*TEMA 14 HISTOQUMICA

1. HISTOQUIMICA DE LOS HIDRATOS DE CARBONO

INTRODUCCIN
La histoqumica es la aplicacin de reacciones qumicas y bioqumicas en la tcnica histolgica, con el fin de
localizar y determinar de manera cientfica ciertas sustancias o su actividad.
En todas estas reacciones o bien se tie la sustancia que buscamos o los colorantes reaccionan qumicamente
con ella, como es el caso del PAS.
Los hidratos de carbono o glcidos son polialcoholes oxidados (polihidroxicetonas o polialdehidos). Los
polisacridos son glcidos formados por la unin de muchas molculas de monosacridos (mas de 10). Entre
los polisacridos adems de los polisacridos simples como el glucgeno destacan los polisacridos
complejos.
Los polisacridos complejos se dividen en 3 grandes grupos:
Mucopolisacaridos que pueden dividirse en :
Mucopolisacaridos neutros
Mucopolisacaridos cidos
Mucoprotenas
Mucolpidos.
REACCIONES HISTOQUMICAS BASADAS EN LA DEMOSTRACIN DE GRUPOS
CARBONILO FORMADOS SOBRE LOS HIDRATOS DE CARBONO POR OXIDACIN
PREVIA.

TCNICA DEL PAS (cido Peridico Schiff)
Consiste en oxidar los tejidos mediante el cido peridico (HIO4) para incrementar el nmero de
grupos carbonilo (aldehdo o cetona) presentes en ellos, de forma que puedan ser demostrados
posteriormente mediante reactivo de Schiff.
Los hidratos de carbono contienen grupos carbonilos relativamente aislados, en una proporcin
aproximada de uno por molcula de monosacrido. Precisamente por ello es necesario oxidarlos con
el fin de incrementar dichos grupos, que solo pueden ser detectados por el reactivo de Schiff si se
encuentran situados en carbonos contiguos y delimitados por grupos alcohlicos o amino.
Para los grupos aldehidos que aparecen en posicin 1,2 glicol estas condiciones se cumplen
exclusivamente tras la oxidacin de los correspondientes radicales hidroxilo.
Procedimiento Tcnico:
Fijacin:
Formol al 4 % o Lquido de Carnoy o Bouin.
cido Peridico0.5 % p/v.
Reactivo de Schiff:
1
Fucsina bsica (CI: 42510) 1g.
Agua destilada... 200 ml.
Disolver la fucsina en 200 ml de agua (d) hirviendo.
Dejar enfriar hasta aproximadamente 50 C. y filtrar
Posteriormente agregar 20 ml de HCl 1N. Despus enfriar hasta 25 C y aadir 1g de Bisulfito sdico
o Metabisulfito potsico (sdico).
Mantener en la oscuridad. El liquido tarda unos 2 das o a veces 24h en tornarse de color amarillo que
indica que est listo para su uso.
Aadir 2g de carbn activado, mezclar y filtrar hasta que desaparezca el color.
La solucin debe conservarse en el refrigerado protegido de la luz.
Bao de cido Sulfuroso o Agua sulfurosa:
cido Clorhdrico (HCl) 1N 5 ml.
Metabisulfito sdico 10 %... 6 ml.
Agua (d)... 100 ml.
Colorante de contraste: Hematoxilina, Orange G o Van Gieson.
Tcnica de Tincin:
Desparafinar e hidratar (xilol y decrecientes alcoholes)
cido peridico 0.5 % 5 min.
Lavar en agua (d).
Reactivo de Schiff.. 15 30 min.
Aclarar en 3 baos de agua sulfurosa 2 min. Cada uno.
Lavar en agua corriente
Colorante de contraste
Lavar con agua corriente.
Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
Material PAS +: rojo oscuro a magenta.
B. Compuestos PAS +
polisacridos simples: como el glucgeno y la celulosa.
Mucopolisacaridos neutros: se encuentran en el epitelio gstrico, en glndulas del duodeno y en
cpsulas bacterianas, tambin en intestino y estmago.

mucoprotenas como son algunas mucinas del tubo digestivo y del rbol respiratorio o bronquial,
tambin la tiroglobulina que est en el tiroides y la hormona estimulante.

