BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE MEDICINA

INTERPERIODO 2016
MODELOS EXPERIMENTALES
PROTOCOLO DE INVESTIGACIN APLICADO A MODELOS
EXPERIMENTALES
EFECTIVIDAD DE LAS FOSFOLIPASAS D1 Y D2 CONTRA LA CONTRA LA
SUPRESIN DEL APETITO Y PROTECCIN AL SOBREPESO
REVISOR: DRA. MARA DEL CARMEN CABRERA MACIP

ALUMNO: JORGE MANZANO MACEDA

NDICE

Introduccin
.....3
Marco terico
Antecedentes generales
Antecedentes especficos4
Planteamiento del problema8
Objetivo General
Objetivos Especficos
Hiptesis

Justificacin ...9

Materiales y Mtodos..10

Resultados12

Conclusiones13

Propuestas... 14

Bibliografa15

1. INTRODUCCIN

Desde hace muchos siglos se han utilizado animales para experimentacin, con
fines de estudio de la anatoma y fisiologa, prueba de frmacos pero esto hasta
hace poco ms de cien aos.
Compartimos como seres vivos un noventa y cinco por ciento del genoma y solo
nos diferencia un cinco por ciento, por lo tanto aunque se han realizado
investigaciones neurobiolgicas en animales y cada especie tiene una percepcin
al dolor distinta entre otras diferencias, los animales tienen sentimientos, viven con
afecto hacia los otros de su especie, son afectos al ser humano en algunos casos
estas caractersticas pueden fallar, por su propio instinto, solo nos hace diferentes
el cinco por ciento del genoma es por esto que los animales merecen un trato
digno en su manejo, almacenaje, alimentacin y en todo caso en su posterior
sacrificio.
Hace muchos siglos cuando se conoci el concepto de tica en la antigua Grecia
pero pocos saban o ignoraban aplicarla en otro ser vivo que no fuese el ser
humano, se crea tambin en ese tiempo que los animales eran seres sin
sentimientos. Pero que tan cierto se debe estar a favor o en contra de su
utilizacin?
La tica juega un papel importante en la investigacin con animales que servirn
como modelo experimental, y aunque,
actualmente existen grandes avances en diferentes disciplinas de las
humanidades y ciencias sociales lamentablemente no siempre se tiene control en
la utilizacin de animales aunque existen leyes suficientes para el manejo, debe
ser manejado de manera que no entorpezca todo estudio, creo que deben existir
sanciones severas en el maltrato en animal en laboratorio y mal uso de ellos.
En Mxico y muchos pases del mundo, es completamente aceptable utilizar
animales como modelos experimentales ya que sin ellos el ser humano habra
disminuido su esperanza de vida.
Afortunadamente se cuentan otros modelos de estudio que complementa
investigaciones y evitan el uso de modelos experimentales, como modelos
matemticos, sistemas biolgicos in vitro, mtodos estadsticos que disminuyen en
gran parte procesos innecesarios y que son fcilmente comprobables mediante su
aplicacin.
Los animales deben sufrir el menor dao posible, tengamos en cuenta que
cualquier ser vivo debe tratarse con respeto apegado a las reglas.
Para aquellos que an estn en contra de la utilizacin de animales para
investigacin cientfica deben prestar un poco de atencin a las normas
establecidas por cada comit o institucin porque de no ser as tendremos
argumentos no fundamentados. En conclusin es una forma de agradecer al
animal un buen trato en los puntos mencionados anteriormente, sin ellos sera
imposible que nosotros y las generaciones prximas tengan un futuro mejor.
Nuestro deber tambin como seres con un coeficiente intelectual mayor es velar
por los derechos animales. No hay ciencia ni descubrimientos sin ellos, por ello,
deben ser valorados.
3

