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PROCESO DE BIOTRANSFORMACIN

Los humanos y muchos otros animales estn constantemente expuestos en su medio ambiente a una vasta variedad de agentes xenobiticos; los cuales pueden ser de origen natural o formados por intervencin del hombre, En general los compuestos ms lipoflicos son ms fcilmente absorbidos a travs de la piel, pulmones o del tracto gastrointestinal. La constante exposicin a este tipo de sustancias podra resultar en su acumulacin dentro del organismo, al menos que se presente un sistema eficaz de eliminacin. Con excepcin de la exhalacin, para que un agente xenobitico pueda ser eliminado del organismo, requiere que sea soluble en fase acuosa, lo anterior funciona para compuestos no voltiles y en consecuencia sern excretados por la orina y las heces, que son las predominantes rutas de eliminacin. Sin embargo, los compuestos lipoflicos que se encuentran en los fluidos de excrecin tienden a difundir hacia las membranas y en consecuencia son reabsorbidos, mientras que los compuestos solubles en agua son excretados, lo que dejara aparentemente una acumulacin de los agentes xenobiticos lipoflicos dentro del organismo (Caldwell and Paulson, 1964; Klaassen et al, 1986).

1. Panorama general.
De acuerdo a la estructura de la membrana celular, esta le confiere una selectividad en la absorcin tanto de las sustancias endgenas como xenobiticas. Esta selectividad permite que existan vas de absorcin especfica para los nutrimentos hidrosolubles con un gasto energtico (transporte activo), pero por otra parte aunque la mayora de los organismos vivos son casi impermeables a la gran mayora de las sustancias hidrosolubles no deseables, no pueden prevenir la absorcin de la mayora de las sustancias liposolubles. En la Figura 1.1. tenemos resumido en un esquema ilustrativo, las principales vas de absorcin y eliminacin tanto de compuestos endgenos como exgenos (Anders, 1985; Manahan, 1990; Shibamoto y Bjeldanes, 1996).

ABSORCIN Afortunadamente, los animales superiores han desarrollado un nmero de sistemas metablicos que convierten los agentes xenobiticos liposolubles en metabolitos hidrosolubles capaces de ser excretados por las vas de eliminacin. A esta actividad bioqumica se le ha denominado proceso de Biotransformacin, el cual se ha dividido a su vez en dos grandes grupos de actividad enzimtica: reaccin de Fase I y Fase II como se observa en la Figura 1.2.

La funcin principal del proceso de Biotransformacin es la transformacin de los agentes xenobiticos para facilitar su remocin a travs del rin y la bilis principalmente. Sin embargo, cuando se modifica la estructura qumica del agente xenobitico, se puede presentar en algunos casos, que se modifique la actividad farmacolgica y en ocasiones hasta un aumento de la toxicidad, lo que se conoce como bioactivacin, como es el caso de las sustancias denominadas procarcinognicas, las cuales requieren del proceso de biotranformacin para manifestar el efecto carcinognico (Loomis, 1978; Anders, 1985).

2. Reacciones fase I.
La funcin de este tipo de reacciones, es modificar la estructura qumica de la molcula,por introduccin de grupos funcionales como son hidroxilo, amino, carboxilo entre otros. Tambin, se puede obtener una mayor polaridad del agente xenobitico por exposicin de grupos funcionales como es el proceso de hidrlisis. Posiblemente la oxidacin es la reaccin ms importante de las reacciones de fase I; en general estas reacciones estn mediadas por el sistema de oxidacin microsomal que contiene el citrocromo P-450, tambin conocido como sistema oxidasa de funcin mixta , el cual requiere del cofactor nicotin-adenin-dinucletido-reducido (NADPH) como donador inicial de electrones y oxgeno molecular como oxidante, segn se observa en la Figura 2.1 (Repetto, 1981; Klaassen et al, 1985; Manahan, 1990).

