EXPERIMENTO 4

METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS (MONOSACARIDOS, DISACÁRIDOS Y POLISACARIDOS)

REQUISITOS Repasar las estructuras de los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos OBJETIVOS Identificar por métodos colorimetritos cuantitativos los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos

1.

FUNDAMENTOS

Los carbohidratos están distribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales tiene participación estructural, funcional y metabólica. Los carbohidratos se clasifican dependiendo del numero de átomos de carbono que posee y la función aldehídica o cetonia, estas a su vez le confiere la base para la mayoría de las reacciones usadas para su identificación y cuantificación. Cuando el carbohidrato esta formado por una sola molécula de carbohidrato, se denomina monosacárido, por dos, disacárido y por mas de dos, polisacárido. Los disacáridos son azucares formados por la unión de dos monosacáridos mediante el enlace glucosídico. Si este enlace se efectúa entre dos carbonos anoméricos, el disacárido no tendrá el potencial aldehído o cetona libre, por lo tanto no dan positivas aquellas pruebas que involucren la participación de estos grupos, recibiendo el nombre de azúcar no reductor, la sacarosa y la trealosa son ejemplos de los disacáridos no reductores (ver anexos). Todos los disacáridos que posean un carbono anomérico libre, darán positivas estas reacciones, llamándose azucares reductores, debido a que promueven la reducción del reactivo usado y ellos mismos se oxidan. Aunque la mayoría de los disacáridos carecen de importancia para el hombre, con algunas excepciones como la sacarosa, su estudio se debe a que disacáridos como la maltosa y la celubiosa, se originan como producto de la 47

3 Prueba de Bial o de Orcinol-HCl Es una prueba específica para pentosas la cual se muestra en la figura 2. di y polisacáridos.1. Prueba de Molish Es una reacción general para carbohidratos que contienen más de 5 átomos de carbono. 1. la reacción se muestra en la siguiente figura: Figura 1 Reacción de Molish O OH OH OH OH OH CH CH CH CH CH CH2 Hexosa H2SO4 3H2O O HOH3C H Hidroximetil Furfura O C OH O HOH3C O C H + 2 HO H3 C OH O CH OH 1. 1. En el anexo. El fundamento radica en la reducción del acetato cúprico a oxido cuproso. especialmente en la población de bajos recursos.1. aunque algunos disacáridos (los reductores) dan positiva la reacción.1. La positividad se reconoce por la formación de una coloración verde botella brillante.2 Prueba de Barfoed: Es una reacción para identificar monosacáridos. Los polisacáridos. la maltosa. se muestran las estructuras de los principales mono.hidrólisis de polisacáridos. 48 . es el producto de la hidrólisis del glucógeno y el almidón. constituido por solo moléculas de glucosa es sin lugar a dudas la base alimenticia del globo terrestre. si son abundantes y representan para el hombre la principal fuente de energía metabólica de fácil aprovechamiento.1 Fundamentos químicos de las pruebas. el almidón. ya que así se hidroliza el disacárido. pero con mas tiempo de calentamiento.1 1. por ejemplo.

La reacción se presenta en la figura 3 Figura 3 Reacción de Seliwanoff OH O OH HC l 3H 2 O O C O H C H2O H Hidroximetil-furfural C H 2 C C HC HC HC H 2 O H OH Fructuosa 1.4 Prueba de Seliwanoff: Es especifica para cetosas que contengan 5 o más átomos de carbono.6 Prueba de Benedict: Es una prueba específica para las sustancias reductoras con grupos carboxilos libres.1. 49 . posiblemente a la formación de un complejo: Ioduro de almidón. El color azul. pero se usa casi exclusivamente para identificar fructosa.5 Prueba de Lugol: Es una prueba que se usa para identificar almidón.Figura 2 Reacción de Bial O OH OH OH OH CH CH CH CH CH2 Pentosa HCl 3H2O O O Furfural CH OH CH3 CH 3 OH O O CH + 2 HO OH H2O O CH 3 CH OH Orcinol OH bis (3. 1.dioxi-metil-fenil furfuril-metano) 1.5 .1.1. se debe.