2. MARCO TERICO
2.1 ANTECEDENTES GENERALES
Gracias a los descubrimientos que hicieron hombres como Robert Hook y
Leeuwenhoek, debido a algo desconocido llamaron a la clula de diferentes
formas, posteriormente Schleiden, Schwann y Virchow y su trabajo llamado teora
celular, que hasta hoy es cierto, nos dice que la clula es lo que forma a los seres
vivos, que otras clulas se forman gracias a otras y que es lo ms bsico que
forma a los organismos vivos. De esto podemos partir desde seres con una sola
clula y otros con mltiples pudiendo ser diferentes, llamamos entonces a los
seres con una sola clula; unicelulares y los que poseen ms de una,
pluricelulares.
Si bien las clulas pueden estar solas o estar en conjuntos dependiendo del ser
vivo del que formen parte estn en peligro si se aslan, es decir trabajan como un
todo aunque tengan una funcin especializada, son muy parecidas entre ellas pero
realizan funciones extraordinarias y que a partir de elementos orgnicos: su
composicin, no basta mucho para darse cuenta que la unidad bsica de los seres
vivos es algo nada ordinario y que cada organelo tiene una funcin indispensable
y por lo tanto vital al organismo siendo este un todo de infinidad de clulas.
Las clulas pueden clasificarse de diferentes maneras son auttrofas y
hetertrofas sintetizan o no sus propios alimentos, procariotas o eucariotas sin
ncleo y organelos o con ncleo y diferentes organelos. Estas clasificaciones
tienen un porqu y no estn sujetas a cambios ya que cada clula tiene funciones
diferentes pero son parecidas entre ellas.
A pesar de las mltiples funciones que puede realizar una clula cada una sin
importar su funcin tienen funciones para producir la energa necesaria que
coadyuve a vivir y llevar a cabo sus funciones bsicas como crecimiento,
reproduccin, alimentacin y degradacin de desechos. Pero esto no ocurre de
manera espontnea debe haber reacciones exergnicas y endergnicas que le
permitan a la clula activar mecanismos de activacin, sin las enzimas esto sera
imposible ya que estas molculas de naturaleza proteica son las que trabajan en
conjunto con las reacciones para agilizar los procesos y que estos no daen a la
clula, las enzimas son como llaves que entran en una cerradura, hay cientos de
cerraduras (sustratos) pero la enzima actuar como una llave que es para una
sola cerradura, esto sucede en el mayor de los casos aunque no siempre puede
suceder as, tambin pueden acomodarse de forma que encajen en el sitio para
desencadenar una reaccin. La clula ocupa como energa un compuesto (ATPadenosin trifosfato) formado por elementos: adenosina, ribosa y tres grupos
fosfato donde en estos ltimos es donde se obtiene el mayor provecho para
obtener energa, generalmente el ATP proviene de la oxidacin de la glucosa.
4

En las investigaciones con modelos biolgicos es importante conocer el

metabolismo de las clulas, para el estudio del metabolismo se hace uso de dos
tipos de estudios: in vivo e in vitro.
Los estudios in vivo son los que estudian un todo y las reacciones que el modelo
bilgico podra tener, los ms importantes son los estudios con animales y
ensayos clnicos, los estudios in vitro son los que buscan mantener con vida una
parte del todo como ejemplo vulos y espermatozoides.
Los estudios in vivo buscan presentar un ejemplo final del trabajo, ver como un
todo a determinado organismo para comprobar algn proceso, la crianza de un
animal, la propagacin de una planta podra son ejemplos de este tipo de estudio.
Este estudio si bien puede ser ms exacto debido a que al ser un todo coadyuva a
que el fin que el investigador busca observar no vare puede presentar tantos
parmetros difciles de controlar a lo contrario del estudio in vitro.
Los estudios in vitro realizan estudios controlados, generalmente en algo
determinado como clulas, protenas son inexactos y buscan comprobar un
determinado proceso o reaccin, este tipo de observaciones son poco variables o
pueden ser amplificadas para su observacin en grande. Sin embargo el
investigador est sometido a la desventaja de tener una conclusin errnea de
algn proceso sino toma las medidas adecuadas como aislamiento de una
protena en estudio o la identificacin de una molcula sintetizadora.
Se considera una etapa critica el anlisis de resultados por la cantidad de
variables a medir en los estudios in vitro ya que al hablar de una clula se
considera un todo vivo que adems de alimentarse y crecer etctera tambin debe
eliminar aquello que no le es til, esto puede variar ya que clulas con funciones
especializadas diferentes pueden tener polimorfismos y dejar de cumplir en
totalidad las funciones necesarias para su propia supervivencia.
En el caso de los modelos in silico son de gran ayuda a representar procesos
biolgicos de manera virtual sus inicios han sido alentadores ya que proveen una
forma novedosa de tratar enfermedades y con ello evitar el uso de modelos
experimentales, no se descarta el uso de ellos, pero gracias la tecnologa su uso
ha disminuido.

