EXPERIMENTO 4

METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS (MONOSACARIDOS, DISACÁRIDOS Y POLISACARIDOS)

REQUISITOS Repasar las estructuras de los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos OBJETIVOS Identificar por métodos colorimetritos cuantitativos los principales monosacáridos, disacáridos y polisacáridos

1.

FUNDAMENTOS

Los carbohidratos están distribuidos ampliamente en vegetales y animales en los cuales tiene participación estructural, funcional y metabólica. Los carbohidratos se clasifican dependiendo del numero de átomos de carbono que posee y la función aldehídica o cetonia, estas a su vez le confiere la base para la mayoría de las reacciones usadas para su identificación y cuantificación. Cuando el carbohidrato esta formado por una sola molécula de carbohidrato, se denomina monosacárido, por dos, disacárido y por mas de dos, polisacárido. Los disacáridos son azucares formados por la unión de dos monosacáridos mediante el enlace glucosídico. Si este enlace se efectúa entre dos carbonos anoméricos, el disacárido no tendrá el potencial aldehído o cetona libre, por lo tanto no dan positivas aquellas pruebas que involucren la participación de estos grupos, recibiendo el nombre de azúcar no reductor, la sacarosa y la trealosa son ejemplos de los disacáridos no reductores (ver anexos). Todos los disacáridos que posean un carbono anomérico libre, darán positivas estas reacciones, llamándose azucares reductores, debido a que promueven la reducción del reactivo usado y ellos mismos se oxidan. Aunque la mayoría de los disacáridos carecen de importancia para el hombre, con algunas excepciones como la sacarosa, su estudio se debe a que disacáridos como la maltosa y la celubiosa, se originan como producto de la 47

por ejemplo. aunque algunos disacáridos (los reductores) dan positiva la reacción. se muestran las estructuras de los principales mono. 48 . 1.1.2 Prueba de Barfoed: Es una reacción para identificar monosacáridos. especialmente en la población de bajos recursos. es el producto de la hidrólisis del glucógeno y el almidón. El fundamento radica en la reducción del acetato cúprico a oxido cuproso. di y polisacáridos.1 1. 1.1. Prueba de Molish Es una reacción general para carbohidratos que contienen más de 5 átomos de carbono. Los polisacáridos. si son abundantes y representan para el hombre la principal fuente de energía metabólica de fácil aprovechamiento.3 Prueba de Bial o de Orcinol-HCl Es una prueba específica para pentosas la cual se muestra en la figura 2. la reacción se muestra en la siguiente figura: Figura 1 Reacción de Molish O OH OH OH OH OH CH CH CH CH CH CH2 Hexosa H2SO4 3H2O O HOH3C H Hidroximetil Furfura O C OH O HOH3C O C H + 2 HO H3 C OH O CH OH 1.1 Fundamentos químicos de las pruebas.hidrólisis de polisacáridos. la maltosa. ya que así se hidroliza el disacárido.1. el almidón. pero con mas tiempo de calentamiento. La positividad se reconoce por la formación de una coloración verde botella brillante. En el anexo. constituido por solo moléculas de glucosa es sin lugar a dudas la base alimenticia del globo terrestre.

1.5 Prueba de Lugol: Es una prueba que se usa para identificar almidón.5 .1.6 Prueba de Benedict: Es una prueba específica para las sustancias reductoras con grupos carboxilos libres.Figura 2 Reacción de Bial O OH OH OH OH CH CH CH CH CH2 Pentosa HCl 3H2O O O Furfural CH OH CH3 CH 3 OH O O CH + 2 HO OH H2O O CH 3 CH OH Orcinol OH bis (3.4 Prueba de Seliwanoff: Es especifica para cetosas que contengan 5 o más átomos de carbono. El color azul. pero se usa casi exclusivamente para identificar fructosa. posiblemente a la formación de un complejo: Ioduro de almidón. se debe. La reacción se presenta en la figura 3 Figura 3 Reacción de Seliwanoff OH O OH HC l 3H 2 O O C O H C H2O H Hidroximetil-furfural C H 2 C C HC HC HC H 2 O H OH Fructuosa 1.1. 1. 49 .dioxi-metil-fenil furfuril-metano) 1.