Figura 5 reacción de la Prueba de Fenilhidrazina H O OH OH + H2O N NH2 H N N OH OH Fenilhidrazcina OH CHCHCHCHCHCH2OH OH CHCHCHCHCHCH2OH OH OH D-glucosa Fenilhidrazcina de D-gluco H OH OH OH OH H N NH2 H O OH OH OH NH2 CH N N CH CHCHCHCH2OH N N C C CH CHCH2OH CH + NH3 + Cetofenilhidrazona de D-glucosa Anilina N H H O OH OH H N NH2 N OH OH N N C C CHCHCHCH2OH OH C C CHCHCHCH2OH N OH N H + H2O Glucosazon 2. Los carbohidratos que solo se diferencian en sus átomos de carbono 1 y/o 2 darán la misma osazona. pinzas de madera 50 .Figura 4 Reacción de la prueba de Benedict cualitativo CuSO4 + 2 NaOH O C H ∆ ∆ Cu(OH)2 + Cu 2 O + R Na2 SO4 COOH + H 2 O Cu(OH)2 + R (rojo ladrillo) 1. 2.6 Prueba Fenilhidrazina Es una prueba para distinguir asas (y oligosacáridos). La figura 5 muestra la reacción.1 MATERIALES Y MÉTODOS Materiales Tubos de ensayo.1. como es el caso de la glucosa y la fructosa. mechero. que son isomeros de función.

indica que la muestra contiene carbohidratos. La aparición de un precipitado rojo. Algunos azucares dan con el Bial una coloración verde. añadir 1. 1 ml 1 ml 2. Mezclar y calentar en baño de agua hirviente. de Molish: α-naftol al 10% en etanol Mezclar H2SO4 concentrado Dejar caer lentamente de por las paredes del tubo. indica la presencia de una pentosa. antes de los 6 min. indica la presencia de un monosacárido. La aparición de un anillo violeta-rojizo en el sitio de contacto de los dos líquidos.2. 2.6H2O) Mezclar Llevar a baño de maría hirviente durante 3 min. La aparición de un escaso precipitado rojo.3 g en 200 ml de H2O destilada.2.8 ml de ácido acético glacial (CH3COOH). Volumen 1 ml 2 gotas 2. de Molish 0. La aparición de un color verde botella. brillante y totalmente transparente.3 P.5 ml 1 ml 51 .2.5 ml 1. Filtrar si es necesario.2.1 P. de Barfoed Sustancia problema Reactivo de Barfoed Acetato de cobre cristalizado 13. Añadir 1. Anotar el tiempo que corresponda a cada carbohidrato.5 g de orcinol y 8 gotas de cloruro férrico al 1% (Cl3Fe.2. P. de Bial Sustancia problema Reactivo de Bial 300 ml de HCl concentrado en 250 ml de H2O destilada.2 Métodos Prueba Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema R. pero está es opaca. contando los minutos y sacar del baño cada tubo inmediatamente después que haya aparecido el precipitado rojo ladrillo de Cu2O. entre 9 y 12 min indica la presencia de Lactosa o Maltosa.50 ml 2.

Se mezclan fenilhidrazina.5 % en H2O. de Lugol 2 ml 1 gota 2. tomar 3 ml añadir 12 ml HCl concentrado.7.s. indica el glucógeno o eritrodextrina.4. indica la presencia de fructosa. Sustancia problema Reactivo de fenilhidrazina. P. el carbohidrato es un monosacárido o un disacárido. de Fenilhidrazina 2 ml 0. amarillo o rojo indica la presencia de un azúcar reductor. de Benedict 0. Llevar a baño de María hirviente durante 10min. Cubrir con la laminilla cubreobjeto evitando dañar los cristales con movimientos bruscos o exceso de muestra.5 ml 2 ml 2.2.6. Sustancia problema Reactivo de Benedict cualitativo Sulfato cúprico + Citrato de sodio + Carbonato de sodio Mezclar Llevar a baño de María hirviente por 5 min.2. La aparición de una coloración azul indica la presencia del almidón y una coloración roja. La formación de un color rojo cereza. 35ml. Volumen 1 ml 2 ml 2. P.s. añadir H2O c. de Seliwanoff Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema Reactivo de Seliwanoff: Resorcinol al 0.5.5 ml 52 .2.p 100 ml Mezclar y observar. La aparición de un precipitado verde.2. P. Al final del período de calentamiento. Si el color no cambia.p. P.Prueba 2. Sustancia problema Reactivo de Lugol: A 5 g de Iodo y 10 g de K añadir H2O c. colocando con mucho cuidado una gota en el portaobjeto. enfrié los tubos en chorro de agua Dejar en reposo durante 5 min Examinar al microscopio la forma característica de los cristales de osazona. ácido acético glacial y agua destilada en una proporción de 1:1:4 Mezclar bien Coloque los tubos en agua de baño hirviendo durante 10 min.