2.2 ANTECEDENTES ESPECFICOS

La historia de la nutricin comenz desde que el hombre supo que era necesario
ingerir alimentos para obtener energa y no morir, a pesar de que el hombre
primitivo no conoca conceptos de metabolismo o digestin era consciente de que

los alimentos tenan una forma antes de entrar a su cuerpo y otra distinta al ser
desechados de este.
As mismo el hombre primitivo pas de ser nmada a ser sedentario,
establecindose en un lugar que consider ptimo para l y su familia con esto
surgi un nuevo problema: la alimentacin y entonces naci la agricultura como
forma de sembrar y cosechar parte de sus alimentos, claro esto no sera posible
sin el uso del empirismo. Con el paso del tiempo el hombre dio cuenta que la
comida tena distinto sabor si era sometida algo brillante, algo desconocido, el
fuego, algo trascendental para la humanidad, pero no fue suficiente hasta que el
hombre supo y desarroll sus propias tcnicas de conservacin de los alimentos.
Y claro descubri por error que algunos responsables de la putrefaccin de su
propia comida eran responsables de otros productos: la fermentacin.
Pero la nutricin no se detuvo all, ni los grandes investigadores se conformaron
sino nuevos paradigmas surgieron, aquello que se crea era cierto result ser
falso, la investigacin en humanos, en los propios humanos ese estigma que dur
siglos, el oscurantismo fren muchos avances, la nutricin actual nos ha enseado
casi todo lo que sabemos actualmente, desde un punto de vista fisiolgico,
bioqumico, biolgico, cada sistema tiene una funcin especfica y correlacionada
que sera imposible de cumplir de faltar los nutrimentos necesarios. El futuro de la
nutricin va encaminado a avances moleculares, bien sabido se sabe que la
unidad funcional de un organismo es la clula y ahora se sabe que todo empez
all, no se centra en lo general sino en lo particular.
La ingesta excesiva de caloras y / o insuficiente resulta en un aumento de la
utilizacin de nutrientes acumulacin de grasa en el tejido adiposo, los adipocitos
hipertrofia e hiperplasia y se asocian a menudo con la induccin de la inflamacin
de bajo grado del tejido adiposo. Esto conduce a un aumento de los niveles de
lpidos y mediadores de la inflamacin y promueve la resistencia perifrica a la
insulina que conduce finalmente a la DT2. La ingesta calrica y el consumo de
energa son estrictamente regulados por las hormonas y el sistema nervioso. Las
seales provocadas por las hormonas, nutrientes y las neuronas aferentes se
coordinan en el hipotlamo para controlar el balance energtico.
Las enzimas fosfolipasa D promueven la hidrlisis del enlace fosfodister de
fosfatidilcolina (PA), la generacin de cido fosfatdico y colina. PA es el mediador
intracelular de lpidos de las funciones biolgicas PLD . Sin embargo, PA est
estrechamente regulada y se puede convertir a otros lpidos potencialmente
bioactivos, incluyendo diacilglicerol, cido lisofosfatdico y cido fosfatidico cclico
(CPA). Las PLD se han descrito en varios organismos, incluyendo mamferos. Con
base en la homologa, se han identificado seis miembros de la familia PLD (PLD1
-PLD6). Sin embargo, slo se sabe que PLD1, PLD2 y PLD6 poseen actividad
enzimtica. PLD1 y PLD2 estn asociados con las membranas intracelulares y se
expresan en casi todos los tipos de clulas en el cuerpo.
Actividad de las PLDs est regulada por fosfatidilinositol-4,5-bifosfato, la protena
quinasa C, GTPasas de la familia ADP y la ribosilacin del factor de Rho. Mediante
6

la generacin de PA, PLD1 y PLD2 regulan mltiples cascadas de sealizacin.

