EXPERIMENTO 4

METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS (MONOSACARIDOS, DISACÁRIDOS Y POLISACARIDOS)

REQUISITOS Repasar las estructuras de los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos OBJETIVOS Identificar por métodos colorimetritos cuantitativos los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos

1.

FUNDAMENTOS

Los carbohidratos están distribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales tiene participación estructural, funcional y metabólica. Los carbohidratos se clasifican dependiendo del numero de átomos de carbono que posee y la función aldehídica o cetonia, estas a su vez le confiere la base para la mayoría de las reacciones usadas para su identificación y cuantificación. Cuando el carbohidrato esta formado por una sola molécula de carbohidrato, se denomina monosacárido, por dos, disacárido y por mas de dos, polisacárido. Los disacáridos son azucares formados por la unión de dos monosacáridos mediante el enlace glucosídico. Si este enlace se efectúa entre dos carbonos anoméricos, el disacárido no tendrá el potencial aldehído o cetona libre, por lo tanto no dan positivas aquellas pruebas que involucren la participación de estos grupos, recibiendo el nombre de azúcar no reductor, la sacarosa y la trealosa son ejemplos de los disacáridos no reductores (ver anexos). Todos los disacáridos que posean un carbono anomérico libre, darán positivas estas reacciones, llamándose azucares reductores, debido a que promueven la reducción del reactivo usado y ellos mismos se oxidan. Aunque la mayoría de los disacáridos carecen de importancia para el hombre, con algunas excepciones como la sacarosa, su estudio se debe a que disacáridos como la maltosa y la celubiosa, se originan como producto de la 47

Prueba de Molish Es una reacción general para carbohidratos que contienen más de 5 átomos de carbono. ya que así se hidroliza el disacárido. se muestran las estructuras de los principales mono. La positividad se reconoce por la formación de una coloración verde botella brillante. 1.1. di y polisacáridos. 48 . En el anexo. Los polisacáridos.1 1. la maltosa.hidrólisis de polisacáridos. por ejemplo.2 Prueba de Barfoed: Es una reacción para identificar monosacáridos. especialmente en la población de bajos recursos. el almidón. 1. la reacción se muestra en la siguiente figura: Figura 1 Reacción de Molish O OH OH OH OH OH CH CH CH CH CH CH2 Hexosa H2SO4 3H2O O HOH3C H Hidroximetil Furfura O C OH O HOH3C O C H + 2 HO H3 C OH O CH OH 1.1 Fundamentos químicos de las pruebas. aunque algunos disacáridos (los reductores) dan positiva la reacción.3 Prueba de Bial o de Orcinol-HCl Es una prueba específica para pentosas la cual se muestra en la figura 2.1. si son abundantes y representan para el hombre la principal fuente de energía metabólica de fácil aprovechamiento. pero con mas tiempo de calentamiento. constituido por solo moléculas de glucosa es sin lugar a dudas la base alimenticia del globo terrestre. El fundamento radica en la reducción del acetato cúprico a oxido cuproso. es el producto de la hidrólisis del glucógeno y el almidón.1.

1.Figura 2 Reacción de Bial O OH OH OH OH CH CH CH CH CH2 Pentosa HCl 3H2O O O Furfural CH OH CH3 CH 3 OH O O CH + 2 HO OH H2O O CH 3 CH OH Orcinol OH bis (3.dioxi-metil-fenil furfuril-metano) 1.4 Prueba de Seliwanoff: Es especifica para cetosas que contengan 5 o más átomos de carbono.6 Prueba de Benedict: Es una prueba específica para las sustancias reductoras con grupos carboxilos libres. 1.1. pero se usa casi exclusivamente para identificar fructosa. posiblemente a la formación de un complejo: Ioduro de almidón. 49 .5 Prueba de Lugol: Es una prueba que se usa para identificar almidón. El color azul.1. La reacción se presenta en la figura 3 Figura 3 Reacción de Seliwanoff OH O OH HC l 3H 2 O O C O H C H2O H Hidroximetil-furfural C H 2 C C HC HC HC H 2 O H OH Fructuosa 1. se debe.5 .