Glucoprotenas del suero
Glucolpidos: como los ganglisidos y cerebros idos.
C. Compuestos PAS
Los mucopolisacaridos cidos no pueden ser oxidados por el cido peridico y por eso son PAS (ya
que no aparecen los grupos carbonilos)
2
D. Controles de la tcnica del PAS.
Es imprescindible realizar preparaciones testigo o de control que confirmen los resultados obtenidos,
para ello suelen ser muy tiles las tcnicas de bloqueo tales como las de bloqueo de grupos aldehdos
en general y las de acetilacin de grupos aldehdos situados en posicin 1,2 glicol.
Tcnica de bloqueo para aldehdos en general
Se realiza tratando los grupos aldehido presentes en el tejido, tras la oxidacin con cido peridico
con una solucin de cido actico saturado con Dimedona, entre 116 h. a 60 C.
Posteriormente se lava con agua destilada y se contina con PAS normal.
nicamente se teir el material PAS + formado a expensas de grupos aldehdos situados en posicin
1,2 glicol (los que proceden de glcidos).
Tcnica de bloqueo mediante acetilacin para grupos 1,2 glicol.
Se basa en la negatividad de la reaccin del PAS despus de la acetilacin de los grupos 1,2 glicol
presentes en los hidratos de carbono.
Este proceso es total o parcialmente reversible por saponificacin posterior mediante tratamiento con
hidrxido potsico. Si no se ha realizado el bloqueo de los aldehdos preexistentes debe realizarse un
control sin oxidar el tejido; todo lo coloreado en esta preparacin no sern grupos 1,2 glicol oxidados,
sino grupos aldehdos que ya estaban presentes antes de la oxidacin.
Despus se realiza el PAS oxidando y se compara los resultados de ambas preparaciones.
El 2 problema en la tcnica del PAS se plantea cuando se trata de diferenciar si los grupos aldehdos
aparecidos tras la oxidacin lo han hecho sobre grupos alcohlicos situados en posicin 1,2 glicol o si
los oxidados han sido grupos hidroxiaminos primarios o hidroxiaminos secundarios, compuestos no
presentes habitualmente en los hidratos de carbono que son PAS +.
Esta distincin pude realizarse mediante acetilacin reversible y saponificacin.
Acetilar consiste en introducir un grupo acetilo en un compuesto orgnico. El anhdrido actico es un
reactivo que tiene gran aplicacin para acetilar, de forma que con este reactivo se bloquean todos los
grupos alcohlicos en general existentes en el tejido.
CH3 C O C CH3 + ROH CH3 C O R
O O O
Este tipo de unin se llama ster.
Saponificar es romper un enlace tipo ester de forma que en condiciones idneas reaparece el grupo
qumico que exista antes de la acetilacin.
La acetilacin es totalmente reversible tras saponificacin para los grupos alcohlicos en posicin 1,2
glicol; totalmente irreversible para los grupos hidroxiaminos secundarios y moderadamente reversible
para los hidroxiamino primarios.
3
CH3 C O R + KOH CH3 COOK + R OH
O
Procedimiento tcnico de acetilacin saponificacin
Soluciones:
Mezcla para la acetilacin:
Anhdrido actico. 13 ml.
Piridina anhidra 20 ml.
mezcla para la saponificacin
Hidrxido potsico 1N en solucin acuosa o en alcohol 80 C.
Modo de operar:
Acetilacin:
Desparafinar e introducir los cortes en alcohol absoluto. Secarlos y
pasarlos a la piridina.

Tratar con la mezcla de acetilacin de 37 58 C durante un tiempo
que depende del material biolgico y suele estar de 30 min. a 24 h.

Pasamos los cortes a la piridina.
Alcohol absoluto.
Hidratar.
Acetilacin + saponificacin:
Se repite el proceso anterior.
Tratar con la disolucin de KOH durante 45 min.
Enjuagar con agua.
Lotes de preparaciones y resultados en los controles de la
tcnica del PAS.

Una preparacin a la que se le hace el PAS normal.
Otra preparacin del mismo corte. Se le hace un PAS sin oxidar para
detectar grupos aldehdos ya existentes o bien se hace un mtodo de
bloqueo especfico para dichos grupos.

Un lote de cortes que llevan acetilacin.
Un lote de cortes que llevan acetilacin + saponificacin.
Resultados:
Al acetilar desaparecen todos los grupos PAS+
menos los aldehdos ya existentes.

