Micropropagación de Saintpaulia Ionantha H. Wendel Var. Bangle Blue.

Huayllu-Bios. N 7.
Diciembre 2013
Micropropagacin de Saintpaulia ionantha H.

Wendel var. Bangle Blue.
Terenti, C. M.; P. Verdes

P R O I C O 503 0 7 L a b o r at o r io d e G e n t ic a y B i o t ecn o l o g a V e g e t al .
F.I.C.E.S., UNSL . Dir eccin : 25 d e May o 3 8 4. 5 73 0 . V i l l a M er c ed e s (San
Lu is). Ar gentin a. p everdes@fices.unsl.edu . ar
Recibido: 5 de diciembre de 2011

Aceptado: 7 de noviembre de 2012
Abstract
S ai ntp a ul i a
i o na n th a
H.
Wendel
va r.
Blue
Ba ngle
(Gesnericeae fami ly), is w i d es p r ea d in o r n a m en ta l

p la nts w o rl dw id e a nd has pa rt ic ula r c harac t e ri st ics
t ha t g iv e i t s p eci a l a p p ea l . M ic ro p r opag a t i on w a s
p e r f o rm e d t o t e st t h e s p ec ies of l ea f t iss ue r e s po ns e
in
the
d i r ec tly .
ind uc t i on
Lea f
of
t is su e
in
vi t ro
e x pl an ts
a d ven ti tio us
c ul ti va ted
in
o rgans
basa l
c ul t u r e m ed i a (M u ra sh i g e a n d S k oo g, 1 9 6 2 ) w it h a
c ombina ti on of grow th regu lat o rs . Thi s respo ns e w as
q ua nt i fi e d a t d if f e r en t st a ge s o f m ic r o p ro pa ga ti on a nd
e v a l uat e d t h e s u r vi va l rat e a t t h e s ta g e o f pl a n tl ets
a c c li ma ti za t i on. F i r st s i n gs o f m o r p ho gen es is w er e
s how n 3 3 d a y s a f t e r c ult i va te d. I t a c hi e v e d hi g h ra tes
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.
Pgina 25
Terenti, C. M.; P. Verdes : Micropropagacin de Saintpaulia ionantha H. Wendel var. Bangle Blue.
o f mul ti p l ic a ti on t h ro ugh mo r ph og e n es is s tim ul a t e d by

t r ea t me nt w it h 6 - benzy la m in opu r i ne (1 mg/ l ), g i v in g a
m ul t ip l ic a t io n a ve r a ge o f 4 8 1 v i t ro p l a n ts /e x pl a nt in
three cy cl es of mul tipl ica tion . Wit h resp ec t t o th e sa lt
c onc e nt ra tio n a n d bala nc e o f pla nt g r owt h r e g u lat o rs
has
hi g he r
s i gn i fi c a n t
m e d iu m.
n ut r i ent
r e q ui r em e nt s,
d i f f e rence s
D u r in g
the
in
dem on st ra t in g
c on c e nt r a t io n
a c c l ima t i za ti on
c om pl e t e
per i o d,
th e
s u bst ra t e, o r ga n ic s o il, p ea t , p e r l i t e (3: 1 : 1 / 2 ) w a s