1. que son isomeros de función.1 MATERIALES Y MÉTODOS Materiales Tubos de ensayo. Figura 5 reacción de la Prueba de Fenilhidrazina H O OH OH + H2O N NH2 H N N OH OH Fenilhidrazcina OH CHCHCHCHCHCH2OH OH CHCHCHCHCHCH2OH OH OH D-glucosa Fenilhidrazcina de D-gluco H OH OH OH OH H N NH2 H O OH OH OH NH2 CH N N CH CHCHCHCH2OH N N C C CH CHCH2OH CH + NH3 + Cetofenilhidrazona de D-glucosa Anilina N H H O OH OH H N NH2 N OH OH N N C C CHCHCHCH2OH OH C C CHCHCHCH2OH N OH N H + H2O Glucosazon 2. pinzas de madera 50 .6 Prueba Fenilhidrazina Es una prueba para distinguir asas (y oligosacáridos). 2. La figura 5 muestra la reacción. mechero. Los carbohidratos que solo se diferencian en sus átomos de carbono 1 y/o 2 darán la misma osazona. como es el caso de la glucosa y la fructosa.Figura 4 Reacción de la prueba de Benedict cualitativo CuSO4 + 2 NaOH O C H ∆ ∆ Cu(OH)2 + Cu 2 O + R Na2 SO4 COOH + H 2 O Cu(OH)2 + R (rojo ladrillo) 1.

antes de los 6 min. indica la presencia de una pentosa. Filtrar si es necesario. Añadir 1. Algunos azucares dan con el Bial una coloración verde.5 ml 1 ml 51 .2. pero está es opaca.5 ml 1. Volumen 1 ml 2 gotas 2. de Bial Sustancia problema Reactivo de Bial 300 ml de HCl concentrado en 250 ml de H2O destilada.2.5 g de orcinol y 8 gotas de cloruro férrico al 1% (Cl3Fe. de Barfoed Sustancia problema Reactivo de Barfoed Acetato de cobre cristalizado 13. entre 9 y 12 min indica la presencia de Lactosa o Maltosa.2.2.8 ml de ácido acético glacial (CH3COOH). brillante y totalmente transparente. añadir 1. 1 ml 1 ml 2.50 ml 2.3 P. La aparición de un color verde botella. La aparición de un precipitado rojo. Anotar el tiempo que corresponda a cada carbohidrato. de Molish 0. de Molish: α-naftol al 10% en etanol Mezclar H2SO4 concentrado Dejar caer lentamente de por las paredes del tubo. La aparición de un anillo violeta-rojizo en el sitio de contacto de los dos líquidos. indica que la muestra contiene carbohidratos. Mezclar y calentar en baño de agua hirviente. indica la presencia de un monosacárido. P. contando los minutos y sacar del baño cada tubo inmediatamente después que haya aparecido el precipitado rojo ladrillo de Cu2O.2.3 g en 200 ml de H2O destilada.2 Métodos Prueba Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema R.1 P.6H2O) Mezclar Llevar a baño de maría hirviente durante 3 min. 2. La aparición de un escaso precipitado rojo.

Cubrir con la laminilla cubreobjeto evitando dañar los cristales con movimientos bruscos o exceso de muestra. añadir H2O c. La formación de un color rojo cereza. colocando con mucho cuidado una gota en el portaobjeto.s. amarillo o rojo indica la presencia de un azúcar reductor.2.5 % en H2O.4.7. el carbohidrato es un monosacárido o un disacárido.6. Llevar a baño de María hirviente durante 10min. indica la presencia de fructosa. de Fenilhidrazina 2 ml 0.2. de Lugol 2 ml 1 gota 2.p 100 ml Mezclar y observar. de Seliwanoff Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema Reactivo de Seliwanoff: Resorcinol al 0. La aparición de un precipitado verde.2.p. P.2. P. P. La aparición de una coloración azul indica la presencia del almidón y una coloración roja. Sustancia problema Reactivo de Benedict cualitativo Sulfato cúprico + Citrato de sodio + Carbonato de sodio Mezclar Llevar a baño de María hirviente por 5 min. 35ml.5. tomar 3 ml añadir 12 ml HCl concentrado. enfrié los tubos en chorro de agua Dejar en reposo durante 5 min Examinar al microscopio la forma característica de los cristales de osazona.Prueba 2.5 ml 52 . P. Si el color no cambia. ácido acético glacial y agua destilada en una proporción de 1:1:4 Mezclar bien Coloque los tubos en agua de baño hirviendo durante 10 min. Se mezclan fenilhidrazina. Sustancia problema Reactivo de Lugol: A 5 g de Iodo y 10 g de K añadir H2O c. indica el glucógeno o eritrodextrina.s. Volumen 1 ml 2 ml 2. de Benedict 0. Al final del período de calentamiento.5 ml 2 ml 2. Sustancia problema Reactivo de fenilhidrazina.