PA asocia directamente al objetivo de la rapamicina en mamferos (mTOR) y
promueve su activacin. Las PLDs tambin regulan directamente la transcripcin
mediante la inhibicin de la accin de los receptores del proliferador de
peroxisoma activados (PPAR). Por otra parte, PA promueve directamente la fisin
y la fusin de vesculas. Por lo tanto, PLD1 y 2 son enzimas esenciales que
regulan el trfico vesicular, la secrecin, la endocitosis, as como receptor de
sealizacin. PLDs y PA parecen estar tambin implicados en la supervivencia, el
crecimiento y la invasin de los tumores, probablemente por activar dicha mTOR,
la estimulacin de la migracin celular, la promocin de la autofagia y
vascularizacin del tumor. Adems, PLD podra promover la regeneracin del
msculo esqueltico y participar en algunas enfermedades neurodegenerativas.
La actividad PLD aumenta bajo la estimulacin de las plaquetas y est implicado
en grnulos densos del proceso exocitosis.
Papel de la Fosfolipasa D1 como marcador para la deteccin de diabetes latente
auto-inmune y diabetes tipo 2 en adultos
La Diabetes Latente Autoinmune en adultos (LADA) representa el 12% de todos
los casos de diabetes en los estudios epidemiolgicos, con una incidencia dos o
tres veces mayor que la de diabetes mellitus tipo 1 "clsica" (DM1) en la poblacin
general. Sin embargo, este trastorno no est bien investigado comparacin con la
DM1 clsica y diabetes mellitus tipo 2 (DM2). LADA comparte varias
caractersticas con DM1 clsica, es tambin conocido como DM1 o DM1 de
progreso lento. El tratamiento de la LADA y DM1 es similar. Sin embargo, debido a
las similitudes en la presentacin clnica de los pacientes con DM2 o LADA en las
primeras etapas, muchos casos de LADA quedan mal clasificados como DM2. Por
otra parte, los requisitos de tratamiento de los pacientes con LADA pueden ser
diferentes de los que tienen diabetes tipo 2 y su control glucmico es
relativamente pobre. Por lo tanto, distinguir la etapa temprana LADA y DM2 es de
gran importancia.
El diagnstico de LADA se basa en la presencia de cuatro grandes
autoanticuerpos circulantes de los islotes; autoanticuerpos descarboxilasa del
cido glutmico (GADA), existen insulinoma antgeno asociado-2 (IA-2A), los
autoanticuerpos de insulina (IAA) y autoanticuerpos de clulas de islotes (ICA),
que tambin estn presentes en T1DM clsica. Entre ellos, GADA es considerado
para ser el biomarcador ms sensible y especfica de LADA. Aunque la tasa de
positivos y titulacin de autoanticuerpos podran ser tiles para la estratificacin
del riesgo y la eleccin teraputica precisa en LADA, ambos, son parmetros
relativamente bajos en los pacientes LADA comparacin con los de DM1 clsica.
Por otra parte, entre el 2% y el 5% de los pacientes con diabetes autoinmune
(DM1 y LADA) son negativos para los anticuerpos clsicos del (GADA, IA-2A, IAA
y la CIA). El Por lo tanto, la bsqueda de nuevos autoanticuerpos continua.
Aunque los nuevos autoanticuerpos, como las especficos para el transporte de
zinc 8 (ZnT8A) tienen la aprobacin de potenciales biomarcadores no presentan
7

