Unidad de Aprendizaje Contenido Temático

2.1 Ley de Lamber Beer

2.2 Desviaciones de la ley de Beer
2.Espectrofotometría 2.3 Curvas espectrales
de UV-Visible e 2.4 Transmitancia- Concentración
Infrarrojo 2.6 Absorbancia- Concentración
2.7 Absorbancia. Longitud de onda
2.7 Curvas de calibración
2.9 Adición del estándar
2.10 Suma de las absorbancias
2.11 Aplicaciones, problemas y ejercicios
2.12 Cuantificación en infrarrojo
2.13 Componentes de los instrumentos ópticos.
•Zonas del Espectro
–UV lejano (10 a 200 nm) “al vacío”
–UV próximo (200 a 400 nm)
–Visible (400 a 800 nm)
 Proceso de Absorción

•Un haz de radiación paralela de potencia P0

•Una capa de solución de b cm de espesor
•Una especie molecular de concentración c (mol /L), que absorbe radiación.
•Como consecuencia de la absorción de radiación, la potencia del haz disminuye de P0 a P.
 Proceso de Absorción

Po P

Po = Radiación Inicial
P = Radiación resultante
b b = Longitud (cm)
C = Mol/L
T = Trasmitancia
Pa Solución Absorbente de
A = Absorbancia
Concentración X
TRANSMITANCIA

Po P

Cantidad de energía que atraviesa un cuerpo en un tiempo

T = P/Po
TRANSMITANCIA

T = Pdisolución / Pdisolvente

T = P/Po

%T = P/Po x100
ABSORBANCIA

Densidad óptica: es la medida de la atenuación de la R.E.M

cuando incide sobre una muestra (analito)

A = log Po/P

A= -log T

A = log Po/P  log Psolvente /Psolución

Relación de la Trasmitancia y la Absorbancia

T %T A

0.001

0.01

0.1

0.5

0.9

1
σ-σ∗
π-π∗ Bandas de intensidad elevada
η-σ∗ Bandas de mediana intensidad
η-π∗ Bandas de baja intensidad

s -> s* (alcanos)
s -> p* (carbonilos)
p -> p* (alquenos, carbonilos, alquinos)
h -> s* (oxígeno, nitrógeno, azufre, halógenos)
h -> p* (carbonilos)
 1
A=bc ( cierta , cte b)
- bc

Transmittance, T
T=10-A =10
Absorbance, A

0.5

pendiente = b 0
Concentration
Concentration

Transmitancia disminuye
La Ley de Beer es una relación entre exponencialmente al incrementarse
absorbancia y concentración. la concentración
Solution with T = 50%

Ley de Beer y la luz

monocromática

12.5%
50%

25%
P0 = 100%
11
Diferente a 0
 Ley de Beer (Lambert-Beer)
Establece que la absorbacia es directamente proporcional a la
concentración de la especie absorbente c, y a la longitud del trayecto
b del medio de absorción

A = log (Po/P)
a = absortividad (L g -1 cm-1)
A = abc (depende: disolvente, % de la disolución y T).
ε = absortividad molar (L mol -1 cm-1)
A = bc (Punto máximo de la absorción, característica
de cada sustancia).
Ley de Beer (Lambert-Beer)

La absorbancia es proporcional a la concentración de la

especie, entonces la ley se cumple cuando:

La concentración del analito es ≤0.01M. Cuando las

concentraciones son muy altas el analito se convierte en el
disolvente.
Ley de Beer (Lambert-Beer)

Las moléculas cambian de comportamiento dependiendo

del disolvente.
ROH en Agua

Los solutos de una disolución que no absorben la radiación

también pueden interaccionar con las especies absorbentes
y modificar la absorbancia.
La ε de muchos compuestos Algunos complejos metálicos de
orgánicos varía desde 5 - 10 000 L transición tienen εde 10 000- 50 000
mol -1 cm-1 o más. L mol -1 cm-1.

Se considera que valores altos de ε en el análisis cuantitativo

proporciona una mayor sensibilidad analítica.
La absortividad molar puede valer 0, sí la probabilidad de
absorción del fotón es 0.

La absortividad molar tiene valores máximos de 105 M-1

cm-1 cuando la probabilidad de absorción del fotón se
acerca a 1
Ejercicios:

1. Hallar la Absorbancia y trasmitancia de una disolución 0.0024 M de una sustancia

que tiene una absortividad molar de 313 M-1cm-1, en una celda de 2.00 cm de paso
óptico.

