Artculo

Caracterizacin del proceso de fermentacin

de Ustilago maydis.
Alberto Hernndez Jurez, Ma. del Rayo Zamora Gallegos
Ingeniera en Biotecnologa, Universidad Politcnica de Puebla, Mxico,
Tercer Carril del ejido serrano S/N San Mateo Cuanal, Municipio de
Juan C. Bonilla, Puebla, Mxico. CP. 72640.Tel. (222)-7746640 a 46
www.uppuebla.edu.mx
ABSTRACT: Ustilago maydis is a fungus that
grown in different environment. Is a responsible
by

KEYWORDS: Fermetation,
Introduccin
Ustilago maydis se considera un hongo dimorfico,
por presentar dos formas durante su ciclo de vida,
levaduriforme y filamentosa ()
El crecimiento en un sistema biolgico se define
como el incremento ordenado de todos los
componentes qumicos (Prescott, 2000). Para ser
aprovechados por el humano, donde, las
condiciones a las que es organismo sea sometido
este aportara una produccin especifica del
metabolito de inters.

ambiente controlado que permite el crecimiento

eficaz de las clulas y la formacin de un
producto. A nivel laboratorio un Biorreactor es un
equipo que contienen 2 litros para realizar su
operacin y con caractersticas especificas del
medio de cultivo (Levitus y otros, 2010).
Lo que permitir manipular al organismo en mejor
manera y controlar parcialmente el crecimiento del
mismo. Para saber que el organismo esta creciendo
dentro del biorreactor, es necesario realizar ciertos
anlisis donde corroboremos que se desarrolla y
consume el sustrato aportado en el medio.
Medicin del crecimiento microbiano
Existen diversos mtodos para medir el
crecimiento de los microorganismos como peso
seco, absorbancia, nmero de clulas variables,
contador de clulas, etc. Gracias a estas tcnicas se
puede saber la concentracin de biomasa presente
en el proceso de fermentacin la cual tendr una
variacin con respecto al tiempo

Una fermentacin depende de los requerimientos

que el organismo necesite para producir lo
esperado, desde el tipo de sustrato hasta la
temperatura en la que este se desarrollara, de
manera que llevar el control de las variables de
inters permitir que el organismo se desarrolle,
gracias al manejo de equipos como los
biorrectores.
Biorreactores
Un biorreactor o fermentador se define como
aquel dispositivo que proporciona un medio
Formato de: Biotechnolgy and Biengineering1

Tabla 1 Tcnicas realizadas para el anlisis de consumo de sustrato,

aumento de biomasa.

Material y Mtodo
Para la fermentacin de U. maydis se realizo una
fermentacin en un biorreactor marca Bichi , con
capacidad de 1 litro de volumen de operacin, con
enchaquetado como intercambiador de calor. Para
realizar las mediciones de las variables como pH y
kLa, se utilizaron electrodos sensibles de respuesta
inmediata. El medio de cultivo presento una
concentracin de 20 g/l de glucosa como fuente de
carbono y 10 g/L de peptona de casena para
fuente de nitrgeno.
Para realizar anlisis del crecimiento de U. maydis
se utilizaron las tcnicas presentes en la Tabla 1.
Para cuantificar las variables de biomasa y
consumo de sustrato, y obtencin de producto
todas las variables relacionadas con el tiempo de
fermentacin.

Anlisis

Resultado

Conteo de clulas cmara de

Neubauer

Biomasa en Unidades
Formadoras de Colonias
por volumen

Densidad ptica

Absorbancia

Peso seco

Cantidad de biomasa en
g/L

Extraccin de protena
extracelular

gProteinas/L

Carbohidratos totales

Consumo de sustrato

Azucares reductores

Consumo de sustrato

Para la distribucin de oxigeno en el medio se

utilizo bombas de aire con flujo de 1 L/min y 2
L/min. Con una agitacin mecnica realizada con
barra y parrilla de agitacin a 500 rpm. En la
Figura 1 se muestra el biorreactor con equipo de
anlisis de variables utilizados en la fermentacin.