especificidad y sensibilidad superior en la deteccin de LADA. Por lo tanto, la

identificacin de una nueva protena plasmtica que puede ser efectivamente
utilizada para distinguir las primeras etapas LADA y DM2 es de gran importancia.
Los autoanticuerpos se encuentran con frecuencia durante el perodo preclnico de
la DMT1 y LADA. Estos trastornos comparten autoanticuerpos similares y la
gestin clnica y no son difciles de distinguir debido a las diferencias en la edad de
aparicin de la diabetes. Sin embargo, es difcil distinguir etapa temprana LADA y
DMT2 en los adultos debido a las similitudes en las caractersticas clnicas; Por lo
tanto, muchos casos de LADA en etapa temprana permanecen clasificados
errneamente como DM2. As, la identificacin de una protena de plasma para la
distincin ms eficaz entre fase temprana LADA y DMT2 es de gran importancia.
GPLD1 es una protena plasmtica de mamferos (110-120 kDa). El hgado y los
islotes pancreticos son dos posibles fuentes de GPLD1 y GPLD1 ADNc se ha
aislado de ambos rganos en mltiples especies. Sin embargo, los estudios han
demostrado que el cerebro, rin, msculo, inmunocitos y clulas inflamatorias
tambin pueden ser fuentes [22]. La expresin de mRNA GPLD1 en el hgado es
ms alta que en otros rganos.
Por otra parte, la acumulacin de evidencia apoya las asociaciones entre las
enfermedades autoinmunes, con co-morbilidad autoinmune que suele implicar
DM1 o enfermedad tiroidea autoinmune (AITD) y la esclerosis mltiple;
enfermedad inflamatoria del intestino (IBD), T1DM o AITD y la artritis reumatoide;
o DM1 y AITD.
Adems, el potencial papel regulador de GPLD1 en las reacciones inflamatorias
crnicas podra ser otro mecanismo que subyace al desarrollo de LADA. los datos
sugieren que la inflamacin crnica de los islotes pancreticos se conecta con la
patognesis de DMT1. En la DMT1, los componentes de las respuestas
inflamatorias que contribuyen a la destruccin de la clula incluyen las clulas
asesinas naturales (NK) CD4 + y clulas T CD8 +, macrfagos, y la relacin
potencial entre la autoinmunidad clulas de los islotes y los marcadores
inflamatorios puede ser similar en LADA. Es posible que por hidrlisis de los
anclajes GPI de algunas protenas de la membrana inflamatorias y la regulacin
positiva de la expresin de citoquinas de macrfagos, GPLD1 puede jugar un
papel importante en la inflamacin y en la patognesis de LADA. Adems, GPLD1,
localizada principalmente en el aparato de Golgi, retcula endoplsmico, y las
vesculas, pueden entrar en la va de procesamiento de MHC-I (Complejo mayor
de histocompatibilidad), en funcin de genes especficos relacionados con IDDM
( diabetes mellitus insulino-dependiente). Otros informes han indicado que la
relacin entre GPLD1 en plasma y la resistencia a la insulina es controvertida.

3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Son eficaces las fosfolipasas D1 y D2 contra la supresin al apetito y proteccin

contra el sobrepeso?

4. OBJETIVOS
4.1 OBJETIVO GENERAL
Comprobar si las fosfolipasas D1 y D2 son eficaces contra la supresin del apetito
y proteccin contra el sobrepeso.
4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
-Comprender la fisiopatologa del apetito y saciedad y su relacin con el
sobrepeso.
-Analizar el ciclo molecular de las Fosfolipasas D y aplicar un estudio en modelos
experimentales con el fin de establecer relacin.
-Comprobar mediante resultados obtenidos en modelos experimentales si existe
proteccin al sobrepeso y supresin del apetito.
5. HIPTESIS
Las fosfolipasas D1 y D2 son eficaces contra la supresin del apetito y proteccin
contra el sobrepeso.
Las fosfolipasas D1 y D2 no son eficaces contra la supresin del apetito y
proteccin contra el sobrepeso.
Las fosfolipasas D1 y D2 no tienen relacin contra la supresin del apetito y
proteccin contra el sobrepeso.

6. JUSTIFICACIN
El exceso de peso corporal (sobrepeso y obesidad) es reconocido actualmente
como uno de los retos ms importantes de salud pblica en el mundo, dada su
magnitud, la rapidez de su incremento y el efecto negativo que ejerce sobre la
salud de la poblacin que lo padece. El sobrepeso y la obesidad incrementan
significativamente el riesgo de padecer enfermedades crnicas no trasmisibles
(ECNT), mortalidad prematura y el costo social de la salud, adems de que
reducen la calidad de vida. Se estima que 90 % de los casos de diabetes mellitus
9

tipo 2 son atribuibles al sobrepeso y la obesidad. Otras ECNT relacionadas son la

