AISLAMIENTO DE ADN

1.- introduccin:
El DNA es una macromolcula compleja compuesta por dos cadenas o hlices
que se entrelazan entre si formando una doble hlice. Cada cadena esta formada
por millones de eslabones llamados nucletidos o bases nitrogenadas ( son 4 A-
T, G-C)
El acido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN, es un tipo de
cido nuclecos, una macromolcula que forma parte de todas las clulas.
Contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los
organismos vivos conocidos y de algunos virus, siendo el responsable de su
transmisin hereditaria
2.- OBJETIVO:
Aislar el DNA cromosmico
3.-FUNDAMENTO:
Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir,
un polinucletido. Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades
simples conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones. En
el ADN, cada vagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado
por un azcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser
adeninaA, timinaT, citosinaC o guaninaG) y un grupo fosfato que acta
como enganche de cada vagn con el siguiente. Lo que distingue a un vagn
(nucletido) de otro es, entonces, la base nitrogenada, y por ello la secuencia del
ADN se especifica nombrando slo la secuencia de sus bases. La disposicin
secuencial de estas cuatro bases a lo largo de la cadena (el ordenamiento de los
cuatro tipos de vagones a lo largo de todo el tren) es la que codifica la informacin
gentica: por ejemplo, una secuencia de ADN puede ser ATGCTAGATCGC... En
los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos,
en la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas
puentes de hidrgeno.
Para que la informacin que contiene el ADN pueda ser utilizada por la maquinaria
celular, debe copiarse en primer lugar en unos trenes de nucletidos, ms cortos y
con unas unidades diferentes, llamados ARN. Las molculas de ARN se copian
exactamente del ADN mediante un proceso denominado transcripcin. Una vez
procesadas en el ncleo celular, las molculas de ARN pueden salir al citoplasma
para su utilizacin posterior. La informacin contenida en el ARN se interpreta
usando el cdigo gentico, que especifica la secuencia de los aminocidos de las
protenas, segn una correspondencia de un triplete de nucletidos (codn) para
cada aminocido. Esto es, la informacin gentica (esencialmente: qu protenas
se van a producir en cada momento del ciclo de vida de una clula) se halla
codificada en las secuencias de nucletidos del ADN y debe traducirse para poder
ser empleada. Tal traduccin se realiza empleando el cdigo gentico a modo de
diccionario. El diccionario "secuencia de nucletido-secuencia de aminocidos"
permite el ensamblado de largas cadenas de aminocidos (las protenas) en el
citoplasma de la clula. Por ejemplo, el caso anterior ATGCTAGATCGC... la ARN
polimerasa comenzara a transcribir una molcula de ARN que se leera AUG-
CUA-GAU-CGC-... empleando como molde la cadena complementaria del ADN
antes citado (sera pues TAC-GAT-CTA-CGC-...); el ARN resultante, utilizando el
cdigo gentico, se traducira como la secuencia de aminocidos metionina-
leucina-cido asprtico-arginina-...
Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, fsica y funcional
de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte que se
transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cundo y dnde deben
expresarse. La informacin contenida en los genes (gentica) se emplea para
generar ARN y protenas, que son los componentes bsicos de las clulas, los
"ladrillos" que se utilizan para la construccin de los orgnulos celulares, entre
otras funciones.
Dentro de las clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas
cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la clula se
divida. Los organismos eucariotas (por ejemplo, animales, plantas, y hongos)
almacenan la inmensa mayora de su ADN dentro del ncleo celular y una mnima
parte en los elementos celulares llamados mitocondrias, y en los plastos, en caso
de tenerlos; los organismos procariotas (bacterias y arqueas) lo almacenan en el
citoplasma de la clula, y, por ltimo, los virus ADN lo hacen en el interior de la
cpsida de naturaleza proteica. Existen multitud de protenas, como por ejemplo
las histonas y los factores de transcripcin, que se unen al ADN dotndolo de una
estructura tridimensional determinada y regulando su expresin. Los factores de
transcripcin reconocen secuencias reguladoras del ADN y especifican la pauta de
transcripcin de los genes. El material gentico completo de una dotacin
cromosmica se denomina genoma y, con pequeas variaciones, es caracterstico
de cada especie.

4.- PROCEDIMIENTO
MATERIAL:
y Gradilla con 2 tubos de ensaye
y Pipeta de 1 y 5 ml.
y SDS (lauril sulfato de sodio) 1%
y Gotas de EDTA como anticoagulante
y Sangre humana .
DESARROLLO DE LA PRACTICA :
METODO 2
1.- tomar una muestra de 3 a 5 ml. De sangre y ponerla en un tubo limpio con dos
gotas de EDTA centrifugar 5 min. a 300 rpm para separar el plasma de los
elementos formes de la sangre.
2.- separar con una pipeta de Pasteur la capa blanca (leucocitos) entre el plasme y
los eritrocitos. Llevar las clulas blancas a otro tuvo de centrifuga y agregar 5 ml.
De agua. Tapar el tubo con un tapon de hule e invertir el tubo 3 veces.
3.- centrifuga 10 ml. A 5000 rpm y descartar sobrenadante
4.- al sedimento ( pequeo botn blanco ) se le agrega 5 ml. De triton X-100 al 1%
( agitar suavemente teniendo cuidado constante, durante unos minutos hasta
resuspender perfectamente el sedimento.
5.- centrifugar durante 10 min. a 5000 rpm. Descartar el sobrenadante .
6.- al sedimento se le agrega 5ml. De SDS al 1% . vaciar en un matraz, y agitar
suavemente durante unos minutos mas.
7.- agregar 2.5 ml. De NaCl 0.1 M agitar y dejar reposar unos min.
8.- se le agrega 5 ml. De etanol frio. Agitar muy suavemente y observar como se
presipitan los filamentos de DNA.

CALCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS.

5.- INTERPRETACION Y CONCLUSIONES:






6.- ANEXOS
1.- MENSIONE COMO ESTA ORGANIZADA LA CROMATINA EN LAS CELULAS
EUCARIOTICAS.
Las unidades bsicas de la cromatina son los nucleosomas. stos se encuentran
formados por aproximadamente 146 pares de bases de longitud (el nmero
depende del organismo), asociados a un complejo especfico de 8 histonas
nucleosmicas (octmero de histonas). Cada partcula tiene una forma de disco,
con un dimetro de 11 nm y contiene dos copias de cada una de las 4 histonas
H3, H4, H2A y H2B. Este octmero forma un ncleo proteico alrededor del que se
enrolla la hlice de ADN (da aproximadamente 1,8 vueltas). Entre cada una de las
asociaciones de ADN e histonas existe un ADN libre llamado ADN "espaciador",
de longitud variable entre 0 y 80 pares de nucletidos que garantiza flexibilidad a
la fibra de cromatina. Este tipo de organizacin, permite un primer paso de
compactacin del material gentico, y da lugar a una estructura parecida a un
"collar de cuentas".

2.- DONDE SE ENCUENTRA EL DNA EN LAS BACTERIAS Y CUANTAS
BARRERAS HAY QUE ROMPER PARA LIBERARLO? La mayora de las bacterias
tienen un nico cromosoma circular y desnuda y se encuentra en mitocondrias y cloroplastos.
Las bacterias pueden tener tambin plsmidos, pequeas molculas de ADN extra-cromosmico
que pueden contener genes responsables de la resistencia a los antibiticos o factores de
virulencia.
3.- cual es la fuente DNA en la sangre?

4.- como acta el detergente? El detergente acta con el etanol y hace que se
desfibren las cadenas del DNA