TERAPIA

GÉNICA
 Genómica estudia el funcionamiento, contenido,
evolución y origen de los genomas.

Un genoma es el número total de cromosomas: todo el

DNA (acido desoxirribonucleico) de un organismo.

Aspecto
Funcionamiento
DNA genes proteínas Metabolismo
enfermedades
 DNA Nuclear DNA
mitocondrial
Tamaño 6.6 Mb 16 Kb

Tipo de DNA Lineal doble Circular, doble

hebra hebra
Numero de cromosomas 23 pares Uno
multicopiado
Presencia de nucleosomas Si No

DNA codificante 3-5% 93%

DNA repetitivo ≈ 30% Prácticamente

nulo
Numero de genes 65-100 mil 37

Presencia de intrones Si No
 Máxima diversidad
(interespecie)

Diversidad genética

Mínima diversidad
(intraespecie)
 Enfermedades
humanas

Exógenas Genéticas Mixtas

• Intoxicaciones • Metabólicas • Labio leporino

• Parasitosis • Cáncer • Espina bífida
• Infecciones • Cromosómicas • Enfermedades
• Nutricionales • Inmunológicas coronarias
 La terapia génica consiste en la inserción de
copias funcionales de genes, ausentes en el
genoma de un individuo para tratar una
enfermedad hereditaria o adquirida

•Se realiza en las células y tejidos

•Induce la producción de proteínas funcionales
•Ensayos clínicos controlados
Aplicaciones

Terapia de enfermedades metabólicas

Terapia de enfermedades adquiridas

Terapia de enfermedades autoinmunes

CLONACION

1.Obtención del gen

2.Formación de ADN
recombinante

3.Introducción del ADN

recombinante

4.Multiplicación

5.Detección de células
recombinantes
 Las enzimas de restricción reconocen y cortan el DNA

Tipo I cortan de forma inespecífica en un punto que dista de la secuencia de

reconocimiento alrededor de 1000 pares de bases.
Tipo II son las más utilizadas. No requieren ATP y cortan específicamente en
la secuencia de reconocimiento.
Tipo III, aunque también es bastante inespecífica, corta en un punto más
cercano de la secuencia que las del tipo I, a unos 25pb.

• Se encuentran en bacterias
• Cortan el DNA foráneo
• requieren Mg
• Actúan a un PH entre 7.2 y
7.8.
• reconocen secuencias
palindrómicas o invertidas
 Enzimas de restricción

Eco RI Escherichia coli cepa RY13

BamHI Bacillus amyloliquefaciens

Hae III Haemophilus aegyptus

 Vectores de clonación
Moléculas transportadoras que transfieren y replican fragmentos de
DNA.

•Plásmidos con origen de replicación en

bacterias.
•Plásmidos con origen de replicación en
levaduras.
•Virus y bacteriófagos.
• Cósmidos y fagémidos.
•Transposones
 TIPOS DE VECTORES

Viral No viral
adenovirus
liposomas
Herpes
retro
transferencia de
genes mediante
receptores

inyecciones de DNA
desnudo

bombardeo con
partículas de oro
 El DNA o RNA del vector
es cortado por enzimas de restricción con el fin
de eliminar zonas patógenas e insertar en el lugar de estas el
gen de interés médico
- ARN de cadena sencilla como genoma viral
- tres genes que codifican:
- gag, el grupo específico de antígenos, proteína de la cápside y de
la matriz
- pol , la transcriptasa inversa, proteasa, integrasa.
- env , proteínas de la envoltura del virus
- LTRs promotor viral
- El genoma también incluye secuencias:
empaquetamiento del ARN vírico
corte y empalme entre donador y aceptor
ARNs mensajeros envueltos de forma separada.

