5.10 - 5.50 Presentación J Rivadeneira PDF

ULTIMOS AVANCES EN LA BIOLIXIVIACIN DE
CONCENTRADOS CALCOPIRITICOS
Dr. JUAN RIVADENEIRA H.

LIAP-UAI
jrivadeneira@liap.cl
Introduccin
Muchas Gracias
Introduccin
Mercado del cobre de acuerdo a su va de procesamiento.

Minerales: xidos v/s Sulfuros.
Sulfuros: Molienda- Concentrados- nodos-ER- Ctodos.
xidos: Chancado- Lixiviacin - SX-EW - Ctodos.
Bajos costos en procesos de biolixiviacin de sulfuros.
Regeneracin de insumos H2SO4
Plantas de SX-EW amortizadas.
Baja intensidad de energa.
Foco actual de lixiviacin en bajas leyes.
Procesos masivos, Botaderos, ROM.
Ambientalmente amigable v/s Fundiciones.
No genera gases sulfurosos
Nuevos minerales
Refractarios o con As
Introduccin
Proceso productivo segn el mineral
Exploracin
geolgica
Extraccin, Carguo
y Transporte
Chancado
Cobre Sulfurado
Cobre oxidado
Molienda
Lixiviacin
Flotacin
Extraccin por
solventes
Fundicin
Electro
refinacin
Electro obtencin
Introduccin
Produccin de Cu en Chile
7.000
6.000
KTon Cu Fino
5.000
4.000
Capacidad de fundicin
Capacidad de Refinacin
Cobre en concentrados
3.000
total Catodos SxEw

2.000
1.000
0
2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2018 2019 2020
Capacidad de Fusin de Concentrados y Refinacin de Cobre en Chile
Fuente: Cochilco, 2009
Introduccin
Mina Subterranea y a rajo
abierto
Gobierno
nueva Geogrfica
Buenayubicacin
norma
defaenas
fundiciones:
de las
Codelco y Enami son
las que debern realizar
Tecnologa
de punta en planta
la mayor
inversin
Constanza Prez-Cueto
04/07/2012
Investigacin
y Desarrollo
"Estimamos que son ms de US$1.350 millones (de inversin). Las

principales inversiones van a estar en las fundiciones pblicas" dijo
a La Tercera, Marcelo Fernndez, jefe de la oficina de Asuntos
Atmosfricos del Ministerio de Medio Ambiente.
Terminologa
Biolixiviacin: disolucin de minerales de su fuente mineral
por accin microbiana.
Bio-oxidacin: es la oxidacin mediante microorganismos
del mineral husped que contiene el componente metlico
de inters. Tratamiento de minerales refractarios de oro.
Bio-mineria: movilizacin de elementos de una materia
slida mediada por bacterias y hongos.
Bio-hidrometalurgia: campo interdisciplinario en donde se
da una cruza entre aspectos microbiolgicos y en especial
geo-microbiolgicos y biotecnolgicos con mineraloga,
geologa, metalurgia, ingeniera qumica y ingeniera en
minas.
Modelos de Mecanismos de Lixiviacin

Directo:
Obteniendo electrones directamente de la
reduccin del mineral.
Adhesin celular al sustrato mineral.
Indirecto:
ion frrico como transportador de electrones
No requiere contacto de la clula al sustrato.
Modelos de Mecanismos de Lixiviacin

Contacto celular con el sustrato mineral.
Excrecin celular de exopolmeros.
Acomplejamiento de iones frricos a residuos de cido
glucurnico presentes en el exopolmero.
Mecanismo de ataque primario.
Formacin de tiosulfato como intermediario de la oxidacin
del sulfuro.
Formacin de grnulos de sulfuro o grnulos de politionato
en el espacio peri plasmtico o en la pared celular.
Mecanismos de Lixiviacin
Mecanismo del tiosulfato (FeS2, MoS2, WS2).
FeS2 + 6Fe 3+ + H2O S2O32- + 7Fe 2+ + 6H+
S2O32- + 8Fe 3+ + 5H2O 2SO42- + 8Fe 2+ + 10H+
2Fe 3+ + 2S2O32- 2FeS2O 3+ 2Fe 2+ + S4O6 2Mecanismo de poli sulfuros (ZnS, CuFeS2, FeAsS, etc.)
MS + Fe 3+ + H+ M 2+ + 0.5 H2Sn + Fe 2+
0.5 H2Sn + Fe 3+ 0.125 S80 + Fe 2+ + H+
0.125 S80 + 1.5 O2 + H2O SO42- + 2H+
Precipitacin del hierro frrico
4 Fe 3+ + 12 H2O 4 Fe(OH)3 + 12 H+
A)
K 2 SO 4 3Fe 2 SO 4 3 12H2 O 2KFe 3 SO 4 2 OH 6 6H2 SO 4
B)
200
TEMPERATURA, C
180
160
140
Fe2O3
120
100
80
FeO(OH)
60
Fe3+
40
20
Fe(OH)3
0
0
pH
Formacin de Jarosita potsica. A) formula de la reaccin qumica conducente a la formacin de jarositas potsicas. B)
diagrama de temperaturas y pH de estabilidad de compuestos de in frrico, se muestran los parmetros de formacin y
estabilidad de las especies que conforman jarositas y hidrxidos de Hierro ( Geothita y Hematita), en rojo se muestra el
rea en que es posible encontrar el in frrico en solucin y las estrellas muestran las condiciones operacionales utilizadas
en las experiencias de biolixiviacin llevadas a cavo en esta tesis con microorganismos mesfilas, termfilos Moderados y
termfilos extremos ( 39, 50 y 70 C Respectivamente) y en condiciones de iso pH 1,5. Adaptado de G. von Weert and
R.J.M. van Lier, Aqueous Pressure Oxidation of Silver Bearing Cyamide Refractory Concentrates in Acidic Sulfate and
Sulfate Iodide Media, TMS EPD Congress JOM 1994, pp 12.
REACCIONES DE OXIDACIN DE MINERALES CUPROSOS

