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Medios de Cultivo y Pruebas Bioquimicas
Medios de Cultivo y Pruebas Bioquimicas
y
Pruebas Bioqumicas
Cabronio 5.9
Medios
de
Cultivo
INTRODUCCIN
Uno de los sistemas ms importantes para
la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio.
El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y
el crecimiento de los microorganismos es
el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de
acidez o alcalinidad.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de
medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua
hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones
no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por
aquellas que crecen en l.
Medios de Cultivo
A.- Medios sintticos o qumicamente definidos. Llevan fuente de carbono,
fuente de nitrgeno, sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca), otros
elementos como son estimuladores del crecimiento (eritritol para Brucella
abortus) pero siempre a concentraciones conocidas.
Clasificacin de los medios de cultivo basndose en su
composicinqumica
B.- Medios complejos o de composicin indefinida. Estos medios llevan
ingredientes como extracto de levadura, peptona, infusin de cerebro,
extracto de carne, etc. que contienen nutrientes en abundancia pero sin
saber con exactitud la composicin cualitativa ni cuantitativa de estos
nutrientes.
C.- Medios de enriquecimiento. Son medios complejos (normalmente) con
aditivos adicionales para favorecer el crecimiento de determinados
microorganismos (particularmente hetertrofos exigentes).
Ejemplo: adiccin de sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas.
D.- Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseo el crecimiento
especfico de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de
gran utilidad para el aislamiento de microorganismos a partir de una poblacin
microbiana mixta.
Ejemplo: CO2 como fuente de carbono es selectivo para auttrofos; adicionando
cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram. (+); utilizando maltosa como
nica fuente de carbono slo crecern los que usen maltosa.
E.- Medios diferenciales. Son aquellos destinados a facilitar la
discriminacin de microorganismos de una mezcla por sus propiedades
diferenciales de crecimiento en dichos medios.
Ejemplo: Agar sangre diferencia hemolticos de no hemolticos; McConkey
diferencia lactosa (+) de lactosa (-).
F.- Medios de mantenimiento. Suelen ser distintos a los de crecimiento
ptimo ya que el crecimiento rpido y prolfico suele ocasionar la muerte
rpida de las clulas.
Ejemplo: al aadir glucosa y utilizarla los microorganismos producen
cidos, acidificndose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa
en los medios de mantenimiento.
Agar-Agar
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos
nutritivos.
Su uso est descrito en muchos procedimientos para el anlisis de
alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.
Agar Nutritivo
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 5.0 Suspender 31 g de polvo por litro de agua
destilada. Mezclar y dejar reposar 5
minutos. Calentar suavemente agitando y
hervir 1 o 2 minutos hasta su disolucin.
Distribuir y esterilizar a 121 C durante 15
minutos.
Extracto de carne 3.0
Cloruro de sodio 8.0
Agar 15.0
pH final: 7.3 0.2
Fundamento
Es un medio usado para el cultivo de
microorganismos poco exigentes en sus
requerimientos nutricionales. No contiene
inhibidores del desarrollo bacteriano.
La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrgeno para el desarrollo bacteriano.
El agregado de cloruro de sodio permite el
enriquecimiento con sangre de carnero u otras
sustancias para facilitar el cultivo de
microorganismos exigentes.
Caractersticas del medio: mbar claro
a medio ligeramente opalescente.
Xanthomonas campestris
Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos
microorganismos. Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el
aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios
nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como
para la observacin de reacciones de hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para
preparar el medio agar chocolate.
Base Agar Gelosa Sangre
Frmula (en gramos por litro)
Infusin de msculo de corazn 375.0
Peptona 10.0
Cloruro de sodio 5.0
Agar 15.0
pH final: 7.3 0.2
Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la
peptona, otorgan al medio un alto valor
nutritivo, que permite el crecimiento de
una gran variedad de microorganismos,
an de aquellos nutricionalmente
exigentes.
El cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico.
El agregado de sangre al medio de
cultivo, en concentracin final de 5-10
%, aporta nutrientes para el crecimiento
bacteriano, y permite detectar
hemlisis.
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar.
Medio preparado con 5% de sangre
de carnero: rojo cereza.
Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram
negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el
desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
E.M.B. Agar
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona 10.0
Suspender 36 g del polvo en un litro
de agua destilada. Reposar 5 minutos;
mezclar, calentando a ebullicin
durante 1 o 2 minutos hasta su
disolucin. Esterilizar en autoclave a
no ms de 121 C durante 15 minutos.
Enfriar a 45 C y distribuir agitando
suavemente.
Lactosa 5.0
Sacarosa 5.0
Fosfato dipotsico 2.0
Agar 13.5
Eosina 0.4
Azul de metileno 0.065
pH final: 7.2 0.2
Fundamento
Este medio combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para
obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y
otras especies de bacilos Gram negativos.
La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y
aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y
azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram
positivas.
Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico
brillo metlico.
Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o
rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras.
Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes
La siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en
C. albicans
Mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden
dar colonias de color azul lavanda. esto puede ocurrir aunque las
cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello
se debe a la incorporacin de azul de metileno a sus membranas.
Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y
transparentes,
En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de
Salmonella y Shigella.
Resultados
Microorganismos Tipo de Colonia
Escherichia coli
Verdosas con brillo metlico y centro negro
azulado
Klebsiella pneumoniae Mucosas, rosa prpura, confluentes
Proteus mirabilis Incoloras
Enterococcus faecalis Incoloras, pequeas, puntiformes
Shigella flexneri Incoloras
Salmonella typhimurium Incoloras
Caractersticas del medio
Mac Conkey Agar
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias
que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas
las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona 17.0
Suspender 50 g del polvo por litro de
agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta uniformar. Calentar
suavemente y hervir 1 a 2 minutos
hasta disolver. Esterilizar en autoclave
a 121 C durante 15 minutos.
Pluripeptona 3.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales biliares 1.5
Cloruro de sodio 5.0
Agar 13.5
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 0.2
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla
de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia.
Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en
las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
Resultados
Microorganismos Colonias
Escherichia coli Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium Incoloras, transparentes
Shigella flexneri Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis Diminutas, incoloras, opacas
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo prpura
Estafilococo 110 Agar
Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciacin presuntiva de
estafilococos, en base a la produccinde pigmentos, la fermentacin de
manitol y la hidrlisis de gelatina, a partir de alimentos y otras muestras.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Extracto de levadura 2.5
Suspender 149 g del medio en un
litro de agua destilada. Reposar 5
minutos y mezclar calentando a
ebullicin durante 1 o 2 minutos.
Esterilizar en autoclave durante 15
minutos a 121 C. Verter en placas y
mezclar para dispersar el
precipitado.
Triptena 10.0
Gelatina 30.0
Lactosa 2.0
D-Manitol 10.0
Cloruro de sodio 75.0
Fosfato dipotsico 5.0
Agar 15.0
pH final: 7.0 0.2
Fundamento
Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicacin
alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios slidos
selectivos: Baird Parker Medio, Manitol Salado Agar, o Estafilococo Medio
110.
En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la triptena aportan los
nutrientes para el desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de
la enzima gelatinasa. La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono
fermentables. El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentracin, para
inhibir el desarrollo de la flora acompaante excepto Staphylococcus spp.,
logrndose as un medio selectivo para el desarrollo de estos
microorganismos.
Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados anteriormente,
es que permite, en la misma placa, obtener pruebas de identificacin
presuntiva de especie como ser: desarrollo de pigmentos, fermentacin de
manitol e hidrlisis de la gelatina.
Resultados
Observar las caractersticas de las colonias y realizar las pruebas de
identificacin de microorganismos.
1-Fermentacin de manitol: agregar unas gotas de prpura de
bromocresol a las zonas donde se encuentran las colonias sospechosas y
en una zona de la placa donde no hay desarrollo bacteriano. Comparar el
color desarrollado entre estas dos zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de
crecimiento bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos
permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento
bacteriano y la zona sin inocular.
2-Hidrlisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solucin saturada de sulfato de
amonio y colocar en estufa, a 35-37 C, en aerobiosis durante 10 minutos.
Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.
Resultados
Microorganismo Pigmento Fermentacin de
manitol
Hidrlisis de
la gelatina
Prueba de la
coagulasa
S. aureus + + + +
S. aureus + + + +
S. epidermidis - - + -
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar claro, opalescente con precipitado.