Al acetilar y saponificar los grupos alcohlicos en
posicin 1,2 glicol quedan como estaban, recuperan
la PAS positividada.

Los hidroxiamino primarios reaparecen mucho ms
dbilmente y los secundarios permanecen
bloqueados al ser la acetilacin irreversible.

1.3 TCNICAS PARA DETERMINAR
MUCOPOLISACRIDOS CIDOS.
Los mucopolisacaridos cidos son unos polisacridos que no tienen
grupos alcohlicos en posicin 1,2 glicol sino grupos cidos
4
carboxilos o sulfatados.
Las tcnicas para determinar mucopolisacridos cidos son
principalmente:
a) Azul Alcin
b) Reaccin Metacromtica
Tcnica del Azul Alcin: se ha comprobado que usando el azul
alcin en condiciones de pH en torno a 2,4 2,6 se colorean los
mucopolisacridos cidos sulfatados y los carboxlicos.

Si por el contrario se emplea a un pH muy bajo, en torno a 1, slo se
colorea los mucopolisacridos sulfatados, los carboxlicos no se
tien.
Si se sigue disminuyendo el pH hasta 0,5 se incrementa la
selectividad de la tincin y en este caso slo se tien los
mucopolisacridos fuertemente sulfatados.
Procedimiento Tcnico:
Fijacin: formol al 4%.
Soluciones:
Azul alcin a pH 2,5:
Azul alcin (C.I. 74240) 1 g.
cido Actico 3%.. 100 ml.
Azul alcin a pH 1:
Azul alcin. 1 g.
HCl 0,1 N 100 ml.
Azul alcin a pH 0,5 :
Azul alcin . 1 g.
HCl 0,5 N .. 100 ml.
Filtrar todas las soluciones antes de usar.
Las soluciones son estables durante 2 semanas
aproximadamente, como colorante de contraste se puede usar
una solucin de Rojo nuclear al 1 %.
Modo de operar:
Desparafinar e hidratar.
Tratar con la solucin deseada de azul alcin durante
30 min.

Si se us la solucin a pH 2,5, lavar con agua (d) ; si
se us cualquiera de los otros dos, secar slo con
papel de filtro.

Contrastar si se desea con rojo nuclear.
Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
5
Azul alcin a pH 2,5 los mucopolisacaridos
cidos (carboxilos y sulfatos) se tien de
azul.

Azul alcin a pH 1 slo se tien de azul los
mucopolisacaridos cidos sulfatados.

Azul alcin a pH 0,5 slo se tien de azul los
mucopolisacaridos cidos fuertemente
sulfatados.

b) Reaccin Metacromtica:
La metacromasia indica un cambio de color cuando un
colorante qumicamente puro tie selectivamente una
estructura tisular de color diferenteal de la solucin diluida
de colorante; se dice que ha ocurrido una reaccin
metacromtica.
La estructura responsable de este cambio se llama
cromotropa.
Para distinguirla de las restantes que se tien normalmente
(ortocromticas)
Sustancias cromotropas son los mucopolisacaridos cidos,
cidos nucleicos, lpidos de carcter cido y partculas de
slice.
La reaccin metacromtica presenta grandes variaciones ante
las ms pequeas modificaciones del medio donde
reproduce, por lo tanto la reaccin metacromtica es de
difcil interpretacin e incluso puede proporcionar resultados
contradictorios.
AZUL DE TOLUIDINA (tcnica de metacromasia que
mas se hace)
Fijacin:
En el caso de los mucopolisacaridos cidos pueden
emplearse tejidos fijados con alcohol, Bouin alcohlico e
incluso formol pero deben evitarse los fijados con agentes
oxidantes.
Soluciones:
Solucin Tampn de cido actico acetato a pH 4,2:
Acetato sdico. 2,7 g.
H2O (d). 100 ml.
cido actico 0,5 M.. 1,1 ml
H2O (d). 100 ml.
Solucin A. 30 ml.
6
Solucin B. 90 ml.
Solucin a 0,2 % de azul de toluidina en la solucin
tamponada anterior.

Solucin acuosa al 4 % de molibdato amnico.
Procedimiento Tcnico:
Desparafinar e hidratar.
Teir con azul de Toluidina. 2 5 min.
Lavar en la solucin tamponada.
Tratar los cortes en la solucin de molibdato.. 10
min.