more effective with 83. 21% of survival . All s ta ges of
m ic r o p ro pa ga ti on w er e c om p l e ted o v e r a p e r i od o f 1 2
mo nt hs. It is co ncl uded tha t th e a p pl icat ion o f t h is
bi ot ec hn olo gy is a n appro p ria t e meth o dol ogy f o r la rge
sc al e mu lt ip l icat i on o f th is s pecies.
Key
wo rds:
S ai ntp au li a
io na nt h a
H.
Wendel
va r.
Ba ngle Blue; M ic ropro pa ga tion; Regeneration.
Resumen
S ai ntp a ul i a
i o n a nt h a
H.
Wendel
va r.
Ba ngle
Blue,
p e r t en ec i en t e a la f am i li a G es ne r i c ea e, es u na pl anta
o rna men tal mu y di fu ndi da en todo el mu ndo y pos ee
ca ra cterstica s
pa rtic ula r es
qu e
le
c on f i e ren
un
a t rac t i vo es p ec ia l . S e r e a l i z l a m ic r o p ro pa gac i n d e
l a es p ec i e p a ra e n s a y a r l a r e s p u es t a d e t e j i do f o l ia r
en la in ducc i n d e rgan os ad vent ic io s in vi tro en
f o r ma d i r ec ta . Pa r a ta l fi n, s e s e m b ra ro n s e g m en tos
d e t e j id o fo l ia r en med i o s d e c u l t i vo ba s a l (M u ra s h ig e
y Skoog, 1962 ) con una c o mbinac in de regul adores
d e c rec i mien to p rees ta bl ec id a. S e cua nti f ic d ic ha
r e s pu es ta
en
m ic r o p ro pa gac i n
las
y
di sti n tas
se
eval u
eta pa s
la
ta sa
de
de
s u per v i ve n c i a e n l a e t a pa d e a c l i ma t i zac i n d e l a s
Pgina 26
Huayllu-Bios. N 7. Diciembre 2013
v i t ro p lan ta s .
e m p e z
o bs e r va r
lo s
m o r fo g n es is .
m ul t ip l ic a c i n
33
l os
Se
en
d a s
des d e
pri m e r os
l o g ra ron
el
la
a lt a s
t r a t a m i ent o
qu e
si e m b ra
se
in d ic io s
de
t a sa s
de
c o n 6 - b enci l
A m i n o P u rin a (1 m g/ l ) , o bt en i nd o s e u n p ro m e di o d e
mul t iplic acin de 481 vit roplantas /explanto en t res
c ic l o s d e rep i qu e s . C o n r es p ect o a l a c o n c en t ra c i n
s al ina y ba lanc e de regul ado res de c rec imi ent o ti en e
mayor
r eq u e r im i en to
de
n utri e nt e s,
dem os t ran do
d i f erenc ia s s i gni f icat ivas en med i os d e c on cent raci n

c om pl e ta.
D u ran t e
la
eta pa
de
acl im at i zac i n,
el
s us t rat o: t ie r r a o r g ni c a , t u r ba , p e rl i ta (3: 1 : 1 /2 ), fue

mas efectivo con un 83, 21% de supervivencia. Se
c um pl i e ro n t o das las e ta pa s d e m ic r o p ro pa gac i n d e
esta especie en un periodo de 12 meses. Se concluye
que
la
apl icac i n
de
e st a
b io t cn ica
res ult a
u na
m e to d olo g a a p ro pi ada p a ra la m ul t ip lic aci n a g ran

escala de esta es pecie.
P a la br a s c la v e : S ai n tp a ul i a i o n a n th a H . W e nd el v ar .
Ba n gl e Bl ue; M ic rop ro pa ga ci n; O rgan o gn esi s.
Introduccin
La mayora de las especies del Gnero Saintpaulia, son
originarias del este de frica Tropical, son las plantas de interior ms
difundidas en todo el mundo y poseen caractersticas particulares
que le confieren un atractivo especial (Rubio y Hernndez, 2005). Se
caracterizan
por
poseer
una
buena capacidad
de regeneracin
mediante su cultivo in vitro (Boelke, 1986; Dimitri y Orfila, 1985).

La propagacin de un genotipo a gran escala a travs del
empleo de tcnicas de cultivo de tejidos, es una herramienta muy
til, tiene el potencial de producir plantas de calidad uniforme a
Pgina 27
escala comercial, a partir de un genotipo selecto y con una tasa de

multiplicacin ilimitada (Echenique et al, 2004).
En el Gnero Saintpaulia, se mencion la formacin de
tallos a partir del cultivo in vitro de pecolos y hojas (Bilkey y
Mc.Cown, 1978; Cooke, 1977; Del Pino et al., 1993; Espinosa et al,
2007; Hakozaki y Onho, 1997; Hurtado y Merino, 1994; Ioannou,
1987;
Mohamed
et
al,
1989;
Start
Cumming,
1976)
en
la
aclimatacin de las vitroplantas, se mencionado el uso de diferentes

