Separacin y purificacin Comentarios

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Del papel a la plana: 60 aos de cromatografa en capa

fina

Antoine - Michel Siouffi

Para citar este artculo: Antoine-Michel Siouffi (2005) del papel a la plana: 60 aos de cromatografa en capa
fina, separacin y purificacin Los comentarios, 34: 2, 155-180, DOI:
10.1080 / 15422110500322990

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Publicado en lnea el 15 febrero de 2007.

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Separacin y purificacin, Crticas 34: 155-180, 2005 Derechos de autor # Taylor
& Francis, Inc. ISSN 1542-2119 de impresin / 1542-2127 DOI en lnea:
10.1080 / 15422110500322990

Del papel a la plana: 60 aos de Thin

Cromatografa en capa

Antoine-Michel Siouf fi
Universite' Paul Ce'zanne, CNRS UMR 6180, Marseille Cedex, Francia

Abstracto: Las tcnicas cromatogrficas utilizando una super fi fuerzas capilares estacionarios de fase y para
mover la fase mvil aparecieron hace siglos. La fase estacionaria de papel evolucion en capas de slice
sobre superficie plana. La historia de 60 aos de cromatografa plana se le dice a raz de la evolucin de la
tcnica y se centra en los modos de deteccin. Los prototipos de investigacin se describen, as como
equipos disponibles comercialmente. El autor concluye que revela su visin del futuro de la tcnica.

palabras clave: cromatografa planar, cromatografa en capa fina, el acoplamiento con la espectrometra de masas

INTRODUCCIN

cromatografa planar (PC) es un acrnimo que apareci en la dcada de 1990. PC es ahora ampliamente
utilizado por las revistas cientficas. La cromatografa en papel primer apareci, seguido por cromatografa
en capa fina (TLC), y luego apareci los diferentes tipos de cromatografa de capa flujo forzado, tales
como cromatografa en capa sobrepresin (OPLC). Todas estas tcnicas pertenecen a la cromatografa de
lquidos en general y, ms precisamente a la capa de cromatografa. En la cromatografa de capa, la
columna es plana. El propsito de este artculo es dar una visin general de la historia de la PC, para
recordar a los analistas que este mtodo es muy poderoso y nunca debe ser descartado, y para
pronosticar el futuro.

Recibido el 2 de mayo de 2005, Aceptado 26 de de junio de de 2005

Correspondencia: Antoine-Michel Siouf fi, Universite' Paul Ce'zanne, CNRS UMR 6180, Campus San
Je'rome, Marseille Cedex 20, 13397 Francia. E-mail: Antoine-fi michel.siouf @ univ.u-3mrs.fr

155
156 A.M. Siouf fi

Los precursores

Un experimento que se puede considerar como una separacin cromatografa en papel se encuentra
en Historiae Mundii, escrito a finales del siglo I por el escritor romano Plinio el ms joven. En el
captulo 24 de su libro, le dice cmo detectar una sal frrica en un pigmento. Slo se necesita para
detectar una gota de la sustancia sobre un papiro impregnado con savia de roble. Durante siglos, los
tintoreros de lino trataron sus colorantes en hojas de papel o tejidos y se examinan los diferentes
colores. Alrededor de 1850, Runge, un farmacutico alemn observ que una gota de la mezcla de
pigmento se deposita sobre una hoja de papel no produjo un punto uniforme, pero crculos
concntricos de diferentes colores (1). Se dio cuenta de que cada crculo de color corresponde a una
sola sustancia. Estas separaciones de colores que llam mensajeros qumicos fueron el preludio de
las pruebas puntuales que se desarrollen posteriormente por Schiff y Feigl. Los libros de Runge son
hermosas tanto arte, como los libros de ciencia. Al mismo tiempo, Schoenbein, profesor de qumica
en Basilea, intent un mtodo para llevar a cabo la cuantificacin de ozono, que descubri en 1840.
tiras de papel de la inmersin en soluciones acuosas de almidn y yodo, se observ que los dos
compuestos no migraron a el mismo nivel como el agua. Schoenbein aplica la tcnica a otros
compuestos; cromatografa capilar naci. relaciones establecidas Goppelsroeder entre la naturaleza
qumica de los compuestos analizados y la tasa de migracin en los capillarograms (2). Al final del
siglo 19, el bilogo holands Beyerinck (3) observ dos anillos cuando una mezcla de cidos
clorhdrico y sulfrico difundidos en gelatina; cido clorhdrico se mova ms rpido.

En 1944 Consden, Gordon, y Martin (4) separa los aminocidos y pptidos en los
hidrolizados de protenas de lana en una hoja de papel suspendido libremente en un recipiente
hermtico al vapor; La fase mvil fue un disolvente orgnico saturado con agua. El mtodo
combinado de adsorcin de Tswett (el adsorbente es la celulosa), la distribucin en
contracorriente, y el anlisis capilar de la Schoenbein; autores utilizaron un mtodo descendente.
Consden, Gordon, y Martin desarrollaron los aspectos tericos con la definicin de la R f ( relacin
frontal) y mostr las capacidades de dos dimensiones. Tres aos ms tarde Kritchevski y Tiselius
(5) introdujeron el cromatografa de reparto de fase inversa con una fase estacionaria no polar. La
cromatografa en papel era muy popular en la dcada de 1950 (6) y algunos analistas recuerdan
papel Whatman y los logros de Munier (7).

La cromatografa en papel fue desafiado rpidamente por cromatografa de capa fina (TLC).
La tcnica de TLC fue introducido en 1938 por Izmailov y Shraiber (8) que trabaja en Kharkov
(URSS). Ellos queran extractos de plantas separados, y se observaron la similitud entre la
cromatografa de adsorcin de Tswett realizado en columnas cilndricas y capillarograms (9).
Utilizaron un portaobjetos de microscopio de almina recubierto sobre la que fue vista una gota de
tintura de la planta, seguido por la adicin gota a gota de metanol (el disolvente se usara en la
columna de un Tswett) sobre el terreno. Se observaron varios anillos bajo una lmpara UV; se trata
de una cromatografa circular. Llamaron a la
60 aos de cromatografa en capa fina 157

Ultrachromatograms tcnica cromatografa spot y el resultado Meinhard y Hall (10) que se

utiliza un agente de unin a la almina para aumentar la resistencia mecnica de la capa y llama
el mtodo: cromatografa de superficie cromatografa en capa fina inici su desarrollo real con
Egon Stahl (Figura 1) que ide la fabricacin de placas recubiertas de capa fina reproducibles
(gel de slice de acuerdo con Stahl, comercializado por Merck en la exposicin Analytica en
Munich en 1958) y estandarizado el mtodo. Promovi la tcnica emergente. En 1956 apareci el
titulado cromatografa en capa fina primer papel (11). Libros de Stahl en los idiomas alemn o
ingls eran ms vendidos (12, 13). En los EE.UU., Kirchner (14) utilizaron tiras y fue el primero
para desarrollar aplicaciones cuantitativas. Todos estos acontecimientos abrieron una nueva era
en la qumica analtica.

LA ERA DORADA

En la HPLC aos 1950 y 1960 no exista y cromatografa lquida en columna se realiz con
columnas de vidrio llenada con un adsorbente tal como slice o

Figura 1. Prof. E. Stahl en su laboratorio (cortesa de Merck).