2. Una Solución de permanganato de potasio 7.25X10-5M, tiene una trasmitancia de

44.1% cuando se mide en una celda de 2.10 cm a una longitud de onda de 525 nm.
A) Calcule la absortividad de esta solución b) la absortividad molar del KMnO4

3. Una Solución 5.0X10 -4 M de un analito colocado en una celda de 1 cm-1 presenta

una absorbancia de 0.338, en una longitud de onda de 490 nm Determinar la
absortividad molar del analito.

4. La trasmitancia de una solución es 35.5% ¿cual será la trasmitancia de la misma

disolución diluida a la mitad?
5.- La diferencia de energía entre los orbitales 3s y 3p es de 2.17 eV. Calcule la λ de la
radiación que absorbería en la excitación del electrón 3s al estado 3p (1 eV =
1.60x10-19.

6.- ¿Cómo varía la transmitancia con la longitud de la trayectoria de la celda?, en un

gráfico ¿cómo es la relación? .

7.- ¿Cómo varía la absorbancia con la longitud de la trayectoria de la celda? en un

gráfico ¿cómo es la relación? .

8.-¿Por qué la longitud de la celda afecta la intensidad de la luz registrada por el

detector?
Indique la relación entre :
A) Absorbancia (A) y Transmitancia (T)
B) Absortividad (a) y Absortividad molar (ɛ)
Aplicaciones cumpliendo
ley de Beer
 Análisis cualitativo

–El espectro de absorción UV-vis permite identificar

especies a partir de las bandas de absorción de mayor
intensidad

–Sin embargo, la región IR es mejor para ello

Análisis cuantitativo

–Es una de las técnicas más útiles para realizar

determinaciones cuantitativas

–Muchas especies inorgánicas y orgánicas absorben

selectivamente en esta zona

–Sustancias con grupos cromóforos o coloreadas.

Gran Sensibilidad
Puede analizar sustancias en concentraciones entre 10-4y
10-5M.

Es una técnica selectiva (se puede encontrar una banda de

λ en la que solo absorba el componente deseado).

Buena precisión y facilidad de manejo.

Las especies no absorbentes pasan a serlo cuando

reaccionan y dan productos coloreados.
Aplicaciones

Determinación de iones metálicos y complejos de elementos de transición

( Ni+2, Cu+2, Co+2, Cr2O7 -2).
Complejos de transferencia de carga: Fe(II –1,10 Fenantrolina , Fe(III)–
tiocianato.

Compuestos orgánicos con enlaces conjugados, heterociclos.

Campos: industrial, clínico, forense, medio ambiente.
Ejercicio

a) Se desea determinar el manganeso en un acero. Se

disolvió una muestra de acero de 0,4895 g , el manganeso
se oxidó a MnO4- y la solución se diluyó a 100 mL en un
matraz aforado. La absorbancia a 525 nm en una celda
de 1 cm fue 0,396. Una solución de MnO4- de 3x 10-4 M
presenta una absorbancia de 0,672
b) Calcule el porcentaje de Mn en el acero
c) Calcule los mg de Mn y el porcentaje de Mn en 100 g de
acero
 Ley de Beer (Lambert-Beer) para mezclas

AT = Aa + Ab + …….. An

A = abc A = εbc

AT1 = aA 1 bcA + aB 1 bcB + ……. + ann bcn

AT 2 = aA 2bcA + aB 2bcB + ……. + annbcn

AT1 = εa 1 bc + ε b 1 bc + …. + εn n bc
AT 2 = εa2bc + ε b 2bc + ……. + εn n bc
Ejercicio

La determinación de Fe3+ y Cu2+ en una mezcla puede ser determinada siguiendo la

reacción de hexacianorutenato II Ru(CN)64-, el cual forma un complejo azul-purpúra
con Fe3+ que absorbe a una =550 nm, y un complejo verde pálido con Cu2+ que
absorbe a una =396 nm. Cuando se analizo la muestra con ambos iones en una
celda de longitud 1 cm se observaron los siguientes valores de absorbancia:

Lmol-1 cm-1 Fe Cu Absorbancia

550 9970 34 0.183
396 84 856 0.109

¿Cual será la concentración molar de ambos iones en la muestra?

