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Algoritmos

bacterianos
QBP. DOMINGO SANCHEZ FRANCIA
HOSPITAL DEL NIÑO MORELENSE
CUERNAVACA MORELOS.
I.-Puntos a tomar en cuenta
en las marchas bacterianas
1.-Toma de muestra

2.-Transporte de la muestra

3.- Análisis Microscopico

4.- Cultivo y primoaislamiento

5.- Identificación Bacteriana


II.- Origen de muestras
clínicas
1.- Las muestras para el estudio
bacteriológico, se dividen en dos tipos:

a).- las que proceden de sitios en los que


no hay flora bacteriana normal
presente.

b).- aquellas que se toman de lugares que


tienen flora bacteriana normal.
Flora bacteriana
Es importante que el bacteriólogo tenga
conocimiento de los siguientes aspectos:

• cuales son los agentes etiológicos aislados


con mayor frecuencia en procesos
infecciosos de sitios anatómicos
normalmente estériles.

• cuales son los microorganismos,


presentes, bajo condiciones normales, en la
piel y en las mucosas.
Presenci a de bi ota nor mal
en di ferentes zonas
corporales del humano.
ZONAS CORPORALES LIBRES DE ZONAS CORPORALES CON DE
BIOTA NORMAL BIOTA NORMAL
Aparato respiratorio inferior Piel
-Laringe Mucosas
-Traquea -Boca
-Bronquiolos -Orofaringe
Aparato genitourinario -Nasofaringe
-Ureteros Oído externo
-Vejiga Ojo
-Riñón Aparato genitourinario
-Útero -Uretra anterior
Líquidos -Vagina
-Sangre Aparato gastrointestinal
-Médula ósea -Estómago
-L.C.R. -Intestino delgado
-Líquido seroso -Intestino grueso
-Líquido sinovial
-Líquido pleural
-Orina
Tejidos
III. - TRAN SPO RTE DE LA
MU EST RA
1.-La cantidad de material debe ser adecuado.

2.-La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso


(por ejemplo, expectoración, no saliva; pus de la lesión
subyacente, no de su trayecto fistuloso; una muestra de lo
profundo de la herida, no de la superficie).

3.-Se debe evitar la contaminación de la muestra utilizando


sólo equipo estéril y precauciones asépticas.

4.-Las muestras para ser enviadas al laboratorio deben


colocarse en un medio de transporte, el cual tiene como
propósito mantener la viabilidad de las bacterias presentes
en la muestra e impedir su multiplicación. Se han diseñado
diferentes medios de transporte, el que más se utiliza es el
de Stuart.
Medios de transporte de uso
en Bacteriología Médica.
MEDIO PROPOSITO

STUART Aerobios y anaerobios facultativos


STUART REDUCIDO Anaerobios estrictos

CARY-BLAIR Shigella y Campylobacter


AMIES
GLICEROL
SOLUCIÓN SALINA
AMIES Y DOUGLAS
HAJNA

CARBÓN ACTIVADO Streptococcus pyogenes


CAS Bordetella pertussis
REGAN-LOWE Bordetella pertussis
2SP Chlamydia

TRANSGROWN Neisseria gonorrhoeae


PIKE Strptococcus pyogenes
CALDO UREA Helycobacter pylori
CAMPYTIO Campylobacter jejuni
SP4 Micoplasma
IV.- Condiciones apropiadas para
el transporte de muestras

1.-La orina, las expectoraciones y el material de absceso, se


pueden colocar en frascos estériles de boca ancha.

2.-Los líquidos corporales como el Líquido Cefalorraquídeo


en tubos estériles (la sangre se coloca en frascos
diseñados ex profeso).

3.-Los trozos de tejido se pueden colocar en frascos


estériles.
V. -Cr iteri os pa ra el rechazo
en la e val uaci ón de las
muestras
a) Muestras no aptas para su procesamiento:
• Punta de sonda foley
• Orina de bolsa de sonda
• Líquidos coagulados
• Cultivos para anaerobios enviados en medio de
transporte inadecuado.

b).-Muestras remitidas en condiciones inadecuadas.

c).-Solicitud de estudios especiales innecesarios.


VI .- MIC ROSCOPIA
Este procedimiento evidencia lo siguiente:
1.- La presencia de bacterias, cantidad, morfología y
agrupación.
2.-Permite evaluar el grado de respuesta inmunológica
con la presencia de células fagocíticas, cuyo
quimiotactismo esté orientado hacia un morfotipo
bacteriano en particular (Criterios de Bartlett), donde
se observen células bacterianas adheridas a la
membrana de los PMN y dentro de las vacuolas
digestivas formadas en el citoplasma de la células
inflamatorias.
VI.- Microscopia
3.-La observación microscópica es el primer paso,
el cual permitirá orientar el método a desarrollar
en el estudio bacteriológico para el diagnóstico
clínico.

4.-Se pueden realizar preparaciones en fresco para


la observación en campo oscuro, ( treponemas y
leptospiras), preparaciones en fresco de
muestras de vagina para la observación de
células indicativas de vaginosis bacteriana.
VI I.- Tinci ones

1. Simples: 2. Diferenciales:
• Azul de metileno • Gram

• Ziehl-Neelsen
• Fucsina fenicada
• Tan Thiam-Hok
• Verde de malaquita
• Machiavello

• Jiménez
VIII.- Tinciones Estructurales:
a) Flagelos
- Rhodes
- Tribondeau
- Leifson
b) Esporas
- Shaeffer-fulton
- Moeller
c) Cápsula
- Hiss
- Tinta china
d) Gránulos metacromáticos
- Ernst-Neisser
- Albert
- Loeffler
Tinción Gram
+ + + + + + + + – – – – –
(cultivo fresco)

Forma coco coco coco coco bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón bastón coco

Agrupación racimos racimos cadenas tetradas                 pares

Crecimiento 
+ + + + + – + + + + + + +
aerobio

Crecimiento 
– + + + + + + – – – + + –
anaerobio

Esporas – – – – – + + + – – – – –

Movilidad  – – – – – +o– +o– +o– +o– + o  – +o- + –

Catalasa  + + – – – – + + + + + + +

Oxidasa                  + + – + +

Fermentación de
glucosa a acido  – + + + + + (o –) + – – – + + –
o a acido+gas

O/F                  – O F F O

Micrococcus X                        

Staphylococcus   X                      

Streptococcus     X                    

Lactococcus     X                    

Enterococcus     X                    

Leuconostoc     X                    

Pediococcus     X X                  

Aerococcus       X                  

Lactobacillus         X                

Clostridium           X              

Bacillus             X X          

Alcaligenes                 X        

Pseudomonas                   X      

 Enterobacterias                     X    

Aeromonas                       X  
Chromobacteriu
                      X  
m
Neisseria                         X
IX .-Ca ra cte rísti ca s
fe no tip ic as p ara la
id entifica ció n ba cte ria na
A).- Criterios Generales:

• Requerimientos de Oxigeno (atmósfera) y temperatura


de incubación.
• Morfología colonial.
• Tipo de hemólisis en GS carnero al 5%.
• Requerimientos nutricionales.
• Producción de pigmentos.
• Tinciones: Afinidad a la tinción de Gram.
• Morfología bacteriana.
• Presencia de enzimas.
• Reacciones inmunoserológicas.
• Sensibilidad antimicrobiana.
X.- Criterios de Cowan y
Steel
B).- Pruebas de selección Primaria :

• Reacción de catalasa
• Reacción de oxidasa
• Prueba de movilidad
• Pruebas de O/F de carbohidratos
• Presencia de Esporas
• Tinción de Ziehel Neelsen
• Tinción de Gram
XI.-Requerimientos nutricionales
1.-Conocer que suplementos nutricionales que
requiere MO para crecer óptimamente.

2.-Ejemplo: dependencia de factor NAD (V) o


factor Hemina (X) ó ambos en el género
Haemophilus.

3.-Familia Enterobacteraceae: no son organismos


nutricionalmente exigentes.
XII.- Atmósfera
1.-Conocer cuales son los requerimientos de
O2 de los MO.

2.-Aerobios.

3.-Microaerofílicos.

4.-Anaerobios facultativos.

5.-Anaerobios estrictos
XIII.- Temperatura
1.-Conocer la temperatura ideal para su
desarrollo.

2.-Mesofílicos (35 a 37ºC): la mayoria de las


especies bacterianas de interés clínico.

3.-Termofílicos (>37ºC): Pseudomonas


aeruginosa (41ºC), Campylobacterias (42ºC).

4.-Psicrofílicos(<ATM): Yersinia enterocolítica


(4ºC), Listeria monocytogenes (ATM)
Morfología colonial
Tipo de hemólisis en GS carnero
al 5%
XIV.-Producción de
pigmentos
1.-Los pigmentos insolubles en agua
incluyen los carotenoides (amarillo-
naranja), la violaceína (violeta o púrpura)
y las fenazinas (rojo, castaño, marrón).

2.-Los pigmentos hidrosolubles y difusibles


incluyen las fluoresceínas (pioverdina),
piocianinas, piorrubina, melanina y otros
varios subproductos pigmentados, que
cambian el color del medio de cultivo.
Pigmentos insolubles en agua

Carotenoides (amarillo- Fenazinas (rojo, castaño, marrón)


naranja)
Pigmentos hidrosolubles y
difusibles

Fluoresceínas (pioverdina- piocianinas) Lampara de Wood (UV)


XV.-Tinciones: Afinidad a la
tinción de Gram.
Morfología bacteriana
XVI.-Reacción de catalasa

• Esta prueba detecta la presencia de


citocromooxidasas en las Micrococcaceae.

• La prueba se hace con peróxido de hidrógeno


(H2O2) al 3% sobre un portaobjetos. La
producción inmediata y abundante de burbujas
indica la conversión del H202 en agua y oxígeno
gaseoso.

• La prueba de la catalasa debe realizarse a partir de


un medio que no contenga sangre porque los
eritrocitos pueden producir una reacción de
catalasa débil.
Prueba de la catalasa
Reacción de citocromo oxidasa

• Los citocromo son


hemoproteinas que
contienen hierro y actuan
como último eslabón de
la cadena de la
respiración aerobia ;
transfireren electrones de
Hidrógeno al Oxígeno,
con la formación de agua.
• El sistema citocromo se
encuentra presente en
microorganismos
aerobios,
microaerofílicos y en Dimetil-p-fenilendiamina al 1%
algunos anaerobios
facultativos, pero nunca
en anaerobios estrictos.
Prueba de movilidad

En agar semisólido ó por gota pendiente


Pruebas de fermentación
de carbohidratos
1.-El medio OF de Hugh y Leifson
contiene peptona al 0,2% y 1,0% de
hidratos de carbono, de tal forma que
la relación entre peptona e hidrato de
carbono es 1:5, a diferencia de la
relación 2:1 que existe en los medios
utilizados para fermentación de
hidratos de carbono.

2.-La disminución de la peptona minimiza


la formación de productos de oxidación
a partir de los aminoácidos, que
tienden a elevar el pH del medio y
pueden neutralizar los ácidos débiles
producidos por los bacilos no
Medio O/F

Los microorganismos oxidativos Los microorganismos


producen ácido sólo en el tubo fermentadores producen ácido
abierto expuesto al oxígeno en ambos tubos.
atmosférico.
Medio O/F

Izquierda tubo de OF
inoculado con un organismo
de metabolismo no
fermentador y no oxidativo
para la glucosa.

Observe el ligero vire a


alcalino (azul) debido a la
utilización de proteinas
(peptonas) del medio.
XVII.-Pruebas de fermentación
de carbohidratos
XVIII.-Presencia de enzimas

• Detección de enzimas y vías


metabólicas

a) RM-VP (KOH + Alfa-naftol).

b) O.N.P.G.
Pru eba de la ONPG (o-
Nitrof eni l- β- D-
ga lactopi ranósid o)
• Es un compuesto estructuralmente
similar a la lactosa, excepto en que la
glucosa ha sido reemplazada por un
grupo o-nitrofenilo.

• Esta prueba permite detectar con


mayor rapidez la fermentación de la
lactosa, al evidenciar la enzima β-
galactosidasa más rápidamente.
XIX.Reacciones
inmunológicas
Utilización de antisueros específicos para determinar
el fenotipo antigénico de grupo y tipo (seroagrupar,
serotipificar)
MARCHAS BACTERIOLÓGICAS.
1.- Sistema gastrointestinal
1.-Coprocultivo rutina: 2.-Coprocultivo
específico
A).- Salmonella sp A).- E. coli patógenas.

B).- Shigella sp B).- Campylobacter


sp.

C).- Vibrios.