H.R.Watling (2006) The bioleaching of sulphide minerals with emphasis on copper sulphides hydrometallurgy 84: 81-108
Microorganismos descritos en procesos de Biolixiviacin

de
calcopirita
TRFLP
H. Huber, K.O.Stetter. (1998) Hyperthermophiles and their possible potential in biotechnology Journal of Biotechnology 64: 39-52.
Mina Subterranea y a rajo

abierto
Buena ubicacin Geogrfica

de las faenas
Tecnologa de punta en planta
Investigacin y Desarrollo
O2
Aerobiosis
SO4=
H2SO4
H2SO4
O2
Fe2(SO4)3
pH 7
NAD(P)H
H+
NAD(P)
ATP
H+
Fe2(SO4)3
FeSO4+ CuSO4 + S
Fe SO4
O2
H2O
H+
ADP + Pi
O2
K Fe3(SO4)2(OH)6
pH 1,5
CuFeS2
O2
Acidithiobacillus ferrooxidans
O2
O2
O2
3+
2+
Modelo propuesto de ataque indirecto por Fe con oxidacin de Fe bacterial y O2 como aceptor de electrones en
Acidithiobacillus ferrooxidans.
Se muestra capa de precipitados de jarosita y precipitados de RISCs que se forma tanto sobre la bacteria como sobre la
partcula a biolixiviar. Se incluye ataque de in frrico sobre la partcula de calcopirita y la generacin de un azufre elemental
como subproducto de la reaccin. Modelo propuesto para ataque Indirecto en condiciones Mesoflicas.
pH 1,5
Aerobiosis
O2
O2
O2
O2
K Fe3(SO4)2(OH)6
CuFeS2
S
O2
O2
O2
Modelo propuesto de ataque directo con oxidacin de RISCs y O2 como aceptor de electrones en Acidithiobacillus
ferrooxidans.
Se muestra capa de precipitados de jarosita y precipitados de RISCs que se forma tanto sobre la bacteria como sobre la partcula a
biolixiviar. Se incluye ataque de la bacteria sobre los precipitados de RISCs en la superficie de la partcula de calcopirita, los compuestos
RISCs al ser extremadamente insolubles en medio acuoso requieren que la bacteria ataque de forma directa la superficie del mineral ( lnea
punteada negra). Modelo propuesto para explicar el ataque Directo en condiciones Mesoflicas, Termoflicas moderadas y Termoflicas
extremas, utilizando oxigeno como aceptor final de los electrones.
pH 1,5
Anaerobiosis
CuFeS2
K Fe3(SO4)2(OH)6
CuFeS2
Modelo propuesto de ataque directo con oxidacin de RISCs y Fe

ferrooxidans.
3+
como aceptor de electrones en Acidithiobacillus
Se muestra capa de precipitados de jarosita y precipitados de RISCs que se forma tanto sobre la bacteria como sobre la partcula a
biolixiviar. Se incluye ataque de la bacteria sobre los precipitados de RISCs en la superficie de la partcula de calcopirita, los compuestos
RISCs al ser extremadamente insolubles
3+ en medio acuoso requieren que la bacteria ataque de forma directa la superficie del mineral ( lnea
punteada negra). A3+
la vez al utilizar Fe como aceptor final de los electrones la bacteria genera espacios en su pared celular capaces de unir
precipitados de Fe permitiendo mejorar las capacidades de unirse al sustrato a biolixiviar. Modelo propuesto para explicar el ataque Directo
en condiciones Mesoflicas, Termoflicas moderadas y Termoflicas Extremas con frrico como aceptor final de los electrones.
PROCESO GEOCOAT
Sistema de Biolixiviacin de Concentrados en Pilas
Aireacin e irrigacin controlada para conservar el calor y as maximizar la
biolixiviacin.
Especies Biolgicas atacan los sulfuros y liberan los metales bsicos a la
solucin.
El concentrado es recubierto sobre un sustrato de tamao controlado
(Roca estril o mineral de baja ley) y apilado.
La pila se irriga con solucin cida con nutrientes que se recicla.
Se emplea aire a baja presin para suplir oxigeno- soplado desde la base
de la Pila.
SX-EW.
Fierro y Arsnico se remueven va precipitacin.
Los metales preciosos pueden recuperarse si estn presentes.
GEOCOAT
clonamiento
Flujo de Solucion
Flujo de Aire
Cubierta de concentrado (0.5