158 A.M. Siouf fi

almina. La gravedad era la nica fuerza motriz de los tiempos de lquidos y de elucin fueron en das y
noches. Adems, el eluyente se recogi en tubos que se analizaron uno por uno para detectar los solutos.
Los qumicos descubrieron comercialmente placas normalizados disponibles que permitieron el anlisis de
muchas muestras en cada procesamiento, con la deteccin especfica por pulverizacin de un reactivo
despus del desarrollo. Los qumicos que se ocupan de fraccionamiento clase y especiacin de lpidos
podran separar mezclas de solutos que no pudieron ser manejado por cromatografa de gases. Tabla 1
enumera las grandes fechas de la evolucin de la cromatografa en papel para planar cromatografa de
pasar por TLC. En 1961 Stahl y compaeros de trabajo extendido el uso de TLC a materiales hidrfilos que
eran entonces el dominio exclusivo de la cromatografa en papel.

Las placas simples viejos

Cromatografa de capa fina es un sistema de tres fases (Figura 2). En el modo ms simple, los
solutos se depositan sobre la superficie de sorbente, la placa se coloca en una cmara de revelado
(Figura 3) que contiene en su parte inferior un pequeo volumen de fase mvil que ascensiones la
capa por fuerzas capilares. La distancia recorrida por el frente del disolvente obedece a una ley
cuadrtica. La capa absorbente es equivalente a un haz de tubos capilares interconectados y la fi fi
LLS lquido primero los capilares ms estrechos. Un lquido entra en un capilar porque esto
disminuye su energa libre. El cambio en la energa libre es inversamente proporcional al radio
capilar. En consecuencia, el frente de disolvente migra ms rpido que la mayor parte de la fase
mvil (15). En este modo la observada R F, que es la relacin de la distancia migrada por el soluto
sobre la distancia migrada por la fase mvil, es diferente de la verdadera R F, que es la relacin de la

Tabla 1. Evolucin histrica de la separacin por cromatografa en capa planas

Ao Evento

1930 La cromatografa en papel

1940 cromatografa de capa fina (slice y almina)
1950 placas de TLC y primer comercial moderno
1960 Por pulverizacin en las aplicaciones y densitometra de barrido

1970 De alto rendimiento TLC, fl forzado ow TLC (capa de sobrepresin

cromatografa)
1980 desarrollo mltiple automtica, el acoplamiento con HPLC, FTIR, ultra-fina
TLC
1985 De alto rendimiento OPTLC
1988 Primer nmero de Journal of planar cromatografa ( Springer Hungarica,
Budapest)
1990 Videodensitometra, placas de slice esfricas
2000 placas de slice Monolith (UTLC), acoplamiento con MS-ESI
60 aos de cromatografa en capa fina 159

Figura 2. El sistema de tres fases en una cmara de TLC.

velocidades (soluto / fase mvil). Adems, la presencia de la fase de gas dentro de la cmara de
revelado (Figura 2) perturba la velocidad de la fase mvil. La evaporacin del disolvente bajo punto de
ebullicin se puede producir y ascenso capilar es ms largo; A la inversa, la adsorcin de los vapores
del disolvente de bajo punto de ebullicin en la fi tanque lls los poros y ascenso capilar es ms rpido.
Ms a menudo, tanto la adsorcin y evaporacin se producen simultneamente. El fenmeno fue
investigado y modelado por Guiochon y Siouf fi et al. (16) y Geiss (17).

Figura 3. Dos cmaras clsicas de vidrio para TLC (Foto cortesa de Camag).
160 A.M. Siouf fi

Hasta la dcada de 1970 TLC fue una tcnica de ensayo y error con algunas directrices de
buenas prcticas. Por ejemplo se afirma a menudo que la distancia de migracin de la fase mvil
debe ser de al menos 10 cm. Afortunadamente, la TLC era (y sigue siendo) un mtodo nico para
comprobar el fenmeno cromatogrfico. Soczewinski desarrollado ecuaciones para caracterizar los
efectos del solvente en la adsorcin TLC y se introdujo la relacin: R metro log (1 / R F 2 1) (18).

LR Snyder publicado extensamente (19) en la adsorcin y mecanismos de retencin de TLC. Su

libro, Principios de la cromatografa de adsorcin, estaba en el estante de cada cromatgrafo (20).

En esos das, el rendimiento no era muy alto, pero los analistas se centr en la selectividad; un
ejemplo notable es el uso de placas de sal impregnada de plata a los ismeros cis-trans separados. Se
produjo un avance cuando se pusieron a disposicin densitmetros en 1969 por fabricantes tales como
Zeiss, Camag, Kontes, Schoeffel, Joyce-Loebl, o Vitatron. Las determinaciones cuantitativas se hizo
posible. Histricamente los primeros densitmetros fue diseada para el escaneo de geles.
Densitmetros se utilizan principalmente en el modo de re fl reflectancia. Debido a la ecuacin de
Kubelka-Munk, curvas de calibracin en TLC no son lineales. densitmetros modernos permiten la
exploracin mltiples longitudes de onda, la medicin de fluorescencia, y UV espectros de grabacin
(Figura 4).

La primera vez comercialmente Equipo Elaborado

La fase de gas era todava un problema que impide R F reproducibilidad 's, y algunas recetas se
defendieron. Para controlar las condiciones de saturacin de vapor,

Figura 4. camino ptico de un escner TLC (cortesa de Camag).

60 aos de cromatografa en capa fina 161

Camag introdujo en 1970 la Vario KS (por Kammersattigung) (21) para demostrar que la fase de
vapor no era necesariamente un inconveniente (22). Se afirm que la saturacin del adsorbente
permite eliminar todos desmezcla de disolvente (23). Una caracterstica interesante de la cmara de
Vario KS fue la posicin horizontal de la placa. La gravedad es despreciable en comparacin con las
fuerzas capilares pero permite un mejor control de la fase de vapor y la cromatografa se inicia desde
la parte inferior de la placa. Aos despus, un equipo polaco tambin fabric una cmara de
desarrollo horizontal (Chromdes). Otra cmara horizontal que se duplic el nmero de muestras
desde lados opuestos de la placa para el medio apareci en la dcada de 1980 (Figura 5).

El nacimiento de cromatografa lquida de alta presin (HPLC) se produjo a mediados de la dcada

de 1970. La tcnica hace uso de partculas finas. En ese momento Merck introdujo las placas de HPTLC.
La capa de placas de TLC estndar se realiz con un 11 metro m dimetro medio de partcula, mientras
que la capa de HPTLC (HP de Alto Rendimiento) placas se realiz con partculas finas de 5 metro m
dimetro medio de partcula similar a los utilizados en HPLC (24). Se public un libro que trata sobre las
nuevas posibilidades (25). Camag introdujo la cmara de U para el desarrollo circular y anticircular en
distancias cortas. Circular TLC permite un menor consumo de disolventes. Los solutos se resuelven
mejor en la parte inferior R F rango por un desarrollo circular que por desarrollo lineal. A la inversa solutos
con una

Figura 5. El esquema de cmara horizontal (esquema cortesa de Camag). (1) placa de HPTLC con la baja de silicagel;
(2) Placa counter para el modo de migracin sndwich; (3) un disolvente para el desarrollo; (4) tiras de vidrio para iniciar
el contacto capilar; (5) tapa de cierre. Abajo: dos cmaras horizontales siendo comercializados en la actualidad.
162 A.M. Siouf fi

mayor R F rango se resuelven mejor por el modo anticircular. En ese momento placas de slice
desnudos slo estaban disponibles, que impide el anlisis de solutos muy polares; el modo
circular era til para tal fin.
Guiochon et al. en una serie de artculos (26, 27), desarroll la teora de actuaciones cinticos
en TLC. Se derivan ecuaciones que producen la altura equivalente a un plato terico como una
funcin de la longitud de desarrollo. Las formas de las curvas (Figura 6) son similares a las curvas van
Deemter en cromatografa en columna. En estas parcelas la abscisa es la longitud de desarrollo ya
que el analista no controla la velocidad de la fase mvil. De las curvas es obvio que una longitud de
desarrollo de 10 cm fue necesario obtener la mejor deficiencia ef con las partculas ms gruesas que
se utilizaron anteriormente. La principal caracterstica de estas curvas es que una longitud de
desarrollo muy corto es obligatoria para conseguir el HETP ms bajo con partculas finas, mientras
que una longitud de desarrollo ms largo es necesario cuando el dimetro de partcula est en
aumento.