Figura 4 Reacción de la prueba de Benedict cualitativo CuSO4 + 2 NaOH O C H ∆ ∆ Cu(OH)2 + Cu 2 O + R Na2 SO4 COOH + H 2 O Cu(OH)2 + R (rojo ladrillo) 1. pinzas de madera 50 . Figura 5 reacción de la Prueba de Fenilhidrazina H O OH OH + H2O N NH2 H N N OH OH Fenilhidrazcina OH CHCHCHCHCHCH2OH OH CHCHCHCHCHCH2OH OH OH D-glucosa Fenilhidrazcina de D-gluco H OH OH OH OH H N NH2 H O OH OH OH NH2 CH N N CH CHCHCHCH2OH N N C C CH CHCH2OH CH + NH3 + Cetofenilhidrazona de D-glucosa Anilina N H H O OH OH H N NH2 N OH OH N N C C CHCHCHCH2OH OH C C CHCHCHCH2OH N OH N H + H2O Glucosazon 2.1. mechero. Los carbohidratos que solo se diferencian en sus átomos de carbono 1 y/o 2 darán la misma osazona. 2.6 Prueba Fenilhidrazina Es una prueba para distinguir asas (y oligosacáridos).1 MATERIALES Y MÉTODOS Materiales Tubos de ensayo. como es el caso de la glucosa y la fructosa. La figura 5 muestra la reacción. que son isomeros de función.

5 g de orcinol y 8 gotas de cloruro férrico al 1% (Cl3Fe. de Bial Sustancia problema Reactivo de Bial 300 ml de HCl concentrado en 250 ml de H2O destilada. de Molish 0. de Molish: α-naftol al 10% en etanol Mezclar H2SO4 concentrado Dejar caer lentamente de por las paredes del tubo.6H2O) Mezclar Llevar a baño de maría hirviente durante 3 min. P.2. La aparición de un anillo violeta-rojizo en el sitio de contacto de los dos líquidos. antes de los 6 min.5 ml 1. 1 ml 1 ml 2. 2. Anotar el tiempo que corresponda a cada carbohidrato. Añadir 1.8 ml de ácido acético glacial (CH3COOH). indica la presencia de una pentosa. indica que la muestra contiene carbohidratos. indica la presencia de un monosacárido. Filtrar si es necesario.3 g en 200 ml de H2O destilada. La aparición de un color verde botella.2. Mezclar y calentar en baño de agua hirviente. Volumen 1 ml 2 gotas 2. de Barfoed Sustancia problema Reactivo de Barfoed Acetato de cobre cristalizado 13.2. La aparición de un escaso precipitado rojo.1 P. entre 9 y 12 min indica la presencia de Lactosa o Maltosa. añadir 1.2. La aparición de un precipitado rojo.2 Métodos Prueba Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema R. pero está es opaca.5 ml 1 ml 51 .3 P.50 ml 2. brillante y totalmente transparente. Algunos azucares dan con el Bial una coloración verde.2. contando los minutos y sacar del baño cada tubo inmediatamente después que haya aparecido el precipitado rojo ladrillo de Cu2O.

indica la presencia de fructosa. ácido acético glacial y agua destilada en una proporción de 1:1:4 Mezclar bien Coloque los tubos en agua de baño hirviendo durante 10 min. Sustancia problema Reactivo de Benedict cualitativo Sulfato cúprico + Citrato de sodio + Carbonato de sodio Mezclar Llevar a baño de María hirviente por 5 min.Prueba 2.p. Sustancia problema Reactivo de Lugol: A 5 g de Iodo y 10 g de K añadir H2O c. Sustancia problema Reactivo de fenilhidrazina.5. Volumen 1 ml 2 ml 2. P.p 100 ml Mezclar y observar. P. el carbohidrato es un monosacárido o un disacárido.2. de Benedict 0. P.2. Si el color no cambia.4.2.s. Cubrir con la laminilla cubreobjeto evitando dañar los cristales con movimientos bruscos o exceso de muestra. tomar 3 ml añadir 12 ml HCl concentrado.2.s. P. 35ml.6. enfrié los tubos en chorro de agua Dejar en reposo durante 5 min Examinar al microscopio la forma característica de los cristales de osazona. Se mezclan fenilhidrazina. añadir H2O c. Llevar a baño de María hirviente durante 10min. de Lugol 2 ml 1 gota 2. Al final del período de calentamiento.5 ml 2 ml 2. indica el glucógeno o eritrodextrina.5 ml 52 . La formación de un color rojo cereza. La aparición de una coloración azul indica la presencia del almidón y una coloración roja. de Fenilhidrazina 2 ml 0. amarillo o rojo indica la presencia de un azúcar reductor. colocando con mucho cuidado una gota en el portaobjeto.7. La aparición de un precipitado verde.5 % en H2O. de Seliwanoff Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema Reactivo de Seliwanoff: Resorcinol al 0.