-desventaja: solo se integran en células que se

replican
- ventaja: genes que se integran X retrovirus poseen
expresión a largo plazo.
 Virus no desarrollados que contienen ADN lineal de cadena
doble
 El ciclo de infección productiva comprende dos fases, la
primera, la más importante para la síntesis del ADN, la
segunda, durante la cual las proteínas estructurales y el ADN
vírico son ensamblados en viriones.
 cuatro unidades transcripcionales, cada una con su promotor,
codifican ARN mensajero empalmados .
 La transcripción es secuencial en la que los genes E1 se
expresan pronto, y en parte activan la transcripción de otros
genes tempranos .
-E1 rescata células de la quiescencia, dejándolas capaces de
sintetizar ADN vírico y proteínas, usando
predominantemente las funciones del código del hospedador.
- E2 : replicación del ADN.
- E3 : detener los mecanismos de defensa de la célula
hospedadora:
 anular los efectos de (TNF) en células infectadas

 bloquear el transporte de MHC I, reduce la presentación

de péptidos víricos.
- E4 regula fase primaria y secundaria del ciclo de vida
vírico.

por su baja eficiencia es necesario utilizar virus a títulos muy altos que podrían
desencadenar respuesta inflamatoria inespecífica.
la expresión de la proteína es limitada a solo semanas o meses por la falta de
integración del DNA, por esto se requiere readministración que puede
desencadenar respuesta inmune y limitar su eficiencia.
 LIPOSOMA: funcionamiento en base a propiedades de carga eléctrica.
-ADN a insertar (-) X fostatos de la doble hélice
-lípidos catiónicos o liposoma (vector) (+)
-célula (-) X ácido siálico presente en su superficie

lípidos (+) + ADN (-)

Liposoma con ADN (+) + membrana celular(-)

cel
Penetra ADN dentro del liposoma, el vector se une
a los fosfolípidos de membrana y se libera el ADN
Por lo tanto el DNA evita la degradación por lisosomas celulares
 TRANSFERENCIA DE GENES MEDIANTE RECEPTORES: En este
caso al ADN a insertar se le adiciona un ligante (moléculas
reconocidas por receptores específicos/tipo celular elegido) y un
fusiógeno para evitar su degradación por el lisosoma celular.

ADN + ligantes
L R célula

ADN penetra X endocitosis

unión endosoma + lisosoma evitada porL fusiógenos

R

ADN entra al núcleo durante la división celular

Se emplea en el tratamiento de la hipercolesterolemia.

A diferencia del liposoma va dirigido contra una célula específica por
medio del reconocimiento ligando/receptor.
 INYECCIONES DE DNA DESNUDO: Por este método el ADN o
ARN puro circular y cerrado covalentemente es directamente
inyectado dentro del tejido deseado.

 BOMBARDEO DE PARTÍCULAS DE ORO:

1º plásmido de ADN revestido gotas de oro o tungsteno.
2º Estas partículas son aceleradas por una descarga eléctrica y
son " disparadas" hacia el tejido.

Aplicación: inyección directa en el músculo, del gen que codifica la

proteína de matriz del virus influenza A para el Tratamiento en
el ratón.
Una ribozima es una molécula de RNA con capacidad catalítica. El
sustrato de esta enzima es una molécula de RNA.

Participan en el silenciamiento génico

Permiten manipular el RNA fácilmente
Se está estudiando la posibilidad de utilizar las ribozimas contra el
virus del VIH,
los virus herpéticos
y el virus del mosaico del tabaco.
 Sentido

hebra plus o hebra +

hebra negativa o hebra -

 La introducción de un gen codificante para un ARNm
antisentido es una técnica usada para bloquear la
expresión de un gen de interés.

Algunos tipos estructurales antisentidos son

experimentales, ya que se usan como terapia antisentido
, y en algunos casos una ellas ha sido aprobada para
uso en humanos.
• Útil cuando la causa de la enfermedad es una única proteína
• El objetivo es suprimir la producción de esa proteína patógena
• Las moléculas antisentido están diseñadas para reconocer y unirse
específicamente al ARN mensajero (ARNm)
• Gracias al bloqueo que realizan, la producción de la proteína se
detiene
 ANALISIS MOLECULAR

• Identificación de patógenos
• Diagnostico de enfermedades
• Evolución y filogenia
• Estudios antropológicos
• Proyecto del genoma humano
• Terapia génica