La Figura 6. Parcela de HETP frente a la longitud de desarrollo para diversos tamaos de partculas. El nmero en
cada curva es dimetro de partcula. Difusin coeficiente de 10 2 5 cm 2 / s (reproducido con permiso de Ref. 33, el Journal
of Chromatograpic Science).
60 aos de cromatografa en capa fina 163

Adems, los autores demostraron que la difusin de solutos coeficiente es un parmetro clave. Estas
caractersticas dan como resultado ms pobre rendimiento cintica de HPLC (nmero de platos tericos, la
capacidad de pico). La capacidad de pico o punto en TLC Nunca pasos superiores 12-14 en la prctica.

capas de partculas finas proporcionan separaciones fi cientes rpidas y EF pero los requisitos son
pequeas varianza de la tcnica de manchas y densitmetros slitscanning fi cientes. La aplicacin manual de
las muestras se puede llevar a cabo con micropipetas, capilares o jeringas. Estos dispositivos llenar
automticamente en sumergindolos en la solucin de muestra y vaciarse en contacto con la superficie
sorbente. Esta aplicacin de contacto puede ser reproducible con un instrumento tal como Nanomat
(Camag), pero la seleccin del disolvente es crtica, ya que debera ser como menos de elucin como sea
posible para evitar ensanchamiento de las bandas de la mancha en la deposicin de la muestra. En la
dcada de 1960 Camag comercializa un nuevo mtodo de aplicacin de la muestra basado en la tcnica de
pulverizacin-en de la muestra sobre la placa. Un atomizador de funcionamiento de una corriente controlada
de nitrgeno pulveriza la muestra de una jeringa, formando bandas homogneas estrechas en la capa de
adsorbente. Esta aplicacin en bandas permite la aplicacin de grandes volmenes, es menos dependiente
del disolvente, y mejora la separacin. aplicacin automatizada permite que los volmenes exactos para ser
vistos, es el ahorro de tiempo, y cumple con la documentacin del software de GLP. aplicacin de pequeo
volumen es crtica para explotar plenamente las propiedades de placas de HPTLC.

Para ello Merck puso a disposicin las placas de zonas de concentracin y Camag comercializa el
Linomat 3 (Figura 7), que reduce drsticamente la varianza de aplicacin de ejemplo.
Sorprendentemente, el uso de datos de TLC para rpidamente

La Figura 7. Efecto del disolvente de la muestra en el tamao de punto obtenido con el contacto automatizado e instrumentos en aerosol.

Izquierda: punto de deposicin por contacto. A la derecha: la deposicin de la banda.

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seleccionar el sistema de HPLC adecuado (28, 29) no explotada completamente a primera. Muchos
procedimientos de TLC ful llenan el cumplimiento de las BPL (buenas prcticas de laboratorio) y se
validaron en muchos (farmacopeas ver algunos ejemplos en referencia 30). Se revisaron los mtodos
de optimizacin (31). Result que uno de ellos, el Prisma desarrollado por Nyiredy en 1985 (32), fue
muy exitoso y se podra aplicar en HPLC, OPLC, y as sucesivamente.

La capacidad Multidimensional

TLC exhibe una ventaja peculiar sobre HPLC: puede ser multidimensional. En bidimensional TLC,
la muestra se detecta en la esquina de la capa y se desarroll a lo largo de un borde de la placa,
y luego la placa se retira de la cmara, se sec, hace girar a una 90 8 ngulo, y reconstruido en la
dimensin ortogonal con una fase mvil diferente. Este doble proceso fue utilizado por un largo
tiempo (5). Guiochon et al. (33, 34) ecuaciones derivadas alumbra los capacidades de desarrollo
bidimensional. Ellos demostraron que la capacidad de punto en bidimensional TLC es slo
comparable por electroforesis bidimensional, y, tericamente, se pudo observar ms de 400
puntos. Si la misma fase mvil se utiliza en los dos desarrollos, los puntos estn alineados en una
diagonal. Para aprovechar plenamente la capacidad bidimensional de TLC, lo mejor es utilizar
dos modos cromatogrficos diferentes que son la fase normal (NP) y los modos de fase inversa
(RP) (Figura 8). Las placas primera C18 unidas eran

Figura 8. Un ejemplo de dos dimensiones de separacin (hidrocarburos aromticos policclicos) con una fase mvil
polar (RP), seguido de un uno apolar (NP).
60 aos de cromatografa en capa fina 165

producido por Whatman a principios de 1980. La misma compaa lanz una placa de dos capas con una tira
de C18 a lo largo de una capa de gel de slice. El xito fue limitado debido a los componentes separados
tendan a centrarse en la brecha existente entre las dos capas. Debido a la ampliacin de la banda desde el
segundo desarrollo, bidimensional TLC no se usa comnmente. Muestra gran inters, ya sea en los laboratorios
de investigacin o para comprobar la estabilidad de los compuestos en los laboratorios industriales.

Cromatografa en capa sobrepresin y automatizados Desarrollos Mltiples

Cuando la TLC se lleva a cabo en la forma lineal simple con placa colocada verticalmente en una
cmara, fuerzas capilares solas son incapaces de producir la velocidad de fase mvil ptimo terico.
Se hicieron algunos intentos (35, 36) para producir un desarrollo cuasi-columna por evaporacin de la
fase mvil en el extremo de una placa de TLC colocado horizontalmente. En ocurrieron a mediados de
1980 dos avances: ms de cromatografa de capa presionados (OPLC) fue propuesta junto con las
capacidades de gradiente TLC primeros con desarrollos mltiples automticos (AMD) (Figura 9).
Ambas tcnicas fueron automatizadas pero que se bas en dos enfoques diferentes: OPLC es un FL
en versin de HPLC, y AMD es la optimizacin de la potencia de separacin capilar. A raz de estos
logros, una nueva revista, la Journal of planar Chromatography, primero apareci en 1988 y su nmero
100 apareci en diciembre de 2004.

AMD precedente, programada desarrollo mltiple con una sola fase mvil a travs de distancias
cada vez mayores fue reportado por primera Perry (37). La mancha estaba centrada cada vez que el
frente del solvente pasa sobre el punto previamente adsorbido en la capa. En contraste con el desarrollo
mltiple convencional de placas de TLC, el desarrollo AMD tiene lugar durante muchos ciclos
cromatogrficos

La Figura 9. Esquema del primer instrumento de AMD. (1) encerrada en desarrollo cmara; (2) botellas de depsito de disolvente; (3)

vlvula de conmutacin para la seleccin de la composicin del disolvente; (4) cmara de mezcla de gradiente; (5) botella de lavado para

la fase de gas; (6) del depsito para la fase de gas; (7) la bomba de vaco; (8) botella de residuos de disolvente.
166 A.M. Siouf fi

de diferentes longitudes. La capa se desarrolla sobre posibles 5-35 etapas en la misma direccin para
aumentar las distancias ms largas (3-10 cm) con un gradiente de fase mvil por etapas de
disminucin de la fuerza (38). Cada nuevo paso se ejecuta en una distancia fija 1, 2, o 3 mm sobre la
anterior y despus de una etapa de secado al vaco completa de la placa. El programa de gradiente
puede ser simple o complejo y algunas separaciones agradables de, por ejemplo, se obtienen los
pesticidas (Figura 10). Debido al efecto de enfoque, 28 ppt de atrazina en agua se pueden detectar en
la placa con la tcnica (38).