sustratos (Alvarado y Glorimar, 2001; Figueroa, 2006; Vidalie, 2001).
Con el objetivo de determinar la tasa de multiplicacin in
vitro que permita precisar la factibilidad de su produccin en escala
comercial, en el presente trabajo se ensaya y cuantifica la respuesta
de tejido foliar para la induccin de rganos adventicios in vitro en
forma indirecta y evaluar la tasa de supervivencia en la etapa de
aclimatacin de las vitroplantas.
Material y Mtodos
Los explantos cultivados de S. ionantha H. Wendel var.
Bangle Blue fueron secciones de pecolos (50 mm) y cortes de
lminas foliares (10 X 10 mm). La desinfeccin de los explantos se
realiz segn los tratamientos detallados en la Tabla 2.
Se analizaron las tasas de multiplicacin y supervivencia en
medio nutritivo de Murashige y Skoog (1962): sales diluidas a un
cuarto, un medio y concentracin completa, con la adicin de agar (6
gr/l) y reguladores del crecimiento (Tabla 2).
Los explantos se incubaron en la cmara de cultivo a 24
2 C con 16 horas de fotoperiodo (116 mol/m 2 s). Semanalmente se
evaluaron
los
siguientes
parmetros:
tasa
de
contaminacin,
formacin de callos, nmero de brotes y races formados in vitro,

tasa de multiplicacin y la tasa de supervivencia de las vitroplantas
Pgina 28
en el invernculo. Se us el mtodo de aclimatacin gradual,

inicialmente con cubierta plstica total y posterior remocin parcial
de la misma cada siete das. La aclimatacin de las vitroplantas se
realiz segn los tratamientos detallados en la Tabla 3. El diseo
utilizado fue completamente aleatorizado con tres repeticiones. Las
observaciones
corresponda
realizadas
mediante:
se
analizaron
ANOVA,
Test
estadsticamente,
de
diferencias
segn
mnimas
significativas (LSD) y Contraste de Kruscal Walis (Sokal y F. Rohlf,

1995).
Tratamientos
Tiempo (minutos)
Alcohol 70
Hipoclorito de sodio (20%)
30
10
20
45
15
1,5
15
20
21
22
10
10
T a bl a 1 . T ra t a m i en t o s d e d es in f ecc i n evaluados en la etapa de

e s t a b l eci mi e nt o i n vi t ro de Sai n tpa ul ia io na nt h a H. Wendel va r. Bangle
Blue.
Pgina 29
Tratamientos
Reguladores de Crecimiento
T1
----
T2
ANA (0,1 mg/l)
T3
BAP (1 mg/l)
T4
ANA (0,1 mg/l) BAP (1 mg/l)
T a bl a 2 . Co m b ina c i n d e reg ul a do r e s de c r ec im i en to eva l u a da e n l a

m ic r o p ro pa gac i n d e Sai n tpaul i a i o n an t ha H . Wendel va r. Bangle Bl ue.
Sustratos
Reguladores de Crecimiento
N1
Tierra orgnica, Turba, Perlita

(3:1:1/2)
N2
Tierra orgnica, Vermiculita

(4:1)
T a bl a 3 . Combinac in de su st rat os eva luados en la acl i mat acin de

S ai ntp a ul i a i o n a n th a H . Wendel va r. Bangle Bl ue.
Resultados y Discusin
Establecimiento:
En los explantos de lminas foliares y pecolos de S.
ionantha H. Wendel var. Bangle Blue se observ contaminacin por
hongos de los gneros Penicillium y Aspergillus. En la Figura 1 y
Grafico 1 se detallan los datos obtenidos en los tratamientos de
desinfeccin, destacndose el tratamiento D con el menor porcentaje
de contaminacin (38,59 %) y necrosis de los explantos sembrados.
Pgina 30
Brotacin y Multiplicacin:
A los 33 das desde la siembra se empezaron a observar los
primeros indicios de morfognesis (Figura 2), esta observacin se
evalu estadsticamente mediante un Contraste de Kruscal-Wallis
para
das
segn
tratamiento
determin
diferencias
altamente
significativas entre los tratamientos (p-valor = 0,018), indicadas en el