En el esquema anterior, un electrn del NADPH se transfiere al citocromo P-450 mediante la enzima NADPH-Citrocromo P-450-reductasa. Hay que hacer notar que el origen del citocromo P-450, se refiere a que es una protena cromgena que cuando se une al monxido de carbono, da una forma reducida que presenta un mximo de absorcin espectral a 450 nm. Aunque este sistema oxidativo forma parte de muchos tejidos del organismo, el sitio de la oxidacin de la mayora de los xenobiticos se presenta en el retculo endoplsmico liso del hgado. Hay muchas formas de citocromo P-450 o isoenzimas que le dan caractersticas particulares al organismo que las contiene, presentndose una diferenciacin en el proceso de Biotransformacin intra e interespecie. El sistema de oxidacin microsomal con participacin de la citocromo P-450 es inducible; as, la administracin de sustancias oxidables incrementa su actividad, como es el caso de la administracin de barbitricos, ciertos plaguicidas entre otros xenobiticos; lo que le confiere una adaptacin del retculo endoplsmico liso del hgado al incremento del proceso oxidativo. El anterior sistema, adems de mediar muchas reacciones de oxidacin; tambin, puede llevar a cabo reacciones de reduccin, como es la conversin de los colorantes azicos a sus correspondientes aminas, cuando se presentan condiciones anaerobias (Hodgson and Guthrie, 1980; Timbrell, 1985). 2.1. Hidroxilacin aromtica. La hidroxilacin aromtica, para el sistema ms simple se describe en la Figura 2.1.1, el cual es uno de los procesos oxidativos de mayor importancia. Los mayores productos de la hidroxilacin aromtica son fenoles, pero tambin se pueden formar catacoles y quinoles. Consecuentemente un nmero variable de metabolitos hidroxilados se pueden formar, lo cual depender de las caractersticas particulares de la especie considerada.

Sin embargo, hay que mencionar que la hidroxilacin aromtica procede va la formacin de un epxido como intermediario. Lo anterior se puede ilustrar en la hidroxilacin del naftaleno, ya que generalmente se forma tanto el 1-naftol como el 2-naftol, la cual se realiza va la formacin del epxido intermediario 1, 2-xido como se observa en la Figura 2.1.2. Cabe mencionar que precisamente el naftaleno es el precursor de los denominados hidrocarburos aromticos policclicos (HAP), donde el efecto carcinognico de algunos de ellos se debe a la formacin de un epxido intermediario.

La oxidacin va formacin de epxidos es muy importante, ya que estos metabolitos intermediarios pueden reaccionar con biomolculas celulares; as tenemos, que los epxidos estabilizados pueden reaccionar con sitios nucleoflicos de constituyentes celulares como son ciertos cidos nucleicos, y producir un evento mutagnico. Eventos de este tipo se presentan con algunos hidrocarburos aromticos policclicos, as como en algunas micotoxinas. 2.2. Hidroxilacin heterocclica. Compuestos heterocclicos con tomos de nitrgeno tales como la piridina y quinoleina, sufren la oxidacin microsomal por hidroxilacin en la posicin 3; as, en el caso de la quinolena, el anillo aromtico sufre la hidroxilacin en la posicin 3 pero tambin se obtiene el metabolito hidroxilado en la posicin 6 como se observa en la Figura 2.2.1. Este tipo de reaccin es interesante, ya que sabemos que los alcaloides tienen como caracterstica estructural, poseer un tomo de nitrgeno heterocclico.

Otro ejemplo de hidroxilacin heterocclica lo constituye la oxidacin microsomal del anillo de cumarina, el cual es muy comn en muchos metabolitos secundarios de algunas plantas superiores y es la estructura bsica de un grupo de rodenticidas que tienen efecto hemoltico. En este caso la adicin del grupo hidroxilo se lleva a cabo en la posicin 7, s sta se encuentra libre, como se observa en la Figura 2.2.2. Tambin, hay que mencionar que algunas micotoxinas como las aflatoxinas y ocratoxinas tienen dentro de su estructura el anillo cumarnico, por lo tanto es factible que se lleve a cabo la hidroxilacin.

2.3 N-Dealquilacin. La N-dealquilacin es la remocin de grupos alquilo del tomo de nitrgeno y en realidad, se podra considerar como un proceso donde se exponen los grupos funcionales como es el grupo amino. Los grupos N-alquil son removidos oxidativamente por conversin al correspondiente aldehdo como se observa en la Figura 2.3.1.