Lavar con agua (d).
Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
Elementos de carcter metacromtico se van a ver de rojo a
prpura y el resto se va a ver azul.
Los baos en alcohol etlico inhiben la metacromasia por lo
que deben realizarse preparaciones testigo.
Una 1 preparacin se observa tras su paso por el agua ctica
antes de fijar con molibdato. Esto tiene por objeto evaluar el
efecto metacromtico inmediato en fase inestable. A
continuacin se sigue el procesamiento normal.
Otra preparacin no se deshidrata y se monta en un medio
acuoso para evitar el paso por alcohol etlico.
La ltima preparacin se confecciona normalmente, es decir,
deshidratando y montando por el mtodo habitual.
Comparando las 3 preparaciones se puede seguir la
evolucin del efecto metacromtico y la influencia del
procesamiento histolgico realizado sobre ellas.
Tambin se deben realizar controles de especificidad en la
reaccin metacromtica. Se usan para distinguir entre
mucopolisacaridos cidos carboxlicos y sulfatados.
Son principalmente de 2 tipos:
Variacin de pH: consiste en realizar la tincin entorno a un
pH de3, 5. en este caso la mayora de los mucopolisacaridos
cidos carboxlicos pierden su metacromasia mientras que
los sulfatados la conservan.

Haremos 2 lotes: el 1 se tien a pH 4,5 y el 2 a 3,5.
Los mucopolisacaridos cidos que siguen siendo
7
metacromticos en el 2 lote corresponden a
mucopolisacaridos cidos sulfatados ya que los carboxlicos
pierden su metacromasia.
Metilacin reversible: consiste en tratar un grupo de cortes
con una mezcla de alcohol metlico y cido clorhdrico, con
lo que se bloquean por metilacin los grupos cidos de los
mucopolisacaridos cidos.

Despus se realiza mutilacin seguida de saponificacin,
reapareciendo la metacromasia solamente en los
mucopolisacaridos cidos carboxlicos.
1.4 TCNICA PARA DIFERENCIAR
MUCOPOLISACRIDOS CIDOS, NEUTROS Y
GLICOPROTENAS. TCNICA DEL AZUL ALCIAN
PAS.
Procedimiento Tcnico:
Fijacin: formol al 4 %.
Soluciones:
Solucin azul alcin a pH 2,5.
Solucin cido peridico el 0,5 %.
Reactivo de Schiff.
Solucin de cido sulfuroso.
Colorante de contraste.
Tcnica:
Desparafinar e hidratar.
Solucin azul alcin a pH 2,5 30 min.
Lavar con agua (d)
cido peridico. 10 min.
Lavar con agua (d).
Reactivo de Schiff 15 30 min.
Aclarar con 3 baos de agua sulfurosa.. 2 min. Cada
uno.

Lavar con agua corriente ... 5 min.
Colorante de contraste (Hematoxilina Harris
normalmente).

Lavar, clorar y montar.
Resultados:
Mucopolisacaridos cidos: azul
Mucopolisacaridos neutros y glicoprotenas: rojo o rosa.
Resto: violeta (si se usa hematoxilina).
2. HISTOQUMICA DE PROTENAS Y ACIDOS
NUCLEICOS.
8
METODOS HISTOQUMICOS PARA LA
COLORACION DE PROTENAS.

Desde la introduccin de los mtodos inmunohistoqumicos
que permiten caracterizar antignicamente a la mayor parte
de las protenas, todos los mtodos de coloracin puramente
histoqumicas para protenas han perdido vigencia.
De forma genrica las tcnicas histoqumicas para colorear
protenas pueden clasificarse en 3 grupos:
Reacciones generales: pretenden colorear globalmente a las
protenas presentes en un tejido.

Reacciones de grupo: pretenden caracterizar, no la molcula
proteica globalmente sino un corto numero de grupos
reactivos especficos de dichas sustancias.

Reacciones especficas: para grupos qumicos particulares
propios de de determinados aminocidos, como por ejemplo
el grupo fenol.