Hubo muchos intentos para aumentar la velocidad de fase mvil (39). El fl cromatografa planar
ow forzado ms antigua (FFPC) se informa, el papel de Hopf (40), que usa las fuerzas centrfugas.
En la cromatografa plana rotacin (RPC), la velocidad de fase mvil se puede variar mediante el
ajuste de la velocidad de rotacin placa. Algunos instrumentos tales como Rotachrom o Extrachrom
aparecieron, que fueron utilizados principalmente en el modo preparativa. Hostettman (41) describe
ampliamente las posibilidades de la tcnica en el aislamiento de compuestos de inters a partir de
muestras naturales y biolgicos.

OPLC fue primero descrita por Tyhiak y compaeros de trabajo (42), que elimina la fase de vapor
en TLC mediante la presurizacin de la capa. Una placa de TLC sellado estaba cubierta por una lmina
inerte flexible, que se someti a sobrepresin y la fase mvil se bombea a travs de la capa de
sorbente. Un pequeo canal asegur una de flujo homogneo. En este modo el sistema funcion como
un fl atbed columna capilar (Figura 11). Puesto que el tiempo para realizar una separacin fue
significativamente ms corto que en el desarrollo convencional, se redujeron los efectos de difusin
producir manchas pequeas y compactas. La instrumentacin requiere una bomba para suministrar la
fase mvil. El sistema comercialmente disponible era un aparato de tipo casete de donde estaba la
placa de TLC preparada

La Figura 10. Un ejemplo de la separacin de pesticidas con AMD (fromD. Hamburguesa presentado en HPTLC 2003,
Lyon, cortesa de Camag).
60 aos de cromatografa en capa fina 167

La Figura 11. Principio de cromatografa a sobrepresin capa (OPLC, por cortesa de Bionisis).

colocado en un soporte que se inserta a travs de una ranura en el instrumento de la misma manera como un CD
en un ordenador.
Cuando la salida de la fase mvil de la cmara de presin se conecta a un detector de clulas de
flujo, fue posible detectar y recoger los solutos de elucin. Una sobrepresin de hasta 50 bares se podra
utilizar, lo que permiti la obtencin de caudales que concuerden con la velocidad lineal ptima de la fase
mvil (100-125 metro L / min) (Figura 12) (43). alturas de placa real en el rango de 10-30 metro m se puede
obtener para todos los solutos en la misma placa (Figura 13). La comparacin de los parmetros
relevantes de OPLC, TLC y HPTLC se ha realizado por Nyiredy (44). OPLC puede ser operado de
acuerdo con muchas maneras: completamente fuera de lnea, totalmente en lnea con fuera de lnea o de
aplicacin de muestras en lnea. Una consecuencia de la constancia de la altura de la placa es el hecho
de que la posicin de la deposicin de la muestra no tiene ninguna influencia en el rendimiento del
sistema. Muchos modos de desarrollo son posibles: lineal, lineal bidireccional, circular, anticircular, y de
dos dimensiones.

La Figura 12. Influencia de la presin aplicada en actuaciones expresado en altura de la placa en

OPLC (por cortesa de Bionisis).
168 A.M. Siouf fi

La Figura 13. Trama de la HETP media y la distancia recorrida por la fase mvil en diferentes capas de
silicagel y diferentes sistemas de cmara (reproducido con permiso de Elsevier, Ref. 43).

Comparando OPLC y HPLC

Una caracterstica interesante que an no se ha explotado completamente es el modo de mltiples capas

en el que varias placas se apilan cara arriba, en la parte superior de la otra. Excelentes crticas en OPLC
aparecido recientemente (45-47). En OPLC cuando el disolvente es forzado a travs de una capa seca de
partculas finas, el aire desplazado por el disolvente da lugar a un frente beta que es ondulado. Para
superar este problema, un predesarrollo de la capa con un disolvente dbil es e fi ciente. A partir de los
datos publicados (48), las separaciones OPLC toman un tiempo ms largo que separaciones por HPLC
similares. Sin embargo, en comparacin con una columna de HPLC, la capa TLC exhibe una mejor
estructura de embalaje (inferior A plazo de la
60 aos de cromatografa en capa fina 169

Van ecuacin Deemter) pero unas pobres cintica de transferencia de masa (mayor plazo C). Tambin, la capa
TLC exhibe valores ms pequeos para la porosidad total y intrapartculas y valores comparables para la
porosidad entre partculas. Estos resultados sugieren que las densidades de embalaje para columnas de HPLC y
capas OPLC son similares, pero una cantidad sustancial de agente aglutinante en parte fi LLS los poros.

Un cambio de nombre reciente para OPLC es un rendimiento ptimo laminar cromatografa.

Para eliminar los efectos de borde, el procedimiento fl debido pared eluyente (FEW) (49) divide el
lecho de sorbente en partes activas y no activas y se utiliza para con fi ne la muestra a la regin
activa, lejos del borde. En este proceso, la fase mvil se divide aguas arriba del inyector de manera
que parte del disolvente ir directamente al inyector y llevar la muestra a travs de la parte activa de
la columna, mientras que la otra fraccin de disolvente exento de muestra llega directamente en la
columna (sin pasar por el inyector) y se dirige a los bordes de la columna donde se producen los
efectos de borde. En este modo la parte no homognea de la capa se puede excluir del proceso de
separacin (Figura 14).

EL PRESENTE

Hoy en da, fases estacionarias son similares en PC y HPLC y son posibles correlaciones de retencin.
Gel de slice sigue siendo, con mucho, el adsorbente ms utilizado

La Figura 14. Un ejemplo de la cromatograma obtenido con pocos (por cortesa de Bionisis).
170 A.M. Siouf fi

y el modo de fase normal con fases mviles orgnicas sigue siendo el modo dominante en PC, mientras
que en fase inversa es el modo dominante en HPLC.

separaciones quirales

Cuando se consideran separaciones quirales, el pequeo nmero de documentos de PC es sorprendente.

separaciones quirales son demasiado a menudo un procedimiento de ensayo y error y uno puede pensar que
la PC puede ser una herramienta valiosa para la prueba. El anlisis por HPLC quiral da una buena separacin
de enantimeros, pero el tiempo de anlisis puede ser largo. El intercambio de ligandos techniquewith
complejo de cobre (II) de N- (2-hidroxidodecil) -4-hidroxiprolina es prcticamente el nico agente de
impregnacin utilizado por los fabricantes (Macherey-Nagel y Merck) para preparar placas quirales cuando
ms de 50 diferentes columnas quirales de HPLC son comercialmente disponible. Parece que los derivados
de poliacrilamida y de celulosa o amilosa no se explotan plenamente en TLC como tcnica de piloto para el
propsito preparativa. Lepri y Del Bubba revisaron el estado de la tcnica en TLC quiral (50).

Triste, pero claro, Dominacin HPLC

Un estudio de la revisin bianual sobre TLC por Sherma en Qumica Analtica (51) es muy
informativo. La tabla 2 indica el nmero de artculos publicados sobre el tema PC. El descenso es
evidente si se recuerda que en el perodo de 1965 a 1985 el nmero de artculos de TLC publicados
fue entre 400 y 900 cada ao. La situacin es peor cuando se considera simposios. Con la excepcin
de la cromatografa planar Simposios tradicionalmente celebrado en Hungra, las comunicaciones de
PC en importantes simposios son escasos. Sin embargo, la asistencia al simposio internacional
HPTLC celebrada en Lyon en 2003 (www.hptlc.com) y totalmente dedicado al PC era impresionante.
Cabe sealar que esta reunin fue el curso de los simposios Interlaken despus de un periodo de 6
aos. Las principales reas de TLC clsica y PC son ciencias de la vida y el anlisis de alimentos
(Figura 15).

