Electroforesis

Guao V.*; Vivas M.*; Zapata J.*

LABORATORIO DE BIOQUMICA
Grupo 3
*Escuela Politcnica Nacional, Facultad de Ingeniera Qumica y Agroindustria
Quito, Ecuador
e-mail: guano.valeria@est.epn.edu.ec, vivas.miguel@est.epn.edu.ec, zapata.joselyn@est.epn.edu.ec

Resumen: El informe detallado a continuacin tuvo como fin la determinacion de la masa molecular relativa de muestras de
algunas protenas, el cual se llev a cabo mediante una tcnica simulada virtualmente denominada electroforesis, la misma que
permiti establecer el peso molecular de muestras a partir de protenas de peso molecular conocido. Dentro de cada analisis se
logr establecer las siguientes afirmaciones: un incremento de potencial afect a todas las protenas por igual, lo cual la
movilidad relativa entre ellas no vari unicamente aport a una disminucin de tiempo de anlisis; la concentracin de
acrilamida es inversamente proporcional a la movilidad relativa; la operacin matemtica antilogartmica y la grafic
generada Log (Mr) vs Rf (Mr= masa relativa, Rf= movilidad relativa) permiti la conclusin del peso molecular en [].
Palabras clave: protenas, electroforesis, masa molecular, movilidad relativa, acrilamida, concentracin, potencial.
Abstract: The report detailed below was aimed the determination of the relative molecular mass of samples of some proteins,
which was carried out by a technique, simulated virtually, called electrophoresis , it could establish a molecular weight of
sample proteins from protein molecular weight known . Within each analysis it was established the following statements:
increased potential affect to all proteins alike, whereby the relative mobility between them was not varied only contributed to a
decrease in analysis time; acrylamide concentration is inversely proportional to the relative mobility; the antilogarithm
mathematical operation and the graphics generated Log (Mr) vs Rf (Mr = relative mass, Rf = relative mobility) allowed the
conclusion of molecular weight in [Da].
Keywords: protein electrophoresis, molecular mass, relative mobility, acrylamide, concentration, potential

1 .MATERIALES Y METODOLOGA

TBE 5x
Protogel

1,2 ml
4,74 ml

TEMED

8 L

Persulfato amnico al
10%

80 L

Se utiliz un simulador virtual[1]

2. TABLAS DE DATOS Y DIAGRAMAS
Tabla 1. Propiedades de la poliacrilamida
Propiedad

Poliacrilamida

Estado de agregacin

Slido

Concentracin
Frmula molecular

(Portela, 2003) [3]

Tabla 3. Gel de corrida Vs un gel concentrador

7,5; 10; 12 y 15%.

(C3H5NO)n

Gel concentrador

Gel separador

Peso molecular

71 [g/mol]

Poros grandes

Poros pequeos

Nmero CAS

9003-05-8

4% de poliacrilamida

10-20 % de
poliacrilamida
La solucin tamponante
utilizada tiene un pH
bsico
Separa los componentes
de la muestra

La solucin tamponante
utilizada tiene un pH cido
(Bioqumica, 1998) [2]
Tabla 2. Composicin detallada del gel de poliacrilamida
Composicin
Agua

Gel de poliacrilamida
al 15%
5,97 ml

Concentra la muestra

(Jorrn, 2006) [4]

3. CLCULOS
Pesos moleculares determinados mediante el grfico log (Mr)
Vs. Movilidad relativa, dentro del simulador

de acrilamida
en gel
Voltaje []
Peso
molecular []

100
82295

200
2592
1

200
6153
8

50
5026
1

200
9584
2

4. RESULTADOS Y DISCUSIN
Tabla 3. Ejercicio 3(Continuacin)
Tabla 1. Ejercicio 1
Prob. 1
Concentracin
de acrilamida
en gel
Voltaje []
Peso
molecular
[]

10%

100
81191

Prob.
2

Prob.
3

Prob.
4

Prob.
5

12%

12%

10%

15%

150
2094
2

200
6050
9

100
6173
8

100
4933
4

Concentracin
de acrilamida
en gel
Voltaje []
Peso
molecular []

Prob.
6
12%

Prob.
7
10%

Prob.
8
10%

Prob.
9
7.5%

Prob.
10
12%

100
5593
6

150
13101

200
21900

100
44211

50
16673

Ejercicio 1: influencia de la diferencia de potencial aplicada.

Tabla 1. Ejercicio 1(Continuacin)

Concentracin
de acrilamida
en gel
Voltaje []
Peso
molecular []

Prob.
6
12%

Prob.
7
7.5%

Prob.
8
10%

Prob.
9
15%

Prob.
10
12%

150
5863
3

150
13477

150
21921

100
46037

150
15293

Prob.
2
10%

Prob.
3
10%

Prob.
4
10%

Prob.
5
7.5%

200
2373
6

150
7369
8

100
5095
3

100
9719
5

Tabla 2. Ejercicio 2
Prob. 1
Concentracin
de acrilamida
en gel
Voltaje []
Peso
molecular []

7.5%

200
80942

Tabla 2. Ejercicio 2(Continuacin)

Concentracin
de acrilamida
en gel
Voltaje []
Peso
molecular []

Prob.
6
12%

Prob.
7
7.5%

Prob.
8
10%

Prob.
9
15%

Prob.
10
7.5%

100
5791
6

150
13643

50
20623

100
44021

100
44284

Prob.
3
7.5%

Prob.
4
10%

Prob.
5
7.5%

Tabla 3. Ejercicio 3
Prob. 1
Concentracin

7.5%

Prob.
2
10%

En el ejercicio 1 se pudo notar que cuando se aumenta el

potencial se afectan todas las bandas de manera igual, por lo
cual la movilidad relativa al ser una relacin de las bandas no
vara. Para el caso de los patrones lo nico que cambia es que
al aumentar el potencial se da un avance mucho ms rpido de
dichos patrones y esto produce que la electroforesis tarde
menos tiempo.
Ejercicio 2: Influencia de la concentracin de acrilamida.

