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Microbiologia Parcial 2 SUYOS
Microbiologia Parcial 2 SUYOS
Cromosoma (ADN) disperso en el citoplasma bacteriano (Tambin es llamado nucleoide). Puede ser
circular o lineal (como en actinomicetos o streptomyces).
El ADN circular se encuentra superenrollado y se organiza en dominios mediante las protenas like
histonas (por ejemplo H, HU, IHF, H1, HLP1, P), para formar hebras infraenrolladas.
Existen enrollamientos positivos (hlice sobreenrollada, que se protege contra radiaciones) y
negativos (infraenrollada, es ms comn).
En el proceso de enrollamiento, participan las enzimas topoisomerasas que tuercen la hebra.
Ejemplos de topoisomerasas: ADN-girasa (clase II): Es blanco de algunos antibiticos, est presente
en bacterias y muchas arqueas. Topoisomerasa I: elimina el superenrollamiento y regresa la cadena al
estado relajado
Plsmidos. Son porciones de material gentico extracromosmico, en general son circulares pero existen
algunos lineales.
Pueden ser unicopia (una sola replicacin por ciclo celular que se coordina con la replicacin
genmica) o multicopia (pueden reproducirse varias veces, independientes a la reproduccin de la
bacteria).
Algunos de ellos contienen genes que proporcionan caractersticas diferentes a las bacterias, como
el plsmido F (plsmido conjugativo) que puede transferirse a otras bacterias mediante la conjugacin,
tiene una regin denominada regin Tra que se excreta por el pili sexual mediante un sistema de secrecin
tipo IV, ste slo es recibido una vez y se vuelve una bacteria F+.
Otros, llamados plsmidos episomales, pueden integrarse al cromosoma y se replican bajo control
de ste. Existen plsmidos que se combinan con el ADN cromosmico llamados transposones. Secuencias
de insercin. Transposasas transposones(elaborada). Normales y Replicativos. Modelo de crculo rodante.
Endonucleasa (enzima que puede reconocer una secuencia caracterstica de nucletidos).
Griffith: Ciertos pptidos activan seales de la clula.
Transcriptasa reversa: se utiliza en eucariontes para copiar una parte de ADN.
Bacterifagos: abren canales.
Becerril Romn Mara del Mar J.
Un transposn o elemento gentico transponible es una secuencia de ADN que puede moverse de
manera autosuficiente a diferentes partes del genoma de una clula, un fenmeno conocido
como transposicin. En este proceso, se pueden causar mutaciones y cambio en la cantidad de ADN
del genoma. Anteriormente fueron conocidos como "genes saltarines" y son ejemplos de elementos
genticos mviles.
El transposn modifica el ADN de sus inmediaciones, ya sea arrastrando un gen codificador de
un cromosoma a otro, rompindolo por la mitad o haciendo que desaparezca del todo. En algunas
especies, la mayor parte del ADN basura (hasta un 50% del total del genoma) corresponde a
transposones.
A diferencia de los provirus, los transposones se integran en el ADN celular en lugares bien
determinados. Su existencia fue propuesta por Barbara McClintock en el maz, sin embargo, su
existencia no se demostr hasta mucho ms tarde en bacterias. Por ello fue laureada con el Premio
Nobel en 1983.
Los plsmidos son herramientas muy importantes en los estudios de biologa molecular, se emplean
como vectores (agentes generalmente orgnicos que sirven como medio de transmisin de un organismo a otro) de genes
para la transformacin de clulas. Los eucariontes no contienen plsmidos, pero pueden insertrseles para que produzcan
una determinada protena.
(ribosomal).
son
unidades
de
http://www2.uah.es/biomodel/model1j/rna-prot/ribosoma.htm
6. A diferencia de los eucariotes, en las bacterias no existen compartimentos, por los que los procesos
de replicacin de ADN, transcripcin (ADN ARNm) y traduccin (ARNm + ARNt + ARNr
Protenas) ocurren en el citoplasma.
Grnulos de polisacridos. Unidades de glucosa que son reserva de carbono y energa que se forma en un
exceso de carbono.
Glucgeno.
Becerril Romn Mara del Mar J.
Grnulos metacromticos (volutina). Reserva de fosfato que se ponen en evidencia con una tincin con el
azul de toluidina, al combinarse con el polifosfato da un color violeta rojizo. Este fenmeno se
denomina metacromasia.
Carboxisomas.
Son
acumulaciones
de
la
enzima
1,5-di
fosfato
Vacuolas de gas. Formadas por dos diferentes protenas: GvpA (Gas Vacuole
Protein
A)
GvpC.