Tabla 2. Trabajos publicados sobre cromatografa

planar

Ao Nmero de artculos

1990 470
1994 490
1996 477
1998 325
2000 310
2004 210
60 aos de cromatografa en capa fina 171

La Figura 15. Los diferentes campos de aplicacin FI de los 210 artculos usando PCpublished en 2004.

Opuesto a HPLC, PC fue marginado debido a sus capacidades de evaluacin comparativa y su

capacidad para analizar varias muestras al mismo tiempo que proporciona rpida fi huella digital per fi les
fueron perdidas. El cuello de botella de TLC clsico es el tiempo transcurrido entre cromatografa per se y la
deteccin de las zonas separadas. En todos los casos la placa debe ser retirado de la cmara, se sec, y se
coloca en el detector. A la inversa, se puede argumentar que la placa es un dispositivo de almacenamiento
que se puede utilizar para muchos modos de deteccin. Off-line y on-line se aproxima a los pros y los contras
de exposicin y la discusin es interminable.

Una amplia variedad de modos de deteccin

Hendidura escanear densitmetros que funcionan en el modo de fluorescencia de modo y fl absorcin

UV-VIS estn comnmente disponibles para el registro de las separaciones de TLC. Las mejoras
importantes en este tipo de instrumentos parecen poco probables. detector de matriz de fotodiodos permite
la deteccin simultnea mltiples longitudes de onda (52). deteccin videodensitometric est ganando
aceptacin. El primer artculo sobre la evaluacin de vdeo de los cromatogramas de TLC apareci en 1991
por Prosek (53). Desarroll su propio software y dise el TLC cuantitativa utilizando una cmara de vdeo
en 1997 (54). El principal atractivo de anlisis de imgenes es la adquisicin de datos rpida de toda la
placa con un software que permite la comparacin de imgenes cromatogrficos (55). Parece que
videodensitometra no puede competir con la densitometra en trminos de sensibilidad ya que slo una
nica longitud de onda est disponible. El progreso en el campo de los sensores CCD de software y pronto
har que el uso de las bibliotecas imagen posible.

deteccin FID sigue siendo un modo de deteccin marginal. En la dcada de 1970, Okamura y Kadono
patentaron un mtodo varilla TLC usando varillas Identificacin de cuarzo de 2 mm, recubiertas con 5 metro m
almina o slice. Estas barras podran escanearse por un detector de FID. El Iatroscan fue producido como el
primero disponible comercialmente
172 A.M. Siouf fi

TLC-FID (Iatroscan Lab, Tokio). El sistema todava est en uso hoy en da. Combina la capacidad de
resolucin de TLC con la respuesta rpida y cuantitativa del detector FID. La tcnica es adecuada
para solutos tales como glicridos o agentes tensioactivos que no tienen cromforos nativos o
derivatizados (56, 57).

Con la llegada de deteccin de espectrometra de masas PC

Hoy espectrometra de masas (MS) es la mejor tcnica de deteccin en cromatografa de gases

(GC-MS) y HPLC. Este no es el caso en el PC. El primer informe sobre la separacin de slabas de
TLC a MS data de 1977 (58). Hubo algunos trucos tales como el uso de una tira de cinta de doble cara
adhesiva para cubrir la punta de una sonda de bombardeo de tomos rpidos (FAB) y presionarlo
contra la mancha de TLC de inters rascado y se eluye est ampliamente abogado por ella. Una
revisin realizada por Wilson (59) describe los intentos de combinar TLC con FABMS y tambin lquido
de iones secundarios (LSI) y lser asistida por matriz de desorcin ionizacin tiempo de- fl ight
(MALDI-TOF) o ionizacin por electrospray (ESI). Para realizar FAB-MS, es necesario utilizar una
matriz lquida compatible con la fase estacionaria tal como glicerol o meta-nitro-bencil alcohol para
inducir la ionizacin y la transferencia de soluto. FAB no es muy adecuado para el anlisis de trazas.
En los ltimos aos ha habido un creciente inters en el uso de MALDI-MS para el anlisis directo de
las placas de TLC. En un anlisis tpico MALDI, el soluto de inters se desorbe de una superficie en un
exceso de matriz utilizando un lser de nitrgeno pulsado a 337 nm. Los iones en fase gaseosa
resultantes de la matriz y el analito se determinan generalmente por un analizador de tiempo de- fl ight
(TOF) de masas. Aplicacin de la matriz sobre la placa debe ser realizado de tal manera para mantener
la integridad cromatogrfica de los spots de analitos.

Parmetros que influyen en la sensibilidad y el analito lateral propagacin son la extraccin de

seleccin de disolvente, tiempo de extraccin, y la presin (60, 61). Un mtodo de deposicin de la matriz
electrospray recientemente desarrollado produce una seal estable, reduce analito difusin, y por lo tanto
permite obtener cromatogrfico, as como la exploracin de datos de espectro de masas de la placa de TLC
(62).
Despus de la separacin TLC, una tira de la placa se corta y montado sobre una diana de
MALDI usando cinta de doble cara. La matriz de MALDI se luego electro sobre la superficie
mediante la aplicacin de un alto voltaje al capilar de pulverizacin del dispositivo (63). matrices
suspensin de partculas (1-2 metro m partculas en etilenglicol grafito) se han aplicado con xito
(64). Los datos cuantitativos requiere calibracin con estndar interno 64). MALDI presin
atmosfrica proporciona mejoras ya que el material cromatogrfico no contamina la fuente ya que
es el caso con vaco. Para generar informacin estructural, decaimiento postsource (PSD) se
puede realizar directamente en los puntos separados. PSD se puede describir como la disociacin
por descomposicin metaestable de iones moleculares intactos que haban ganado exceso de
energa durante el proceso de desorcin.
60 aos de cromatografa en capa fina 173

Como fue sealado por Van Berkel et al. (65), TLC-MALDI-MS tiene algunas limitaciones,
especialmente la cmara de vaco del instrumento. Ionizacin por electrospray se utiliza ampliamente en
LC-MS y no explota plenamente en TLC. Luftmann describe un dispositivo que permite la recuperacin
de compuestos a partir de placas de TLC y acoplamiento con ESI-MS (66). Van Berkel et al. (65)
utilizaron un muestreo de superficie emisor combinado sonda de electrospray descrito previamente por
Wachs y Henion (67), para la lectura directa de las placas C18 comerciales por ESI-MS. Dos interfaces
desarrolladas para conectar TLC con IEN-EM en lnea consistieron en (i) dos fibras pticas unidas
insertados en las partculas de C18 ligado a la salida de un pequeo canal TLC y (ii) una pequea tira
TLC comercial con una punta afilada. El muestreo de la superficie de la placa se llev a cabo bien a
travs de una seleccin punto manual (paso a paso el modo de muestreo) o un modo de muestreo de
exploracin controlado por ordenador. El mismo grupo realiz el acoplamiento de un sistema de
cromatografa plana rotacin preparativa con MS a travs de una interfaz sencilla y una sonda
nebulizador calentado auto-aspiracin de una fuente de APCI descarga de corona (68).

Interfaces para el acoplamiento TLCwith TOF-SIMSwere describen recientemente (69). La capa

delgada cromatogrfico debe ser modi fi para evitar la actividad seal de fondo TOF-SIMS del material
cromatogrfico. Una manera posible es modificar una placa de aluminio con respaldo. Una forma ms
prometedor es el uso de una capa monoltica. Una interfaz TLC-MS en lnea con deteccin-trampa de
iones y la extraccin controlada por ordenador de solutos de puntos permite el control de la cantidad de
disolvente de extraccin y el volumen de muestra inyectada (70).