1.0mm) sobre ripio de soporte
Ripio de soporte +4mm 25 mm
Espacios libres permiten alta

permeabilidad
Balance trmico
GEOCOAT
clonamiento
Conveccin
Evaporacin
Radiacin
Condicin de borde
Irrigacin
Solucines
Conduccin
Transporte de solucin y
aire al interior de la pila
Las reacciones
generan calor en
la pila
La energa es generada por

las reacciones de lixiviacin
Aireacin
Aireacin y Evaporacin
Condicin de Borde
La acumulacin de calor en la pila es determinada por el balance entre la tasa de lixiviacin , la tasa de
riego y la tasa de aireacin combinada con las condiciones de borde.
Balance trmico GEOCOAT

Temperatura C
20
condensacin
Riego
Accumulacin de Temperatura
Evaporacin
Profundidad m
Perdida de calor y calor en soluciones de riego
Aireacin
0
Sobre
Sobre
Temperatura
irrigacin
aireacinideal
enfra
70
Inculos microbiolgicos
Obtenidos a partir de Bancos de microorganismos pre
adaptados a los concentrados de Pucobre y entregados por el
Dr Greg Olsen, Little Bear laboratories, Inc ( Geosynfuels,
Golden, CO).
Campaas de bioprospeccin realizadas en el norte de Chile.
Lugares impactados por la industria minera y seleccionados de
acuerdo a su capacidad de biolixiviar concentrados calcopirtico
en pruebas de matraces.
drenajes cidos de minas.
soluciones ricas de percolacin.
tranques de relaves (Chaaral).
rio salado y caleta palitos.
fuentes termales del norte de Chile en particular las
termas de rio Negro y El Tatio.
clonamiento
Bio prospeccin de Inculos
Zona alta
ZA
Zona
media ZM
Zona baja
ZB
Concentrado de Calcopirita
Biolixiviacin en matraz (1L)
Anlisis de
biodiversidad
y qumicos
Anlisis qumicos,
granulomtricos y
Mineralgicos
Biolixiviacin en tanque
agitado (35L)
Generacin de
inculo para
Anlisis comparativos de
diversidad y abundancia
relativa por RFLP, T-RFLP
caracterizacin de
especies dominantes por
clonamiento y
secuenciacin
Anlisis qumicos
comparativos
Prelixiviacin cido/frrica en tanque

(50L)
Anlisis de
biodiversidad
y qumicos
Generacin de
inculo para
Anlisis qumicos,
granulomtricos
Biolixiviacin en Columnas
( Cuarzo y Ripios , 2 y 6 m de altura)
Anlisis de biodiversidad
y qumicos
Anlisis mineralgicos concentrado calcopirtico.

Composicin mineralgica global
ESPECIES
CALCOPIRITA
COVELINA
ENARGITA
PIRITA
ESFALERITA
MAGNETITA
HEMATITA
LIMONITA
RUTILO
GANGA
TOTAL
% PESO
52,68
0,11
0,05
27,73
0,05
2,78
1,36
0,05
0,05
15,12
100,00
%S
18,44
0,04
0,02
14,81
0,02
%Cu
18,23
0,08
0,03
%Fe
16,02
%Zn
%As
0,01
12,92
0,03
2,01
0,95
0,03
33,32
18,33
(*)
31,93
0,03
0,01
Composicin mineralgica 100% base minerales sulfurados de cobre

ESPECIES
CALCOPIRITA
COVELINA
ENARGITA
TOTAL
% PESO
99,68
0,22
0,10
100,00
%S
22,87
0,05
0,02
22,94
%CU
34,49
0,14
0,05
34,68
%Fe
30,30
0,01
30,31
Asociaciones mineralgicas de sulfurados de cobre (por especies)

ESPECIES
CALCOPIRITA
COVELINA
ENARGITA
Libre
93,09
50,00
100,00
Asoc.
Gn.
2,19
50,00
Asoc. Py
3,84
Inclu.
Gn.
0,77
Inc.
Py/Gn
0,11
TOTAL
100,00
100,00
100,00
Asociaciones mineralgicas de sulfurados de cobre (% Cu)

ESPECIES
Libre
CALCOPIRITA
COVELINA
ENARGITA
32,11
0,07
0,05
TOTAL
32,23
Asoc.
Gn.
0,76
0,07
Asoc. Py
1,32
Inclu.
Gn.
0,27
Inc.
Py/Gn
0,04
0,83
1,32
0,27
0,04
Grado de liberacin de cobre

Libre
92,91
Asociado
6,20
Ocluido
0,89
TOTAL
100,00
TOTAL
34,49
0,14
0,05
34,68
Caracterizacin qumica de los concentrados