2.4. N-Hidroxilacin. La N-hidroxilacin de arilaminas primarias, arilamidas e hidrazinas, es catalizada por el sistema de oxidacin microsomal involucrando la participacin del citocromo P-450 y requiriendo NADPH y oxgeno molecular. As, el ejemplo ms simple es el de la N-hidroxilacin de la anilina para producir fenilhidroxilamina como se observa en la Figura 2.4.1. Hay que mencionar que los metabolitos formados por este proceso oxidativo, pueden ser molculas muy reactivas.

En este proceso oxidativo se pueden presentar algunos ejemplos de bioactivacin como es el caso de la N-hidroxilacin del 2-acetilaminofluoreno (Figura 2.4.2) que produce un potente carcinognico (Anders, 1985; Timbrell, 1985).

2.5. Desulfuracin. La sustitucin del tomo de azufre por un tomo de oxgeno en una molcula orgnica por oxidacin microsomal, se conoce como desulfuracin y es un proceso comn para la Biotransformacin de los insecticidas organofosforados, los cuales se usan ampliamente en las actividades agrcolas. En la Figura 2.5.1 se tiene un ejemplo ilustrativo como es la desulfuracin del paratin, con lo cual se obtiene el metabolito oxidado que tiene mayor efecto inhibidor sobre la acetilcolinestarasa. (Timbrell, 1985; Miyamoto et al, 1988). Este proceso de oxidacin microsomal es aprovechado en la bioactivacin de los insecticidas organofosforados. As, tenemos por ejemplo que el Paratin tiene un DL50 de 10 a 12 mg/Kg p.c., en tanto que el Paraoxn (metabolito desulfurado) incrementa su toxicidad con un DL50 entre 0.6 a 0.8 mg/Kg p.c.; los anteriores datos de toxicidad corresponden a evaluaciones en rata por va intraperitoneal.

2.6. Reacciones de oxidacin no microsomal. Aunque el sistema de oxidacin microsomal con la participacin del citocromo P-450, es el proceso enzimtico ms comn en la oxidacin de un compuesto extrao, hay otras vas metablicas que pueden llevar a cabo la oxidacin de algunas molculas orgnicas como son: la oxidacin de aminas, alcoholes, aldehidos y purinas entre otras (Timbrell, 1985; Miyamoto et al,1988). En la oxidacin de aminas, hay la participacin ya sea de monoamino o diamino oxidasas, ambas involucradas en la desaminacin tanto de aminas primarias, secundarias y terciarias, resultando como productos sus respectivos aldehidos como se puede observar en la Figura 2.6.1. La enzima monoamina oxidasa se localiza en las mitocondrias de varios tejidos; en tanto que la diamino oxidasa se encuentra en el citosol de las clulas.

Aunque in vitro el sistema microsomal oxidativo ha demostrado que puede oxidar el etanol; sin embargo, in vivo la enzima que lleva a cabo esta funcin es la alcohol deshidrogenasa, la cual se encuentra en la fraccin soluble de varios tejidos. Los productos de oxidacin de esta enzima, son los correspondientes aldehdos o cetonas, de acuerdo a s son alcoholes primarios o secundarios respectivamente. Los productos carbonlicos de la accin de la alcohol deshidrogenasa, pueden sufrir una posterior oxidacin por la aldehidos deshidrogenasa y producir los respectivos cidos orgnicos, como se muestra en el ejemplo de la Figura 2.6.2.

En este proceso oxidativo presentamos el caso de la bioactivacin que corresponde al alcohol allico, ya que al actuar sobre este compuesto la alcohol deshidrogenasa se forma el respectivo aldehdo, que en este caso corresponde a la acrolena, el cual es un hepatotxico que causa necrosis periportal en animales de experimentacin (Figura 2.6.3, Timbrell, 1985). Precisamente, este aldehdo por tener un carcter muy reactivo, esta implicado en la formacin de cidos grasos cclicos, los cuales al parecer tienen un efecto txico.