hipertensin arterial, las dislipidemias, la enfermedad coronaria, la apnea del
sueo, la enfermedad vascular cerebral, la osteoartritis y algunos cnceres (de
mama, esfago, colon, endometrio y rin, entre otros). La obesidad (ndice de
masa corporal = 30 kg/m) es una enfermedad sistmica, crnica y multicausal, no
exclusiva de pases econmicamente desarrollados, que involucra a todos los
grupos de edad, de distintas etnias y de todas las clases sociales. Esta
enfermedad ha alcanzado proporciones epidmicas a nivel mundial, razn por la
que la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) denomina a la obesidad como la
epidemia del siglo XXI.
En la actualidad, Mxico y Estados Unidos, ocupan los primeros lugares de
prevalencia mundial de obesidad en la poblacin adulta (30 %). En la actualidad,
ms del 70 % de la poblacin adulta (mujeres, 71.9 %; hombres, 66.7 %), entre los
30 y los 60 aos, tiene exceso de peso. La prevalencia de sobrepeso es ms alta
en hombres (42.5 %) que en mujeres (37.4 %), mientras que la prevalencia de
obesidad es mayor en las mujeres (34.5 %) que en los hombres (24.2 %).
El presente estudio busca contribuir al nuevo conocimiento, dirigido a
profesionales de la salud, investigadores, estudiantes y sociedad, sobre la
obesidad y sobrepeso y factores protectores que buscan como objetivo que este
grave problema de salud pblica disminuya, as mismo se desea que a partir de
este estudio surjan otros ms que favorezcan un diagnostico y tratamiento
adecuado a cada individuo desde el punto de vista nutricional y mdico a partir de
la investigacin.

7. MATERIALES Y MTODOS
Ratones
Los animales fueron alojados en jaulas (mx. 5 ratones por jaula) que contuvieron
una cama de aserrn y un nido hecho de pauelos de papel. Las jaulas se
mantuvieron a 23 C y se sometieron a una fase de luz de 12 horas seguido de
una fase de oscuridad de 12 horas. Los ratones fueron alimentados con una dieta
de control con croquetas ad libitum ( a libre demanda) y tuvieron acceso ilimitado
al agua durante todo el estudio. Los ratones fueron mantenidos siguiendo las
directrices para el cuidado y bienestar animal, de acuerdo con TierschutzVersuchstierverordnung con la aprobacin del gobierno del distrito de la Baja
Francfila (Control Animal de la Baja Francfila.). Se llev a cabo la eutanasia por
dislocacin cervical, en un rea separada lejos de otros animales y se hicieron
todos los esfuerzos para minimizar el sufrimiento. Ninguno de los animales
murieron o se enfermaron durante el desarrollo de esta investigacin. Todos los
estudios con animales fueron aprobados por el comit de bienestar de los
animales de gobierno del distrito de la Baja Francfila y los lineamientos de la
Unin Europea.
10