TRFLP
calcopirticos
A) Recibido
LEY
Muestra
Concentrado Rougher
S
%
29.93
Cu
%
17.75
Fe
%
26.04
As
%
0.02
Ag
g/T
29.40
B) pre-lixiviados mediante agitacin cida Frrica (10grL/Fe
Au
g/T
3.95
Cl%
0.08
CaCO3 Si
%
%
2.88
3.29
3+
)
Leyes
S
Muestras Pre
Lixiviado
Termfilos (Ripios)
Moderados (Ripios)
Mesfilas (Ripios)
Termfilos(Cuartiza)
Moderados (Cuartiza)
Mesfilas (Cuartiza)
CuT FeT
Cl-
As
Ag
g/T g/T
34.9
29.4
31.5
28.4
28.6
30.1
2.96
2.88
2.84
2.87
2.88
2.94
3.21
3.29
2.96
3.06
2.78
2.83
29.66
29.93
30.1
29.61
30.04
30.1
17.75
17.05
16.95
16.95
17.15
17.25
25.48
26.04
25.46
25.82
26.24
26.36
0.081
0.081
0.081
0.088
0.075
0.075
0.016
0.019
0.019
0.018
0.019
0.020
Au CaCO3
4.09
3.95
3.74
3.24
4.24
4.08
Si
5
4
3
2
1
Vista panormica del deposito de ripios de biolixiviacin dispuesto en Planta Biocobre.

En la actualidad Planta Biocobre dispone de ms de 7 Millones de Toneladas de Ripios de biolixiviacin en 5 niveles o
bancos superpuestos de 10 mts de altura cada uno. Muestras de estos ripios fueron lavadas y seleccionadas
granulomtricamente ( 3 a 12 mm) para ser usadas como matriz soporte en pruebas de biolixiviacin en columnas de
concentrados de flotacin de mineral de calcopirita.
Anlisis qumicos de la fraccin utilizada de ripios de

lixiviacin (Biocobre) y de clonamiento
las muestras de Cuarzo utilizados
como roca soporte.
Muestra
Roca Soporte
Leyes
S
CuT
FeT
Cl-
As
Ag
Au
CaCO3
SiO2
g/T
g/T
Ripios
3.34
0.41
11.39
0.102
0.007
3.3
0.14
1.76
25.01
Cuarzo
0.03
0.00
0.00
0.012
0.002
0.0
0.0
0.27
99.58
Determinacin mediante tcnica de Digestin cida y determinacin de minerales mediante

espectrometra de Absorcin Atmica (AAS)
(a)
(b)
(c)
(d)
Imgenes de muestras de los minerales utilizados en pruebas de biolixiviacin.

Como roca soporte (a,b) y del concentrado calcopirtico (c), utilizado en las pruebas de biolixiviacin en columnas.
Imgenes del mineral de Ripio lavado del desecho lixiviacin de Planta Biocobre (a), de mineral de cuarzo lavado (b), del
concentrado calcopirtico recibido (c). Vista superior del concentrado ya aglomerado sobre roca soporte (d), y cargado en
la columna de biolixiviacin.
3 L /min
Aire
CO2
2%
Agitacin
300 rpm
Reactor
polipropileno
cinta calefactora
Pulpa:
5 % slidos
pH < 1,5
Volumen total 50 L
Volumen operacin 35L
aislante trmico
termocupla
controlador
Hlice
Acero inoxidable
Bafles polipropileno
burbujeador
12 L /hr/m2
Anlisis Gas
Consumo O2
bolitas de
polipropileno
Columna polipropileno
Concentrado Aglomerado
Cinta calefactor
Termocupla
Concentrado
calcopirtico
Controlador
Aislante
2 L / min.
1mm
Roca
Soporte
Aire
CO2
2%
bolitas de
polipropileno
Anlisis
pH, Eh, Cu T, Fe T, cido
Solucin percolacin
Ajuste pH =1,5
Solucin riego
Bomba
peristltica
clonamiento
Inoculacin de las experiencias

Protocolo de Inoculacin:
La inoculacin de las experiencias se realizo en dos etapas:

1.- Inoculacin primaria, en la etapa de aglomeracin en la pulpa de los
concentrados agregada sobre las distintas matrices de roca soporte a una
densidad de siembra de 1,5 X107 clulas por gramo de concentrado.
2.- En las soluciones de riego de las columnas a una densidad de inoculacin de
1,5 X108 Clulas por ml de solucin. En ambos casos la densidad celular fue
determinada mediante conteo de microorganismos por microscopia de luz en
una cmara de Petroff Houser.
Resultados
1. Pruebas de lixiviacin Batch:

Reactor de tanque agitado
2. Pruebas en columnas
3. Anlisis moleculares
A)
B)
C)
D)
Resultados de las pruebas de biolixiviacin por Agitacin a 38, 49 y 69C. (valores promedio de
pruebas en duplicado).
A) % de disolucin de Cu en la pulpa; B) Concentracin de Fe (gr./l) en la pulpa, C) Variacin en el pH en la pulpa, D) Variacin del
Potencial Electroqumico (Eh respecto al electrodo de platino) en la pulpa. Condiciones operacionales, de 5% slidos de
concentrado calcopiritico 17,5 % Cu, 35 lts totales de operacin, agitacin (300rpm) y efectuadas a temperaturas Mesoflicas,
Termoflicas Moderadas y Termoflicas Extremas
( 38, 49 y 69 C, respectivamente).
Oxidacin de Cu sulfurado (%), a partir de anlisis de slidos en columnas de biolixiviacin.