Grafico 2. Se pueden establecer las siguientes diferenciaciones entre
los tratamientos con reguladores de crecimiento: en el T1C (sales de
Murashige y Skoog completas) se observ la formacin de callos;
mientras que en el T4 (sales de Murashige y Skoog diluidas al
cincuenta por ciento), se observ la formacin de races y los brotes
neoformados.
En la etapa de multiplicacin se lograron altas tasas de
multiplicacin mediante el T3 (BAP, 1 ml /l), con 481 plantas por
explante (Figuras 3 y Grfico 3). Espinoza et al. (2007) tambin evalu
el comportamiento de la especie respecto de los dos reguladores de
crecimiento ANA y BAP, obteniendo tasas de multiplicacin similares a
las obtenidas en el presente trabajo. En cambio, Mohamed et al
(1989), encontraron que a partir de explantos de pecolos las mejores
concentraciones de hormonas fueron 0,25 mg.l - 1 de ANA y 1 mg.l - 1 de
BAP;
mientras
que
cuando
el
explanto
eran
hojas
las
mejores
concentraciones fueron 0,1 mg.l - 1 de ANA y 0,5 mg.l - 1 de BAP. Por su

parte, Hakozaki et al. (1997) estudio el efecto de la concentracin de
AIA e IBA en la induccin de tallos y races en callos de Saintpaulia
ionantha cv. Susie, usando como explantos tejido foliar. En pocos das
se logr la formacin de callos y races adventicias, en aquellos
medios que contenan bajas concentraciones (0,5 mg.l - 1 ) de las
hormonas
mencionadas.
Solamente
se
formaron
tallos
agregado de IBA a 0,5 o 2,5 mg/l.
Pgina 31
con
el
Enraizamiento y Aclimatacin:
Se determin el porcentaje de plantas in vitro aclimatadas
Figuras 4 y Grfico 4, siendo los sustratos ms efectivos el N 1
(composicin: tierra orgnica, turba, perlita; 3:1:1/2), que present
un 83,21 % de vitroplantas aclimatadas. Vidale H. (2001) y Heredia C.
y Yelitza M (2003) mencionan una alta tasa de aclimatacin en
sustratos porosos, poco compactados y con pH cido, caractersticas
stas concordantes con el sustrato N 1. Figueroa Cuevas (2006)
realizo una pre-aclimatacin, etapa no evaluada en el presente
trabajo pero con tasas de viabilidad similares; se debe considerar
que los resultados citados corresponden a la misma especie pero
distinta variedad. Desde siembra a aclimatacin de plantas obtenidas
in vitro se cumplieron en un periodo de 12 meses.
100
90
% Contaminacin
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Tratamientos
A
Grfico 1. S. ionantha H. Wendel var. Bangle Blue: comparacin de

los porcentajes de contaminacin con las distintas metodologas de
desinfeccin.
Pgina 32
18
Nmero de plantas/explanto
16
14
12
10
8
6
4
2
0
T1
T2
T3
T4
Tratamientos
C
1/2
1/4
G r f ico 2 . S . i o n an t ha H. W endel va r. Ba ngle Bl u e: o rga no gn es is in vitro

observa da a los 33 da s de cult ivo. R e f e ren cia s: C=MS co m pl et o. = MS
diluido al 50 %. = MS dil u do al 25%
500
Nmero de plantas/explanto
450
400
350
300
250
200
150
100
50
0
T1
T2
T3
T4
Tratamientos
C
1/2
1/4
G r f ico 3 . S . i o n an t ha H . W e nd e . l v a r. B a n gl e B l u e: c om p a ra c in d e l
n me r o d e pl ant as obt e ni da s en l a eta pa d e mu lt i pl icac i n. R ef e renc ia s:
C =MS co mp l et o. = MS d il u id o a l 50 %. = MS d il uid o al 2 5%.
Pgina 33
90
% plantas aclimatadas
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Tratamientos
N1
N2
G r f ico 4 . S . i o n an t ha H. Wendel va r. Ba ngle Bl ue: porc enta je de pla nta s