Am1 = x1 b Cx + y1 b Cy

Am2 = x2 b Cx + y 2 b Cy
 Métodos de cuantificación

Curvas de calibración Método de adición

con estándares externos de un estándar

A volumen final A volumen

constante variable
 Curvas de Calibración
Muestra la relación lineal entre la señal medida y la concentración del analito, la
curva de calibración mas útil es una línea recta (obtenida generalmente a través
de un proceso de regresión lineal).
 Pendiente:
Y = A + BX

Intersección
Ordenada
al origen
 Y  X 2  -  X  XY  Variable Variable
A
n X 2 -  X  independiente
2
dependiente
Pendiente
Coeficiente de correlación
Concentración Absorbancia
ppm λ460nm
100 1.89
90 1.73
80 1.57
70 1.39
60 1.25
50 0.96
40 0.78
30 0.59
20 0.54
10 0.11

R =0.9924
Curva de calibración con estándares externos

Los estándares de calibración deben aproximarse en lo posible a la

composición general de las muestras.

BR M 2mL 4mL 6mL 8mL 10mL

Ax A1 A2 A3 A4 A5

estándares
mg/L Absorbancia
0.00 0.010
2.00 0.100
4.00 0.200
6.00 0.300
8.00 0.405
10.00 0.500
12.00 0.590
? 0.340
CALIBRACIÓN POR ADICIÓN DE ESTÁNDAR

Se utiliza cuando las muestras tienen matrices difíciles

OBJETIVO Construir una recta de calibrado con matriz idéntica a la

de la muestra
Calibración por adición de estándar

Método mas largo, ya que hay que hacer

una preparación por muestra
Algunos software permiten hacer el
tratamiento de datos sin tener que hacer
todas las preparaciones
Método de adición de estándar: a volumen final constante y varias adiciones
Las dificultades de contar con un patrón con una composición general que se
asemeje a la de las muestras hace recomendable este método. Requisito: se
cumple la ley de Beer.

M Vx Vx Vx Vx Vx BR
VX st1 st2 st3 st4 st4 α β
AT = Ax + Ast
Gráfico A vs Vst : pendiente = β
AT = α + β intercepto = α
Cx = αCst/βvx
Método de adición de estándar: a volumen final variable y una adición
 POR ADICIÓN DE ESTÁNDAR

A T = Ax + As

A T = bCx + bCs b(Vx/Vt)Cx = K1

A T = b(Vx/VT)Cx + b(Vs/VT)Cs εb(Cs/VT)Vs = K2 Vs

A T : es la absorbancia total
 : Coeficiente de extinción molar A total = k1 + k2 Vs
Vx : volumen del analito
Vs : volumen del estándar Dividiendo K1/K2 tenemos que:
VT : volumen total
Cx : concentración del analito
Cs : concentración del estándar
Cx = K1 Cs /K2 Vx
 Ejercicio
El hierro forma un complejo con 1,10 fenantrolina, el cual presenta un máximo de
absorción a 510 nm. A partir de una solución patrón de 1000 mg/L de hierro se preparó
una curva de calibración , obteniéndose los datos de la tabla. Una muestra de 25,0 mL de
agua subterránea se colocó en un matraz de 50,0 mL después de ser tratada para formar
el complejo coloreado, al igual que la curva de calibración, fue aforada. La absorbancia fue
de 0,203 . Calcular la concentración de Fe de la muestra de agua en mg/L

conc ( mg/L) A
2 0.160
4 0.313
6 0.460
8 0.619
muestra 0,203
 Ejercicio
Basado en el ejercicio anterior plantearemos la siguiente metodología : 25,0 mL
de una muestra de agua subterránea se colocaron en un matraz de 50,0 mL
después de ser tratada para formar el complejo coloreado Fe/1-10 fenantrolina ,
fue aforada. La absorbancia fue de 0,203 . En otros matraces iguales fueron
colocados 25 mL de la muestra , el reactivo complejante y respectivamente : 0, 1
; 0,2 y 0,3 mL de solución patrón de Fe de una concentración de 1000 mg/L.
Calcule la concentración de Fe en la muestra.
reactivo A
complejante
0 0.203 Método de adición estándar con volumen final fijo
0.1 0.363 No hay factor de dilución.
0.2 0.516
0.3 0.663
Ejercicio
Una solución ácida de ión cúprico tiene una absorbancia de 0,062 a
la longitud de onda de máxima absorción. A 5,0 mL de esta solución
se le agregó 1,0 mL de solución 0,01 M de ión cúprico y se
determinó que la absorbancia fue de 0,102 a la misma longitud de
onda, ¿ Cuál es la concentración de la muestra ?
 Ejercicio
En un experimento para determinar la concentración un analista encontró
los datos de la tabla (Conc. Unidad desc). El analista calculo la absorción de
una concentración al 10% con un valor de 1.34. Utilizando los datos
anteriores el presento su informe. Determine su curva de calibración.
Calcule de nuevo la absorbancia al 10% y comente sus observaciones.
[] A
90 2.16
80 2.12
60 2.06
50 2.04
70 2.01
10 ?
Limitaciones de la
ley de Beer
 Ley de Lambert-Beer
Sí el analito participa en un equilibrio químico que depende de la
concentración la absortividad cambia.