Bial (-) Otro color Hexosa P.3 Marcha analítica para monosacáridos. Disacárido o Polisacáridos Prueba Lugol (+) Azul Almidón (-) Amarillo Disacárido (+) Rojo o amarillo oscuro Glucógeno P. Fenilhidrazina (+) Cristales en (+) Cristales en forma de Flor forma de nido (Maltosazona) (Lactosazona) Maltosa Lactosa 53 . Seliwanoff (-) Incoloro o una leve coloración Glucosa o galactosa (+) Rojo Fructosa (+) Verde Pentosa (+) Precipitado rojo de 9 a 12 min. Monosacárido P. disacáridos y polisacáridos SUSTANCIA DESCONOCIDA Prueba Molish (-) incolora No es carbohidrato (+) Anillo rojo o violeta Carbohidrato Prueba Barfoed (+) Precipitado rojo antes de los 6 min. Benedict P.2. Fenilhidrazina (-) No cambia No es reductor Sacarosa (+) Precipitado rojo Reductor (+) Cristales en forma de palma (Glucosazona) Glucosa (+) Cristales en forma de estrella (Galactosazona) Galactosa P.

Dibuje dos o tres gránulos en el cuadro que tiene en su informe. 10. Hervir simultáneamente todos los tubos en baño de María durante 1 min. Defina los siguientes términos: azúcar reductor y azúcar no reductor. 2. Observe los resultados y anote en su informe. Explique en que consiste la hidrólisis ácida de disacáridos.4. Dibuje los monosacáridos glucosa. centro quiral. Cuál es la importancia energética del almidón. 12. ácida. clasifíquelos según el número de átomos de carbono y la función principal Efectué un enlace hemiacetálico y uno hemicetálico. Escriba y compare las fórmulas de la maltosa y la trealosa. Volumen de la solución del disacárido (ml) 1 1 1 1 HCl 1 N (ml) 1 1 0 0 H2O (ml) 0 0 1 1 Tome cuatro tubos de ensayo y siga el siguiente procedimiento: Solución del disacárido 1 Maltosa 2 Sacarosa 3 Maltosa 4 Sacarosa Seguidamente: 1. ribosa y fructosa.5 ml de Benedict y lleve a baño de María por 2 min. Escriba la glucosa en forma de silla. Cuales son las aplicaciones prácticas de las pruebas estudiadas. Efectué un enlace glucosídico. Defina los siguientes términos: carbono anomérico. Suspenda algunas partículas del almidón comercial (Papa.4 Preparación del almidón de diversas especies de granos para observar los gránulos al microscopio. 11. 2. anote sus observaciones. Molish. 3. cite ejemplos. cetónica. 7. escriba las diferencias entre ambos enlaces. 9. 8. 4.1 Tubo Hidrólisis ácida de disacáridos. 2. 5. 3. alcohólica. colóquelas en orden de reactividad y explique el por qué de ese orden. 4. 6. Neutralizar los tubos 1 y 2 añadiendo 7 gotas de NaOH 1 N y 7 gotas de agua a los tubos 3 y 4 3. yuca y fríjol) en dos gotas de agua sobre un portaobjeto. 54 . A cada tubo añada 0.2. Cubra con la laminilla y examine al microscopio. levorrotatorio. AUTO-EVALUACIÓN. Explique por qué el monosacárido gliceraldehido da negativa la P. Escriba las funciones: aldehídica. 1. galactosa.