2.7. Reduccin. Aunque el sistema de oxidacin microsomal que contiene citocromo P-450 normalmente lleva a cabo la oxidacin xenobitica; este sistema puede funcionar como un proceso de biotranformacin reductivo. El proceso reductivo se presenta cuando hay una baja tensin de oxgeno molecular (baja concentracin) y por consiguiente ciertos substratos xenobiticos pueden aceptar uno o dos electrones que son proporcionados por el sistema microsomal con participacin del Citocromo P-450, en lugar del oxgeno. En este panorama reductivo, incluso el oxgeno acta como inhibidor de esta ruta, ya que compite con los substratos por los electrones; adicionalmente, los mismos productos de reduccin son inhibidores de este sistema, ya que pueden competir con los propios sitios de unin del Citocromo P-450 y por consiguiente detener el flujo de electrones, por lo cual este proceso es menos efectivo que la oxidacin (Klaassen et al, 1986; Gilman et al, 1990; Shibamoto y Bdjeldanes, 1996). En la figura 2.7.1 se tiene esquematizado las principales reacciones de reduccin que puede llevar a cabo el anterior sistema, recordando que esta ruta solo se presenta en un ambiente anaerbico. En base a lo anterior, se establece que la microflora intestinal tiene una gran

influencia en este proceso de reduccin; ya que estos microorganismos tienen su sistema de oxidacin microsomal normal, pero debido al medio en que se encuentran (reduccin de la tensin de oxgeno), pueden llevar a cabo el proceso de reduccin en lugar de la oxidacin (Hodgson and Guther; 1980; Klaassen et al, 1986).

2.8. Hidrlisis. En las reacciones de fase I del proceso de biotransformacin de xenobiticos, lo que se pretende es darle un mayor carcter polar a las molculas, lo cual implica adicionarle grupos funcionales polares tales como hidroxilo o aminas; sin embargo, otro camino para llegar al mismo propsito implica realizar un proceso hidroltico en cierto tipo de compuestos, para que se puedan exponer estos grupos polares funcionales (Timbrell, 1985; Gilman et al, 1990). En ciertos tejidos de los mamferos y especialmente en el plasma sanguneo se encuentran varias esterasas, las cuales tienen la capacidad de producir hidrlisis de diferentes tipos de steres. Estas esterasas son clasificadas como aril-esterasas y acetil-esterasas; incluso cabe mencionar que enzimas tales como tripsina y quimotripsina pueden producir la hidrlisis de ciertos carboxi-steres. En la Figura 2.8.1 tenemos el esquema genrico de este proceso hidroltico con un ejemplo ilustrativo.

La hidrlisis de amidas es catalizada por amidasas; sin embargo, este proceso hidroltico es ms lento en comparacin al proceso de hidrlisis de los steres. Adicionalmente, el plasma no es un lugar de alta actividad de hidrlisis de amidas, sino que sta se presenta en otros tejidos, como es el caso de algunas carboxil-amidasas microsomales del hgado (Repetto, 1981; Timbrell, 1985). En la Figura 2.8.2 se presenta el esquema genrico y un ejemplo de la hidrlisis de una amida.

Los epxidos que son anillos de tres miembros que contienen un tomo de oxgeno, pueden ser metabolizados por la enzima epxido-hidratasa; esta enzima adiciona una molcula de agua al epxico produciendo un transdihidrodiol. Este tipo de reaccin es de suma importancia en el proceso de biotransformacin, ya que en la hidroxilacin de xenobiticos que es comn y se producen epxidos como metabolitos intermediarios, los cuales son molculas muy reactivas que pueden generar un evento mutagnico.

La epxido-hidaratasa es una enzima que se encuentra en la fraccin microsomal de las clulas, muy prxima al sistema oxidasa de funcin mixta; por lo tanto, la epxido-hidratasa lleva a cabo un proceso de destoxificacin sumamente importante, ya que desactiva intermediarios inestables muy reactivos, que son producidos en la hidroxilacin mediada por Citocromo P-450. (Figura 2.8.3, Timbrell, 1985; Klaassen et al, 1986).