D).- Otras entidades


.
A).- Coprocultivo
• Las enfermedades infecciosas del aparato
gastrointestinal representan una de las
principales causas de mortalidad y morbilidad
infantil por la diarrea aguda de niños menores
de cinco años.
• La patogénesis de la diarrea involucra a varios
microorganismos como agentes causales,
pertenecientes en su mayoría a la familia
Enterobacteriaceae, entre los que destacan:
Salmonella, Shigella, Yersinia y Escherichia coli.
Escherichia coli
• Escherichia coli forma parte de la biota
normal, sin embargo las cepas patógenas
se clasifican de acuerdo con su mecanismo
de patogenicidad en seis grupos:

1. Enteropatógena EPEC
2. Enterohemorrágica EHEC
3. Enterotoxigénica ETEC
4. Enteroagregativa EaggEC
5. Enteroadherente difusa DAEC
6. Enteroinvasiva EIEC
• Algunas especies de Campylobacter
y Helicobacter se incluyen como
causantes de enfermedad en el
aparato gastrointestinal, al igual que
Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas.
Recolección de la muestra
• Las muestras se recolectan directamente en un frasco
limpio y de boca ancha con tapa hermética, al inicio de
la enfermedad y preferentemente antes de iniciar
tratamiento antimicrobiano.

• Cuando se sospecha de la posible recuperación de


Shigella y Campylobacter, es necesario tomar dos
hisopos rectales impregnados de materia fecal, los
cuales se colocan en medio de transporte Cary-Blair (se
pueden usar otros medios de transporte como Stuart o
Amies).
MATERIA FECAL

(MEDIO DE
TRANSPORTE
CARY- BLAIR)

MAC CONKEY XLD CALDO SELENITO

INCUBAR INCUBAR
INCUBAR
37ºC, 24h 37ºC, 8 – 12 h
37ºC, 24h

Seleccionar colonias Lac(+) y Resembrar en Agar


Lac (-). Resembrar en agar SS ó VB
Seleccionar colonias
nutritivo para realizar pbas.
lac (-), LD(+ ó -)
bioquímicas
y/o producción de
H2S

AGAR NUTRITIVO Identificar colonias


Oxidasa sospechosas de
OF Salmonella Lac(-)
H2S(+)

OX(+ ) OX(+ ó -)
OX(-)
OF: (+/+) OF: (+/-)
OF: (+/+) AGAR NUTRITIVO
OF: (-/-)
Oxidasa
OF

Pbas. Bioquímicas:
E.coli patógenas KIA,ONPG,LD, OD, CIT,
Pbas. Bioquímicas: Shigella sp SIM MR-VP, UREA, FD
KIA,ONPG,LD, OD, Salmonella spp Serotipificar
CIT, SIM MR-VP, Yersinia enterocolitica AB CLSI
UREA, FD Plesiomonas
Serotipificar Aeromonas
AB CLSI
HISOPADO
RECTAL CARY
BLAIR
2.-Tracto genitourinario
• I.V.U : Urocultivo

• Vaginitis : Cultivo Vaginal

• Vaginosis: Cultivo vaginal

• Uretritis: Cultivo sec. uretral


A).- Urocultivo
• La orina de personas sanas es estéril debido a su vaciado
frecuente, lo cual evita la colonización.

• La acidez inhibe algunos microorganismos, y en los pacientes


masculinos, la secreción prostática contiene espermita y zinc
que impiden el desarrollo de algunas bacterias.

• Cuando la orina es turbia debido a la presencia de leucocitos


(piuria), en ocasiones de eritrocitos (hematuria) y de bacterias,
es sugestivo de infección de las vías urinarias (IVU).

• La bacteriuria puede ser asintomática o presentarse como una


enfermedad crónica o aguda.
• En la colonización de las vías urinaria, intervienen
varios factores predisponentes que pueden ser de
origen local como por ejemplo: la contaminación
fecal del meato urinario, el cateterismo, la patología
urinaria congénita o adquirida y el reflujo vesical.

• Entre los factores generales se mencionan: la


diabetes mellitus, el transplante de órganos, el
SIDA, el embarazo, la hipertensión arterial y la
terapia con fármacos de amplio espectro.

• Escherichia coli es el agente etiológico en más del


80% de estas infecciones; ocasionalmente pueden
encontrarse dos o más especies bacterianas
involucradas.
• La muestra de elección, es la primera orina de la
mañana; sin embargo en la IVU aguda la carga
bacteriana es representativa a cualquier hora del día.

• En pacientes femeninas se indica que deben lavarse


el área periuretral y la periferia del meato urinario,
utilizando una gasa estéril humedecida con agua y
jabón, con movimientos de adelante hacia atrás.

• posteriormente se limpiará el área con una gasa


estéril humedecida con agua o solución salina estéril.

• la recolección de la orina debe hacerse separando los


labios mayores con una mano, la otra mano sostiene
el frasco donde se deposita la muestra.
• A los pacientes masculinos se les indica que se limpien el
glande y la periferia del meato urinario con una gasa
impregnada con solución salina estéril antes de la micción.

• En ambos sexos la muestra debe tomarse por el método


del “Chorro medio”, que consiste en que el paciente debe
desechar la primera porción de orina y recolectar la parte
media del chorro en un frasco de boca ancha estéril.

• En recién nacidos, niños y ancianos la muestra puede


recibirse en una bolsa de plástico estéril; las muestras
tomadas en esas condiciones fácilmente se contaminan de
biota fecal, en un resultado positivo debe considerarse la
posibilidad de una contaminación.
• El criterio que se aplica para evaluar la presencia de
bacterias en la orina es el de Kass (1957) y Sanford (1956),
el cual considera que las bacterias provenientes de las
porciones superiores aparato urinario durante su residencia
en la vejiga, utilizan la orina como medio de cultivo,
alcanzando un población superior a 100,000 UFC/ml de
muestra.

• Por el contrario las bacterias que son arrastradas durante la


micción, nunca llegan a esas cifras por lo que en estos
casos se les considera como contaminantes.

• Cuentas menores de 100,000 UFC/ml podrían corresponder


a infecciones en las vías superiores en pacientes que han
recibido antimicrobianos, o en aquellos cuya orina está muy
diluida por la terapia hidratante; por último cuentas menores
de 10,000 UFC/ml se toman como contaminantes.
Criterios para el diagnóstico de IN
6.5 Infecciones de vías urinarias.
(Sintomáticas, cont.....)
Independientemente de los hallazgos de urocultivo:
6.5.1.11 Chorro medio: muestra obtenida con asepsia previa, mayor
de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.1.12 Cateterismo: más de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.1.13 Punción suprapúbica: cualquier crecimiento es diagnóstico.
6.5.1.14 El aislamiento de un nuevo microorganismo en urocultivo
es diagnóstico de un nuevo episodio de infección urinaria.
6.5.2 Asintomáticas.
Pacientes asintomáticos de alto riesgo con un sedimento urinario
que contenga 10 o más leucocitos por campo más cualquiera de los
siguientes:
6.5.2.1 Chorro medio: muestra obtenida con asepsia previa mayor
de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.2.2 Cateterismo: mayor de 50,000 UFC/ml (una muestra).
6.5.2.3 Punción suprapúbica: cualquier crecimiento es diagnóstico.
ORINA
Homogenizar

