DEPARTAMENTO DE QUMICA ANALTICA Y TECNOLOGA DE ALIMENTOS

FUNDAMENTOS DE ANLISIS INSTRUMENTAL. 7 RELACIN DE PROBLEMAS.

1.- Las sustancias A y B tienen tiempos de retencin de 16.40 y 17.63 min, respectivamente, en una
columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a travs de la columna en 1.30 min. Las anchuras
mximas (en la base) de A y B son 1.11 y 1.21 min, respectivamente. Calcule:
a) la resolucin entre los compuestos A y B
b) el nmero medio de platos de la columna
c) la altura de plato
d) la longitud de la columna necesaria para lograr una resolucin de 1.5
e) el tiempo necesario para eluir la sustancia B en la columna que da un valor de RS de 1.5
2.- La figura muestra el cromatograma de una mezcla de dos componentes en una columna
cromatogrfica de lquidos empaquetada, de 25 cm. La velocidad de flujo fue de 0.40 mL min-1.
a) Determina los factores de retencin para los dos componentes
b) Calcula la resolucin de los dos picos
c) Halla la altura media de plato
d) Qu longitud de la columna se necesitaria para alcanzar una resolucin de 1.75?
e) Supongamos que la longitud de la columna se ha fijado a 25 cm y que el material de
empaquetamiento est fijo. Qu medidas podra usted tomar a fin de incrementar la resolucin
para lograr la separacin en lnea base?
f)Hay alguna medida que usted pudiera usar para lograr una mejor separacin en menos tiempo
con la misma columna que en el apartado anterior?

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3.- El aldehdo cinmico es el compuesto del que depende el sabor de la canela. Tambin es un
antimicrobiano potente, que forma parte de ciertos aceites esenciales. La respuesta de la
cromatografa de gases (CG) con una muestra artificial que contiene seis componentes de aceites
esenciales y metilbenzoato como patrn interno se muestra en la siguiente figura:

La siguiente figura es una ampliacin de la regin cerca del pico del aldehdo cinmico.

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Calcula:
a) el nmero de platos tericos para el compuesto de estudio.
b) La columna de slice fundida tiene 0.25 mm x 30 cm de dimetro y longitud de columna
respectivamente, y con un tamao de partcula de 0.25 m. Determina la altura de plato terico.
c) Se obtienen datos cuantitativos empleando metilbenzoato como patrn interno para los
compuestos aldehdo cinmico y timol tal y como se muestra en la siguiente tabla. Sabiendo que los
valores de rea relativas para cada compuesto se calculan dividiendo el rea del pico del
componente/rea del patrn interno, calcula: el rea relativa para los dos compuestos
anteriormente mencionados, determine las ecuaciones de la curva de calibrado para cada
componente y a partir de los datos del apartado anterior determina qu componente tiene mayor
sensibilidad.
rea de pico abosluta
Concentracin
(g mL-1)
0.50
0.75
1.30
2.50

Metil
benzoato
18225
18523
17895
18329

Aldehdo
cinmico
12325
20140
35462
68090

Timol
20238
36890
69975
130215

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PARMETROS CROMATOGRFICOS
Seal
Compuesto A

tRB
tRA

Compuesto B

Compuesto A

W1/2A

W1/2B

to
WA

WB

Tiempo (min)

Tiempo muerto

1. Tiempo de retencin (tR)

2. Factor de capacidad (K)

K'=

t R t0
t0

o bien

K'=

VR VO
V0

3. Selectividad () Factor de selectividad, tambin llamado retencin relativa:

1, 2 =

t R2 t0 K 2
=
t R1 t 0
K1

4. Eficacia de la columna

- Nmero de plato terico (N):

t
N = 16 R

: anchura de la base del tringulo construido por el pico.

1/2: anchura de la media altura del pico.
- Altura de plato terico (H):
6. Resolucin (RS)

Rs =

(t R 2 t R1 )
2(t t )
= R 2 R1
( 2 + 1 ) / 2 ( 2 + 1 )

H=L/N

t
N = 5.54 R
1 / 2

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1.- Las sustancias A y B tienen tiempos de retencin de 16.40 y 17.63 min, respectivamente, en una
columna de 30 cm. Una especie no retenida pasa a travs de la columna en 1.30 min. Las anchuras
mximas (en la base) de A y B son 1.11 y 1.21 min, respectivamente. Calcule:
a) la resolucin entre los compuestos A y B
b) el nmero medio de platos de la columna
c) la altura de plato
d) la longitud de la columna necesaria para lograr una resolucin de 1.5
e) el tiempo necesario para eluir la sustancia B en la columna que da un valor de RS de 1.5
a)

Rs =

(t R 2 t R1 )
2(t t ) 2 * (17.63 16.40)
= R 2 R1 =
= 1.06
(2 + 1 ) / 2 (2 + 1 )
1.11 + 1.21

Es una resolucin menor que 1.5, lo que indica que no hay separacin de los compuestos a lnea
base. Este valor nos indica que la resolucin es aproximadamente del 90%.
b)
2

t
16.40
N A = 16 * RA = 16 *
= 3493

1
.
11

A
t
17.63
N B = 16 * RB = 16 *
= 3397
1.21
B
N AB =

N A + N B 3493 + 3397
=
= 3445
2
2

c)

H=

L 30.0cm
=
= 8.7 x10 3 cm
N
3445

d) La resolucin se relaciona proporcionalmente con la raz cuadrada del nmero de platos:

N1
Rs1
=
Rs2
N2
Siendo 1 la columna de 30 cm y 2 la columna a calcular

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1.06
3445
=
N 2 = 6900 L = H * N = 8.7 x10 3 * 6900 = 60cm
1.5
N2
Nos vamos a otra columna el doble de larga, lo que dobla los tiempos de retencin y por tanto de
anlisis.
e) en este caso:

t R1 Rs12
17.63 1.06 2
=

=
t R 2 =35 min .
t R 2 Rs22
tR 2
1.52
En el siguiente problema se plantearn otras estrategias para aumentar la resolucin sin que se
incremente el tiempo de anlisis.

