Cmara de recuento:

1) Qu es una cmara de recuento y dnde se utiliza?

La cmara de recuento es un aprato de precisin hecho de vidrio ptico especial. Se utiliza
para contar clulas u otras partculas en suspensiones bajo el microscopio. Las cmaras de
recuento se utilizan principalmente para el anlisis de sangre (recuento de leucocitos, eritrocitos,
trombocitos) y recuento de clulas en el liquor. Adems las cmaras de recuento sirven para
contar bacterias, esperma y esporas de hongo.

2) El principio de construccin:
Todas las cmaras de recuento
muestran el mismo principio de
construccin.
Dentro de una rectangular placa
de vidrio ptico especial del
tamao de un portaobjetos se
encuentran en el tercio medio cuatro ranuras longitudinales, que son paralelos a los laterales
cortos.
Las dos grandes superficies laterales no estn tratadas y sirven para la rotulacin.
El soporte central y los dos soportes exteriores estn planamente esmerilados y pulidos. La
superficie del soporte central es un poquito ms baja que la de los dos soportes exteriores. Los
retculos de recuento estn grabadas en el soporte central (fondo de la cmara).
Cuando se coloca un cubreobjetos sobre los soportes
exteriores, se crea un espacio
capilar entre la cara inferior del
cubreobjetos
y el soporte
central de la cmara de recuento.

3) Modelo e identificacin de las cmaras de recuento:

Modelo:

Modelo simple - soporte central sin divisin

(un retculo de recuento)

Modelo doble - soporte central dividido

(dos retculos de recuento)

Adems, se diferencia:

El modelo normal: el retculo de recuento est grabado directamente en el vidrio.

El modelo de lneas claras: primero se recubre el fondo de la cmara con metal y luego
el retculo de recuento est grabado en esta capa de metal.

Identificacin:
En las dos superficies laterales, no tratadas, estn indicadas las siguientes informaciones:

El sistema del retculo

El nombre y la marca registrada de Marienfeld Superior
La profundidad de la cmara en milmetros
La superficie del cuadrado ms pequeo en mm2

4) Fabricacin y explicaciones de calidad:

Las cmaras de recuento son aparatos de precisin e instrumentos in-vitro diagnosticos. Se
utilizan principalmente en laboratorios mdicos. Por eso un cmara recuento que es aplicada o
distribuida en la Union Europea tiene que ser aprobada y marcada con el simbolo CE.
Todas las cmaras de recuento vendidas por la empresa Marienfeld se fabrican de acuerdo a
los requisitos de la Ordenanza de Verificacin alemana y la norma DIN.
Fabricacin de cmaras de recuento de sangre:
La fabricacn slamente se describe brevemente. Se compone de diferentes pasos parciales,
controles intermediarios y un final control de calidad.
El campo central (el fondo de la cmara) y los dos campos exteriores son esmerilados y pulidos.
Hay que prestar especial atencin que estas superficies quedan absolutamente planas y la
profundidad exacta. Los requerimientos estn fijados en la norma DIN 12874. El campo central
est bajado segn la divisin del respectivo sistema (por ejemplo Neubauer 0,1 mm). Se fabrican
varias profundidades estandar y especiales (p.ej. 0,2; 0,5; 0,01 y 0,02 mm).
Despus de estos pasos se graba la divisin (del retculo en cuestin) en el campo central y
seguido se realizan los procesos de impresin y secado al horno. Un contrl final muy rgido que
cumple con las exigencias de las normas DIN y la Oficina alemana de Contraste termina la
fabricacin.
Exigencias al control de calidad:
Las diferencias lmites segn la norma DIN 12847:

la profundidad de la cmara en la zona del retculo 2 % del valor nominal

las distancias inferiores a 0,4 mm entre las lneas del retculo 2 m

las distancias superiores a 0,4 mm entre las lneas del retculo 0,5 % del valor nominal

los ngulos de la divisin del retculo 1 grado

la anchura de las lneas de divisin no debe de ser superior a 5 m

La tolerancia de planeidad, segn DIN 7184, parte 1:

el fondo de la cmara en la zona del retculo de recuento 2 m

la superficie de apoyo 2 m

las lminas cubreobjetos 3m (segn DIN 58884)

5) Llenado de la cmara de recuento:

Posicionamiento del cubre-objeto:
Los soportes exteriores se humedecen con
agua destilada. Luego se coloca el cubreobjeto a suave presin desde delante sobre la
cmara de recuento.
Atencin: Peligro de rotura del cubre-objeto!
La creacin de lneas de interferencia (anillos
de Newton) entre los soportes exteriores y el
cubre-objeto indica que el cubre-objeto est
colocado correctamente.

Cargar:
La pipeta bien mezclada se quita del agitador y
se tiran las primeras gotas.
Limpiar y secar la pipeta por fuera y mantenerla
inclinada hasta que se haya formado una
pequea gota en la punta.
Esta gota se sita en el punto entre el cubreobjeto y la cmara de conteo.
Por efecto de capilaridad el espacio entre el
cubre-objeto y el fondo de la cmara se llena.
Antes de que la solucin de sangre pueda
desbordar esta parte de la cmara, se debe
retirarla. Si hay burbujas de aire o si se ha
despordado lquido a las ranuras, la cmara
tiene que ser limpiada y nuevamente cargada.

Pipetas mezcla-sangre utilizadas:

Pipeta de leucocitos
(perla blanca)
Pipeta de eritrocitos
(perla roja)

6) Recuento de las partculas:

Tcnica de recuento:
El recuento requiere un exacto conocimiento de las lneas del
retculo de la respectiva cmara de recuento. En la ilustracin se
ve las lneas triples del sistem Neubauer mejorado.
Para que las clulas, que estn encima o cerca de las lneas de
limitacin, no se cuenten dos veces o se olvidan en el recuento,
hay que cumplir determinadas reglas (p.ej., vase la ilustracin
derecha).
Se cuentan todas las clulas que se encuentran dentro de una
definida zona de medicin.
Tambin se cuentan las clulas (marcadas en negro) que tocan o
estn encima de 2(!) lneas en un lado, p.ej. en la lnea de medida
izquierda y superior.