En una disolución concentrada de HA predominan las especies

protonadas HA, en una disolución diluida de HA predominan las
especies disociadas A-, sí la absortividad de HA ≠ de la absortividad
de A- no se cumple la ley de Lambert-Beer.

HIn H+ + In-
Desviaciones de la ley de Beer

Desviación positiva
Ideal

Desviación Negativa

Bajo ciertas circunstancias, la relación de Beer da una relación no lineal.

Estas desviaciones de la ley de Beer Lambert se clasifican en tres categorías:
Desviaciones reales de la Ley de Beer
Fundamentalmente las desviaciones propias de la Ley de Beer

La ley de Lambert describe el comportamiento de absorción de soluciones que contienen

cantidades relativamente bajas de solutos disueltos en ella (<10-3M).

Cuando la concentración del analito en la solución es alta (> 10-3 M), el analito comienza
a comportarse de manera diferente debido a las interacciones con el solvente y otras
moléculas de soluto e incluso debido a interacciones de enlaces de hidrógeno.

También es posible que la concentración sea tan alta que las moléculas crean una
pantalla para otras moléculas y las sombrean de la luz incidente.
Desviaciones Químicas de la Ley de Beer
Debidas a las especies químicas presentes (asociación, disociación e interacción con el
disolvente para producir un producto con diferentes características de absorción).

HIn H+ + In-
Color 1 Color 2
 El rojo de fenol sufre una
transformación de resonancia cuando se
pasa de la forma ácida (amarilla) a la
forma básica (roja). Debido a esta
resonancia, la distribución de electrones
de los enlaces de la molécula cambia
con el pH del disolvente en el que se
disuelve.
Desviaciones Instrumentales de la Ley de Beer
Dependen de la forma en que se realizan las mediciones de absorbancia

A] Debido a la radiación policromática

La ley de Beer-Lambert se sigue estrictamente cuando existe una fuente monocromática

de radiación. En la práctica, sin embargo, es común usar una fuente de radiación
policromática con distribución continua de longitudes de onda junto con un
monocromador para crear un haz monocromático a partir de esta fuente.
A] Debido a la radiación
policromática
B] Debido a la radiación parásita

Debido a la presencia de radiación parásita.

La radiación dispersa del instrumento que está

fuera de la banda de longitud de onda
seleccionada.
esta radiación se debe a la reflexión y
dispersión por las superficies de lentes,
espejos, rejillas, filtros y ventanas.
Si el analito absorbe a la longitud de onda de
la radiación dispersa, se observa una
desviación de la ley de Beer-Lambert similar a
la desviación debida a la radiación
policromática.
c] Debido a la celda

Si las celdas que contienen el analito

y las soluciones en blanco tienen
diferentes longitudes de trayecto o
características ópticas desiguales, es
obvio que se observaría una
desviación en la ley de Beer-Lambert.
Ejercicio
Las aminas RNH2 reaccionan con el ácido pícrico para formar picratos de amina, que
absorben fuertemente a 359 nm (ε= 1.25x104M). Se disolvieron 0.1155 g de una amina
desconocida en agua, se diluyo a 100 mL. De esta solución se diluye una alícuota de 1
mL a 250 mL, para su medición. Sí esta disolución final tiene una absorbancia de 0.454
a 359 nm con una celda de 1 cm, ¿cuál es el peso fórmula de la amina?, ¿cuál sería una
fórmula probable?
Ejercicio

La cloroanilina de una muestra se determina como picrato de anilina. Una muestra de

0.0265 g reacciona con ácido pícrico, y se diluye a un litro. La disolución tiene una
absorbancia de 0.368 en una celda de 1 cm. ¿Cuál es el porcentaje de cloroanilina en la
muestra?
 Ejercicio
Considerando la siguiente reacción, calcular los datos de A para las disoluciones no
tamponadas cuyas concentraciones totales del indicador están comprendidas entre 2x10-5
M y 16x10-5 M.

HIn H+ + In-
Color 1 Color 2