Peso y composicin corporal

Medicin de peso corporal se realiz semanalmente desde el nacimiento hasta la
semana 20. La composicin del cuerpo, incluyendo la masa grasa, masa magra y
el contenido de fluidos libres, se analiz por Resonancia Nuclear Magntica (RMN)
utilizando analizador de la composicin corporal Minispec LF50 de Bruker de
acuerdo con el fabricante e instrucciones de (Bruker Optik, Ettlingen, Alemania).
Para la diseccin de los rganos, los ratones fueron sacrificados por dislocacin
cervical. Tres depsitos adiposos (EpiWAT, SubWAT y BAT), cudriceps, el bazo,
el hgado, el hipotlamo, el pncreas, el corazn y los riones fueron disecados,
ponderados y rpidamente congelados en nitrgeno lquido.
Prueba de la insulina y la tolerancia a la glucosa
Una prueba de tolerancia a la insulina (ITT) se llev a cabo de 16 semanas
despus del nacimiento. Los ratones se mantuvieron en ayunas 4 horas antes del
experimento. Para esta prueba, las mediciones de glucosa se realizaron antes y
despus de la inyeccin intraperitoneal de insulina humana solucin (19278,
Sigma-Aldrich, Alemania) en solucin salina Dulbecco fosfato tamponada (14190094, Invitrogen Life Technologies). 0,5 unidades / kg de insulina fueron inyectados
segn el peso corporal. Una gota de sangre se recogi de la punta de la cola
directamente sobre la tira de ensayo para la medicin de glucosa en sangre. AccuChek Inform II tiras (Roche, Alemania) fueron utilizados en un glucmetro AccuChek Performa (Roche, EE.UU.).
Una prueba de tolerancia a la glucosa (GTT) se realiz a las 18 semanas despus
del nacimiento. Los ratones se mantuvieron en ayunas 13 horas antes del
experimento. Para esta prueba, las mediciones de glucosa se realizaron antes y
despus de la inyeccin intrapericrdica peritoneal de solucin al 20% estril de
glucosa (HN06.2, Carl Roth, Alemania) en solucin salina tamponada con fosfato
de Dulbecco s (14190-094, Life Technologies, Invitrogen). 2 g / kg de glucosa se
inyect segn el peso corporal. La recogida de sangre y la medicin de glucosa se
realizaron como para ITT. Un dispositivo de restriccin se utiliz con el fin de
recoger las muestras de sangre para GTT y ITT.
Anlisis de lpidos en plasma y las hormonas
Las muestras de sangre se recogieron por incisin de la cola usando un
dispositivo de restriccin. El contenido de plasma FFA se analiz utilizando un kit
NEFA Wako-C (Wako NEFA-HR2) como se describe en el manual del fabricante.
El glicerol y los triglicridos en el plasma se analizaron usando el reactivo de
glicerol libre (F6428, Sigma, Alemania). contenido de insulina en plasma se midi
usando kits de ensayo de suspensin de perlas de matriz para inmuno-ensayo
siguiendo las especificaciones del fabricante (Bio-Plex Pro Prueba de Diabetes en
Ratones, Biorad, EE.UU.) en un instrumento Bio-Plex serie 100 (Biorad, EE.UU.).
Medicin del metabolismo energtico
11

Para la ingesta de alimentos, consumo de oxgeno y mediciones de disipacin de

dixido de carbono, los ratones fueron alojados individualmente y monitoreados
mediante el uso de un animal de laboratorio PhenoMaster sistema de monitoreo
(TSE Systems) como se describi anteriormente. Todos los ratones se
mantuvieron en un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas a 22 C con un acceso sin
restricciones a los alimentos y el agua. El gasto de energa y la tasa de
intercambio respiratorio fueron calculados a partir de datos de calorimetra
indirecta como se describe. Los ratones se familiarizan con las botellas de bebidas
individuales de vivienda y durante al menos 48 h antes de fenotipificacin
metablica. A continuacin, las mediciones se realizaron en un intervalo de 10
minutos durante cinco das consecutivos. Los datos de las primeras 24 h fueron
excluidos de todos los anlisis tanto, los resultados incluyen datos de ms de
cuatro ciclos de luz / oscuridad. Los resultados que se muestran en los grficos de
dispersin son un promedio de cada hora y los grficos de barras muestran el
promedio de cada ciclo de luz / oscuridad.
Realimentacin despus del ayuno
Todos los ratones se mantuvieron en un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas a 22
C. Despus de 6 das, los ratones se mantuvieron en ayunas durante la noche
durante 16 horas con acceso libre al agua. La comida fue restaurada despus del
perodo de ayuno y las mediciones se realizaron cada 10 minutos durante 24
horas.
PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR)
Se aisl el ARN usando reactivo QIAzol (reactivo de lisis QIAzol, 79306, QIAGEN,
EE.UU.) segn las instrucciones del fabricante. El ARN total se transcribe en ADN
complementario usando la primera sntesis de cadena de cDNA Kit (K1612,
Thermoscientific, Lituania) segn las instrucciones del fabricante. qPCR se realiz
utilizando el FastStart universal SYBR Green Master (Roche) y los cebadores.