DILUIR LA MUESTRA DE ORINA


Lectura del Sedimento
EN SOLUCION SALINA ESTERIL

DILUCIÓN 1:100
0.1 ml ORINA+9.9 ml SS ESTERIL Tinción de Gram
Mezclar

Inocular con asa bacterilogica de


0.01 ul o con una pipeta
automatica 10μl con una puntilla
esteril

GS 5% u otro medio nutritivo Agar de Mac Conkey con


Estriar de forma masiva 37ºC x estria central
24 – 48 hrs 37ºC x 24 – 48 hrs

COCOS GRAM POSITIVOS


BACILOS GRAM NEGATIVOS BGN
AGAR NUTRITIVO

CONTAR EL NUM DE COLONIAS QUE


DESARROLLARON Y MULTIPLICARLAS IDENTIFICAR Y REALIZAR
POR EL FACT. DE DIL. AB CLSI
REPORTAR EN UFC/ml
B).- Exudado cérvico vaginal
• En las mujeres con signos y síntomas de
infección genital aguda las muestras más
comunes son de cuello uterino y de uretra.

• Este estudio es util para determinar el


posible agente causal de la vaginitis e
incluso de la vaginosis bacteriana.

• Las muestras cervicales se obtienen con un


espéculo, después de eliminar el moco
cervical con una torunda seca y esteril.
Agentes potencialmente
patógenos:
Vaginitis Vaginosis
• Neisseria gonorrhoeae • Gardnerella vaginalis
• Streptococcus • Mobiluncus
agalactiae • Bacteroides
• Candida albicans • Peptostreptococcus
• Mycoplasmas y
ureaplasmas
• Chlamidia
• Trichomonas vaginalis
Toma del producto
• Con la paciente en posición ginecológica se introducirá un
espéculo lubricado con agua ó sol. salina estéril.
• Recoger la muestra, bajo visión directa, con un hisopo de
dalcrón, de la zona con mayor exudado, o en su defecto, del
fondo del saco vaginal posterior. Repetir la operación con la
segunda torunda.
• Se obtendrán 3 hisopados, uno destinada al estudio
microscópico del Gram, otro para cultivo y el tercero para el
fresco.
• El envío de la muestra debe ser inmediato siempre que sea
posible.
• El medio de transporte de Stuart-Amies, mantiene viables a
los MO hasta por 3-6 horas.
Determinar Mediante el uso de un espejo vaginal estéril 3er. Hisopo: Observar
lubricado con agua estéril, se toman 3 hisopados Fresco, KOH al 10%
pH insito
Criterios de Gardner y
1er. Hisopo para de muestrra de la secreción de fondo de saco y De Nugent
laminilla Gram cervix.
“Tinción de Gram compatible con Pseudohifas (+)
vaginosis bacteriana Prársitos
2do. Hisopo medio de transporte
para cultivo

Seleccionar medios
de cultivo primarios

GS carnero 5% GCh ó TM Agar Dextrosa Sabouraud


Agar Biggy
Aagr Micosel
CGP CGP
Col. Grises, brillantes de DCGN
Cadenas cadenas
oxidasa positiva. TG(+)
Col.βhem. Col. αβγhem.
Cat(+) Mal(+), Sac(-), Tre(+), Lac(-)
Cat(-) Cat(-)
Identificación de Neisserias Ure(-)
Taxo”A”= R PYR(+)
Gilu(+), Mal(-), Fruc(-)
TSX= R BE(+)
pruebas de sensibilidad.
CAMP(+) NaCl 6.5 (+)

Streptococcus β hem. Gpo. B Candida albicans


Enterococos Neisseria gonorrhoeae

Pruebas de susceptibilidad (CLSI)


C) .- Exudado uretr al
mascul ino
• El diagnóstico de gonorrea puede establecerse en los
hombres que se presentan con uretritis supurativa aguda, en
quienes es posible identificar los diplococos intracelulares
gramnegativos.
• Cuando la descarga uretral es escasa y los diplococos
intracelulares no aparecen en una muestra al azar, la toma de
la primera muestra de la mañana, antes de orinar, suele ser
útil.
• La incidencia de C. trachomatis excede la de N.
gonorrhoeae como causa de infecciones supurativas agudas
en los genitales.
• Los signos y síntomas son indistinguibles; C. trachomatis
tiende a generar menos exudado y menor concentración de
neutrófilos segmentados que N. gonorrhoeae.
• Hasta un 20% de hombres y un 40% de las mujeres
con gonorrea pueden estar coinfectados por C.
trachomatis.

• En muchos casos pueden requerirse procedimientos


de cultivo para recuperar ambos microorganismos, en
particular cuando el tratamiento falla.

• Con frecuencia, tanto en hombres como en mujeres la


infección es asintomática, en particular cuando el
agente infeccioso es C. trachomatis.
Toma del producto
• Limpiar cuidadosamente la mucosa
circundante con gasas estériles.

• Introducir el hisopo suavemente con un


movimiento de rotación hasta penetrar
unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm
para la investigación de Chlamydia
trachomatis) y depositar en el medio
2SP.

• Repetir operación con un segundo hisopo


para tinción Gram.

• El medio de transporte de Stuart-Amies,


mantiene viables a los MO hasta por 3-6
horas.
3.- Vías respiratorias
A).- Infecciones de las VRS
• Exudado faringeo : Diagnóstico de Faringo
amigdalitis, amigdalitis, epiglotitis.
• Portadores de patógenos oportunistas Exudado
nasal.
• Exudado Otico: Diagnóstico de otitis media.
B).- Infecciones de las VRI
• Cultivo de Expectoración.
• Cultivo de Lavado Bronco Alveolar.
• Cepillado Bronquial (CB).
A).- Exudado faringeo
• Este estudio bacteriológico esta encaminado como
una herramienta para el diagnostico confirmatorio
de la faringo amigdalitis de origen piógena,
• La confirmación de patologías “complejas”, tales
como la difteria, la angina de Vincent, la faringitis
clamidiana y micoplásmica, así como las
infecciones virales, no pueden ser evidenciadas
por este procedimiento.
• El clínico debe de formular el cuadro diagnóstico
complementario cuando esto sea necesario.
• Los microbiólogos deben orientar a los
médicos para realizar un diagnóstico
adecuado entre "investigación de
estreptococos" y cultivos de rutina.
• La confusión surge cuando los médicos
ordenan cultivos de rutina de garganta para
faringitis agudas y el laboratorio reporta la
presencia de Staphylococcus aureus,
Enterobacterias y BGN no fermentadores,
Haemophilus influenzae y otros
microorganismos que no causan
faringoamigdalitis primaria.
• Bajo visión directa, con la ayuda de un depresor
lingual, se tocará con un hisopo de dacrón en
todas las partes con exudado, membranas o
inflamación.