2. Seliwanoff (-) Incoloro o una leve coloración Glucosa o galactosa (+) Rojo Fructosa (+) Verde Pentosa (+) Precipitado rojo de 9 a 12 min. Benedict P. Disacárido o Polisacáridos Prueba Lugol (+) Azul Almidón (-) Amarillo Disacárido (+) Rojo o amarillo oscuro Glucógeno P. Monosacárido P. Fenilhidrazina (+) Cristales en (+) Cristales en forma de Flor forma de nido (Maltosazona) (Lactosazona) Maltosa Lactosa 53 . Bial (-) Otro color Hexosa P. Fenilhidrazina (-) No cambia No es reductor Sacarosa (+) Precipitado rojo Reductor (+) Cristales en forma de palma (Glucosazona) Glucosa (+) Cristales en forma de estrella (Galactosazona) Galactosa P.3 Marcha analítica para monosacáridos. disacáridos y polisacáridos SUSTANCIA DESCONOCIDA Prueba Molish (-) incolora No es carbohidrato (+) Anillo rojo o violeta Carbohidrato Prueba Barfoed (+) Precipitado rojo antes de los 6 min.

Cubra con la laminilla y examine al microscopio. yuca y fríjol) en dos gotas de agua sobre un portaobjeto. Observe los resultados y anote en su informe. colóquelas en orden de reactividad y explique el por qué de ese orden. ribosa y fructosa. escriba las diferencias entre ambos enlaces. Escriba la glucosa en forma de silla. galactosa. Volumen de la solución del disacárido (ml) 1 1 1 1 HCl 1 N (ml) 1 1 0 0 H2O (ml) 0 0 1 1 Tome cuatro tubos de ensayo y siga el siguiente procedimiento: Solución del disacárido 1 Maltosa 2 Sacarosa 3 Maltosa 4 Sacarosa Seguidamente: 1. 9. 7. clasifíquelos según el número de átomos de carbono y la función principal Efectué un enlace hemiacetálico y uno hemicetálico. 12.1 Tubo Hidrólisis ácida de disacáridos.5 ml de Benedict y lleve a baño de María por 2 min. Explique en que consiste la hidrólisis ácida de disacáridos. Cuales son las aplicaciones prácticas de las pruebas estudiadas. 11.2.4 Preparación del almidón de diversas especies de granos para observar los gránulos al microscopio. 3. 4. alcohólica. AUTO-EVALUACIÓN. 54 . Cuál es la importancia energética del almidón. 2. 2. Hervir simultáneamente todos los tubos en baño de María durante 1 min. 8. Molish. 3. 10. Dibuje los monosacáridos glucosa. 2. Suspenda algunas partículas del almidón comercial (Papa. 4. levorrotatorio. A cada tubo añada 0. Efectué un enlace glucosídico. Defina los siguientes términos: carbono anomérico. Escriba las funciones: aldehídica. centro quiral. Escriba y compare las fórmulas de la maltosa y la trealosa. Defina los siguientes términos: azúcar reductor y azúcar no reductor. 6. ácida. 1. Dibuje dos o tres gránulos en el cuadro que tiene en su informe. 5.4. cetónica. Explique por qué el monosacárido gliceraldehido da negativa la P. cite ejemplos. Neutralizar los tubos 1 y 2 añadiendo 7 gotas de NaOH 1 N y 7 gotas de agua a los tubos 3 y 4 3. anote sus observaciones.