Esto tambin es vlido para el tipo de operacin de recuento

que debe realizarse en forma de meandro. El recuento
empieza en el ngulo superior izquierdo en direccin de la
flecha.

Comentarios acerca del recuento:

a) En todos los recuentos con cmaras, el diagrama del
condensador en el microscopio deber estar cerrado en gran
parte.
b) La diferencia de las clulas contadas entre los cuadrados grandes y los cuadrados de grupos
no deber ser superior a 10 clulas.
c) En todos los recuentos de clulas, hay que realizar dobles determinaciones. Despus del
recuento del retculo superior, se recuenta como control tambin el retculo inferior. Hay que
tener en cuenta que la cmara no est resecada. Esto se puede evitar si se llena la cmara
inferior justo poco antes del recuento y se recuente despus del tiempo de sedimentacin.

d) La diferencia entre las sumas de los recuentos de ambos retculos de recuento no debe ser
superior a 10 clulas. El valor intermedio de los recuentos se aplica luego en la frmula de
clculo o se multiplica con el factor correspondiente.

7) Clculo:
Frmula:
Nmero de clulas
Superficie recontada (mm2) x profundidad de la cmara (mm) x dilucin

= clulas por 1 l de sangre

Ejemplo: Cmara: Neubauer improved

a) Leucocitos
1.
2.
3.
4.

Clulas recontadas 161 leucocitos

Superficie recontada 4 cuadrados ( = 4 x 1 mm2) = 4 mm2
Profundidad de la cmara 0,1 mm
Dilucin 1 : 20

161
4 mm2x 0.1 mm x 1/20

161 x 20
4 x 0.1 x 1 l

8050 leucocytes per

1 l of blood

b) Eritrocitos:
1.
2.
3.
4.

Clulas recontadas 507 eritrocitos

Superficie recontada 5 cuadrados ( = 5 x 0,04 mm2) = 0,2 mm2
Profundidad de la cmara 0,1 mm
Dilucin 1 : 200

507
=
0.2 mm x 0.1 mm x 1/200
2

507 x 200
0.2 x 0.1 l

5.07 x 10 /l l

8) Limpieza de las cmaras de recuento:

Inmediatamente despus del recuento realizado, se retira el cubre-objeto y se limpia la cmara
con agua o - en caso de necesidad - con un suave detergente. A continuacin, la cmara se
seca con un pao blando o se lava con acetona.

9) Breve descripcin de la cmara de recuento:

Los diferentes sistemas de cmaras de recuento se diferencian por el modelo del retculo de
recuento y la profundidad de la cmara. El retculo est compuesto de una divisin cuadrada
que slo se puede ver debajo del microscopio (aprox. 100 aumentos). A continuacin se
describe la cmara de recuento ms utilizada:
Neubauer-improved:
Cuadrado grande:
1 mm2
Cuadrado de grupo: 0,04 mm2
Cuadrado pequeo: 0,025 mm2
Esta es la cmara preferida hoy en da. La profundidad de la cmara = 0,100 mm. La divisin del
retculo de esta cmara muestra 3x3 cuadrados grandes de una superficie de 1 mm2 cada uno.
Los 4 cuadrados en las esquinas se utilizan para el recuento de los leucocitos.
El gran cuadrado en el centro est adicionalmente dividido en 5x5 cuadrados de grupo con
una longitud lateral de 0,2 mm cada uno y una superficie de 0,04 mm2 cada uno. A su vez, los
cuadrados de grupo estn subdivididos en 16 cuadrados pequeos de 0,0025 mm2 cada uno.
Cinco de estos cuadrados de grupo se utilizan para el recuento de eritrocitos.
Merece especial atencin el hecho de que la cmara muestre triples lneas de lmite por todos
los lados. De ellos la lnea central (!) ha de considerarse la mayor lnea de medida. Esto es
importante para decidir si las clulas que estn en la zona lmite, tienen que ser contadas o no.

10) Por qu las cmaras de recuento mantienen su importancia en

el laboratorio a pesar de contadores elctricos:
Para un laboratorio pequeo no vale la pena comprar caros aparatos electrnicos.
Las cmaras de recuento son imprescindibles para p.ej. el recuento de celulas de liquor de
efusiones, recuento de huevos de gusanos, bacterias o esporas del moho.
En caso de pocos trombocitos los instrumentos electrnicos son menos exactos que las
cmaras de recuento.
Posibles fuentes de errores:
la cmara de recuento no est limpia
el cubre-objeto no est correctamente puesto (no hay anillos de interferencia)
hay burbujas de aire en la cmara
la cmara est demasiado llena
el tiempo de sedimentacin es demasiado corto
el cubreobjetos no es correcto. Laminillas para la microscopa estandard son demasiado
delgadas y tuercen debido a las fuezas capilares
Contadores elctricos:
son usados en laboratorios mayores (altos gastos de inversin)
Desventaja: Los tipos de clulas solamente se diferencian por tamao. Por eso puede haber
errores a causa de partculas de polvo pelusas.
Ventaja: Por el rpido recuento y la evaluacin de muchas partculas hay menos errores
estadsticos. En procesos de recuento se tiene en cuenta el error estadstico:
Frmula: error estadstico = 1 : n
con n = 100 de clulas contadas
1:100
= 0,1 = 10 %
con n = 10.000 clulas contadas
1:10.000 = 0, 01 = 1 %

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