En el ejercicio 2 cuando se aumenta la concentracin de

acrilamida ocurre que los patrones se desplazan menos, por lo
tanto entre mayor concentracin la movilidades irn
disminuyendo, una de las razones fsicas por las que se da esto
es porque el gel al tener mayor concentracin de acrilamida
tiene poros ms pequeos esto hace que la protena tenga ms
dificultad en avanzar.

Ejercicio 3: Determinacin de la masa molecular de protenas

problema.

[3] PORTEA,C.,(2003), Reconocimiento de factores de

ADN, Chile:USC. [en lnea]. Recuperado de
https://books.google.com.ec/books?id=LoeTWLXc4WEC&pr
intsec=frontcover&hl=es#v=onepage&q&f=false
[4] JORRN,V.,(2006), Electroforesis desnaturalizante, [en
lnea]. Recuperado de
http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/16%20ELECTROFORESIS%20GELES%20PAA.p
df

Ejercicio 3 debemos tener en cuenta que para la obtencin de

los pesos moleculares relacionamos la movilidad relativa con
el logaritmo peso molecular, esto representado grficamente
da una lnea inclinada en donde conociendo la movilidad
relativa de la protena e interpolando podremos obtener el
peso molecular, si observamos la muestra problema 1 su peso
molecular es muy alto comparado con la muestra 7 , pero si
efectuamos el logaritmo de los pesos moleculares tendramos
que la muestra 1 es igual a 4.98 y muestra 7 es igual 4.11, con
esto podemos concluir que si bien en la grfica la diferencia
de unidades en la parte logartmica no es muy amplia esto no
quiere decir que los pesos moleculares sern iguales o
parecidos .
5. CONCLUSIONES
En el ejercicio 1 los patrones avanzan ms rpido al aumentar
el potencial.
En el ejercicio 2 los patrones tienen menor movilidad al
aumentar la concentracin de acrilamida.
En el ejercicio 3 conociendo la movilidad relativa podemos
interpolar en la grfica Log (Mr) vs Rf para obtener los
valores del peso molecular.
6. RECOMENDACIONES
El manejo adecuado del programa ayuda a la obtencin de
buenos resultados, ya que de no contar con el programa
necesario para la ejecucin del simulador no se lograr el
decreto de los mismos. Dentro de la ejecucin es importante
realizar cada problema en diferentes circunstancias para
constatar el cambio que se genera en cada circunstancia.
7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
[1]Biomodel.
[en
lnea].
Recuperado
http://biomodel.uah.es/lab/inicio.htm

de

[2] FUENTES,X.,(1998), Bioqumica, Espaa:Revert. [en

lnea].
Recuperado
de
https://books.google.com.ec/books?id=cKGyh_81voC&pg=PA173&dq=poliacrilamida&hl=es&sa=X&redir_esc
=y#v=onepage&q=poliacrilamida&f=false

[5] Deutscher, M., (1998), Mtodos en enzimologa, Mxico:

Academic Press [en lnea]
https://books.google.com.ec/books?id=zTiRJHpKIQoC&pg=
PA425&lpg=PA425&dq=Garfin+DE.+One+dimensional+gel
+electrophoresis.+Methods+in+enzymology.+vol+182.+Acad
emic+press.1990&source=bl&ots=Y05QGIv8F&sig=3sKGlYhYF4jaISbBS7n66XqAQNo&hl=es&sa=
X&ved=0CB8Q6AEwAGoVChMI8ryu0LOIxgIVzlqMCh2E
QgBW#v=onepage&q=Garfin%20DE.%20One%20dimension
al%20gel%20electrophoresis.%20Methods%20in%20enzymol
ogy.%20vol%20182.%20Academic%20press.1990&f=false

ANEXO
Ejercicio 1: influencia de la diferencia de potencial aplicada.

Ejercicio 2: Influencia de la concentracin de acrilamida.

Ejercicio 3: Determinacin de la masa molecular de protenas problema.

PREGUNTAS:
1.- Qu es la movilidad relativa?

La movilidad relativa (Rf) es una medida convencional de la movilidad de la protena relativa al frente de migracin y se define
como la distancia desde el inicio del gel separador hasta el centro de cada banda dividida entre la distancia a la que ha migrado
el in lder. [1]
Rf =

distancia que migra una determinada protna

distancia que migra el frete del gel

2.- A partir de la recta obtenida en el simulador, podra determinar la movilidad relativa de una protena cuyo peso
molecular es de 140KDa; y de una protena cuyo peso molecular es de 5KDa? S, no, por qu?
S, porque conociendo los pesos moleculares podra calcular el Log (Mr), esto me permitiera relacionar por medio de la grafica
Log (Mr.) vs Rf, o tambin podramos relacionar con la ecuacin de la rectar que presente dicha grafica.

y = mx + b
Donde:
y = log(Mr)
x = Rf

m =-1.36

b =5.13

Remplazando:
log(Mr) = m(Rf) + b

Ec. De la grfica

log(Mr) b
= (Rf)
m
Primer caso 140 kDa

() .
= ()
.
= 0.012

Segundo caso 5 KDa

5

1000
= 5000
1

log(5000) 5.13
= ()
1.36
=1.052