Bial (-) Otro color Hexosa P. Seliwanoff (-) Incoloro o una leve coloración Glucosa o galactosa (+) Rojo Fructosa (+) Verde Pentosa (+) Precipitado rojo de 9 a 12 min.3 Marcha analítica para monosacáridos.2. Fenilhidrazina (+) Cristales en (+) Cristales en forma de Flor forma de nido (Maltosazona) (Lactosazona) Maltosa Lactosa 53 . Benedict P. disacáridos y polisacáridos SUSTANCIA DESCONOCIDA Prueba Molish (-) incolora No es carbohidrato (+) Anillo rojo o violeta Carbohidrato Prueba Barfoed (+) Precipitado rojo antes de los 6 min. Monosacárido P. Fenilhidrazina (-) No cambia No es reductor Sacarosa (+) Precipitado rojo Reductor (+) Cristales en forma de palma (Glucosazona) Glucosa (+) Cristales en forma de estrella (Galactosazona) Galactosa P. Disacárido o Polisacáridos Prueba Lugol (+) Azul Almidón (-) Amarillo Disacárido (+) Rojo o amarillo oscuro Glucógeno P.

Molish. A cada tubo añada 0. Hervir simultáneamente todos los tubos en baño de María durante 1 min. 2. 6. 8. Explique por qué el monosacárido gliceraldehido da negativa la P. Cuales son las aplicaciones prácticas de las pruebas estudiadas. 2. Efectué un enlace glucosídico.5 ml de Benedict y lleve a baño de María por 2 min. Dibuje los monosacáridos glucosa. Escriba la glucosa en forma de silla. centro quiral. cetónica. 11. 54 . escriba las diferencias entre ambos enlaces. galactosa.4 Preparación del almidón de diversas especies de granos para observar los gránulos al microscopio. ácida. 4. 7. 3.4. Escriba y compare las fórmulas de la maltosa y la trealosa. cite ejemplos. 12. anote sus observaciones. ribosa y fructosa. Neutralizar los tubos 1 y 2 añadiendo 7 gotas de NaOH 1 N y 7 gotas de agua a los tubos 3 y 4 3. 9. alcohólica. 5. 1. AUTO-EVALUACIÓN.1 Tubo Hidrólisis ácida de disacáridos. levorrotatorio. Observe los resultados y anote en su informe. Defina los siguientes términos: azúcar reductor y azúcar no reductor. Explique en que consiste la hidrólisis ácida de disacáridos. 10. colóquelas en orden de reactividad y explique el por qué de ese orden. yuca y fríjol) en dos gotas de agua sobre un portaobjeto. 2. Escriba las funciones: aldehídica. Defina los siguientes términos: carbono anomérico. Volumen de la solución del disacárido (ml) 1 1 1 1 HCl 1 N (ml) 1 1 0 0 H2O (ml) 0 0 1 1 Tome cuatro tubos de ensayo y siga el siguiente procedimiento: Solución del disacárido 1 Maltosa 2 Sacarosa 3 Maltosa 4 Sacarosa Seguidamente: 1. clasifíquelos según el número de átomos de carbono y la función principal Efectué un enlace hemiacetálico y uno hemicetálico. Dibuje dos o tres gránulos en el cuadro que tiene en su informe. 4. Suspenda algunas partículas del almidón comercial (Papa. Cuál es la importancia energética del almidón. 3. Cubra con la laminilla y examine al microscopio.2.