Datos obtenidos a partir de muestras slidas a 38, 64, 84 y 96 das de operacin mediante digestin cida de minerales
muestreados de pruebas realizadas a temperaturas de operacin de microorganismos Termfilos, Moderados y Mesfilos (70, 50
y 38 C respectivamente) de concentrado calcopirtico de flotacin aglomerado sobre matriz soporte de ripios de lixiviacin lavados o
bien sobre mineral de cuarzo lavado.
A)
B)
Concentracin de Cu (A) y Fe (B) (gr./l) disuelto en las soluciones de biolixiviacin recirculadas por cada columna, medio
mediante AAS.
Concentraciones obtenidas mediante AAS de soluciones de percolacin obtenidas de pruebas de biolixiviacin de concentrado
calcopirtico aglomerado sobre matriz soporte de ripios lavados de lixiviacin o sobre mineral lavado de cuarzo. Experiencias
realizadas a temperaturas de operacin caractersticas de microorganismos Termfilos, Moderados y Mesfilas (70, 50 o 38C
respectivamente).
A)
C)
B)
D)
Parmetros Cinticos de las solubilizacin de cobre y fierro en experiencias en columnas, en relacin a la variacin de pH y de Potencial
electroqumico Eh del medio lixiviante.
A) % de disolucin de Cu; B) % de disolucin de Fierro; C) Variacin del pH y D) Variacin de Potencial Electroqumico Eh en la solucin de
biolixiviacin de cada columna. Datos generados partir del anlisis de las soluciones de biolixiviacin de cada una de las columnas mediante AAS ( A
y B) y mediante medicin con electrodo de pH Ag/AgCl (para C) y electrodo de Platino ( para D). Muestras tomadas y o medidas de cada una de las
soluciones percoladas provenientes de las columnas cargadas con concentrados calcopirticos aglomerados en torno a una partcula soporte de
Ripios o de cuarzo y biolixiviadas a temperaturas propias de microorganismos Mesfilos, Termfilos Moderados y Termfilos Extremos
A)
B)
C)
D)
Resultados de proyecciones de la cinticas industriales de procesamiento de mineral a partir de los datos de consumos y de disolucin
de Cu por columna.
A) consumo de cido Total por columna; B) Proyeccin del consumo Neto de cido; C) Tasa (en % diario) de solubilizacin de cobre por columna.
D) Proyeccin tasa diaria de consumo de cido por tonelada de concentrado al da. Proyeccin de consumos Netos en plantas de SX-EW a tres
distintas temperaturas de operacin del proceso de biolixiviacin (Termo, Mod y Meso equivalentes a 70, 50 y 38C respectivamente),
concentrados aglomerados sobre matriz de ripios de lixiviacin lavados o sobre mineral lavado de cuarzo. Calculado a partir de valores de consumo
total de cido en pruebas de biolixiviacin menos los equivalentes cidos derivados del crdito estimado de cido generado en la etapa de electro
depositacin del ctodo de cobre. (1,54 kg H2SO4 por kg de ctodo electro depositado).
LIAP
Laboratorio de Investigacin Aplicada
Marcador
Mesfilos (MoBio)
Termfilos Moderados (MoBio)
Termfilos Extremos (MoBio)
Termfilos Extremos (Bao)
Termfilos Extremos (Wizard)
Marcador
Extraccin de DNA metagenmico
Consorcio de Cultivos Mesfilos (25-45C)

-
5 gr. Calcopirita
5 gr. Rougher
1 gr. Azufre
400 ml Medio Basal + 25g/L sulfato ferroso
33C
4 semanas
de cultivo
Cultivo precipitado durante 30 min.
Cultivo homogenizado
Se toma solo el sobrenadante
50 ml
por tubo
Se toma del
Homogenizado
50 ml
por tubo
4000 rpm 90 min

El pellet fue lavado
con agua cida ( X3)
El pellet fue lavado con

PBS-Tween 20 ( X3)
Centrifugar 13.000 rpm 3 min
Pellet para
Pellet para
Kit Wizard
Kit MoBio
4000 rpm 90 min

El pellet fue lavado
con agua cida ( X3)
El pellet fue lavado con

PBS-Tween 20 ( X3)
Centrifugar en Speed Vac para

secar el pellet, 40 min
0.5 gr para Kit MoBio
OBTENCIN DNA GENMICO
1500 pb
1000 pb
500 pb
1500 pb
1000 pb
500 pb
Acidithiobacillus ferrooxidans aportado por C. Jerez
Mesfilos (MoBio)
Termfilos Moderados (MoBio)
Termfilos Extremos (MoBio)
Termfilos Extremos (Bao)
Termfilos Extremos (Wizard)
Acidithiobacillus ferrooxidans (MoBio)
Una vez estandarizada las

condiciones de PCR se procedi a
amplificar el gen 16S rDNA para los
distintos consorcios bacterianos
mesfilos, termfilos moderado y
termfilos extremo.
Electroforesis en gel de agarosa 1%.
Marcador (100 pb)
Reaccin en cadena de la polimerasa

