aparicin de un

humo blanco-azulado.
5. Determinar la temperatura.
Cenizas.
1. Pesar un gramo de muestra en un crisol de porcelana previamente tarado
2. Quemar la muestra con mechero hasta completa ceniza.
3. Enfriar y observar que el contenido este seco.
4. Agregar cido sulfrico concentrado poco a poco, flamear el crisol hasta la
desaparicin de vapores blancos.
5. Incinerar el residuo en la mufla a una temperatura de (800C 25/ hora).
6. Enfriar en desecador por 45 min. Y pesar.
7. Calcular por diferencia de peso la cantidad de cenizas totales mediante la siguiente
formula:

%C=

Y
x 100
X

Donde:
% C = Porcentaje de cenizas.
Y = Peso de muestra despus de incineracin
X = Peso de muestra antes de incineracin
ndice de acidez
1. En un matraz de tapn esmerilado disolver 5.0g de muestra en una mezcla de
volmenes iguales de Etanol-ter previamente neutralizada.
2. Agregar la solucin indicadora de Fenolftalena
3. Valorar con solucin 0.1 N de Hidrxido de Potasio hasta que la solucin
permanezca ligeramente rosa durante 30 segundos despus de la adicin.
4. Determinar el ndice de acidez mediante la siguiente formula:

I . A=5.61(V /m)
Donde:
I.A = ndice de acidez de la muestra
V = mL. De solucin de KOH 0.1 N usados en la valoracin.
5.61 = meq. De la solucin 0.1 N de la solucin de KOH.

m = peso en gramos de la muestra tomada.

ndice de yodo.
1. Colocar 0.15g de muestra en un matraz con tapn esmerilado
2. Agregar 15mL. De cloroformo y disolver.
3. Agregar lentamente desde una bureta 25mL. De solucin de yodo bromuro.
4. Reposar en un lugar oscuro durante 30 minutos, con agitacin ocasional.
5. Agregar 10mL. De solucin reactivo de yoduro de potasio y 100mL. De agua.
6. Titular con solucin 0.1 M de tiosulfato de sodio, agregando casi al final de la
titulacin 1mL. De solucin de almidn. Simultneamente realizar un blanco.
7. Determinar por medio de la siguiente formula:

I . I =(ba)0.01269 x 100/m
Donde:
I.I = ndice de yodo de la muestra
a = mL. Consumido de tiosulfato de sodio en la muestra.
b = mL. Consumidos por el blanco.
m = peso de la muestra en gramos.
0.01269= meq. De la solucin 0.1 M de tiosulfato de sodio.
ndice de perxido.
1. Pesar con exactitud 5.0 g de muestra, transferir a un matraz.
2. Adicionar una mezcla de 30mL. Con tres volmenes de cido actico glacial y dos
volmenes de cloroformo.
3. Agitar hasta disolucin y adicionar 0.5mL. De solucin saturada de yoduro de
potasio.
4. Reposar la mezcla por un minuto y adicionar 30mL. De agua.
5. Titular gradualmente con solucin 0.01 M de tiosulfato de sodio con agitacin
vigorosa y continuar hasta que casi desaparezca el color amarillo.
6. Adicionar 0.5mL.de solucin de almidn y continuar la titulacin, agitando
vigorosamente hasta que desaparezca el color azul. Correr un blanco.
7. Determinar mediante la siguiente formula:

I . P=1000 M [(ab)/m]
Donde:

I.P= ndice de perxido

a= mL. De tiosulfato de sodio gastados en titulacin.
b= mL. De solucin de tiosulfato de sodio gastados en la titulacin del blanco.
M= molaridad de la solucin.
1000= referencia a 1000 gramos de muestra.
m= peso en gramos de la muestra.
ndice de saponificacin.
1. Colocar en un matraz con tapn esmerilado 2.0g de muestra
2. Agregar 25mL. De solucin alcohlica de hidrxido de potasio 0.5 N.
3. Reflujar durante 30 minutos agitando constantemente por rotacin el contenido del
matraz.
4. Enfriar la solucin.
5. Valorar con solucin 0.5 N de cido clorhdrico, usando fenolftalena como indicador.
Realizar simultneamente un blanco.
6. Determinar mediante la siguiente formula: (ver clculos en anexo 6)

I . S=28.05 [(bV )/m]

Donde:
I.S = ndice de saponificacin de la muestra.
b = mL. De solucin 0.5 N de HCL gastados en la valoracin del blanco.
v = mL. De la solucin 0.5 N de HCL gastados en la valoracin de la muestra.
28.05 = meq. De la solucin 0.5 N de la solucin de hidrxido de potasio.
m= peso en gramos de muestra.

Fuentes Bibliogrficas.
https://www.sites.google.com/site/equipoquimicaexperimental6/practica-5-destilacionpor-arrastre-de-vapor
Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 10 edicin, tomo I y II, Mxico,
2000.
Pharmacopeia convention, United States Pharmacopeia USP 30 edition.
United States- Inc. 2007.

DIAZ J. Descubre los frutos exticos. Ediciones Norma-Capitel, Madrid 2004 p 316