Estas
vesculas
permiten
los
Preparaciones microbiolgicas.
http://microexpfqunam.blogspot.mx/
Frotis:
Impronta. Sobre un portaobjetos limpio y desengrasado, es como un sello y se obtienen muestras delgadas.
Frotis sanguneo. Gota en portaobjetos especial. Se usa para buscar protozoarios, cpsulas o diferenciales.
Tinciones.
1. Positivas. Se observa teida la clula sobre un fondo claro.
Simples (1 solo colorante: azul de metileno, safranina, cristal violeta, etc.) y compuestas (como
Gimsa, Wright y May Crnwald).
Pueden usarse mordentes (compuestos qumicos intensificadores de color aumentando la afinidad
colorante-molcula) y decolorantes.
2. Negativas. El fondo se tie de oscuro para observar clulas o estructuras refringentes, como la
cpsula donde se usa tinta china (tincin negativa de cpsula)
3. Diferenciales. Se pueden diferenciar las distintas especies por su coloracin. (ZIehl-Neelsen, Gram).
4. Selectivas. Son utilizadas para dar color y aislar partes especficas de los microorganismos
(Endosporas, Flagelo, Ncleo).
Generalmente, se mezclan los colorantes con glicerina, ya que pueden ser muy agresivos y daar a la clula.
Colorantes.
Compuestos coloridos que al combinarse con otras sustancias les imparten color; estn formados por un
grupo cromforo que es la parte responsable del color, y un grupo auxcromo que al formar sales le
permite disociarse y combinarse. Si se rompen los enlaces conjugados, la molcula deja de tener color. Se
unen a protenas o cidos nucleicos.
1. cidos El cromforo es el anin de la molcula (eosina).
2. Bsicos. El cromforo es el catin de la molcula (azul de metileno, cristal violeta, safranina, fucsina).
Tcnicas de tincin.
3. Tincin simple.
Frotis fijo con calor, seco.
Nos seala la forma, agrupacin
se mezclen. Las G- pierden cristal violeta ya que se daa su membrana externa. Las G+ deshidratan
su pared y no permiten salir el colorante.
8. Tincin de Ziehl-Neelsen.
Serologa (anticuerpos)
PCR
Baciloscopa: es la tcnica ms segura para detectar
tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis).
Se toma la primera expectoracin del da.
Neutralizar cido.
Se deja secar una gota de muestra (frotis) y se
sella con albmina.
Medio de cultivo 37 C.
cidos
miclicos
retienen
la
fucsina
bsica
Microscopa.
Tipos de microscopas:
Metabolismo microbiano.
Suma de reacciones bioqumicas requeridas para la generacin de energa (catabolismo) y el uso de ella para
sintetizar material celular a partir de molculas del medio ambiente (anabolismo).
Las reacciones catablicas producen energa como
ATP, el cual es utilizado en las reacciones anablicas
para sintetizar el material celular a partir de nutrientes.
1. Enzimas: protenas con funcin de catalizadores
biolgicos; reducen la
energa de activacin
de
una
reaccin
qumica.
especficas
Son
para
un
sustrato.
Grupo prosttico: molcula no proteica que se une a la protena(enzima) y forma parte de su estructura.
Cofactor (inorgnico) o coenzima (orgnico): se unen a la enzima para
que aumente la afinidad por el sustrato. La enzima cuando no est
unida al cofactor se le llama apoenzima.
molculas proteicas por lo que los sitios activos se ven modificados. La enzima
se satura a cierta concentracin del sustrato, o sea que aunque aumentemos
la concentracin, no aumentar la velocidad de la catlisis puesto que se ha
alcanzado la velocidad mxima de la enzima.
INHIBIDORES ENZIMATICOS.
Un inhibidor competitivo se une a la enzima en el sitio
activo, impidiendo la entrada y unin del sustrato. Un
inhibidor alostrico modifica la afinidad de la enzima
por el sustrato, al unirse en un sitio distinto (sitio
alostrico) al sitio activo.
REGULACIN DE LAS VAS METABLICAS.
Regulacin por producto final de la reaccin ->
Cuando hay suficiente producto, ste es un inhibidor
de una enzima reguladora, generalmente la primera
para que no se siga efectuando la va.
Becerril Romn Mara del Mar J.