PCR
Visualizacin de los patrones de RFLP de productos de PCR del 16s

rDNA de mesfilos (M) y termfilos moderados (TM) extrados de
pruebas de tanque agitado y digeridos con cuatro enzimas distintas
MspI
Hae III
1
TM
TM
AluI
M
6
TM
7
HhaI
M
8
TM
9
Leader (bp)
50
10
100
11
Gel de acrilamida teido con plata. Lneas (1) leader 50bp, 2) HaeIII mesfilo, 3) HaeIII t. moderado, 4) MspI mesfilo,
5) MspI t. moderado, 6) AluI mesfilo, 7) AluI t. moderado, 8) HhaI mesfilo, 9) HhaI t. moderado, 10) leader 50bp, 11)
leader 100bp. En crculos rojos se muestran las bandas que parecieran ser compartidas entre los distintos
tratamientos (mesfilas y termfilos moderados).
Estudio de las comunidades biolixiviantes

Clonamiento y secuenciacin.
Muestra de algunos de los patrones de RFLP

digeridos con HaeIII de muestras de los 16S rDNA
clonadas.
Los patrones de RFLP obtenidos fueron utilizados para determinar el factor de cobertura de la biblioteca de
clones creada. Patrn leader de 50 pb en primera y ltima banda , imgenes muestran el nmero de placa de petri
chequeada y nmero del clon de la respectiva placa , se incorpora letra que adjudica el patrn de corte a un ribotipo
especfico de acuerdo a la placa chequeada.
TABLA VI:
Caracterizacin de las secuencias de 16S rRNA clonales de acuerdo a su similitud
con las secuencias de bases de datos para bacterias de NCBI.
INOCULOS
Tratamiento
T_RFLP in silico
N Clon
Organismo Relacionado
% Identidad
N Acceso
Hae III
HhaI
AluI
Inoculo
Meso
2-.28
Sulfobacillus disulfidooxidans
99,5
U34974
152
225
232
Inoculo
Meso
2-.42
99,5
DQ909079
308
262
289
Inoculo
Meso
2-.43
Sulfobacillus thermosulfidooxidans
93,1
AB089844
137
71
239
Inoculo
Meso
2-.8
99,5
CP001132
170
206
275
Inoculo
Meso
2-.82
Uncultured Sulfobacillus
95,7
EF612379
217
149
318
Inoculo
Meso
2-.92
99,5
CP001219
251
203
232
Inoculo
Meso
5-.17
96,1
DQ529309
169
204
276
Inoculo
Meso
5-.2
99,2
CP001219
251
203
232
Inoculo
Meso
5-.44
95,8
DQ676505
251
203
232
Inoculo
T. Ext
9-.39
99,4
AB089845
130
140
178
Inoculo
T. Ext
11-.17
99,8
AB089844
130
140
177
Anlisis comparativo de secuencias de 16SrDNA obtenida de los clones mediante secuenciacin de los 16SrDNA amplificados
a partir de muestras de DNA genmico de pulpas de experiencias de lixiviacin en matraces, 5% p/v concentrado
calcopirtico.
TABLA VI:
Caracterizacin de las secuencias de 16S rRNA clonales de acuerdo a su similitud
con las secuencias de bases de datos para bacterias de NCBI.
TANQUE AGITADO
Tratamiento
T_RFLP in silico
N Clon
% Id
N Acceso
Hae III
HhaI
AluI
Batch
Meso
30A
Acidithiobacillus caldus
98,2
DQ470072
215
563
231
Batch
Meso
33A
Leptospirillum ferriphilum
96,4
DQ 534052
190
376
218
Batch
Meso
34A
Thermophilic bacterium
97
EF199989
216
563
230
Batch
Meso
35A
Uncultured Leptospirillum
88,7
2,43E-120
FJ890907
143
328
171
Batch
Mod
15B
93,7
DQ 534052
145
329
172
Batch
Mod
40B
95,4
EU499919
130
140
177
Batch
Mod
50B
Curvibacter lanceolatus
95,6
GU368379
220
207
368
Batch
Mod
19B
Cupriavidus metallidurans
98,1
CP000352
203
70
157
Batch
T.Ext
46C
Cupriavidus metallidurans
98,5
CP000353
203
70
157
Batch
T.Ext
56C
96,7
NR_028818
127
137
202
Batch
T.Ext
58C
96,9
DQ534052
190
563
230
Batch
T.Ext
59C
98,1
AF356830
197
328
224
Batch
T.Ext
68C
Acidithiobacillus caldus
97,7
EU499920
216
503
230
Anlisis comparativo de secuencias de 16SrDNA obtenida de los clones mediante secuenciacin de los 16SrDNA
amplificados a partir de muestras de DNA genmico de pulpas de experiencias de lixiviacin en tanques agitados 5% p/v
concentrado calcopirtico.
TABLA VI:
Caracterizacin de las secuencias de 16S rRNA clonales de acuerdo a su similitud con las
secuencias de bases de datos para bacterias de NCBI.
COLUMNAS CONCENTRADO CALCOPIRITICO
Tratamiento
T_RFLP in silico
N Clon
% Identidad
N Acceso
Hae III
HhaI
AluI
Ripio
Meso
1-.29
97,5
FN400770
251
203
232
Ripio
Meso
1-.33
100
DQ676505
251
203
232
Ripio
Meso
1-.38
99,9
AM502931
251
203
232
Ripio
Meso
4-.24
99,5
CP001132
170
206
275
Ripio
Meso
4-.39
99,9
CP001219
251
203
232
Ripio
Mod
14-.16
99,4
CP001132
170
206
275
Ripio
Mod
14-.23
99,4
DQ909079
308
262
289
Ripio
Mod
14-.65
98,8
CP001219
251
203
232
Ripio
Mod
m75
99,8
DQ676505
251
203
232
Ripio
Mod
m77
Acidithiobacillus albertensis
99,3
NR_028982
251
203
274
Ripio
Mod
m78
100
AM502931
232
186
212
Cuarzo
Mod
3-.40
Acidithiobacillus thiooxidans
97,2
EU084706
226
181
207
Cuarzo
Mod
3-.41
Acidithiobacillus thiooxidans
99,8
EU084705
226
180
207
Cuarzo
Mod
8-.11
99,6
CP001219
251
203
232
Cuarzo
Mod
8-.41
Acidithiobacillus albertensis
99,9
NR_028982
251
203
232
Ripio
T. Ext
12-.49
97,7
AM502931
251
203
232
Ripio
T. Ext
12-.64
99,6
CP001132
170
206
275
Anlisis comparativo de secuencias de 16SrDNA obtenida de los clones mediante secuenciacin de los 16SrDNA
amplificados a partir de muestras de DNA genmico de slidos de experiencias de lixiviacin en Columnas 20 % p/p
concentrado calcopirtico.
T-RFLP
Anlisis de los polimorfismos de los fragmentos
Terminales por electroforesis capilar
Estudio de las comunidades biolixiviantes
2.- Amplificacin
por PCR de genes
16S rRNA
1.- Toma de muestras y extraccin de DNA