4.2 REPRESENTACIÓN DE HAWORTH Representación en estructuras de Haworth CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH O * O * O * O * O * CH2OH α-D-Manopiranosa α-D-Glucopiranosa β-D-Ribofuranosa β-D-Fructofuranosa α-D-Galactopiranosa 55 .4.1 ANEXO REPRESENTACIÓN DE FISCHER DE MONOSACÁRIDOS Representación de Fischer de los monosacáridos mas frecuentes en la naturaleza carbonos H H H H H H C OH C O 1 C O C O C O * * * * C O H C OH H C OH H C OH HO C H 2 * HO C H HO C H H C OH HO C H 3 HO C H H C OH HO C H H C OH H C OH H C OH 4 5 6 H H C OH C OH H H C OH C OH H H C OH C OH H D-Galactosa D-Ribosa H C OH H H H C OH C OH H D-Fructosa H D-Glucosa H D-Manosa 4.

4.3 DISACÁRIDOS MAS IMPORTANTES Y ESTRUCTURAS DEL PIRANO Y FURANO DISACARIDOS MAS IMPORTANTES CH2OH CH2OH CH2OH CH2OH o o o o o o MALTOSA α−D-glucopiranosil (1-4) α−D-glucopiranosa CH2OH CH2 CELUBIOSA β−D-glucopiranosil (1-4) β−D-glucopiranosa CH2OH CH2OH o o o o o o ISOMALTOSA α−D-glucopiranosil (1-6) α−D-glucopiranosa CH2OH LACTOSA β−D-galactopiranosil (1-4)α−D-glucopiranosa CH2OH o HO2HC o o CH2OH o CH2OH o o TREALOSA α−D-glucopiranosil (1-2) α−D-glucopiranosido SACAROSA α−D-glucopiranosil (1-2) β−D-fructofuranosido PIRANO o o BOTE SILLA FURANO o o 56 .

a = eje axial.glucopiranosa (Estructura en silla) clave: * = Carbono anomérico.glucopiranosa (Estructuras de Howard) Alfa-D.4.glucosa (anómero beta) Alfa-D. e = eje ecuatorial 57 .glucosa (anómero alfa) (e) CH2OH 6 a (a) H 5 O H (e) e 4 6 e 5 (e) OH H (a) H a (a) *1 e 3 a 2 e * 1 a e a O 4 OH (e) 3 2 OH (a ) H (a) OH (e) Alfa-D.glucosa Beta-D.4 ANÓMEROS DE LA GLUCOSA Y REPRESENTACIÓN EN SILLA D-GLUCOSA H O H H 1C C 2 C 3 C 4 C 5 C 6 H * OH OH H 1C C * HO H 1C * C 2 C 3 C 4 C 5 C 6 H H OH H2O O 2 OH H2O HO H H OH HO H H2O H 3 4 C C C C H OH H2O HO H H OH O H H 5 OH H 6 OH OH H H OH H (Estructuras de Fisher) D.

N0 Muestra P. Benedict P. para reportar la positividad o negatividad de la reacción. INFORME 4 Apellidos Grupo de prácticas Fecha Calificaciones Entrada (CARBOHIDRATOS) Nombres N° del mesón N° del estudiante Desarrollo Informe Definitiva 1. Lugol P. Sobre la base de los resultados de sus pruebas. Barfoed P. coloque el numero de cada tubo de las muestras problemas que se le entrego. Use los signos (+) o (-). Seliwanoff P. Fenilhidrazina Nombre de la muestra problema 2. puede identificar la muestra problema. Ud. Complete el siguiente cuadro con la información deseada. Bial P.5. Dibuje y anote y sus observaciones sobre los cristales identificados en el microscopio Dibujo de los cristales de osazonas Observaciones 58 . En la casilla “N0 Muestra”. Molish P.

Anote sus resultados y la explicación sobre la hidrólisis ácida de disacáridos Tubo 1 Resultado Explicación 2 3 4 Nota: El informe debe ser entregado al finalizar la práctica. Dibuje en el siguiente cuadro los gránulos de almidón.3. sin anexar hojas. anote sus observaciones Almidón Dibujo Yuca Papa fríjol Observaciones 4. 59 .

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