Atenuacin y
Fosforilacin a nivel de sustrato. (se forma el ATP apartir de ADP + Pi, en un sitio alostrico de una enzima que
cataliza una reaccin que libera energa, utilizando esa energa para crear el enlace fosfato)
2.
mitocondria en eucariotes, por medio de un gradiente de H+ y en algunos casos Na+, generado por el paso del electrn
disminuyendo gradualmente su potencial a travs de distintos complejos proteicos, algunos de los cuales son canales
para H+ que se abren al pasar por ellos el electrn y van generando un gradiente elctroqumico de protones, los cuales
pasan a travs de una protena ATPasa que se encarga de fosforilar ADP)
(Justo debajo de ciclo de Krebs viene la explicacin ms completa)
3.
Fotofosforilacin. Los pigmentos captan la energa luminosa proveniente del sol (fotones) y la llevan al
fotosistema uno (P680), donde esta clorofila es excitada a un estado de mayor energa (mayor potencial), por lo que el
electrn va disminuyendo su potencial a medida que pasa por distintos complejos acarreadores de electrones, luego
pasa al fotosistema dos (P700), quien recibe otro fotn, quien pasa a un estado excitado y vuelve a disminuir su potencial
gradualmente, generando un gradiente electroqumico de protones a medida que el electrn pasa por las protenas
canal con centros redox, el cual es dispersado de manera similar a la cadena respiratoria; por medio de una ATPasa.
c. orgnicos
fotohetertrofos
Luz
fottrofas
Fuente de carbono
CO2
fotoauttrofos
c. orgnicos
quimiohetertrofos
Fuente de energa
c. orgnicos
quimiohetertrofos
Fuente de carbono
CO2
Redox
quimitrofas
c. orgnicos
mixtrofos
c. inorgnicos
quimilottrofos
Fuente de carbono
CO2
litoauttrofos
Gluclisis
La va de la gluclisis (EMP), se encuentra en todos los eucariotes y muchas especies de bacterias.
1.
2.
En la segunda parte se forman 4 molculas de ATP por fosforilacin a nivel de sustrato (cuando una molcula
fosforilada posee una gran energa de hidrlisis puede ceder su grupo fosfato a un ADP, para formar ATP) y 2 molculas
de NADH (molcula reducida a la que se conoce como poder reductor que si suponemos que el ATP es el efectivo en
energa, el NADH es como un cheque que se va a canjear en la cadena de transporte de electrones por 3 ATPs por
cada molcula de NADH que cede su electrn).
Esa fructosa1,6bisP, se rompe en dos molculas de 3 carbonos: gliceraldehdo3P y 3dihidroxiacetonafosfato,
que se isomeriza a gliceraldehido3P ste gliceraldehdo va sufriendo cambios conformacionales y va pasando
por intermediarios de alta energa que ceden su grupo fosfato a un ADP en 2 ocasiones; como tenamos 2
molculas de gliceraldehdo 3P por gaca molcula de fructosa1,6bisP, se generan en total 4 ATP en esta parte,
adems en una de las reacciones, se libera NADH que tambin se multiplica por 2.
3.
La ganancia total son 4 ATP y 2 NADH, y como se invirtieron 2 ATP para fosforilar la glucosa, la ganancia neta es de 2
ATP por molcula de glucosa que se convierte por esta va en piruvato (molcula de 3 C sin grupo fosfato).
Se tienen 3 molculas de glucosa6P que se oxidan a a 6-fosfogluconolactona (una lactona es un ster cclico),
producindose 3 NADPH.
2.
se
descarboxilan,
liberando
4.
Se remueven 3C de la sedoheptulosa7P y se
unen al gliceraldehdo3P , formando ahora un
azcar de 4 carbonos (eritrosa4P) y un azcar de
6 carbonos (fructosa6P)
5.
Va Entner-Doudoroff
Muchos tipos de bacterias no poseen la enzima fosfofructocinasa-1 (PFK1 de la gluclisis, donde la
fructosa6P se fosforila mediante un gasto de ATP a ADP a fructosa1,6bisP).
Una va alterna es Entner-Doudoroff, en la cual la glucosa 6P es convertida a del 6-fosfogluconato que es
deshidratado a 2-ceto-3-desoxi-6-fosfogluconato (KDPG) que ya se rompe en 2 molculas e 3C (piruvato y
Gliceraldehdo-3-fosfato).
Fermentacin.
Se realiza en condiciones anaerbicas.
Utiliza
el
NADH
producido
en
la
aceptor
de
electrones
una
de
frmico,
etanol
vino,
(etanol->
cido
de
vinagre:
consorcio
queso
Otras fermentaciones
(Lactobacillus,
suizo
(Propionibacterium
butanol
(Clostridium
Ciclo de Krebs = Ciclo de los cidos tricarboxlicos = Ciclo del cido ctrico
Piruvato Acetil-CoA (enzima: piruvato deshidrogenasa). La acetil-CoA tambin se forma por la -oxidacin de los
cidos grasos.