TLC-MS slo se utiliza por grupos de investigacin principalmente porque el precio del detector es dos
rdenes de magnitud ms alta que la herramienta de separacin por TLC. TLC-MS no tiene lmites de exploracin
de tarifas, no hay lmites orden de acceso, y sin limitaciones de tiempo de anlisis, pero PC-MS requiere una
interfaz que no es el caso en GC-MS o capilar LC-MS. sistemas de TLC-MS comercialmente disponibles son an
poco frecuente. Para una discusin, se recomienda el captulo de Busch (71). Busch tambin ha publicado
recientemente una revisin en la que se prev una cierta posible desarrollo en el campo (72). Un esquema de
separacin silbica TLC y MS se muestra en la Figura 16.

Dado que las tasas fl OPLC ow estn dentro de la gama de caudales tpicos para electrospray
convencional, el acoplamiento directo de OPLC con QTOF se ha demostrado con xito por Chai et
al. (73). Para en lnea acoplamiento de una pieza corta de PEEK capilar fue conectado entre la
salida de la OPLC y la entrada de la sonda de electrospray estndar. Una sensibilidad de 5 pmoles
de glicoesfingolpidos se logr fcilmente para PC-ESI-MS y 20 pmoles para PC-ESI-MS-MS. Sin
embargo, el nfasis est en LC-MS y las capacidades de PC son ignorados por la mayora de los
analistas que trabajan con EM.

Y modos de deteccin ms exticos

Kovar (74) fue pionera en el acoplamiento HPTLC-FTIR pero las aplicaciones todava no son muy numerosos
(75). espectroscopia Raman rara vez se utiliza como una deteccin
174 A.M. Siouf fi

La Figura 16. Un esquema posible para un TLC -MS interfaz.

tcnica. seales Raman se obtienen por irradiacin de una muestra con radiacin monocromtica y la
medicin de la pequea porcin de la radiacin dispersa que es inelstica. El proceso no es muy e fi
ciente. Cuando se aplica coloidal Ag en los puntos de analitos adsorbidos, espectros de resonancia
mayor superficie (SERS) se registran con un espectrmetro multicanal micro Raman (76) en el rango
IR cercano. TLC-SERS puede ser una alternativa a algunos inmunoensayos (77).

Una ventaja de PC y en particular TLC sobre HPLC es la amplia variedad de posibles modos de
deteccin que son difciles o imposibles de realizar con cromatografa en columna. Por ejemplo
autorradiografa digital (78), la deteccin fotoacstica (79), o de fluorescencia lnea de estrechamiento
que requiere temperaturas bajas (, 30 8 K) (80) no se puede utilizar en la HPLC y di los resultados en
PC. Poole, en su opinin (81), destac las potencialidades de la PC en la vigilancia biolgica con la
amplia gama de posibles detecciones microbiolgicas. Cit unas 14 referencias relevantes relacionados
con el aislamiento de compuestos bioactivos a partir de plantas medicinales, aislamiento de captadores
de radicales en los alimentos, la exploracin de bibliotecas combinatorias, etc. Un captulo completo en
la deteccin de compuestos microbiolgicamente activos apareci en la visin retrospectiva para el
tercero milenio (82 ).

EL FUTURO

PC tiene muchas caractersticas nicas que no pueden ser abordados por cualquier otra tcnica de separacin.
Es capaz de analizar un gran nmero de muestras. Se puede preservar todo el cromatograma con el posible
uso de muchos modos de deteccin. Se puede realizar la limpieza de la muestra y separaciones rpidas
realizadas en una sola pasada.
60 aos de cromatografa en capa fina 175

Su capacidad bidimensional slo es superada por electroforesis en gel. cromatografa planar es una
excelente herramienta no slo para los qumicos, sino tambin para los bilogos, mdicos, y todas las
personas que trabajan en el control de calidad. OPLC y HPTLC ahora estn haciendo su propio progreso.

HPTLC sin duda encontrar un nicho de mercado cuando otros mtodos de separacin fallan; o
cuando se requiere un mtodo ortogonal para confirmar el resultado proporcionado por un mtodo estndar.
Gradientes se utilizan ampliamente en HPLC, la teora ha sido ideado y HPLC softwares de optimizacin
son cada vez ms sofisticados (83). A pesar de los primeros trabajos del grupo de Soczewinski y la
disponibilidad de AMD, la teora del gradiente en el PC se mantiene en su infancia.

Los analistas se preguntan sobre el futuro de cromatografa plana electro-conducido.

Electrosmosis es el movimiento de lquido en un slido bajo la influencia de un voltaje aplicado. TLC
con de flujo electro-osmtico fue primero descrita por Pretorius en 1974 (84). Un resultado de la
aplicacin de campo elctrico para la migracin de disolvente es que se genera calor por efecto Joule
que provoca la evaporacin del disolvente de la superficie de la capa. Se presume que es el
fenmeno que arrastr la fase mvil en capas montados verticalmente (85).

Electroosmtico de flujo se genera con disolventes polares o tampones acuosos que impide el uso
del modo de NP. resultados interesantes fueron obtenidos por Nurok et al. (86, 87) con capas de fase
inversa con iones tampn preadsorbidos y la mezcla de disolvente acuoso polar como fase mvil. Con
placas de slice convencionales y aplicacin de un 200V / cm campo, las tasas de migracin de
disolvente de
0,039 y 0,21 cm / s se pueden conseguir con etanol y acetonitrilo, respectivamente. Cuando se
utilizaron cmaras cromatogrficas horizontales, Nurok et al. obtenido 5500 platos tericos con una
distancia de migracin 7 cm. Malinowska (88) investig la influencia del campo elctrico sobre la
migracin de la fase mvil en slice seca. La cmara de DS horizontal se puede cerrar para llevar a
cabo electrocromatografa con 2 kV aplicado a una placa de 10 cm (89). Kreibik et al. (90) diseada
una cmara vertical para dielectrochromatography planar, una tcnica que hace uso de asimtrica
alternantes campos elctricos. Muchas preguntas siguen sin respuesta, tales como el papel de la
carpeta o el uso de capas ms delgadas.

cromatografa Shear impulsado es un nuevo enfoque (91). El sistema consta de dos paredes
longitudinales separadas: una pared longitudinal es ms corto y est unido a un bastidor estacionario,
y el otro es ms largo y se traduce (o girar) ms all de la ms corta (Figura 17). Cuando la placa ya
se mueve ms all de la placa ms corta, la fl presente uid delante de este canal es arrastrado
automticamente en, a travs y fuera del canal por el efecto viscoso presente en el fluido. La
velocidad axial en un flujo laminar entre dos FL en placas exhibe una lineal pro fi le, pasando de u s 0
cerca de la pared estacionaria para u u w cerca de la pared mvil. SCD slo funciona si las paredes
laterales de los canales estn perfectamente paralelos a la direccin de desplazamiento de la pared
mvil. El sistema puede ser miniaturizado (92). La tcnica es muy prometedora y el costo es muy
bajo. Algunas separaciones de fase inversa con alturas de placa tan bajas como 11 metro m se han
reportado.
176 A.M. Siouf fi

La Figura 17. La cromatografa set-up impulsado por cizalla. (1) sistema de desplazamiento axial; (2) controlador digital; (3)
que se mueve de pared de canal; (4) soporte de diapositivas estacionario; (5) carril de gua; (6) canal impresa en la hoja de
transparencia; (7) la columna SDC; (8) pieza de conexin (adaptado de Ref. 89 con permiso).