ac lima tadas en dos tipos de s ust rat os.
F i gur a 1 . S . i o na n th a H . Wendel va r. Bangle Bl ue: expl ant os fol iares

c ult i va do s i n vi t ro.
Pgina 34
Fo to 2 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: o rg a no g nesi s in vi tro a

l os 33 d as d e c ul ti v o.
Fo to 3 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: mu l t ip l i c a c i n i n v i t ro.
Pgina 35
Fo to 4 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: pla nta a c l ima ta da.
Conclusiones
Se cumplieron todas las etapas de micropropagacin de
esta especie en un periodo de 12 meses. Se concluye que la
aplicacin de esta biotcnica resulta una metodologa apropiada
para la multiplicacin a gran escala de esta especie.
Pgina 36
Bibliografa
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Pgina 38

Micropropagación de Saintpaulia Ionantha H. Wendel Var. Bangle Blue.

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Huayllu-Bios. N 7.

Micropropagacin de Saintpaulia ionantha H.

Terenti, C. M.; P. Verdes

Recibido: 5 de diciembre de 2011

(Gesnericeae fami ly), is w i d es p r ea d in o r n a m en ta l

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

o f mul ti p l ic a ti on t h ro ugh mo r ph og e n es is s tim ul a t e d by

s u bst ra t e, o r ga n ic s o il, p ea t , p e r l i t e (3: 1 : 1 / 2 ) w a s

Ba ngle Blue; M ic ropro pa ga tion; Regeneration.

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

Huayllu-Bios. N 7. Diciembre 2013

d i f erenc ia s s i gni f icat ivas en med i os d e c on cent raci n

s us t rat o: t ie r r a o r g ni c a , t u r ba , p e rl i ta (3: 1 : 1 /2 ), fue

m e to d olo g a a p ro pi ada p a ra la m ul t ip lic aci n a g ran

mediante su cultivo in vitro (Boelke, 1986; Dimitri y Orfila, 1985).

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

escala comercial, a partir de un genotipo selecto y con una tasa de

aclimatacin de las vitroplantas, se mencionado el uso de diferentes

formacin de callos, nmero de brotes y races formados in vitro,

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

Huayllu-Bios. N 7. Diciembre 2013

en el invernculo. Se us el mtodo de aclimatacin gradual,

significativas (LSD) y Contraste de Kruscal Walis (Sokal y F. Rohlf,

Hipoclorito de sodio (20%)

T a bl a 1 . T ra t a m i en t o s d e d es in f ecc i n evaluados en la etapa de

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

ANA (0,1 mg/l)

ANA (0,1 mg/l) BAP (1 mg/l)

T a bl a 2 . Co m b ina c i n d e reg ul a do r e s de c r ec im i en to eva l u a da e n l a

Tierra orgnica, Turba, Perlita

Tierra orgnica, Vermiculita

T a bl a 3 . Combinac in de su st rat os eva luados en la acl i mat acin de

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

Huayllu-Bios. N 7. Diciembre 2013

significativas entre los tratamientos (p-valor = 0,018), indicadas en el

concentraciones fueron 0,1 mg.l - 1 de ANA y 0,5 mg.l - 1 de BAP. Por su

agregado de IBA a 0,5 o 2,5 mg/l.

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

Grfico 1. S. ionantha H. Wendel var. Bangle Blue: comparacin de

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

Huayllu-Bios. N 7. Diciembre 2013

G r f ico 2 . S . i o n an t ha H. W endel va r. Ba ngle Bl u e: o rga no gn es is in vitro

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

G r f ico 4 . S . i o n an t ha H. Wendel va r. Ba ngle Bl ue: porc enta je de pla nta s

F i gur a 1 . S . i o na n th a H . Wendel va r. Bangle Bl ue: expl ant os fol iares

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

Huayllu-Bios. N 7. Diciembre 2013

Fo to 2 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: o rg a no g nesi s in vi tro a

Fo to 3 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: mu l t ip l i c a c i n i n v i t ro.

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad Nacional de Catamarca.

Fo to 4 . S. ionantha H . Wen de l var . B a n gl e B l u e: pla nta a c l ima ta da.

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