UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

Facultad de Ciencias Bsicas e Ingeniera

Ingeniera Agroindustrial
LABORATORIO DE BIOQUMICA
Laboratorio 1. FRACCIONAMIENTO DE TEJIDOS EN SUS PRINCIPALES BIOMOLCULAS:
CARBOHIDRATOS, LIPIDOS, PROTEINAS Y ACIDOS NUCLEICOS.
Elaborado por Daniel Aguilera
1. OBJETIVOS
1.1. Emplear los mtodos de solubilidades diferenciales y de centrifugacin para el
fraccionamiento de un tejido animal en sus principales constituyentes.
1.2. Comparar diferentes tejidos desde el punto de vista de sus componentes principales.
2. INTRODUCCIN
El objetivo del fraccionamiento celular es separar la clula en sus principales componentes y as
permitir el estudio de un componente sin la interferencia de otras partes. En trminos generales
primero se debe elegir un tejido adecuado segn el inters teniendo como criterio la facilidad para
su fraccionamiento, la disponibilidad del constituyente de inters y homogeneidad del tipo de
clula. Para la presente prctica se obtendrn las fracciones de los diferentes constituyentes de
un tejido de origen animal en trminos de sus biomolculas, utilizando para ello las tcnicas de
centrifugacin y propiedades de solubilidad diferencial.
2.1. Solubilidad Diferencial
Debido a las diferencias que existen en las propiedades qumicas entre las biomolculas de
carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos; estas presentaran diferente solubilidad en
solventes orgnicos al igual que en cidos del tipo del tricloroactico segn la temperatura. Por lo
tanto es posible utilizar tales solubilidades diferenciales para separarlos, una vez los tejidos han
sido triturados y roto sus membranas.
2.1.1. Accin del cido tricloroactico a baja temperatura
Sobre carbohidratos: A baja temperatura los monosacridos son estables en medio cido,
mientras que al ser tratados en caliente sufren deshidratacin producindose los furfurales. En
general se puede decir que los carbohidratos son solubles en solucin de cido tricloroactico
(ATA) al 10% a temperaturas inferiores a 4 C y no sufren cambios qumicos en estas condiciones.
Sobre lpidos: Por definicin, estos compuestos son pocos solubles en soluciones acuosas y no son
extrados si se trata el tejido en soluciones acuosas de ATA.
Sobre protenas: Estas forman sales insolubles en cidos como tricloroactico o perclrico, por lo
tanto no son solubles en soluciones de ATA al 10% en frio.

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Sobre cidos nucleicos: Al igual que las protenas, estos cidos son insolubles en ATA al 10%. Por
otra parte el cido desoxirribonucleico (ADN) est unido a histonas, lo cual lo hace ms insoluble
en estas condiciones. En resumen, al tratar un tejido previamente triturado con ATA al 10% a 4 C
y luego someter a centrifugacin la suspensin resultante, en el sobrenadante se obtienen los
azcares, mientras que los lpidos, protenas y cidos nucleicos quedan en el residuo.
2.1.2. Accin del etanol-ter-cloroformo (2-2-1 v/v)
Si el residuo de la extraccin con cido tricloroactico al 10 %, se trata con solucin de etanol-tercloroformo, a la mezcla slo pasan los lpidos, mientras que las protenas y los cidos nucleicos
quedan en el residuo.
2.1.3. Accin del cloruro de sodio al 10 % en caliente
Si el residuo anterior se suspende en una solucin de NaCl al 10% y se calienta en bao de Mara
(92 C) durante 20 minutos, se desnaturalizan las protenas y los cidos nucleicos principalmente
el ribonucleico (RNA)- quedan en solucin. Por este procedimiento es posible separar entonces las
protenas de los cidos nucleicos. Si el sobrenadante se le agrega ahora etanol en un volumen
igual al doble de la solucin original y se enfra en bao de hielo por 10 minutos, se obtiene un
precipitado que puede ser separado por centrifugacin y el cual contiene los cidos nucleicos.
3. CONSULTA PREVIA AL LABORATORIO
3.1. Cul es el fundamento de la centrifugacin? Realice una breve explicacin de sus principios.
3.2. Consulte los diferentes mtodos de ruptura de clulas
3.3. Por qu se recomienda mantener los tejidos que se fraccionan a bajas temperaturas?
4. REACTIVOS Y MATERIALES
Materiales

Reactivos*
cido triclocetico al
10%
etanol-tercloroformo (2:2:1)
etanol al 96%
NaCl al 10%
hielo
arena lavada

Laboratorio

1 mortero de porcelana con

mango
2 tubos de centrifuga
1 vasos de precipitado de 50
o 100 mL
2 tubos de ensayo
1 pinza para tubo de ensayo
1 vidrio de reloj
2 pipetas pauster
1 gradilla
4 frascos entre 4 a 7 mL

*Los reactivos deben estar refrigerados

Equipos y/o
montajes

Estudiantes

Hgado de pollo u
otro tejido
Cuchillo o escarpelo
Micro esptula o
alambre

Centrifuga
Bao de
mara
Balanzas
Nevera

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5. PROCEDIMIENTO
Cada grupo har el fraccionamiento qumico sobre el tejido segn el siguiente protocolo:

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NOTAS:
1. Cada grupo de laboratorio podr traer hgado de pollo o seleccionar otra fuente y/o tipo
de tejido de origen animal para realizar el procedimiento de fraccionamiento.
2. Las diferentes fracciones obtenidas en esta prctica deben guardarse, debidamente
rotuladas, para las dos sesin de laboratorio siguientes.
6. CUESTIONARIO PARA EL INFORME1
6.1. Por qu cree usted que se elige un tejido de origen animal y no uno de origen vegetal?
6.2. Qu otros solventes podra utilizar para separar las diferentes biomolculas? Justifique su
respuesta
7. FUENTES BIBLIOGRFICAS

7.1. Gerardo Prez, Yolanda Navarro. Mdulo de Bioqumica. Universidad a distancia. Ministerio
de Educacin Nacional. Bogot. Unisur. 1992
7.2. Guas del Laboratorio de Principios de Bioqumica de la carrera de Biologa. Facultad de
Ciencias. Universidad Nacional de Colombia. Primer semestre 2011.
7.3. http://course1.winona.edu/lreuter/307/CellFractionation.pdf
26/07/2013

ltima fecha de acceso:

7.4. http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/methods/fractionation/fractionation.html ltima fecha de

acceso: 26/07/2013

Se entregar un solo informe al finalizar las tres sesiones, el cual debe incluir el cuestionario de
cada prctica.