En HPLC, dos tendencias principales en el desarrollo son: presin ultra alta y columnas
monolticas. Una pelcula delgada de monolito a base de slice se ha introducido recientemente por
Merck (93). cromatografa de pelcula delgada no es nueva. En 1968, Cremer (94) crea un xido de
indio-evapor de vaco de 1 mm pelcula sobre una placa de vidrio. La distancia de desarrollo no
podra superar los 2 cm y un lugar 20NL era un requisito previo. Andreev (95) produjo una pelcula
delgada de fi ne (2 metro m) partculas de slice y afirmaron que miles de placas podran ser
generados. En la cromatografa de capa ultrafina (UTLC), un monolito se injerta en la placa de
vidrio. No hay ligante (Figura 18) (96). los

La Figura 18. Una comparacin de placas de slice TLC, HPTLC, y UTLC (por cortesa de Merck).
60 aos de cromatografa en capa fina 177

Tabla 3. cromatografa de capa ultrafina

propiedades fisicoqumicas placa

Material slice Monolith

(no hay partculas)

Formato 30 60mm
Grosor de la capa 10 metro metro

meso poros dimetro de poro 30-40A

macro poros 1-2 metro m de dimetro de poro

rea superficial especfica fi 350m gramo

2/

Speci fi volumen c poro 0,3 ml / g

(poros meso)

Comparando UTLC con TLC y HPTLC UTLC

TLC HPTLC

Volumen de la muestra: 5-20 nL 1-5 metro L 100-500 nL

distancia de migracin: 1-3 cm 10-15 cm 3-7 cm
Tiempo de anlisis: 1-6min 15-200min 5-30min
Disolvente utilizado: 1-4mL 100 ml 20 ml
LOD: 10 pg 1 ng 100 pg

espesor es 10 metro m, lo que requiere un volumen muy pequeo de la inyeccin (Tabla 3). Debido a la
presencia de macroporos, el ascenso capilar disolvente es corto (2 cm) y los puntos debe ser muy
pequea. distancias de migracin estn en el intervalo de 1 cm (Tabla 3). El lquido no puede
ascender 3 cm debido a los macroporos. La debilidad de UTLC en comparacin con HPTLC se reduce
la resolucin causada por distancias ms cortas de desarrollo y una menor disponibilidad de especi fi
superficie c.

Las demandas en el futuro son para mtodos rpidos, fiables, econmicos y analticos. El
futuro de la cromatografa plana depender de la voluntad de los investigadores y fabricantes. La
formacin en la PC de la industria o de la universidad es pobre y el PC es demasiado subestimado.
En 1999 Renger (97) publicaron un estudio de referencia comparando PC, HPLC y CE con tres
escenarios posibles. La tendencia en ciencias de separacin es hacia la miniaturizacin y los
instrumentos porttiles. Se puede esperar que el PC va a evolucionar hacia esa direccin.

EXPRESIONES DE GRATITUD

AMS es una gran deuda con P. Bernard-Savary para un debate fructfero y proporcionar cifras de
Camag y N. Bryson para proporcionar cifras de Bionisis. Ambos van a ser agradecido por sus
valiosas sugerencias.
178 A.M. Siouf fi

Referencias

1. aNFt, B. (1955) 'FB Runge A Forgotten qumico del siglo 19'. J. Chem. Educ., 32: 566.

2. Heine, SV (1969) Tres que fue pionero en Cromatografa. J. Chem. Educ.,

46: 315.
3. Beyerinck, MW (1889) Z. Phys. Chem., 3: 110.
4. Consden, R. Gordon, AH, y Martin, AJP (1944) Biochem. J., 38: 224-232.
5. Sakodinski, KH (1993) Analytiskaia Chromatographia, edn Moskva.
6. Hais, IM y Macek, K. (1958) Handbuch der papier chromatographie, Band I. En Grundlige und Technik; G.
Fischer Verlag: Iena.
7. Munier, R. (1952) Toro. Soc. Chim. Fr., 852.
8. Izmailov, NA y Shraiber, UMS (1938) Farmatsya, 3: 1.
9. D'Ascenzo, G. y Nicolini, N. (1990) A partir de la percepcin de Runge a la adsorcin de Tswett. Fresenius
Z. Anal. Chem., 337: 232.
10. Meinhard, JE y Hall, NF (1949) Anal. Chem., 21: 185.
11. Stahl, E. (1956) Cromatografa en capa fina. Pharmazie, 11: 633-637.
12. Stahl, E. (1962) Dunnsicht chromatographie; Springer Verlag: Berln.
13. Stahl, E. (1965) Cromatografa de capa fina, Un Manual de Laboratorio; Acadmico
Press: Nueva York.
14. Kirchner, JG (1967) Cromatografa de Capa Fina de Qumica Orgnica;
Perry, ES y Weissberger, A., eds .; Wiley Interscience: Nueva York, vol. XII.
15. Giddings, JC, Stewart, GH, y Ruoff, AL (1960) Zona de Migracin en la cromatografa en papel. J.
Chromatogr., 3: 239.
16. fi Siouf, A.-M. y Guiochon, G. (1978) J. Chromatogr. Sci., 16: 598-609.
17. Geiss, F. (1987) Parmetros der dunnschicht chromatographie. En Fundamentos de
Cromatografa de capa fina; Hthig: Heidelberg.
18. Soczewinski, E. (1969) Efectos composicin del disolvente en cromatografa de capa fina. Anal. Chem., 41
(1): 179-182.
19. Snyder, LR (1971) J. Chromatogr., 63: 15.
20. Snyder, LR (1968) Principios de la cromatografa de adsorcin; Marcel Dekker:
Nueva York.
21. Geiss, F. y Schlitt, H. (1968) Chromatographia, 1: 302.
22. Geiss, F. (1988) J. planar Chromatogr., 1: 102.
23. Viricel, M., Gonnet, C., y Lamotte, A. (1974) Chromatographia, 7: 345.
24. Halpaap, H. y Ripphahn, J. (1977) Chromatographia, 10: 613.
25. Zlatkis, A. y Kaiser, RE (1977) Alto rendimiento cromatogrfico en capa fina
grafa; Elsevier: Amsterdam.
26. Guiochon, G. y Siouf fi, A.-M. (1978) J. Chromatogr. Sci., 16: 470.
27. Guiochon, G., Bressolle, F., y Siouf fi, A.-M. (1979) J. Chromatogr. Sci., 17:
368, y referencias en el mismo.
28. Gonnet, C. y Marichy, M. (1984) analusis, 12: 369.
29. Soczewinski, E. y Golkiewicz, W. (1976) J. Chromatogr., 118: 91.
30. Hahn-Deinstrop, E. (1999) Cromatografa en capa fina aplicada; Wiley-VCH:
Weinheim.
31. fi Siouf, A.-M. (1981) J. Chromatogr., 556: 81.
32. Nyiredy, Sz., Meier, B., Edelmeier, CAJ, y Sticher, O. (1985) J. alta Resol. Chromatogr., 8: 186.