8. RESULTADOS
Los ratones del grupo PLD1 y PLD2 presentan un mayor peso corporal y la grasa
corporal.
Se ha informado de ambas isoformas de la fosfolipasa D que se expresa de forma
ubicua en diferentes rganos y tejidos. Con el fin de corroborar estos resultados,
se analiz la expresin de ARNm de ambas isoformas de la PLD en los rganos
de los ratones de tipo salvaje por prueba qPCR. De acuerdo con observaciones
anteriores, la expresin de PLD1 y PLD2 se encontr en todos los rganos
analizados ( tejido blanco y tejido adiposo marrn, corazn, hipotlamo, rin,
pncreas hgado y el bazo). Es de destacar que se observ una alta expresin
hipotalmica de PLD2.
12

Las PLD y PLD2 suprimen el consumo de alimentos

la supresin de enzimas PLD promueve balance energtico positivo en los ratones
que explica aumento de la acumulacin dependiente de la edad de la grasa en
estos animales.
Los ratones PLD1 y PLD2 presentan respuesta normal a la saciedad
El aumento de la ingesta de alimentos de los ratones agotados PLD1 o PLD2 no
se debe a un defecto en el mecanismo de la saciedad, pero es ms probable que
sea debido a las seales de adiposidad.
La supresin de PLD1 o PLD2 resulta en una alterada expresin de genes
relacionados en la regulacin con el consumo de alimentos en hipotlamo.
cidos grasos libres en circulacin estn elevados en ratones con supresin para
PLD1 o PLD2.
La supresin de PLD1 y PLD2 resulta en resistencia a la insulina e intolerancia la
glucosa.
Mediante mediciones de concentraciones de glucosa se observ que existe
intolerancia la glucosa cuando la fosfolipasa D est ausente. La deficiencia de
enzimas PLD result en el desarrollo de resistencia a la insulina caracterstica del
estado pre-diabtico.
9. CONCLUSIONES
Aunque en otros estudios, la supresin de las fosfolipasas D con actividad
enzimtica (D1 y D2) est comprobada que es favorable para ciertas patologas
como cnceres de mama o Alzheimer.
Las fosfolipasas D (PLD) han demostrado ser a partir de este estudio factores
asociados protectores contra el sobrepeso y supresoras del apetito lo cual es un
avance en la comprensin de la epidemia del siglo 21; la obesidad y sobrepeso,
de la cual derivan las enfermedades crnicas no transmisibles que cobran muchas
muertes al ao, no solo en pases desarrollados sino tambin en aquellos en vas
de desarrollo como Mxico y que es ya un gran problema de salud pblica.
Con este estudio queda demostrado que la deficiencia de fosfolipasas D
( isoformas D1 y D2) no afecta y los individuos puede llevan una vida
aparentemente normal, pero una falta de las isoformas D1 y D2 contribuye al
aumento del apetito de un 15 a 18% este porcentaje es significativo, con el paso
del tiempo, los modelos experimentales desarrollaron sobrepeso, posteriormente,
la homeostasis metablica se afect provocando otros trastornos tales como
incremento de cidos grasos libres en sangre y resistencia a la insulina y glucosa.
13

La fosfolipasa D1 puede no estar asociada al desarrollo de diabetes latente

autoinmune, pero es posible como un marcador para su deteccin oportuna.

10. PROPUESTAS

Sera importante realizar un estudio de la deficiencia de fosfolipasa D2 y su papel

en la disminucin del gasto de energa y la actividad incrementada en la fase
nocturna a partir de modelos experimentales y de cabida a nuevos estudios. Se
considera importante ya que la higiene del sueo est afectada en estos tiempos y
la poca utilizacin de la energa no sea necesariamente debido al estilo de vida de
los estudiados, podra ser consecuencia de la falta de las isoformas en poblacin
mexicana, asociado a otros factores no mencionados en esta investigacin ya que
no se consideran pertinentes.

14

13. BIBLIOGRAFA
Trujillo Viera J, El-Merahbi R, Nieswandt B, Stegner D, Sumara G (2016)
Phospholipases D1 and D2 Suppress Appetite and Protect against Overweight.
PLoS ONE 11(6): e0157607. doi:10.1371/journal.pone.015760

Qin W, Liang Y-Z, Qin B-Y, Zhang J-L, Xia N (2016) The Clinical Significance of
Glycoprotein Phospholipase D Levels in Distinguishing Early Stage Latent
Autoimmune Diabetes in Adults and Type 2 Diabetes. PLoS ONE 11(6): e0156959.
doi:10.1371/ journal.pone.0156959

15