Becerril Romn Mara del Mar J.
El oxalacetato u cido oxalactico es una molcula de 4C, que se une al grupo acetil (2C) para formar cido
ctrico.
2.
ste cido ctrico es isomerizado y oxidado, liberando NADH y CO2, por lo que nos queda una molcula de 5C,
llamada cido--cetoglutrico, que es oxidado a su vez, liberando NADH, ATP y CO2 a cido succnico (4
carbonos).
3.
ste es oxidado a cido fumrico, liberando FADH2 (que es otro poder reductor, acarreador de electrones),
que pasa a su vez, liberando otro NADPH a oxalacetato.
Por Acetil-CoA se forman 2 molculas de NADH, una de NADPH y una de FADH2, adems de un ATP por FNS
(fosforilacin a nivel de sustrato).
Fosforilacin oxidativa.
Las coenzimas reducidas (como el NADH), transfieren los electrones a un aceptor
En la fosforilacin aerobia:
Los electrones pasan primero al complejo 1 (si provienen del acarreador NADH) o
al complejo 2 (si provienen de FADH2); ambos complejos donan su electrn a las quinonas, quienes lo transfieren al
complejo 3; ste lo transfiere al citocromo C (citocromo es una protena perifrica pequea que posee un centro
redox); del citocromo C, el electrn pasa al complejo 4, que finalmente, dona el electrn al oxgeno (O 2 O22-), quien
se une a dos protones H+ (que ya pasaron a travs de la ATPasa hacia el citoplasma) para formar H2O. Los complejos
1,3 y 4 son canales de protones, mientras que el complejo 2 es simplemente un acarreador.
El donador es el NADH o el FADH2; el aceptor es el O2 y el producto final es H2O.
El gradiente de protones generado, es utilizado para la sntesis de ATP mediante una protena ATPsintasa
(ATPasa); quien posee dos complejos:
Complejo F0 responsable de la transferencia de protones a travs de la membrana. Embebido en la membrana
citoplasmtica.
Complejo cataltico F1 responsable de la interconversin de ADP+ Pi y ATP. Se encuentra en el lado citoplasmtico.
http://www.youtube.com/watch?v=WggF8DGEmEs
La ATPasa es reversible; puede funcionar como bomba de protones contra gradiente, mediante la hidrlisis de
ATP.
En la respiracin anaerobia, los compuestos que se reducen en lugar del O2 pueden ser:
NO2- + O2 NO33. Las bacterias nitrificantes fijan CO2 por el ciclo de Calvin. Las que
oxidan
nitrito
pueden
ser
hetertrofas
con
glucosa
otros
compuestos orgnicos.
Organismos Auttrofos
Organismos que utilizan el CO2 como fuente de carbono y lo pueden incorporar por diversas vas:
La fijacin es realizada por la enzima Ribulosa bifosfato carboxilasa (RubisCO) que forma cmulos llamados
carboxisomas.
Fotosntesis.
1
Consta de 2 fases:
1.
en
energa
de
Calvin-Benson
CO2
carbono
como
para
fuente
el
de
crecimiento
celular.
Mecanismo del ciclo de Calvin:
La enzima RUBISCO fija el CO2 a
la ribulosabisfosfato (5 carbonos) y divide
la molcula en 2 molculas de 3fosfoglicerato (cada una de 3C), la cual
es
fosforilada
reducida
Fotofosforilacin acclica
Ocurre en la fotosntesis oxignica. El donador de electrones es el agua y el aceptor final es una
coenzima oxidada. Hay produccin de oxgeno.
Fotofosforilacin acclica
Ocurre en la fotosntesis anoxignica. Los donadores de electrones son principalmente: H2S, S, S2O32-.
Los electrones son devueltos a la bacterioclorofila por medio de transportadores (cadena reversa).
Fotofosforilacin
no
fotosntetica
(mediada
por
el
pigmento
En cianobacterias, la ficoeritrobilina y la ficocianobilina como pigmentos capturadores de la luz. Las ficobilinas estn
unidas covalentemente a protenas de unin especficas, formando las ficobiliprotenas, que se asocian en complejos
ordenados llamados ficobilisomas. Estas son las principales estructuras de captacin de luz en los microorganismos. (Son
como antenas)
En estos ensamblajes los pigmentos de ficobilina se unen a protenas especficas que forman pigmentos llamados
ficoeritrina (PE), ficocianina (PC) y aloficocianina (AP). La energa de los fotones absorbidos por PE o PC es transmitida por AP
a la clorofila a del centro de reaccin mediante un proceso conocido como transferencia de excitones.