Figura 1 Biorreactor montado con sistema de control de temperatura, electrodos de pH y O 2 de respuesta inmediata. Flujo de aire y agitacin..

Resultado y discusin
La fermentacin se realizo en un periodo de 28
horas a 30 oC, con un pH inicial de 6.8, con un
flujo de aire de 1 VVM a 400 rpm. Con un valor
inicial de biomasa de 0,157 g/L. Los resultados
2

Formato de: Biotechnology and Bioengineering

obtenidos del crecimiento de biomasa se presentan

en la Figura 2 donde se muestra la grafica de
crecimiento de U. maydis en peso seco. Adems
del consumo de sustrato (Glucosa) con el anlisis
de azucares reductores.

Tambin se realizaron los anlisis de densidad

ptica, conteo de clulas viables, y azucares
totales. En la se presentan los valores inciales y
finales del periodo de fermentacin de U. maydis.
Los valores obtenidos permitieron realizar el
calculo de ciertos parmetros de la cintica de
crecimiento, como lo son max, Xmax etc. En la
Tabla 3 se presentan los parmetros de la cintica
de crecimiento de U. maydis.
2

18
16
14
12

1.5

gX/L

10
8 gS/L
Proteina extracelular6
Glc
4
2

Biomasa
0.5
0

0
0

10 15 20 25 30

Tabla 3 Parametros cinticos obtenidos en la fermentacin de U.

maydis

Parmetro

Resultado

max

0,433 h-1

Xo

0,157 g/L

Xmax

1,722g/L

Yx/s

0,346 gX/gS

Yp/s

0.099 gP/gS

Yp/x

0.287 gP/gX

Ks

14,779 gS/L

Conclusin

Tiempo (h)
Figura 2 Grafica de crecimiento de U. maydis y el consumo de
sustrato (Glc).

Como se puede observar en la Figura 2 el valor

max se alcanzo en un periodo de 6 horas donde
el consumo de glucosa no fue tan elevado teniendo
valores de 16.4 g en el mismo periodo. Despus de
20 horas el crecimiento de U. maydis se detuvo
obteniendo valores de biomasa de 1.722 gX/L.
para el producto obtenido o se lograron obtener
resultados superiores a 1 g/L de protena
extracelular despus del periodo de fermentacin.
Tabla 2 Valores inciales y finales del proceso de fermentacin de
U. maydis

Anlisis

Los valores de biomasas tienen cierta relacin en

al crecimiento en un aumento de mas de diez
veces. Adems se dio un consumo muy bajo de
carbohidratos, teniendo un consumo del 50 % en
anlisis de carbohidratos totales. Tambin, se logro
encontrar una concentracin de azucares
reductores de 73.41 % con respecto a la
concentracin inicial.

Resultado
Inicial

Final

Conteo de clulas cmara de

Neubauer (UFC/mL)

14,073,958

159,177,083

Densidad ptica

0.114

1.295

Peso seco (gX/L)

0.157

1,722

Carbohidratos totales (g/L)

20.00

10.85

Azucares reductores (g/L)

17.00

12.48

El crecimiento de U. maydis presenta un bajo

consumo de glucosa, en dos anlisis diferentes
sobre el sustrato se encontr poco consumo sobre
el crecimiento del organismo. Utilizar un sustrato
relacionado al metabolismo de U. maydis como lo
es almidn (Venegas et al, 1995), permitir
relacionar mas el consumo del mismo en relacin
del ambiente donde este se desarrolla.
Referencias bibliogrficas
Levitus, G., Echenique, V., Rubinstein, C., Hopp,
E., & Mroguinski L., (2010). Biotecnologa Y
Mejoramiento Vegetal. Genmica, Argentina,
315-350.
Prescott, H. Klein. (2004). Crecimiento
microbiano. Espaa, 118-146.
Venegas, P. E.; Valverde, M. E.; ParedesLpez,
O.; Pataky, J. K. 1995. Production of the edible
fungus huitlacoche (Ustilago maydis): effect of
maize genotype on chemical composition.
Journal of fermentation and bioengineering.
80(1): 104106
Formato de: Biotechnolgy and Biengineering3