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FUNDACIN UNIVERSIDAD DE AMRICA

I INFORME DE LABORATORIO

DETERMINACIN DE ACTIVIDAD ENZIMTICA


(COEFICIENTES DE RENDIMIENTO DE PRODUCTOS Y REACTIVOS EN UN CULTIVO BATCH DE
Saccharomyces cerevisiae).

INTEGRANTES:
Laura Guarn COD:
Lina Muoz COD: 6141307
Felipe Quiroga COD:
Sebastin Sarmiento COD: 6141257
Grupo 3 de laboratorio

DOCENTE:
Luis Humberto Reyes Barrios

Bogot D.C.

OBJETIVOS

Objetivo general:

Septiembre 15 de 2016
industria farmacutica en el campo de las vacunas,
medicamentos, etc., y la industria qumica que
produce cidos, aldehdos, etc.

Determinar los coeficientes de rendimiento de los


compuestos que intervienen en la fermentacin
batch (por lotes) mediante el uso de tcnicas
experimentales y tericas.

Objetivos especficos:

-Aprender a realizar el montaje de un cultivo


batch.
-Identificar las partes que componen un cultivo y
los factores que lo alteran.
-Estudiar la produccin de biomasa en un cultivo
-Predecir concentraciones de sustancias en cultivo
a partir de curvas de calibracin.
-Realizar tincin de Gram.
MARCO TERICO

Fermentacin:

Segn la teora evolutiva acerca del origen de la


vida en la Tierra, se considera que la fermentacin
es el proceso de obtencin de energa ms antiguo.
Sobre esa base se considera que, dadas las
condiciones de la Tierra primitiva, en la que no
exista oxgeno libre y donde los rayos del sol no
llegaban a la superficie terrestre, los primeros
organismos solo podan obtener la energa de los
compuestos orgnicos mediante la fermentacin.
La fermentacin fue descubierta por Louis
Pasteur, que la describi como la vie sans lair (la
vida sin el aire). La fermentacin tpica es llevada
a cabo por las levaduras.
La fermentacin es un proceso que realizan
muchos microorganismos, efectuando reacciones
sobre algunos compuestos orgnicos y liberando
energa, siendo esta usualmente utilizada en la
produccin de alimentos, los alimentos
fermentados son aquellos cuyo procesamiento
involucra el crecimiento y actividad de
microorganismos como mohos, bacterias,
levaduras
(hongos
microscpicos).
La
fermentacin en alimentos los conserva por largos
perodos de tiempo.
Las tcnicas de fermentacin se modernizaron a
partir de la aparicin de tcnicas de cultivos puros
de clulas animales y vegetales, al igual de otro
tipo de cultivos microbianos. As, se industrializa
la fermentacin y da origen a grandes industrias
tales como las alimenticias donde se destacan la
panificadora y la de bebidas alcohlicas; la

Tipos de fermentacin:

Existen cuatro tipos de fermentacin que se


describirn a continuacin:
Actica: su caracterstica principal es la de
transformar el agua en cido actico, que como
bien es conocido se lo puede observar dentro de la
composicin del vinagre. La formacin de dicho
cido surge de la oxidacin que produce una
bacteria sobre el elemento alcohlico cuando
existe oxigeno en el ambiente. Considerablemente
distintas de otras, las bacterias que la causan
necesitan de la presencia de mucha cantidad de
oxigeno para poder llevarla a cabo.
Alcohlica: se trata de la realizada por
microorganismos que trabajan sobre los hidratos
de carbono, observables en gran cantidad de frutas
y cereales. Su producto resultante es un etanol
(una forma especfica de alcohol) o un gas (forma
de dixido de carbono). El etanol es utilizado
industrialmente para la produccin de la mayora
de las bebidas alcohlicas como cerveza o vino.
Por otra parte, tambin dan lugar a algunas
molculas de ATP pero son consumidas en
simultneo mediante el metabolismo celular
energtico de los microorganismos. En este caso
el proceso en su totalidad se dar sin presencia
alguna de oxigeno en el ambiente.
Butrica: al igual que la anterior se produce
nicamente en ausencia de oxigeno. En particular
se trata de el proceso por el cual se transforman
los glcidos, especficamente la lactosa, en el
llamado acido butrico. A su vez, puede
encontrarse tambin como resultado de este
proceso la formacin de gas. Los organismos
encargados de esta transformacin son bacterias
pertenecientes al grupo Clostridium, y dentro de
este la variedad Clostridium butyricum. El
desarrollo de este proceso es fcilmente detectable
dada la aparicin inmediata de olores
caractersticos fuertes y repulsivos.
Lctica: es la va por la cual se da lugar a la
elaboracin de cido lctico. El proceso consiste
en la oxidacin de una parte de la glucosa
contenida en el citosol de la clula para lograr la
produccin de energa. Diferente de la butrica,
esta puede ser llevada a cabo por ms de un tipo