• Se deben frotar las criptas tonsilares y la faringe


posterior.

• No tocar nunca la mucosa oral, lengua o úvula.

• Se investigará rutinariamente la presencia de


Streptococcus beta-hemolítico del grupo A
(S. Pyogenes), la posible presencia de los
Streptococcus beta-hem. De los grupos C y G.
• Se le solicita al paciente
que abra bien la boca y
que emita un "ah".
• La lengua se abate
suavemente con una
espátula y se guía un
hisopo hacia la faringe
posterior.
• La mucosa detrás de la
úvula y entre los pilares
amigdalinos es
recolectada con un
movimiento suave de
barrido de atrás hacia
delante.
EXUDADO FARINGEO

GS de carnero al 5%
Sembrar por estría cruzada
Picar el medio 3-5 ocasiones
Incubar en CO2 al 3%
24 – 48 hrs 37ºC

CGP
Cadenas
Col βhem.
Cat(-)

BAC (S) 0.04U BAC (R) 0.04U


BAC (S) 0.04U TSX (S) 1.25/23.75 ug TSX (S) 1.25/23.75 ug
TSX (R) 1.25/23.75 ug CAMP (-) CAMP (-)
CAMP (-) Posible Grupo “C” Posible Grupo “G”
Grupo “A” PYR (-) PYR (-)
PYR (+)

Seroagrupar preferentemente
Realizar susceptibilidad (CLSI)
B).- Cultivo nasal
• Es la muestra indicada para la investigación de
Bordetella pertussis y de otros patógenos
oportunistas (S. pneumoniae, H. influenzae, Neisseria
meningitidis).

• En pacientes inmuno comprometidos se evaluara la


colonización de:

K. pneumoniae subesp. Rhinoscleromatis

K. pneumoniae subesp. ozaenae


Toma del producto
• Las muestras nasofaríngeas se obtienen usando
iluminación por encima del hombro.
• Con el pulgar de la mano, se eleva delicadamente la
punta de la nariz, se humedece la punta de un hisopo
nasofaríngeo delgado de alambre flexible con agua o
solución salina estéril y se lo inserta con suavidad en
uno de los orificios nasales.
• El hisopo se guía hacia atrás y hacia arriba a lo largo del
septo hasta encontrar resistencia, que indica que se ha
llegado a la faringe posterior, se retira con delicadeza y
se deposita en el medio de transporte Stuart.
Secreción nasal
Toma de ambas narinas

GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dextrosa Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC

CGP racimos
Col. β óγhem CGP BGN BGN LAC (+ ó -) INV. Hongos más comunes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos En pacientes
Furazolidona(S) F(V) F(X) Inmunodeprimidos
Oxidasa (-)
Agar Nutritivo
OX
Coag(+) DCGP OF
F(V) (+) F(V) (+)
Manitol(+) Col.αhem Pigmentos
F(X) (+) F(X) (-)
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN
OPT 5ug URE URE
Sol. en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-)
OF: (+/-)
OF: (+/+)
OF: (-/-)
Staphylococcus aureus
AB. CLSI S. pneumoniae
Serotipificar H. parainfluenzae
Solo en manejadores AB. CLSI H. influenzae Serotipificar FENOTIPO
De alimentos
Serotipificar AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
AB CLSI Citrato,LD,OD,SIM,
URE, FD

K. Rhinoscleromatis
BGNF
K. ozaenae
C).- Otitis media
• Se define otitis media • Los dos principales
como la presencia de patógenos son:
exudado en la cavidad
media del oído. • Cocos gram positivos como:
Streptococcus pneumoniae,
Streptococcus pyogenes,
• Los lactantes y niños Staphylococcus aureus.
pequeños son los más
propensos a padecer • Bacilos Gram negativos
otitis media, como: E. coli o
Pseudomonas
aeruginosa,Haemophilus
influenzae y anaerobios
Cultivo de secreción de oído
• El Cultivo bacteriológico de aspirado de oído
medio adecuadamente recolectados, permite
determinar cuáles son los microorganismos
responsables de la otitis media aguda.

• La timpanocentesis para obtener líquido para


cultivos, solo es útil si existe exudación.

• Puede ser necesario el cultivo simultáneo e


LCR y sangre, si existen signos y síntomas
sistémicos.
Exudado de oído
Toma de ambas narinas

GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dextrosa Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC

CGP racimos INV. Hongos más comunes


Col. β óγhem CGP BGN BGN LAC (+ ó -) En pacientes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos Inmunodeprimidos
Furazolidona(S) F(V) F(X)
Oxidasa (-)
Agar Nutritivo
OX
Coag(+) DCGP F(V) (+) OF
F(V) (+)
Manitol(+) Col.αhem F(X) (-) Pigmentos
F(X) (+)
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN
OPT 5ug URE URE
Sol. en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-)
OF: (+/-)
OF: (+/+)
OF: (-/-)
Staphylococcus aureus
AB. CLSI S. pneumoniae
Serotipificar H. parainfluenzae
Solo en manejadores AB. CLSI H. influenzae Serotipificar FENOTIPO
De alimentos
Serotipificar AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
AB CLSI Citrato,LD,OD,SIM,
URE, FD

K. Rhinoscleromatis
BGNF
K. ozaenae
D).-Cultivo de expectoración
• Las infecciones del tracto respiratorio inferior
son de las más frecuentes dentro del
conjunto de las infecciones,tanto entre las
adquiridas en el ambiente comunitario como
en el medio nosocomial.

• La bronquitis crónica se define, como un


proceso caracterizado por un descenso de
los flujos espiratorios que no cambian de
manera significativa tras varios meses de
seguimiento.
• El diagnóstico viene sugerido por el
cuadro clínico, por lo que el cultivo no es
la herramienta de Dx de mayor utilidad
para esta patología.

• Un gran número de los pacientes son


fumadores,o están expuestos de forma
prolongada a substancias nocivas para la
mucosa bronquial, y que refiere tos y
expectoración habitual; según la definición
clásica, durante un mínimo de 3 meses y
hasta por dos años consecutivos.
Esputo in du cido
• No es el tipo de muestra más representativa
de las inefcciones VRI, por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el arbol
traqueo-bronquial y con la flora saprófita de
la orofaringe.