3.- Digestin con enzimas de
restriccin
5.- Ploteo de resultados
6.-Asignacin de acuerdo a TRFLP in

Silico.
4.- secuenciacin y deteccin de

fragmentos marcados
(a)
A. ferrooxidans 251 nt..
A. ferrooxidans sp 170.
L. ferriphillum 190 nt.
A. tiooxidans 226 nt.
(d)
(b)
(e)
S. disulfooxidans 230 nt.
(g)
(c)
A. ferrooxidans 232 nt.
(f)
A. albertensis 274 nt.
(h)
(i)
C. matalidurans 157. nt
Representacin de los perfiles de T-RFLP de las secuencias de 16S rDNA extradas de los consorcios crecidos en las
pruebas de biolixiviacin en columnas aglomeradas en torno a Ripios de biolixiviacin como roca soporte.
Abundancia relativa (%) de T-RFLP de 16S rDNA obtenidos utilizando las endonucleasas HaeIII (a,d,g), Hha I (b,e,h) y Alu I ( c,f,i).
Perfiles de T-RFLP obtenidos de experiencias en condiciones de operacin Mesoflicas (a,b,c) , Termoflicas Moderadas (d,e,f) y
Termoflicas Extremas ( g,h,i). Flechas rojas corresponden a asignacin de Grupo segn TRFLP in silico con cada endonucleasa
estudiara y fueron obtenidos mediante secuenciacin de 16S rDNA clonales.
(a)
(b)

(c)
(d)
A. ferrooxidans 170 nt..
S. termosulfooxidans 130 nt.
L. Ferriphillum 145 nt.
(e)
L. Ferriphillum 190 nt.
C. metalidurans 203 nt.
(f)
A. caldus 215 nt.
Representacin de los perfiles de T-RFLP de las secuencias de 16S rDNA extradas de los consorcios
crecidos en las pruebas de biolixiviacin.
Abundancia relativa (%) de T-RFLP de 16S rDNA obtenidas de Tanques agitados (a,c,e) y de columnas aglomeradas en
torno a Ripios de biolixiviacin como roca soporte (b,d,f). Perfiles de T-RFLP obtenidos utilizando endonucleasa Hae III.
Perfiles de T-RFLP obtenidos a partir de experiencias en condiciones de operacin Mesoflicas (a,b) , Termoflicas
Moderadas (c,d,) y Termoflicas Extremas ( e,f). Flechas rojas corresponden a asignacin segn TRFLP in silico para HaeIII
obtenidos mediante secuenciacin de 16S rDNA clonales.
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
Imgenes (SEM) Muestras de cuarzo recubierto a 90 das de operacin.