Medios de cultivo
1. Macronutrientes en los medios de cultivo
3. Factores de crecimiento
4. Clasificacin.
Composicin
Naturales o complejos. No tienen una composicin definida. Sangre, suelo, frutas, etc. o medios que contengan
ingredientes cuya composicin no est completamente definida como el extracto de levadura, peptonas o el agua
de la llave.
Sintticos. Composicin completamente conocida, componentes son extrapuros, como en los medios empleados
para investigacin.
Estado
Medios lquidos. Generalmente tienen componentes completamente solubles. Son tiles en la propagacin de
microorganismos pero tienen la desventaja de que no se pueden detectar contaminaciones.
Medios fluidos. Contienen agar aprox. 0.1%, consistencia lquida pero la presencia de agar disminuye la velocidad de
disolucin de O2 ambiental. Se emplea generalmente en el cultivo de microorganismos anaerobios y
microaeroflicos.
Semislidos. 0.2
a 0.8% de agar, son suaves y permiten observar la movilidad de los microorganismos. Esta
consistencia es utilizada en los medios de transporte, las pruebas de movilidad, pruebas biqumicas y pruebas
genticas.
Slidos. 1.5 a 2.0% de agar, consistencia dura y forman un soporte para el crecimiento microbiano. Se emplean para
cultivo, aislamiento, diferenciacin, cuantificacin, pruebas de sensibilidad y en algunos casos para conservacin
(inclinados).
Uso
Enriquecidos. Contienen componentes ricos nutritivamente y permite el crecimiento de microorganismos no
exigentes.
Ejemplos:
Agar cuenta estndar (cuenta en placa)
Infusin cerebro y corazn (BHI)
Agar Soya Tripticasena (TSA)
Agar nutritivo (AN)
Agar sangre (AS)
De enriquecimiento. Contiene componentes y condiciones que permiten el desarrollo de un tipo microbiano y
disminuyen la velocidad de crecimiento de la flora acompaante.
Ejemplos:
Agua peptonada pH 9: Deteccin de V. cholerae
Caldo tetrationato: Pre-enriquecimiento para Salmonella
Caldo selenito: Deteccin de Salmonella, Enterobacter sakazakii y Yersinia enterocolitica
Selectivos. Contiene componentes que permiten el desarrollo de un tipo microbiano e inhiben el crecimiento de los
dems microorganismos.
Ejemplos:
Agar cetrimida
Caldo bilis verde brillante
Agar Bacillus cereus
Agar Sabouraud cicloheximida
Diferenciales. Contiene componentes que permiten diferenciar las actividades metablicas de los microorganismos
inoculados. La presencia de indicadores o el uso de reveladores despus de la incubacin ponen de manifiesto la
actividad.
Ejemplos:
Agar DNAsa
Agar almidn
Agar cromognico para Candida
Diferenciales y selectivos.
Agar XLD
Agar Endo
Agar Mc Conkey
De conservacin. Algunos medios de cultivo son empleados para la conservacin temporal de microorganismos,
como son:
Medio slido en caja a 4C (hasta 1 semana).
Medio de agar inclinado 4C (hasta 2 semanas) con sello de glicerol estril a 4C (varios meses dependiendo del
microorganismo).
Medio fluido de tioglicolato con carne molida con sello de aceite mineral estril a temperatura ambiente (varios
meses
dependiendo del microorganismo).En la liofilizacin tambin se emplea la leche descremada (aos).
De transporte. Son medios que se emplean para el transporte de muestras sin alterar la viabilidad y la proporcin de
microorganismos. Tienen consistencia semislida, con amortiguador de pH y reducidos en nutrientes para preservar la
proliferacin de microorganismos por varias horas. Las muestras se recolectan con asas o con hisopos de alginatos
que no inhiben a los microorganismos.
Medio Amies
Medio de Stuart
De transporte. Son medios de cultivo que tienen los nutrientes para poner en evidencia la actividad metablica de
un microorganismo puro. Pueden emplear reveladores y/o indicadores.
Pruebas bioquimicas
Determinan la actividad metablica de una cepa pura. Son empleadas principalmente la identificacin y
clasificacin de bacterias y hongos.
Partes.
Producto
Leche
Descremada.
Sustrato:
Casena
Enzima:
Caseinasa
oxidativo.