Reacciones de grupo. Reaccin de Ninhidrina Schiff.
Se trata de establecer la naturaleza proteica de una
determinada sustancia a partir de la demostracin en ellas de
ciertos grupos qumicos que se encuentran de forma
exclusiva en los polipptidos.
La reaccin de la Ninhidrina Schiff se basa en un proceso
de desaminacin oxidativa de las cadenas polipeptdicas,
provocado por la ninhidrina por el cual los grupos amino son
sustituidos por grupos carbonilo.
Tras el proceso se realiza la determinacin de los carbonilos
neoformados mediante reactivo de Schiff (igual que la
tcnica del PAS).
TCNICA DE LA NINHIDRINA SCHIFF
Fijacin: alcohol o acetona. Formol
tamponado y lquido de Zenker, tambin se
puede utilizar pero en estos casos el tiempo
de incubacin con la ninhidrina debe ser
superior a 20 horas. Se pueden utilizar
secciones en congelacin o en parafina.

Soluciones:
Solucin de ninhidrina:
Ninhidrina.. 0.5 g.
Etanol absoluto............... 100 ml.
Solucin de reactivo de Schiff.
Procedimiento:
Desparafinar e hidratar.
Tratar los cortes con alcohol etlico al 70 %.
Incubar a 37 C con la solucin de ninhidrina entre 6 24
9
horas, (habitualmente toda la noche).
Lavar bien las secciones en agua corriente.
Teir con reactivo de Schiff.. 30 45 min.
Contrastar con hematoxilina de Harris.
Posteriormente lavar con agua corriente 10 min.
Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
Grupos amino (NH2): rojo rosa prpura.
Controles:
La ninhidrina solo oxida los grupos amino cuando estn
prximos a un radical metilo o a un radical cido.
Adems es posible la aparicin de falsos positivos en casos
de preexistencia de grupos aldehdos en el tejido (R C =
O), por ello debe incluirse siempre un lote de preparaciones
sin tratamiento con la ninhidrina, es decir, que se traten slo
con el reactivo de Schiff.
METODOS HISTOQUMICOS PARA LA
DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS.

Los cidos nucleicos estn compuestos por largas cadenas de
unidades llamadas nucletidos, enlazadas por uniones
covalentes.
En general los nucletidos estn formadas por:
cido fosfrico, implicado en el mecanismo
fisicoquimico de coloracin por el cual se tien
intensamente con colorante bsicos como le
hematoxilina.

Una pentosa (5 carbonos), que puede ser ribosa
(ARN) o desoxiribosa (ADN).

Bases nitrogenadas ( ADN : A,C,T,G), ( ARN:
A,C,G,U)

En condiciones normales los cidos nucleicos se conjugan
con protenas bsicas para formar nucleoprotenas, por ello la
realizacin de una hidrlisis cida permite separar el
componente proteico y as poder demostrar la presencia de
cidos nucleicos (los cidos nucleicos se enrollan sobre las
protenas y la hidrlisis es para eliminar las protenas).
Tcnicas que permiten separar el ADN de otras
estructuras. Reaccin de Feulgen.

Estas tcnicas se utilizan para visualizar el ncleo, el proceso
de tincin se realiza en 2 fases:
1 Fase. Una hidrlisis cida del ADN: con esto se pretende
mediante la actuacin del cido clorhdrico romper la
estructura del ADN por el lugar en que la pentosa se une a la
base nitrogenada, de forma que sobre cada molcula de
10
azcar (pentosa) reaparece un grupo carbonilo. Estos grupos
se encuentran situados a una distancia entre 1 1.1 nm.
2 Fase. Demostracin de los grupos carbonilos: mediante
reactivo de Schiff (color rosa ADN slo). El ARN no puede
ser detectado por el reactivo de Schiff tras la realizacin de la
hidrlisis cida, puesto que la distancia entre grupos
carbonilo es menor de 1 nm, y por tanto no se produce la
reaccin con el reactivo de Schiff.
Problemas generales de esta tcnica:
Hidrlisis excesiva: el cido clorhdrico es un cido fuerte, si
se prolonga excesivamente el tiempo de hidrlisis se puede
disgregar la molcula de ADN en su totalidad, impidiendo
as su posterior deteccin. Por ello el aspecto ms importante
de la tcnica es el tiempo de hidrlisis, que varia mucho
segn el fijador utilizado.

Envejecimiento del reactivo de Schiff: en condiciones
normales es incoloro, la aparicin de una tonalidad rosada
indica envejecimiento y por tanto debe desecharse, puesto
que el envejecimiento lo hace inservible para detectar los
grupos carbonilos.

METODOS PARA LA IDENTIFICACION Y TINCION
DE PIGMENTOS E IONES METLICOS.

