Protocolos y mtodos

Laboratorio de Genmica Viral y Humana

Facultad de Medicina UASLP

Preparacin de TAE y TBE

Creado: 14 de Febrero del 2008
Ultima modificacin: 11 de Noviembre del 2008

Preparacin de Buffer Tris, Acido actico, EDTA (TAE) y Tris, Acido brico, EDTA
(TBE).
El TAE es el buffer ms comnmente empleado para la separacin de fragmentos de DNA por electroforsis. Sus aplicaciones
electroforticas incluyen al anlisis de productos de PCR, protocolos de purificacin de DNA y experimentos de clonacin de
DNA. Este buffer posee una fuerza inica baja al igual que una pobre capacidad de amortiguacin de pH. El TAE constituye la
mejor alternativa (en comparacin al TBE) para el anlisis electrofortico de fragmentos grandes (> 20 kb) de DNA. Una de las
desventajas del TAE como buffer de electroforesis es que no permite reciclarlo por ms de tres corridas electroforticas
seguidas, a diferencia del TBE cuya efectividad permanece inalterada durante 3 o 4 das, sin importar el nmero de corridas
electroforticas realizadas. El empleo del TBE como buffer de electroforesis es particularmente til para discriminar a
pequeos fragmentos de DNA (<500 bp) en geles de agarosa (en comparacin al TAE). En trminos generales los fragmentos
grandes (>20 kbp) de DNA tienden a migrar ms rpido en el TAE que en el TBE, mientras que los fragmentos pequeos (<300
bp) migran ms rpido en el TBE que en el TAE. Esta capacidad discriminatoria ha llevado a establecer parmetros
optimizados para la discriminacin de fragmentos en base a su tamao. As pues, la mejor discriminacin de fragmentos de
entre 100 y 500 bp de DNA se logra con geles de agarosa al 2% empleando TBE como buffer, mientras que los fragmentos de
entre 900 y 2000 bp son mejor separados con geles de agarosa al 0.8% empleando TAE como buffer de electroforesis.

Procedimiento:
1.

Prepare 100 mL de Acido Clorhdrico 1M (1M HCl) agregando 8.62 mL de HCl concentrado a 91 mL de dH20
previamente colocados en un vaso de precipitados de 250 mL. No agregar el agua al cido! Mezcle en una plancha
agitadora magntica durante 5 minutos. Afore a 100 mL con dH20.

2.

Prepare 100 mL de Hidrxido de Sodio 10M (10M NaOH) agregando 40 g de NaOH a 40 mL de dH20 previamente
colocados en un vaso de precipitados de 250 mL. Mezcle con una barra magntica en una plancha agitadora hasta que
el NaOH se haya disuelto por completo. Afore a 100 mL con dH20. Precaucin, esta reaccin es exotrmica!

3.

Para TBE, prepare 0.5 M EDTA pH 8.0 disolviendo 186.1 g de Na2EDTA-2H2O en 700 ml de dH20, ajustando el pH a
8.0 (de lo contrario no ser posible disolver al EDTA) por medio de 10 M NaOH (~50 ml) , afore a 1 L con dH20.

4.

Aada las sales a un vaso de precipitados adecuado para el volumen de la solucin por preparar. De acuerdo a la Tabla
de Preparacin mostrada a continuacin.

5.

Aada el 80% del volumen de dH20 requerido y mezcle encima del agitador magntico hasta diluir las sales.

6.

En el caso de soluciones TAE 1X, ajuste el pH a 7.6 con 1M HCl o 10M NaOH (segn sea necesario) empleando para
ello una pipeta de transferencia de plstico limpia (ver nota #2). Monitoree continuamente el pH con el potencimetro
mientras se aaden las soluciones de HCl o NaOH gota a gota.

7.

Afore la solucin con dH20 al volumen final requerido.

8.

Almacene a temperatura ambiente.

9.

Para preparar una solucin 1X, mezcle 1 volumen de TBE/TAE 10X con 9 volmenes de agua y agtese bien.

Laboratorio de Genmica Viral y Humana

Facultad de Medicina

Universidad Autnoma de San Luis Potos

Protocolos y mtodos
Laboratorio de Genmica Viral y Humana
Facultad de Medicina UASLP

Preparacin de TAE y TBE

Creado: 14 de Febrero del 2008
Ultima modificacin: 11 de Noviembre del 2008

Tabla de preparacin (TAE):

TAE 10X
Tris
Acido Actico

Cf (1X)

1L

10 L

20 L

40 mM

48.4 g

484 g

968 g

Na2EDTA-2H2O

2 mM

dH2O

11.42 ml 114.2 ml 228.4 ml

7.44 g

74.4 g

148.8 g

cbp 1 L cbp 10 L cbp 20 L

Tabla de preparacin (TBE):

TBE 10X

Cf (1X)

1L

10 L

20 L

Tris

89 mM

108 g

1.08 kg

2.16 kg

Acido Brico

89 mM

55 g

550 g

1.1 kg

0.5 M EDTA, pH 8

2 mM

40 ml

400 ml

800 ml

cbp 1 L

cbp 10 L

cbp 20 L

dH2O

Notas:
1.

Limpie perfectamente bien la balanza con la brocha para evitar el acarreo de contaminantes y la corrosin de la
balanza o de las superficies de acero inoxidable.

2.

El Tris(hidroximetil)aminometano tambin es conocido por los nombres de tris, TRIS, tris base, trizma, trisamina,
THAM, trometamina, trometamol y trometano. Tris-HCl hace referencia a la solucin de tris cuyo pH ha sido
manipulado o modificado con HCl. El pH de las soluciones amortiguadoras a base de Tris cambia significativamente
con la temperatura, disminuyendo aproximadamente 0.028 unidades de por cada C por encima de 25C. Por ello es
necesario ajustar el pH ante fluctuaciones extremas de temperatura operacional. Como el pKa del Tris es de 8.08, este
no debe usarse para soluciones amortiguadoras con rangos operacionales por debajo de pH 7.0 o por encima de pH
9.0.

3.

Las soluciones 10X de TAE poseen un pH ~8.5 que se corrige automticamente a pH 7.5 una vez llevadas a 1X. Por
ello en el caso de las soluciones 10X, no es necesario ajustar el pH.

4.

La vida media de anaquel para soluciones 1X o 10X de TAE y TBE oscila entre 6 y 24 meses a temperatura ambiente.

Referencias:
1.
2.

Current Protocols in Molecular Biology, Appendix 2, A.2.5, Supplement 40, Frederick M. Ausubel et al. 2003.
TBE, or not TBE; that is the question: Beneficial usage of tris-borate for obtaining a higher resolution of small DNA
fragments by agarose gel electrophoresis. Yutaka Miura et al, Nagoya Medical Journal 43(1) 1-6, 1999.

Laboratorio de Genmica Viral y Humana

Facultad de Medicina

Universidad Autnoma de San Luis Potos