Prueba
para
determinar
si
el
Oxidativa.
Producto:
Acido
pirvico.
Indicador:
Azul
de
butilengliclica:
en
sta,
parte
del
piruvato
se
metaboliza
produciendo cantidades menores de cido lctico, frmico y actico, la mayor parte del
piruvato se condensa formando acetilmetilcarbinol, que es reducido a 2,3-butilenglicol,
productos que son neutros.
Para determinar la presencia de los productos neutros (acetona) (prueba de VogesProskauer): Se agrega un poco de a-naftol al 5% en etanol (medio adquiere aspecto
lechoso), luego se le aade (KOH 40%) que desaparece el aspecto lechoso, se agita
fuertemente. La acetona reacciona con el a-naftol, y produce un cromforo rojo en
presencia de oxgeno. (Prueba positiva color rosado - violceo en la parte superior del tubo;
Prueba negativa no tiene coloracin).
Rojo de Metilo/Voges Proskauer (Caldo RM/VP) Sustrato: Glucosa. Vas: Fermentacin cida o neutra.
Producto: cidos orgnicos o acetona. Reveladores: Solucin de Rojo de Metilo, Alfa
Naftol y KOH 40%.
8.
Utilizacin del citrato. Un microorganismo que puede utilizar el citrato como nica
fuente de carbono tambin utiliza las sales de amonio del medio como nica fuente de
nitrgeno. La extraccin de nitrgeno de las sales de amonio producen amoniaco y se
alcaliniza el medio virando el indicador al alcalino.
Medio de Citrato de Simmons Sustrato: Citrato de sodio. Va: Varias dependientes
del pH del medio. Producto: Acetato/formato en condiciones alcalinas y Acetato, CO2, lactato/Acetona en condiciones
cidas. Indicador: Azul de bromotimol.
9. Agar Hierro de Kligler (KIA). Identificacin de enterobacterias y otras bacterias Gram negativas. En presencia de
tiosulfato en el medio o la degradacin de protenas liberando aminocidos azufrados, algunos microorganismos forman
H2S gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cistena desulfurilasa. El gas incoloro H 2S se forma en
condiciones cidas y reacciona con el citrato de amonio frrico para producir un precipitado negro insoluble de sulfuro
ferroso metlico.
Las bacterias incapaces de fermentar utilizan las peptonas y liberan aminas que alcalinizan el medio.
Las bacterias que solo fermentan la glucosa, inicialmente tambin utilizan aerbicamente la glucosa y debido a la
baja concentracin de glucosa (0.1%), metabolizan las peptonas alcalinizando la superficie del medio (el pico de
flauta).
Las bacterias fermentadoras de glucosa y lactosa, fermentan la glucosa 0.1% y al trmino de esta, fermentan la
lactosa 1%, permitiendo la acidificacin completa del medio.
Alcalino: rojo/bugambilia, cido: amarillo.
Agar hierro de Kligler Sustratos: Glucosa 0.1%, lactosa 1% y Tiosulfato o grupos SH de la cistena. Va: Fermentativa
Enzimas: Tiosulfato reductasa y cistena desulfurilasa Productos: cidos mixtos y H2S. Indicadores: Rojo de fenol y sales de Fe2+.
10. Medio SIM (Sulfhdrico Indol Movilidad). Derivacin del de Kligler. (medio semislido)
Sustratos: Tiosulfato o grupos SH de la cistena y triptfano. Enzimas: Tiosulfato reductasa, cistena desulfurilasa y
tiptofanasa. Producto: H2S e Indol. Revelador: Sales de Fe2+ y p-Dimetilaminobenzaldehdo (DMABA).
Resultados: 1. Reduccin del azufre (precipitado negro). 2. Formacin de indol a partir de triptfano (se forma un
cromforo rojo en la superficie) y 3. Movilidad (si se esparce por el tubo de ensaye o si slo se presenta en la parte
donde se inocul).
1.
2.
3.
6.
NO reductasa (NOR).
N2 reductasa (N2OR).
Caldo nitratos Sustrato: Nitrato de sodio. Enzima: Nitrato reductasa. Producto: Nitritos. Revelador: Reactivos de Griess (a
y b) (cido sulfanlico y dimetil-a-naftilamina (a-naftilamina) que forman un cromforo rojo, despus de 24 horas de la
incubacin, en presencia del nitrito.
Cuando la prueba resulta negativa para
nitritos se utiliza la campana de fermentacin o la prueba del
zinc, ya que es posible que la bacteria haya logrado reducir
an ms el nitrito hasta N2 (donde se observara la presencia
de un gas). El zinc, reduce nitrato a nitrito, y si sale positiva,
quiere decir que la bacteria no logr reducir el nitrato.