4.4.2 REPRESENTACIÓN DE HAWORTH Representación en estructuras de Haworth CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH O * O * O * O * O * CH2OH α-D-Manopiranosa α-D-Glucopiranosa β-D-Ribofuranosa β-D-Fructofuranosa α-D-Galactopiranosa 55 .1 ANEXO REPRESENTACIÓN DE FISCHER DE MONOSACÁRIDOS Representación de Fischer de los monosacáridos mas frecuentes en la naturaleza carbonos H H H H H H C OH C O 1 C O C O C O * * * * C O H C OH H C OH H C OH HO C H 2 * HO C H HO C H H C OH HO C H 3 HO C H H C OH HO C H H C OH H C OH H C OH 4 5 6 H H C OH C OH H H C OH C OH H H C OH C OH H D-Galactosa D-Ribosa H C OH H H H C OH C OH H D-Fructosa H D-Glucosa H D-Manosa 4.

4.3 DISACÁRIDOS MAS IMPORTANTES Y ESTRUCTURAS DEL PIRANO Y FURANO DISACARIDOS MAS IMPORTANTES CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH o o o o o o MALTOSA α−D-glucopiranosil (1-4) α−D-glucopiranosa CH2OH CH2 CELUBIOSA β−D-glucopiranosil (1-4) β−D-glucopiranosa CH2OH CH2OH o o o o o o ISOMALTOSA α−D-glucopiranosil (1-6) α−D-glucopiranosa CH2OH LACTOSA β−D-galactopiranosil (1-4)α−D-glucopiranosa CH2OH o HO2HC o o CH2OH o CH2OH o o TREALOSA α−D-glucopiranosil (1-2) α−D-glucopiranosido SACAROSA α−D-glucopiranosil (1-2) β−D-fructofuranosido PIRANO o o BOTE SILLA FURANO o o 56 .

glucosa (anómero beta) Alfa-D. e = eje ecuatorial 57 .glucopiranosa (Estructuras de Howard) Alfa-D.glucosa (anómero alfa) (e) CH2OH 6 a (a) H 5 O H (e) e 4 6 e 5 (e) OH H (a) H a (a) *1 e 3 a 2 e * 1 a e a O 4 OH (e) 3 2 OH (a ) H (a) OH (e) Alfa-D.glucopiranosa (Estructura en silla) clave: * = Carbono anomérico.4.4 ANÓMEROS DE LA GLUCOSA Y REPRESENTACIÓN EN SILLA D-GLUCOSA H O H H 1C C 2 C 3 C 4 C 5 C 6 H * OH OH H 1C C * HO H 1C * C 2 C 3 C 4 C 5 C 6 H H OH H2O O 2 OH H2O HO H H OH HO H H2O H 3 4 C C C C H OH H2O HO H H OH O H H 5 OH H 6 OH OH H H OH H (Estructuras de Fisher) D. a = eje axial.glucosa Beta-D.

En la casilla “N0 Muestra”. Barfoed P. coloque el numero de cada tubo de las muestras problemas que se le entrego. Bial P. para reportar la positividad o negatividad de la reacción. Lugol P. INFORME 4 Apellidos Grupo de prácticas Fecha Calificaciones Entrada (CARBOHIDRATOS) Nombres N° del mesón N° del estudiante Desarrollo Informe Definitiva 1. Use los signos (+) o (-).5. N0 Muestra P. Seliwanoff P. Complete el siguiente cuadro con la información deseada. Sobre la base de los resultados de sus pruebas. Ud. Benedict P. Molish P. Dibuje y anote y sus observaciones sobre los cristales identificados en el microscopio Dibujo de los cristales de osazonas Observaciones 58 . puede identificar la muestra problema. Fenilhidrazina Nombre de la muestra problema 2.

3. Anote sus resultados y la explicación sobre la hidrólisis ácida de disacáridos Tubo 1 Resultado Explicación 2 3 4 Nota: El informe debe ser entregado al finalizar la práctica. Dibuje en el siguiente cuadro los gránulos de almidón. anote sus observaciones Almidón Dibujo Yuca Papa fríjol Observaciones 4. 59 . sin anexar hojas.

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