1 ANEXO REPRESENTACIÓN DE FISCHER DE MONOSACÁRIDOS Representación de Fischer de los monosacáridos mas frecuentes en la naturaleza carbonos H H H H H H C OH C O 1 C O C O C O * * * * C O H C OH H C OH H C OH HO C H 2 * HO C H HO C H H C OH HO C H 3 HO C H H C OH HO C H H C OH H C OH H C OH 4 5 6 H H C OH C OH H H C OH C OH H H C OH C OH H D-Galactosa D-Ribosa H C OH H H H C OH C OH H D-Fructosa H D-Glucosa H D-Manosa 4. 4.2 REPRESENTACIÓN DE HAWORTH Representación en estructuras de Haworth CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH O * O * O * O * O * CH2OH α-D-Manopiranosa α-D-Glucopiranosa β-D-Ribofuranosa β-D-Fructofuranosa α-D-Galactopiranosa 55 .4.

3 DISACÁRIDOS MAS IMPORTANTES Y ESTRUCTURAS DEL PIRANO Y FURANO DISACARIDOS MAS IMPORTANTES CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH o o o o o o MALTOSA α−D-glucopiranosil (1-4) α−D-glucopiranosa CH2OH CH2 CELUBIOSA β−D-glucopiranosil (1-4) β−D-glucopiranosa CH2OH CH2OH o o o o o o ISOMALTOSA α−D-glucopiranosil (1-6) α−D-glucopiranosa CH2OH LACTOSA β−D-galactopiranosil (1-4)α−D-glucopiranosa CH2OH o HO2HC o o CH2OH o CH2OH o o TREALOSA α−D-glucopiranosil (1-2) α−D-glucopiranosido SACAROSA α−D-glucopiranosil (1-2) β−D-fructofuranosido PIRANO o o BOTE SILLA FURANO o o 56 .4.

4.glucosa Beta-D.glucosa (anómero beta) Alfa-D.glucosa (anómero alfa) (e) CH2OH 6 a (a) H 5 O H (e) e 4 6 e 5 (e) OH H (a) H a (a) *1 e 3 a 2 e * 1 a e a O 4 OH (e) 3 2 OH (a ) H (a) OH (e) Alfa-D.glucopiranosa (Estructuras de Howard) Alfa-D. a = eje axial.glucopiranosa (Estructura en silla) clave: * = Carbono anomérico.4 ANÓMEROS DE LA GLUCOSA Y REPRESENTACIÓN EN SILLA D-GLUCOSA H O H H 1C C 2 C 3 C 4 C 5 C 6 H * OH OH H 1C C * HO H 1C * C 2 C 3 C 4 C 5 C 6 H H OH H2O O 2 OH H2O HO H H OH HO H H2O H 3 4 C C C C H OH H2O HO H H OH O H H 5 OH H 6 OH OH H H OH H (Estructuras de Fisher) D. e = eje ecuatorial 57 .

Molish P. En la casilla “N0 Muestra”. Lugol P. coloque el numero de cada tubo de las muestras problemas que se le entrego. Benedict P. Complete el siguiente cuadro con la información deseada. INFORME 4 Apellidos Grupo de prácticas Fecha Calificaciones Entrada (CARBOHIDRATOS) Nombres N° del mesón N° del estudiante Desarrollo Informe Definitiva 1. Bial P. Fenilhidrazina Nombre de la muestra problema 2. Use los signos (+) o (-).5. Barfoed P. para reportar la positividad o negatividad de la reacción. puede identificar la muestra problema. Sobre la base de los resultados de sus pruebas. Ud. N0 Muestra P. Dibuje y anote y sus observaciones sobre los cristales identificados en el microscopio Dibujo de los cristales de osazonas Observaciones 58 . Seliwanoff P.

Dibuje en el siguiente cuadro los gránulos de almidón. anote sus observaciones Almidón Dibujo Yuca Papa fríjol Observaciones 4.3. Anote sus resultados y la explicación sobre la hidrólisis ácida de disacáridos Tubo 1 Resultado Explicación 2 3 4 Nota: El informe debe ser entregado al finalizar la práctica. sin anexar hojas. 59 .