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2.- La figura muestra el cromatograma de una mezcla de dos componentes en una columna
cromatogrfica de lquidos empaquetada, de 25 cm. La velocidad de flujo fue de 0.40 mL min-1.
a) Determina los factores de retencin para los dos componentes
b) Calcula la resolucin de los dos picos
c) Halla la altura media de plato
d) Qu longitud de la columna se necesitaria para alcanzar una resolucin de 1.75?
e) Supongamos que la longitud de la columna se ha fijado a 25 cm y que el material de
empaquetamiento est fijo. Qu medidas podra usted tomar a fin de incrementar la resolucin
para lograr la separacin en lnea base?
f)Hay alguna medida que usted pudiera usar para lograr una mejor separacin en menos tiempo
con la misma columna que en el apartado anterior?

a)

KA '=

b)

t R A t0 30 5
=
=5
t0
5

Rs =

KB ' =

t R B t0 50 5
=
=9
t0
5

2(t R 2 t R1 ) 2 * (50 30)

=
= 1.025
(2 + 1 )
23 + 16

De la grfica, prolongando hasta el eje, sacamos las anchuras de pico:

1 = (38-22) = 16 min
2 = (62-39) = 23 min
No hay resolucin a lnea base

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c)
2

t
30
N A = 16 * RA = 16 * = 56.25
16
A
t
50
N B = 16 * RB = 16 * = 75.62
23
B
N AB =
H=

N A + N B 56.25 + 75.62
=
= 65.93
2
2
L 25cm
=
= 0.379cm
N 65.93

d)

N1
Rs1
=
Rs2
N2
Siendo 1 la columna de 25 cm y 2 la columna a calcular

1.025
65.93
=
N 2 = 192.215 L = H * N = 0.379 *192.215 = 72.85cm
1.75
N2
Nos vamos a una columna casi tres veces la longitud original.
e) Si la Fase Estacionaria es constante ( no vara L, ni tamao de partcula, dimetro o espesor de la
capa lquida, es decir N) podemos actuar sobre la fase mvil:
-Cambiar de eluyente, utilizar otros disolventes con mayor capacidad de elucin.
- Adicin de sustancias a la fase acuosa, como tampones (cambio de pH y naturaleza del tampn),
pares inico, ligandos formadores de complejos, etc.
-Variacin de la temperatura.
f)
- aumentando el caudal de la fase mvil
- elucin en GRADIENTE
- variando la temperatura
Actuando sobre la fase estacionaria, la resolucin se puede variar actuando sobre:
-Longitud de la columna (aumenta los tiempos de retencin y de anlisis por tanto)
-Tamao de partcula
-Dimetro de la columna
-Espesor de la capa lquida.

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3.- El aldehdo cinmico es el compuesto del que depende el sabor de la canela. Tambin es un
antimicrobiano potente, que forma parte de ciertos aceites esenciales. La respuesta de la
cromatografa de gases (CG) con una muestra artificial que contiene seis componentes de aceites
esenciales y metilbenzoato como patrn interno se muestra en la siguiente figura:

La siguiente figura es una ampliacin de la regin cerca del pico del aldehdo cinmico.

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Calcula:
a) el nmero de platos tericos para el compuesto de estudio.
b) La columna de slice fundida tiene 0.25 mm x 30 cm de dimetro y longitud de columna
respectivamente, y con un tamao de partcula de 0.25 m. Determina la altura de plato terico.
c) Se obtienen datos cuantitativos empleando metilbenzoato como patrn interno para los
compuestos aldehdo cinmico y timol tal y como se muestra en la siguiente tabla. Sabiendo que los
valores de rea relativas para cada compuesto se calculan dividiendo el rea del pico del
componente/rea del patrn interno, calcula: el rea relativa para los dos compuestos
anteriormente mencionados, determine las ecuaciones de la curva de calibrado para cada
componente y a partir de los datos del apartado anterior determina qu componente tiene mayor
sensibilidad.
rea de pico abosluta
Concentracin
(g mL-1)
0.50
0.75
1.30
2.50
a)

Metil
benzoato
18225
18523
17895
18329

Aldehdo
cinmico
12325
20140
35462
68090

Timol
20238
36890
69975
130215

t
19
N = 16 * R = 16 *
= 23104

0.5

De la grfica, prolongando hasta el eje, sacamos las anchuras de pico: = (19.25-18.75) = 0.5 min

b)

H=

L
30m
=
= 0.13cm
N 23104

c) Se trata del mtodo del patrn interno, para obtener la seal analtica, se divide el rea de
pico del analito por la del patrn interno. Entonces se hace el ajuste por mnimos cuadrados
reas de pico corregidas
Concentracin
(g mL-1)
0.50
0.75
1.30
2.50

Aldehdo
cinmico
0.676
1.087
1.982
3.715

Timol
1.110
1.991
3.910
7.104

Aldehdo cinmico: y = 1.514*rea corregida - 4.67x10-2

Timol: y = 2.975xrea Corregida 2.27x10-1
Mayor sensibilidad presenta el Timol, ya que la pendiente de la recta de regresin entre la
seal analtica y la concentracin es mayor, luego, para obtener el mismo intervalo de seal
analtica, se necesita un intervalo de concentraciones menores. Indicio es que podemos
determinar concentraciones ms pequeas, pero el lmite de deteccin como hemos visto no
solo depende de la pendiente de la recta de calibrado.