• El resultado dependerá en gran medida de


su correcta obtención, control de calidad
antes de iniciar su proceso, tipo de agente
que se pretenda detectar.
Obte nció n d el
pr oducto.
• Enjuagar la boca con agua estéril o solución salina.
• Obtener el esputo tras una expectoración profunda,
preferentemente matinal.
• De no producirse expectoración espontánea, puede
inducirse el esputo con nebulizaciones de suero
fisiológico estéril (15 ml durante 10 minutos.
• Recolectar en un frasco de boca ancha esteril por lo
menos 2 ml de la secreción.
• Procesar lo antes posible.
• Muestra de calidad =>25 PMN CE <=10 en promedio de
30 campos a 10x.
Criterios para el diagnóstico de IN
Infecciones del tracto respiratorio.

6.1.2 Infecciones de vías respiratorias bajas. CIE-10 (J12-J18, J20, J86.9, J98.5).
6.1.2.1 Neumonía. CIE-10 (J12-J18).
Cuatro criterios hacen el diagnóstico.
Criterios 6.1.2.1.4 y 6.1.2.1.5
son suficientes para el diagnóstico de neumonía.
6.1.2.1.1 Fiebre, hipotermia o distermia.
6.1.2.1.2 Tos.
6.1.2.1.3 Esputo purulento o drenaje purulento a través de cánula endotraqueal
que al examen microscópico en seco débil muestra <10 células epiteliales
y > 20 leucocitos por campo.
6.1.2.1.4 Signos clínicos de infección de vías aéreas inferiores.
6.1.2.1.5 Radiografía de tórax compatible con neumonía.
6.1.2.1.6 Identificación de microorganismo patógeno en esputo, secreción
endotraqueal o hemocultivo.
Muestra de Expectoración

Gram: Criterios de
Murray-Bartlett
PMN =>25 CE <=10

GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dextrosa Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC

CGP racimos
Col. β óγhem CGP BGN BGN LAC (+ ó -) INV. Hongos más comunes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos
Furazolidona(S) F(V) F(X)
Oxidasa (-)
Agar Nutritivo
OX
Coag(+) DCGP F(V) (+) OF
F(V) (+)
Manitol(+) Col.αhem F(X) (-) Pigmentos
F(X) (+)
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN
OPT 5ug URE URE
Sol. en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-) OX(+)
OF: (+/-)
OF: (+/+) OF: (+/+)
OF: (-/-)
Staphylococcus aureus
AB. CLSI
S. pneumoniae
Serotipificar H. parainfluenzae
AB. CLSI H. influenzae Serotipificar FENOTIPO
Serotipificar AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
Coag(-) AB CLSI Citrato,LD,OD,SIM,
Manitol (V) URE, FD
Lac(V)

Enterobacterias BGNF Vibronaceae


ECN
E).- Neumonía adquirida
en la comunidad (NAC).
• Constituye una causa muy importante de morbilidad y
mortalidad.
• La mortalidad varia desde el 5% a más del 30%, según
el agente causal y diversos factores de riesgo
individuales.
• En los países industrializados, la NAC es la primera
causa infecciosa de muerte y la sexta de mortalidad
general.
• El número de personas que fallecen cada año en el
mundo como consecuencia de esta infección se cifra en
aproximadamente 5 millones.
F).- Cultivo de LBA ó CB
• Neumonía nosocomial: La mayoría de los
estudios consideran la neumonía nosocomial
como la segunda causa de las infecciones
adquiridas en el hospital.
• La neumonía nosocomial se adquiere a través
de tres mecanismos: la aspiración, la
inhalación de aerosoles y la diseminación
hematógena a partir de otro foco de sepsis.
• La flora orofaríngea normal está formada
principalmente por cocos grampositivos.
• La colonización de la orofaringe por BGN se observa en
menos del 10% de los individuos sanos, aumenta con
hospitalizaciones prolongadas y alcanza el 60-75% en
enfermos críticos ingresados en unidades críticas.

• La implicación de los bacilos gramnegativos


(enterobacterias como Klebsiella pneumoniae, Escherichia
coli, Serratia marcescens, Enterobacter spp., y
Pseudomonas aeruginosa) en la neumonía nosocomial es
muy frecuente (20-60%).

• En el enfermo ventilado, Staphylococcus aureus se situaría


en segundo lugar (10-30%), mientras que otros
microorganismos más prevalentes en la comunidad, como
Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae o
Chlamydia pneumoniae serían menos frecuentes.
LBA ó CB

Gram: Criterios de
Murray-Bartlett
PMN =>25 CE <=10
Presencia de cel. ciliadas

GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dextrosa Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC

CGP racimos
Col. β óγhem CGP BGN BGN LAC (+ ó -) INV. Hongos más comunes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos
Furazolidona(S) F(V) F(X)
Oxidasa (-)
Agar Nutritivo
OX
Coag(+) DCGP F(V) (+) OF
F(V) (+)
Manitol(+) Col.αhem F(X) (-) Pigmentos
F(X) (+)
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN
OPT 5ug URE URE
Sol. en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-) OX(+)
OF: (+/-)
OF: (+/+) OF: (+/+)
OF: (-/-)
Staphylococcus aureus
AB. CLSI
S. pneumoniae
Serotipificar H. parainfluenzae
AB. CLSI H. influenzae Serotipificar FENOTIPO
Serotipificar AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
Coag(-) AB CLSI Citrato,LD,OD,SIM,
Manitol (V) URE, FD
Lac(V)

Enterobacterias BGNF Vibronaceae


ECN
Muestras sistémicas

• LCR
• Sangre
• Médula ósea
• Líquidos diversos:
 L. Pleural
 L. Sinovial
 L.Peritonial
4.- L íq uid o c efa lo rraquíd eo
(L CR)
• El líquido cefalorraquídeo (LCR) es la muestra clínica
representativa cuando hay sospecha de meningitis
séptica.

• Los agentes infecciosos más comunmente identificados


incluyen N. meningitidis, S. pneumoniae , H.
influenzae, S. agalactiae

• Otros agentes menos frecuentes son: Enterobacterias,


C. neoformans, C. albicans, algunos BGNF, S. aureus
entre otros.
Obtenci ón de lí qui do
cef alor raquí deo ( LCR )
• La colección del LCR solamente debe ser
tomada por personal especializado y bajo
condiciones de estricta asepsia.

• Por lo general, se sacan tres tubos de LR


para química, microbiología y citología.