de bacteria, siempre y cuando cumplan con la


condicin fundamental de pertenecer al grupo de
las llamadas bacterias lcticas. Pero adems,
puede producirse por otros microorganismos
como ser hongos y protozoos; como tambin a
travs de tejidos humanos y animales, como ser
por ejemplo los msculos.

La pared celular de las bacterias Gram positivas


poseen capas gruesas de peptidoglucano lo que les
da un color especfico por el contrario las
bacterias Gram negativas tienen capas de
peptidoglucano delgadas.
RESULTADOS Y CLCULOS

Volumen
solucin
Tubo
Stock
glucosa
mL
1
0
2
0.25
3
0.5
4
1
5
2
Saccharomyces cerevisiae:

Volumen
de Agua
Destilad
a mL

Absorbancia

Factor
de
dilucin

5
4,75
4,5
4
3

0,034
0,097
0,158
0,306
0,634

0
0,05
0,1
0,2
0,4

A la Saccharomyces se le llama en cocina la"


levadura del panadero" o "levadura de cerveza".
Este microrganismo es un hongo que tiene la
capacidad de convertir el azcar en alcohol y de
hacer subir la pasta o masa. Este hongo se
utilizaba desde la antigedad por los panaderos,
por los bodegueros y en la fabricacin de la
cerveza de alta fermentacin. El Saccharomyces
cerevisiae se utiliza a menudo en investigacin
para probar nuevas molculas, por su capacidad
para reproducirse de forma rpida y para la
expresin de nuevos genes.

Cultivo Batch:

Es un mtodo de cultivo de alimentacin


discontinua o por lo lotes en el cual se hacen
presentes las etapas de crecimiento y
decrecimiento celular tales como: lag (periodo de
adaptacin al medio), exponencial (crecimiento
celular), estacionaria (fase en la que el
crecimiento se iguala con el nmero de muertes) y
muerte (de tipo exponencial). Su importancia
radica en que no es constante a lo largo del
tiempo.

Tincin de Gram:

Es un proceso rpido de identificacin de


bacterias, se basa en la coloracin de contraste
sobre las paredes celulares de las bacterias, all se
usa una muestra a analizar en un portaobjetos,
dicha muestra es tratada con reactivos como el
lugol, alcohol-acetona y safranina.

Concentracin de la
glucosa: 10 g/L
Peso da 1: 214.13 gr
Peso da 2: 213.85 gr
Prdida de dixido de
carbono ( CO2 )=
214.13 gr-213.85 gr=0.28
gr
Peso tubo Falcon vaco:
7.1759 gr
Peso tubo Falcon + 10
mL de muestra: 16.9956

gr
Peso de sobrenadante en tubo Falcon: 7.3143
Peso sobrenadante: 16.9956 gr-7.3143 gr = 9.6813
gr
Absorbancia da 1 (575 nm):

Factor de dilucin:

Vf
Vi

0,25
=0,05
5

Absorbancia da 2:
Diluido 15%: 0.426
Concentracin: C1*V1=C2*V2. Se supone un
volumen de 1L
10g/L*1mL=C2*15mL
C2=0,66666667 g/L

Factor de dilucin Vs Absorbancia

Absorbancia
s

0.2

0.4

0.6

Factor de dilucin

Absorbancia a las

Curva de calibracin de la glucosa: NO SE


COMO HACER LA GRFICA NI ENFRENTAR
QU CON QU
Volumen solucin
Volumen de Agua
Tubo
Stock glucosa mL
Destilada mL