Crecimiento Bacteriano
Crecimiento: incremento en el # de clulas
Biparticin (fisin binaria): una clula se divide para formar dos iguales.
Generacin: intervalo que transcurre en la formacin de dos clulas.
Becerril Romn Mara del Mar J.
Fisin binaria: cada clula hija recibe una copia del cromosoma, ribosomas, complejos macromoleculares, as como
monmeros y iones inorgnicos para existir como una clula independiente. El ADN se ancla a la membrana y as, cada
clula hija se queda con una copia.
Se forma un septo que dar lugar a cada una de las clulas, las envolturas
rodean a cada copia del ADN y finalmente se da la separacin de las clulas.
Proteinas Fts (filamentous temperature sensitive): forman el aparato de divisin (divisoma)
o FtsZ polimeriza y forma un anillo en el centro de la clula.
o FtsA es una enzima ATP hidrolasa que provee la energa para ensamblar protenas
en el divisoma.
o ZipA ancla a FtsZ a la membrana citoplasmtica.
o FtsI es una protena involucrada en la sntesis de peptidoglucano, tambin
llamada protena de unin a penicilina (su actividad es bloqueada).
Replicacin del ADN
Previo a la formacin del anillo FtsZ que se forma en el espacio entre los cromosmas duplicados.
o MinC: inhibidor de la divisin celular y previene que FtsZ ensamble el anillo hasta que el centro se encuentre formado.
o MinE: inhibe la actividad de MinC y se ancla al centro de la divisin.
o FstK participa en la elongacin.
o FstZ: tiene actividad de GTP hidrolasa, libera energa para la polimerizacin y despolimerizacin, as como para el
ensamblaje y desensamblaje del anillo.
Protena MreB y la forma de las bacterias.
La presencia de esta protena se ha relacionado con las bacterias no cocoides.
o FtsZ tubulina bacteriana.
o MreB actina bacteriana.
Autolisinas: realizan pequeas aberturas, presentes en el complejo divisoma.
La sntesis del nuevo peptidoglocano deja en las clulas Gram positivas una cicatriz. (de
donde empieza a sintetizar la clula hija su propio pptidoglucano)
La abertura y sntesis deben ser coordinadas para evitar la autolisis de la clula.
Bactoprenol y transpeptidacion.
El bactoprenol (protena en el periplasma de gran negativas) acarrea los precursores de la pared celular, en el
periplasma interacta con la enzima que inserta los precursores de pared celular y cataliza la formacin del enlace
glucosdico.
La transpeptidasa forma el enlace peptdico entre las cadenas de aminocidos de las unidades de murena.
Crecimiento bacteriano: duplicacin de un cultivo de manera regular durante un intervalo de tiempo.
o Grafica logartmica: muestra el crecimiento exponencial; puede calcularse el tiempo de generacin.
Tiempo de generacin (G): tiempo requerido para que una clula se divida o una poblacin se duplique.
G = t/n
n= numero de generacin
t=tiempo
No= nmero inicial de microorganismos
N = No2n
lg N = lg No + n lg 2
Tipos de cultivo.
Cultivo en lote. Varios matraces, muestrear de cada uno en el tiempo, se construye una curva, mtodo analtico
analtico a pequea escala.
Becerril Romn Mara del Mar J.
Temperatura
(1). Gelificacin de la membrana; los procesos de transporte se llevan a cabo
lentamente y no hay crecimiento.
(2). Las reacciones enzimticas aumentan su velocidad.
(3). Las reacciones enzimticas se llevan a cabo a su mxima velocidad. (no
todas, cada enzima tiene su temperatura ptima).
(4). Desnaturalizacin de protenas y membrana citoplasmtica. Lisis trmica.
pH
Microorganismos patgenos.
Acidofilos 1-6
Neutrofilos 7-10
Alcalofilos 11-14
Oxigeno.
Concentracin de solutos.
Actividad del agua (aw ): disponibilidad del agua para los microorganismos.Osmfilos y xerfilos pueden vivir en bajas aw
TABLA DE EXTREMOFILOS
Microorganismos COLIFORMES.
Coliformes totales: bacilos Gram negativos aerobios o anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la
lactosa con produccin de gas en un lapso mximo de 48 h a 35C.
Este grupo esta conformado por 4 gneros principalmente:
Enterobacter, Escherichia, Citrobacter y Klebsiella.