33. Guiochon, G., Gonnord, M.-F., Siouf fi, A.-M., y Zakaria, M. (1981)
J. Chromatogr., 209: 129.
60 aos de cromatografa en capa fina 179

34. Guiochon, G., Beaver, LA, Gonnord, M.-F., Siouf fi, A.-M., y Zakaria, M. (1983) J. Chromatogr., 255: 415.

35. Soczewinski, E. y Wawrzynowicz, T. (1978) Chromatographia, 11: 466.

36. Nurok, D. (1981) Anal. Chem., 53: 714.
37. Perry, JA, Jupille, TH, y Glunz, LJ (1975) Anal. Chem., 47: 65A.
38. Burger, K. (1984) Z. Anal. Chem., 318: 228.
39. Nyiredy, Sz. (Ed) Cromatografa plana, una visin retrospectiva de la Tercera
Millenium; Springer: Budapest, 177-199.
40. Hopf, PP (1947) Ind. Eng., 39: 938.
41. Hostettman, K., Marston, A., y Hostettman, M. (1997) cromatogrficas preparativa
Tcnicas graphy, 2 ed .; Springer: Berln, 13-32.
42. Tyhiak, E., Mincsovics, E., y Kalasz, H. (1979) J. Chromatogr., 174: 75.
43. Tyhiak, E., Mincsovics, E., y Kalasz, H. (1980) J. Chromatogr., 191: 292.
44. Nyiredy, Sz. (2001) Trac, 20: 91.
45. Tyihak, E. y Mincsovics, E. (2001) En Cromatografa plana, una retrospectiva
Ver para el tercer milenio; Nyiredy, Sz., Ed .; Springer: Budapest, 137-176.
46. Nyiredy, Sz. (2003) J. Chromatogr. UN, 1000: 985.
47. Bryson, N. y Papillard, D. (2004) LC-GC Eur., 17: 41.
48. Poole, CF y Fernando, WPN (1992) J. planar Chromatogr., 5: 357.
49. Mincsovics, E., MANACH, M., Kecske's, L., TANAPA, B., Papillard, D., y Tyihak, E. (2003) J. Liquid
Chromatogr., 26: 2611.
50. Lepri, L. y Del Bubba, M. (2000) En Enciclopedia de la ciencia de la separacin;
Academic Press: London2426-2440.
51. Sherma, J. (2004) Anal. Chem, 76: 13R.
52. Spangenberg, B., Ahrens, B., y Klein, K.-F. (2001) Chromatographia, 53:
S-438.
53. Prosek, M. y Drusany, I. (1991) Actas de la sexta Instrumental planar Chromatography; Interlaken; pag.
273.
54. Drusany, I., Kravanja, R., y Prosek, M. (1991) J. planar Chromatogr., 4: 490.
55. Vovk, I. y Prosek, M. (1997) J. Chromatogr. UN, 768: 329.
56. Ranny, M. (1987) TLC con Anlisis FID; Reidel, D., ed .; Pub. Co .: Dordrecht,
Los Pases Bajos.
57. Shanta, N. (1992) J. Chromatogr., 624: 21.
58. Issaq, HJ, Schroer, JA, y Barr, EW (1977) Chem. Instrum., 8: 51.
59. Wilson, ID (1999) J. Chromatogr. UN, 856: 429.
60. Mehl, JT, Gusev, AI, y Hrcules, DM (1997) Chromatographia, 46: 358.
61. Mehl, JT y Hrcules, DM (2000) Anal. Chem., 72: 68.
62. Crecelius, A., Clench, MR, Richards, DS, Evason, D., y Parr, V. (2002)
J. Chromatogr. Sci., 40: 614.
63. Crecelius, A., Crspulo, MR, Richards, DS, y Parr, V. (2002) J. Chromatogr. UN,
958: 249.
64. Crecelius, A., Clench, ML, Richards, DS, y Parr, V. (2003) J. Pharmaceut. Biomed. Anal., 35: 31-39.

65. van Berkel, G., Snchez, C., y Quirke, JME (2002) Anal. Chem., 74: 216.
66. Luftmann, H. (2004) Anal. Bioanal. Chem., 378: 964.
67. Wachs, T. y Henion, JD (2001) Anal. Chem., 73: 68.
68. van Berkel, G., Llave, JJ, de Apadoca, MF, y Ford, MJ (2004) Anal. Chem.,
76: 479.
69. Orinak, A., Arlinghaus, HF, Vering, G., Justinova, M., Orinakova, R., Turcaniova, L., y Halama, M. (2003) J.
planar Chromatogr., 16: 23.
180 A.M. Siouf fi

70. Prosek, MM, Milivojevic, L., Krizman, M., y abeto, M. (2004) J. planar Chromatogr., 17: 420.

71. Busch, KL (2003) En Handbook of TLC; Sherma, J. y Fried, B., eds .; Marcel
Dekker: Nueva York, 239-277.
72. Busch, KL (2004) J. planar Chromatogr., 17: 398.
73. Chai, W., Leteux, C., Lawson, AM, y Stoll, MS (2003) Anal. Chem.,
75 (1): 118.
74. Kovar, KA, Ensslin, HK, Frey, OR, Rienas, S., and Wolff, SC (1991)
J. planar Chromatogr., 4: 246.
75. Stahlmann, SA (1999) J. planar Chromatogr., 12: 5.
76. Pestel, S., Jungerman, K., y Schiferdecker, HL (2005) Las prostaglandinas y otros lpidos. 75: 123.

77. Kocsis, L., Horvath, E., Kristof, J., Frost, RL, Redey, A., y Mink, J. (1999) J. Chromatogr A, 845: 197.

78. Klebovich, I. (1997) En La cromatografa planar Instrumental; Nyiredy, Sz.,

Kaiser, RE y Studer, A., eds .; Springer Hungarica: Budapest, 147-154.
79. Vovk, I. y Moscnik, G. (2001) En Cromatografa plana, una visin retrospectiva
para el tercer milenio; Nyiredy, Sz., Ed .; Springer: Budapest, 312-336.
80. Hofstraat, JW, Engelsma, M., Ce fi no, WP, Hornweg, GP, Goojer, C., y Velthorst, NH (1987) Anal. Chim.
Acta, 193: 193.
81. Poole, CF (2003) J. Chromatogr., 1000: 963.
82. Botz, L., Nagy, S., y Kocsis, B. (2001) En Cromatografa plana, un retrospectivo
Ver tivo para el tercer milenio; Nyiredy, Sz., Ed .; Springer: Budapest, 489-515.
83. Baczek, T., Kaliszan, R., Claessens, HA, y Van Straten, A. (2001) LC-GC Eur.,
14: 276.
84. Pretorius, V., Hopkins, BJ, y Schicke, JD (1974) J. Chromatogr., 99: 23.
85. Sha fi k, T., Howard, AG, Moffat, E., y Wilson, ID (1999) J. Chromatogr. UN,
841: 127.
86. Nurok, D., Koers, JM, y Carmichael, MA (2002) J. Chromatogr. UN,
87. Nurok, D., Koers, JM, Carmichael, MA, Liao, WM, y Dzido, TH (2002)
J. planar Chromatogr., 15: 320.
88. Malinowska, I. (2000) J. planar Chromatography, 13: 307, y las referencias en l.
89. Dzido, T., Mroz, J., y Jozwiak, G. (2004) J. planar Chromatogr., 17: 404.
90. Coman, V. y Krebik, S. (2003) J. planar Chromatogr., 16: 338.
91. Clicq, D., Pappaert, K., Vankrunkelsven, S., Vervoort, N., Baron, GV, y Desmet, G. (2004) Anal. Chem., 431A.

92. Vervoort, N., Clicq, D., Baron, GV, y Desmet, G. (2003) J. Chromatogr. UN,
987: 39.
93. Hauck, HE, Bund, O., Fischer, W., y Schulz, M. (2001) J. planar Chromatogr.,
14: 234.
94. Cremer, E. y Nau, H. (1968) La cromatografa con ultrafinas LMS lquido fi.
Naturwiss., 55: 651-653.
95. Andreev, LV (1982) Instrumental HPTLC Simposio, Instituto de piel cromatogrficas
grafa; Durkheim, B., ed .; Interlaken, p. 256.
96. Hauck, HE y Schulz, M. (2202) J. Chromatogr. Sci., 40: 550.
97. Renger, B. (1999) J. planar Chromatogr., 12: 58.