• Si solamente hubiera disponible un tubo,


este debe enviarse al laboratorio de
microbiología para su inmediato análisis.
Transport e de las
muest ras de LCR
• Enviar inmediatamente al laboratorio de
microbiología para su análisis (en un
plazo no mayor de 1 hora a partir del
momento de la obtención de la muestra

• No refrigerar ni exponer a calor


extremo o a la luz solar.
LCR Sobrenadante
Centrifugar Ag capsulares:
el LCR N. meningitidis,
3000 RMP/15min H. influenzae,
S. pneumoniae,
SEDIMENTO: S. del gpo.B,
Tinciones Escherichia coli.
Gram
Ziehl Neelsen
Tinta china

GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dex. Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC

CGP racimos DCGN


INV. Hongos
Col. β óγhem CGP BGN Cat(+) BGN LAC (+ ó -)
más comunes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos OX(+)
CGP
Furazolidona(S) F(V) F(X) Glu(+)
Col. βhem
Oxidasa (-) Mal(+)
Cadenas cortas
Taxo A (R) Fru(-) Agar Nutritivo
SXT(R) OX
Coag(+) DCGP CAMP (+) F(V) (+) F(V) (+) OF
Neisseria
Manitol(+) Col.αhem F(X) (+) F(X) (-) Pigmentos
meningitidis
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN AB CLSI
OPT 5ug S. agalactiae URE URE
Sol.en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-) OX(+)
Seroagrupar OF: (+/-)
Staphylococcus aureus OF: (+/+) OF: (+/+)
AB CLSI OF: (-/-)
AB. CLSI

S. pneumoniae H. parainfluenzae
H. influenzae Serotipificar
Serotipificar
Serotipificar AB CLSI FENOTIPO
Coag(-) AB. CLSI
AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
Manitol (V)
Citrato,LD,OD,SIM,
Lac(V)
URE, FD

Novobiocina (S) Enterobacterias BGNF Vibronaceae


Novobiocina (R)
16mm
S. epidermidis <16mm
AB CLSI S. saprophyticus
5.- Sangre (Hemocultivo)

• El estudio bacteriológico de la
sangre debe realizarse
principalmente en pacientes
con neumonía, meningitis o
fiebre de origen desconocido,
entre otros síndromes.
DEFINICION

Bacteriemia: es la presencia de
bacterias viables en el torrente
sanguíneo, evidenciada por la
obtención de cultivos en sangre, sea
por punción venosa o por aspiración a
través de un catéter intravascular.
DEFINICION (NOM-045-SSA2–2005 )
Este diagnóstico se establece en un paciente con
fiebre, hipotermia o distermia con hemocultivo
positivo.

El diagnóstico de bacteriemia nosocomial (BN)


puede darse aun en pacientes con menos de 48
horas de estancia hospitalaria si se les realizan
procedimientos de diagnóstico invasivos o reciben
terapia intravascular.
Interpretación del Hemocultivo Positivo.
Un hemocultivo positivo para Gramnegativos,
Grampositivos u hongos es suficiente para hacer el
diagnóstico.
En caso de aislamiento de un bacilo Grampositivo o
estafilococo coagulasa-negativo, puede considerarse
bacteriemia si se cuenta con dos o más de los
siguientes criterios:
•Alteraciones hemodinámicas.
•Trastornos respiratorios.
•Leucocitosis o leucopenia no inducida por fármacos.
•Alteraciones de la coagulación (incluyendo trombocitopenia).
•Aislamiento del mismo microorganismo en otro sitio anatómico.
Los gérmenes identificados como causales de
Bacteriemia Nosocomial según la bibliografía
internacional son principalmente:
1.- Cocos gram positivos: 3.- Bacilos
•Estafilococo Coagulasa-Negativo Gramnegativos:
•Staphylococcus aureus Pseudomonas spp
•Enterococcus spp. E. coli
Klebsiella pneumoniae
2.- Hongos levaduriformes: Enterobacter cloacae
•Candida spp Acinetobacter spp
Serratia spp

RHOVE-DGE
Material necesario
• Guantes, jeringuilla, aguja, ligadura,
torundas, contenedor de
punzocortantes, botella de cultivo,
tintura de yodo, alcohol isopropílico al
70%.

• El tamaño de la aguja dependerá del


lugar de la del tamaño de la vena y la
edad del paciente.
Venopución
1) Seleccione el brazo y aplique el torniquete para restringir el paso de
la sangre venosa.
2) Normalmente se selecciona la vena más prominente para la punción.
3) Limpie completamente la piel con alcohol al 70%; y a continuación
limpie con solución yodo povidona, frotando el área seleccionada y
deje secar.
4) Introduzca en la vena la aguja con el bisel hacia arriba. Una vez que
la vena se haya canalizado, extraiga la sangre jalando el émbolo de
la jeringuilla de manera lenta y con continuidad.
5) Una vez que se ha obtenido la cantidad de sangre necesaria, retire
el torniquete y coloque un algodón con alcohol sobre el sitio de
Inserción.
6) Retire la aguja y haga que el paciente sostenga firmemente el
algodón hasta que cese el sangrado.
7) Inocule el medio de cultivo con los volúmenes de sangre que
recomienda el fabricante.
Sangre
Inoculación de la botella
Incubar a 35ºC

Monitoreo de producción
ó consumo de gas,
hemólisis y turbidez
Durante las 6 -18hrs posteriores
Incubando la botella 35ºC

Monitoreo de producción
ó consumo de gas,
hemólisis y turbidez
Diariamente si se mantiene negativo

Subcultivar en Agar Chocolate


Incubar a 35-37ºC 24 – 48 y realizar tinción de Gram
Directo de la botella
Repetir la operación cda 3er. día

Descartar el frasco si después de 7 días


Cultivo (+) Cultivo (-)
de incubación
no se compruba positivo

ID. Bacteriana
AB CLSI
Médula ósea
Inoculación de la botella
Incubar a 35ºC

Monitoreo de producción
ó consumo de gas,
hemólisis y turbidez
Durante las 6 -18hrs posteriores
Incubando la botella 35ºC

Monitoreo de producción
ó consumo de gas,
hemólisis y turbidez
Diariamente si se mantiene negativo

Subcultivar en Agar Chocolate


Incubar a 35-37ºC 24 – 48 y realizar tinción de Gram
Directo de la botella
Repetir la operación cda 3er. día

Descartar el frasco si después de 7 días


Cultivo (+) Cultivo (-)
de incubación
no se compruba positivo

ID. Bacteriana
AB CLSI
LIQUIDOS
Centrifugar
3000 RMP/15min

SEDIMENTO:
Tinciones
Gram
Ziehl Neelsen

GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dex. Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC

CGP racimos DCGN


INV. Hongos
Col. β óγhem CGP BGN Cat(+) BGN LAC (+ ó -)
más comunes
Cat(+) Cat(-) Pleomórficos OX(+)
CGP
Furazolidona(S) F(V) F(X) Glu(+)
Col. βhem
Oxidasa (-) Mal(+)
Cadenas cortas
Taxo A (S) Fru(-) Agar Nutritivo
SXT(R) OX
Coag(+) DCGP CAMP (-) F(V) (+) F(V) (+) OF
Neisseria
Manitol(+) Col.αhem F(X) (+) F(X) (-) Pigmentos
meningitidis
Lac(+) Taxo P(S) IND IND
16mm ORN ORN AB CLSI
OPT 5ug S. pyogenes URE URE
Sol.en bilis (+) OX(+ ó -)
OX(-) OX(+)
Seroagrupar OF: (+/-)
Staphylococcus aureus OF: (+/+) OF: (+/+)
AB CLSI OF: (-/-)
AB. CLSI

S. pneumoniae H. parainfluenzae
H. influenzae Serotipificar
Serotipificar
Serotipificar AB CLSI FENOTIPO
Coag(-) AB. CLSI
AB CLSI KIA, ONPG,RM-VP
Manitol (V)
Citrato,LD,OD,SIM,
Lac(V)
URE, FD

Novobiocina (S) Enterobacterias BGNF Vibronaceae


Novobiocina (R)
16mm
S. epidermidis <16mm
AB CLSI S. saprophyticus
6.- Piel y tejidos blandos

• Cultivo de secreción de
herida

• Cultivo de absceso

• Cultivo para anaerobios


A).- Cultivos de secreción de
Heridas, úlceras y abscesos
• Lavar cuidadosamente la superficie de la herida.
• La aspiración percutánea requiere una desinfección severa,
previa similar a la realizada en la toma de hemocultivos.
• Recoger el pus mediante jeringa y aguja, aspirando
preferentemente de zonas profundas.
• Esta técnica también es adecuada para obtener muestras de
celulitis, úlceras, escaras o abscesos abiertos y heridas
superficiales.
• Cuando la muestra sea insuficiente, instilar solución salina
estéril y aspirarlo nuevamente en la jeringa.
• Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podrá
efectuarse un frotis de las partes profundas de la herida con
un hisopo para tinción de Gram.
Criterios para el diagnóstico de IN

6.8 Infección de piel y tejidos blandos.


6.8.2 Infecciones de tejidos blandos. CIE-10 (L04, L08).
Fascitis necrosante, gangrena infecciosa, celulitis, miositis y linfadenitis.
Con tres o más de los siguientes criterios:

6.8.2.1 Dolor localizado espontáneo o a la palpación.


6.8.2.2 Inflamación.
6.8.2.3 Calor.
6.8.2.4 Rubor, palidez o zonas violáceas.
6.8.2.5 Crepitación.
6.8.2.6 Necrosis de tejidos.
6.8.2.7 Trayectos linfangíticos.
6.8.2.8 Organismo aislado del sitio afectado.
6.8.2.9 Drenaje purulento.
6.8.2.10 Absceso o evidencia de infección durante la cirugía o
por examen histopatológico.
Heridas, abscesos
úlceras
GRAM
Respuesta inflamatoria
ó
Zona de necrosis
proteolítica

GS al 5% GCh
Mac Conkey
al 5% al 5% Agar Dex. Sabouraud
24-48 Hrs 37ºC
CO2 al 5% CO2 al 5% (Opcional)
24-48hrs 37ºC 24-48hrs 37ºC

CGP racimos BGN


bipolares INV. Hongos
Col. β óγhem BGN LAC (+ ó -)
BGN Cat(+) más comunes
Cat(+)
CGP Pleomórficos OX(+)
Furazolidona(S)
Col. βhem Glu(+)
Oxidasa (-)
Cadenas cortas OF(+/ -))
Taxo A (S) Agar Nutritivo
SXT(R) OX
Coag(+) CAMP (-) OF
Fositas F(V) (-)
Manitol(+) Pasteurella sp Pigmentos
Cat(-) F(X) (-)
Lac(+) OX(+) IND
OF(-/ -)) ORN AB CLSI
S. pyogenes LD(+) URE
OX(+ ó -)
OD(+) OX(-) OX(+)
Seroagrupar OF: (+/-)
OF: (+/+) OF: (+/+)
Staphylococcus aureus AB CLSI OF: (-/-)
AB. CLSI

H. aphrophilus
E. corrodens Serotipificar
Serotipificar AB FENOTIPO
Coag(-) AB KIA, ONPG,RM-VP
Manitol (V)
Citrato,LD,OD,SIM,
Lac(V)
URE, FD

Novobiocina (S) Enterobacterias BGNF Vibronaceae


Novobiocina (R)
16mm
<16mm
S. epidermidis
AB CLSI S. saprophyticus
B).- Cultivo de catéter
• Desinfectar con alcohol una zona de piel de unos 10 cm
correspondiente a la zona de entrada del catéter.

• Hacerlo en forma de círculos comenzando par el centro.

• Repetir la misma operación, pero con el alcohol iodado o


iodopovidona.

• Retirar el catéter con la máxma asepsia.

• Con pinzas y las tijeras estériles, cortar los 3 cm distales del


catéter que corresponden a la porción intravascular.

• Introducir el segmento de catéter en un recipiente estéril


correctamente identificado.
Criterios para el diagnóstico de IN
Bacteriemias.

6.9.6 Bacteriemia relacionada a líneas y terapia intravascular.


Hemocultivo positivo periférico y a través del catéter con dos o más de los
siguientes criterios:

6.9.6.1 Relación temporal entre la administración de terapia


intravascular y la aparición de manifestaciones clínicas.
6.9.6.2 Ausencia de foco evidente.
6.9.6.3 Identificación de contaminación de catéter o solución endovenosa.
6.9.6.4 Desaparición de signos y síntomas al retirar el catéter o la
solución sospechosa.
6.9.6.5 Cultivo de punta de catéter >15 UFC/ml.
Cateter 3cm
Método de Maki

AGAR NUTRTIVO
Caldo BHI
Rodarlo sobre toda la
Superficie del agar

Distribuir con una asa


bacterilogica en estria masiva

Incubar de 8 a 12 Hrs
Incubar por 24 -48hrs Hrs 35 – 37ºC
35 – 37ºC

Agar Nutritivo
35 - 37ºC x 24 – 48 hrs
COCOS GRAM POSITIVOS
BACILOS GRAM NEGATIVOS

BGN
AGAR NUTRITIVO

<15 UFC no representativo


IDENTIFICAR Y REALIZAR
=>15 UFC Representativo AB CLSI