El grupo de coliformes fecales: bacterias Gram-negativas capaces de fermentar la lactosa con produccin de gas a
las 48 h de incubacin a 44 C. Este grupo no incluye una especie determinada; la ms prominente es Escherichia coli.
2 Totales. Microorganismos vivos y muertos no se pueden distinguir. Son rpidos pero se requiere contar en algunos casos
con curvas de calibracin.
1.
Recuento microscpico.
observadas al microscopio.
2.
Cuenta de Breed.
Se usa: muestra a evaluar (directa o diluida), objetivo
calibrada o micropipeta
micromtrico, asa
Nefelometra (Turbidimetra).
densidad ptica (DO) que puede ser expresada como Absorbancia, % de Transmitancia o Unidades Klett (UK).
Longitud de onda ()
Bacterias 540nm
Protozoarios 580nm
Levaduras 600nm
El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas se obtiene por el secado de un volumen en un horno a
105C hasta peso constante. til para grandes volmenes. Desventaja: componentes voltiles pueden perderse y puede
existir degradacin. La muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado.
1. Agentes qumicos.
Mecanismo de accin
Concentracin
Tiempo de exposicin
Factores ambientales
Susceptibilidad de los microorganismos
Edad de los microorganismos
Presencia de materia orgnica
Fenoles y sus derivados. Destruccin de la membrana citoplasmtica y desnaturalizacin de enzimas.
Metales pesados.
cido peractico. Esterilizante. Biocida para hongos y bacterias, endoesporas y virus. No txico. Desinfectante
de equipo mdico y de procesamiento de alimentos.
Esterilizantes gaseosos. Esterilizantes de plsticos y materiales termosensibles. Desnaturalizan protenas.
Antibiticos.
Antibiograma.
Resistencia.
Natural
Adquirida
Una cruzada
Una asociada
Factores Fsicos.
Calor hmedo
Ebullicin. Desnaturaliza los componentes celulares.
Punto trmico mortal. Temperatura variable y tiempo constante. La temperatura que destruye a los
microorganismos en un tiempo determinado.
Periodo trmico mortal. Tiempo variable y temperatura constante. El tiempo que tardar en destruir a los
micoorganismos en una muestra a una temperatura determinada.
Tindalizacin. Proceso de destruccin de formas vegetativas
por medio de vapor de agua y una incubacin para favorecer la
germinacin de endosporas, para posteriormente repetir el proceso.
Pasteurizacin lenta. Calentar la leche entre 62 y 64C y mantener durante 30 minutos. Luego enfriar entre
4 y 10C .
Pasteurizacin rpida. Llamada tambin pasteurizacin continua o bien HTST (High Temperature Short
Time), consiste en aplicar a la leche una temperatura de 72 - 73C en un tiempo de 15 a 20 segundos.
Una leche ultrapasteurizada: 110C y 115C por 4 segundos, mientras que la leche esterilizada : 140-150C en 2 s;
inyeccin de vapor purificado, con la cual se eleva la temperatura; la leche pasa inmediatamente a una
cmara de vaco, en donde ocurre una expansin del lquido con la siguiente separacin del vapor.
Todo tratamiento trmico a temperaturas inferiores al 100C son considerados mtodos de pasteurizacin.
Autoclave. Esterilizacin 121C, 15lb, 20 minutos. Esterilizacin comercial 70C.
Calor seco
Produce desecacin de la clula, es esto txico por los niveles elevados de electrolitos y fusin de membranas.
Transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos.
La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est
seco o la actividad de agua del medio es baja.
Ventajas:
Materiales que se pueden esterilizar: materiales no alterables por el calor, no hace falta que sean porosos pero s
que resistan altas temperaturas, durante prolongados periodos de tiempo.
Estufas de esterilizacin (horno). Doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia circula por la
cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras. Se mantiene una temperatura estable mediante
termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan el circuito elctrico.
Para el control del proceso existen:
Mtodos fsicos. Uso del termmetro interno vs externo.
Mtodos qumicos. Cinta testigo y tiras reactivas.
Mtodos biolgicos. Bioindicadores de B. subtilis.
Temperaturas bajas. Disminuye la velocidad de crecimiento de los microorganismos. Provoca la formacin de
cristales*. Conservacin de alimentos, reactivos y muestras biolgicas.
Refrigeracin 4C.
Congelacin -20C*
Ultracongelacin -96C*
Tiempo de reduccin decimal D. Es el tiempo que una poblacin se reduce en 10 ordenes a una
temperatura determinada. Es caracterstico de cada microorganismo.