MTODOS PARA DETECTAR IONES TCNICOS.
TCNICAS DEL AZUL DE PERLS.

En el interior de los tejidos el hierro se puede depositar de 2
formas:
En forma inica, o formando sales ferrosas y ferricas, por lo
general en forma de cloruros o hidrxidos.

Como hierro ligado a protenas.
La tcnica del azul de Perls es la de mayor importancia para
detectar hierro, ya que el hierro ferrico es el ms frecuente en
los tejidos. El fundamento de esta tcnica se basa en la
propiedad que tiene el ferrocianuro potasico, para
transformarse en presencia de hierro frrico en ferrocianuro
ferrico, o azul de Prusia por accin del cido clorhdrico que
acta como desencadenante de la reaccin.
CL3Fe
Ferrocianuro potsico + HCL Ferrocianuro frrico.
TCNICA.
Fijacin: cualquier fijador es vlido. Se pueden
utilizar secciones en parafina o improntas.

Soluciones:
Ferrocianuro K al 10 % (conservar en nevera).
11
cido clorhdrico :
cido clorhdrico concentrado. 2 ml.
Agua destilada...... 98 ml.
Solucin de ferrocianuro K, cido clorhdrico: mezclando a
partes iguales la solucin 1 y 2. esto se debe preparar
inmediatamente antes de su uso.

Procedimiento Tcnico:
Desparafinar e hidratar.
Tratar con la mezcla de ferrocianuro K, cido clorhdrico 10
min.

Lavar con agua destilada (el Fe se ve azul).
Se puede contrastar con una solucin rojo nuclear al 1 %.. 2
3 min.

Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
Hierro frrico: azul.
Ncleos: rojo.
Observaciones:
El tiempo de tincin depende de la cantidad de hierro
existente en los tejidos.
Siempre deben utilizarse preparaciones positivas de control.
Si al echar la disolucin 3 en la porta toma color verde
debemos desecharla, enjuagar y poner reactivo nuevo.
METODOS PARA LA DETERMINACIN DE
CALCIO. TECNICA DE VON KOSSA.

Las sales de calcio estn presentes normalmente en los
huesos, dientes y sangre aunque en ocasiones tambin
aparecen reas de calcificacin en tejidos desprovistos de
ellas.
En general las sales que con mayor frecuencia se depositan
son carbonatos, oxalatos y fosfatos.
TCNICA
Fijacin: formol al 4 % preferiblemente y
utilizar secciones en parafina.

Soluciones:
Solucin acuosa de nitrato de plata al 1 %.
Solucin de tiosulfato sdico al 2,5 %.
Rojo neutro al 1 %.
Procedimiento tcnico:
Desparafinar e hidratar.
Tratar con la solucin de
12
nitrato de plata a plena luz..
30 60 min.
Lavar con agua destilada.
Lavar en la solucin de
tiosulfato.. 5 min.

Volvemos a lavar con agua
destilada.

Contrastar con el rojo
neutro. 2 3 min.

Deshidratar, aclarar y
montar.

Resultados:
Iones calcio o
calcificacin: negro.
Ncleos: rojo.
METODOS PARA LA
DETERMINACION DE
COBRE. TCNICA
CIDO RUBENICO.

Este metal se encuentra
presente de forma casi
exclusiva en el hgado y
otros rganos de pacientes
con enfermedad de Wilson.
En ocasiones se encuentra
presente en algunas cirrosis
hepticas aunque en muy
pequea proporcin.
TCNICA
Fijacin:
cualquier
fijador es
vlido. Se
deben
utilizar
secciones
en parafina
o en
congelacin.

Soluciones:
Solucin
madre de
cido
rubenico al
0,1 %.

Solucin de
13
acetato
sdico al 10
%.
Solucin de
trabajo:

De la
solucin 1:
por cada 2.5
ml se echan
de la
solucin 2,
50 ml
Procedimiento
Tcnico:

Desparafinar
e
hidratar.

Tratar
con
solucin
de
trabajo
a
37
durante
toda
la
noche
en
un
recipiente
tapado
hermticamente.

tratar
los
cortes
con
alcohol
etlico
al
70
%
15
min.

Alcohol
etlico
absoluto..
6
horas.

Aclarar
14
con
xileno
y
montar.
Resultados:

Depsitos
de
Cobre:
con
granulaciones
de
verde
a
negras.
15