DNS

1
2
3
4

3
1,5
0.75
0,375

0
1,5
2,25
2,625

T =80 C79 C=1 C


Clculo de biomasa:
Condiciones de anlisis Peso Seco
Porcentaje Humedad biomasa:
_________________
Volumen centrifugado: 10 mL
Peso biomasa hmeda: 0,1384 gr
Concentracin de biomasa:

BIBLIOGRAFA
Reyes , L. (2016, 08). DETERMINACION
ACTIVIDAD ENZIMATICA (COEFICIENTES
DE RENDIMIENTO DE PRODUCTOS Y
REACTIVOS EN UN CULTIVO BATCH DE
Saccharomyces cerevisiae). Guas de laboratorio.
Obtenido 08, 2016.
Gonzlez, M. (2014, 04). Caracterizacin
bioqumica y biotecnolgica de la levadura
"Saccharomyces cerevisiae" GL 15. Universidad
de la Rioja. Obtenido 08, 2016, de
http://biblioteca.unirioja.es/tfe_e/TFE000802.pdf
Lpez, L. (2014, 02). Las tinciones bsicas en el

Peso seco=

Peso hmedo(1humedad reportada)


gr microbiologa. Tinciones. Obtenido
laboratorio
= de
de biomasa
Vol de la muestra
mLde:
08, 2016,

ANLISIS DE RESULTADOS

http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir2014/ir
141b.pdf

CO2 , pero los


0.28gr no son solamente de CO2 tambin

IMPORTANCIA DE LA FERMENTACIN.
UNAM. Mxico. Con acceso en lnea el 08-09-16
http://portalacademico.cch.unam.mx/alumno/biolo
gia1/unidad2/fermentacion/importancia

Se observ la prdida de

puede haber una pequea parte de agua.


Dado que se centrifug a 5500 rpm se tuvo que
aumentar el tiempo a 8 minutos.
En el sobrenadante todava quedaba un poco de
muestra por lo que la biomasa se calcula en base
hmeda.
Se ve que la absorbancia aumento en las 24 horas
cerca de 0,186 nm
CONCLUSIONES
Las levaduras que dan positivo (color rojo) en la
tincin de Gram estn contaminadas con agentes
externos.
No se presenta alcohol porque no hubo
fermentacin. Las bacterias no consumieron todo
el oxgeno porque los medios (especialmente la
temperatura) no fueron ptimos para ellas, as que
solo se present respiracin aerbica.
Las burbujas formadas en la inactivacin por
hipoclorito de sodio al 15% se dan por reacciones
de xido-reduccin.

SACCHAROMYCES CEREVISIAE. Revista en


lnea con acceso el 08-09-16.
http://salud.ccm.net/faq/17673-saccharomycescerevisiae-definicion

RESULTADOS: Estos deben incluir:


- Datos / observaciones. Los datos se refieren a aquellas cantidades que se derivan de mediciones y que se
han de utilizar en el proceso de los clculos.
- Grficos. Los grficos que hacen parte de un informe por lo general cumplen dos objetivos: (a)
Proporcionan informacin a partir de la cual se pueden obtener datos complementarios y necesarios para los
clculos; en otras palabras, hacen parte de los datos. (b) Representan la informacin derivada de los clculos;
es decir, hacen parte de los resultados.
- Clculos y resultados. Los resultados surgen al procesar los datos de acuerdo con principios o leyes
establecidas. Deben presentarse preferiblemente en forma de tabla junto con un modelo de clculo que
exprese, mediante una ecuacin matemtica apropiada, la forma como se obtuvo cada resultado.
- CONCLUSIONES Y DISCUSION. Aqu se trata del anlisis de los resultados obtenidos a la luz de los
comportamientos o valores esperados tericamente. Especficamente la discusin y las conclusiones se hacen
con base en la comparacin entre los resultados obtenidos y los valores tericos que muestra la literatura,
exponiendo las causas de las diferencias y el posible origen de los errores. Si hay grficos, debe hacerse un
anlisis de regresin para encontrar una ecuacin que muestre cul es la relacin entre las variables del
grfico.
BIBLIOGRAFA. Se consigna la bibliografa consultada y de utilidad en la elaboracin del informe. La
bibliografa de libros y/o artculos debe ajustarse a las normas establecidas internacionalmente.