Micrografa electrnica de barrido (SEM) de la superficie de cuarzo recubierto en concentrado calcopirtico al final del periodo
de biolixiviacin en columna (90 das). Imgenes obtenidas de los biofilms a distinta magnificacin ( de acuerdo a escala en
cada imagen) generados en condiciones Mesoflicas 38 ( a,d), Termoflicas Moderadas 50 (b,e) y Termoflicas Extremas 69
C (c,f).
Recapitulando
Las recuperaciones de Cobre estn relacionadas con la
temperatura de operacin de los reactores sean estos de tanque
agitado o de concentrados aglomerados sobre distintas matrices
minerales.
En las pruebas de biolixiviacin en columna a temperaturas
hipertermoflicas las recuperaciones de cobre se correlacionan con
potenciales electroqumicos moderados en relacin a los
alcanzados en condiciones mesoflicas y termoflicas moderadas.
Las diferentes temperaturas de operacin pueden alterar
significativamente tanto la riqueza de especies como su
abundancia pero no causan una fuerte alteracin en la estructura
de las comunidades bacterianas presentes, sobretodo al tratarse
de experiencias en columnas.
Recapitulando
Independientemente de las temperaturas de operacin las
comunidades que provienen de experiencias en columnas tienden
a mantenerse estables, pero las comunidades provenientes de
experiencias en tanques agitados y matraces presentan fuertes
cambios en su composicin dependiendo de la temperatura de
operacin.
Las comunidades estaban mayormente dominadas por bacterias
del genero Acidithibacillus y Sulfobacillus no importando la
temperatura de operacin aplicada.
Los compuestos de iones frricos precipitados sobre las partculas

de mineral en condiciones hipertermoflicas y termoflicas
moderadas actan como estructurador de los biofilms efecto que
no se aprecia al trabajar en condiciones mesoflicas.
pH 1,5
Temperatura 70C
H+
O2
H2SO4
SO4=
Fe2(SO4)3
+ H2SO4
O2
H+
NAD(P)H
H+
NAD(P)
FeSO4+ CuSO4 + S
O2
Fe SO4
H2O
ATP
H+
Fe3+
ADP + Pi
O2
SO4
pH 7
O2
O2
O2
CuFeS2
pH 7
Muchas Gracias.
Dr. Juan Rivadeneira H

LIAP SpA.
jrivadeneira@liap.cl

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Microorganismos descritos en procesos de Biolixiviacin

Mina Subterranea y a rajo

Buena ubicacin Geogrfica

Modelo propuesto de ataque directo con oxidacin de RISCs y Fe

como aceptor de electrones en Acidithiobacillus

Los metales preciosos pueden recuperarse si estn presentes.

Cubierta de concentrado (0.5

Ripio de soporte +4mm 25 mm

Espacios libres permiten alta

La energa es generada por

Balance trmico GEOCOAT

Perdida de calor y calor en soluciones de riego

Bio prospeccin de Inculos

Prelixiviacin cido/frrica en tanque

Anlisis mineralgicos concentrado calcopirtico.

Composicin mineralgica 100% base minerales sulfurados de cobre

Asociaciones mineralgicas de sulfurados de cobre (por especies)

Asociaciones mineralgicas de sulfurados de cobre (% Cu)

Grado de liberacin de cobre

Caracterizacin qumica de los concentrados

B) pre-lixiviados mediante agitacin cida Frrica (10grL/Fe

Vista panormica del deposito de ripios de biolixiviacin dispuesto en Planta Biocobre.

Anlisis qumicos de la fraccin utilizada de ripios de

Determinacin mediante tcnica de Digestin cida y determinacin de minerales mediante

Imgenes de muestras de los minerales utilizados en pruebas de biolixiviacin.

Inoculacin de las experiencias

La inoculacin de las experiencias se realizo en dos etapas:

1. Pruebas de lixiviacin Batch:

Oxidacin de Cu sulfurado (%), a partir de anlisis de slidos en columnas de biolixiviacin.

Termfilos Moderados (MoBio)

Termfilos Extremos (MoBio)

Termfilos Extremos (Bao)

Termfilos Extremos (Wizard)

Extraccin de DNA metagenmico

Consorcio de Cultivos Mesfilos (25-45C)

Cultivo precipitado durante 30 min.

Se toma solo el sobrenadante

4000 rpm 90 min

El pellet fue lavado con

Centrifugar 13.000 rpm 3 min

4000 rpm 90 min

El pellet fue lavado con

Centrifugar en Speed Vac para

0.5 gr para Kit MoBio

OBTENCIN DNA GENMICO

Acidithiobacillus ferrooxidans aportado por C. Jerez

Termfilos Moderados (MoBio)

Termfilos Extremos (MoBio)

Termfilos Extremos (Bao)

Termfilos Extremos (Wizard)

Acidithiobacillus ferrooxidans (MoBio)

Una vez estandarizada las

Marcador (100 pb)

Reaccin en cadena de la polimerasa