Sal y Manitol Agar
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y
diferenciacin de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir
de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales
de importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas
de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio
Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Extracto de carne 1.0
Suspender 111 g de polvo por litro de
agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar calentando a ebullicin
durante 1 o 2 minutos. Distribuir y
esterilizar en autoclave a 118-121 C
durante 15 minutos.
Pluripeptona 10.0
d-Manitol 10.0
Cloruro de sodio 75.0
Agar 15.0
Rojo de fenol 0.025
pH final: 7.4 0.2
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina.
Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio;
las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante.
Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una
zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso
de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente
de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el
agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol
es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y
fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del
medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no
fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan
como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias
rojas, rodeadas de una zona del mismo color o prpura.
Resultados
Microorganismos Crecimiento Caractersticas de las colonias
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla
Staphylococcus epidermidis ATCC
14990
Bueno Roja
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Inhibido Inhibido
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo
Salmonella Shigella Agar
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas
especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los
cuales se sospeche su presencia.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 5.0
Suspender 60 g del polvo por litro de
agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta homogeneizar.
Calentar a ebullicin durante 2 o 3
minutos. NO ESTERILIZAR EN
AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50 C y
distribuir unos 20 ml por placa.
Secar la superficie del medio unos
minutos en la estufa.
Extracto de carne 5.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales biliares 8.5
Citrato de sodio 8.5
Tiosulfato de sodio 8.5
Citrato frrico 1.0
Agar 13.5
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
pH final: 7.0 0.2
Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el
desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido
sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar,
acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose
colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa,
crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro
debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Resultados
Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis Transparentes, centro negro
Escherichia coli Rosadas a rojas
Klebsiella pneumoniae Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis
Incoloras, de muy escaso
crecimiento
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo naranja.
A. Klebsiella pneumoniae. Acid + Lac + B. Escherichia coli .Acid + Lac +
C: Salmonella sp..H2S D: Proteus mirabilis H2S
E: Pseudomona aeruginosa
Mueller Hinton Agar
Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de
sensibilidad a los antimicrobianos. Adems es til con el agregado de sangre
para el cultivo y aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Infusin de carne 300.0 Suspender 37 g del medio deshidratado
en un litro de agua destilada. Dejar
embeber de 10 a 15 minutos. Calentar
con agitacin frecuente y hervir durante
1 minuto. Esterilizar a 121 C durante 15
minutos. Enfriar a 45 -50 C y distribuir a
cajas de Petri (o agregar los
suplementos que se desee) hasta un
nivel de 4 mm sobre una superficie
horizontal (25-30 ml en placas de 9 cm
de dimetro).
Peptona cida de casena 17.5
Almidn 1.5
Agar 15.0
pH final: 7.3 0.1
Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), recomend su uso en
forma rutinaria para la realizacin del antibiograma en medio slido, debido
a una serie de factores :
presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad,
su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es
bajo,
la mayora de los patgenos crece satisfactoriamente
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para realizar las
pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos.
Resultados
Consultar en la seccin prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la
metodologa apropiada.
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar.
Chromobacterium violaceum Pseudomona aeruginosa Streptococcus pyogenes
Cerebro Corazn Infusin
Medio lquido adecuado para el enriquecimiento y cultivo de bacterias
aerobias y anaerobias, de microorganismos exigentes como estreptococos,
neumococos y otros microorganismos de difcil desarrollo.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se utiliza
este medio para el cultivo de hongos patgenos.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Infusin de cerebro de ternera 200.0 Suspender 37 g del polvo en un litro de
agua destilada. Calentar a ebullicin
hasta disolver completamente.
Esterilizar en autoclave a 121 C durante
15 minutos. Los tubos que no se usen
inmediatamente debern calentarse en
un bao hirviendo para la eliminacin
del oxgeno retenido. Enfriar
rpidamente sin agitar.
Infusin corazn vacuno 250.0
Peptona 10.0
Cloruro de sodio 5.0
Glucosa 2.0
Fosfato disdico 2.5
pH final: 7.4 0.2
Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo
microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de corazn vacuno y
la peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas.
La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene
el balance osmtico y el fosfato disdico otorga capacidad buffer.
Los nutrientes de este caldo son muy apropiados para los hemocultivos, ya
que en esta infusin desarrollan todas las especies de estreptococos excepto
los tiol y piridoxal dependientes.
Los estafilococos que crecen en esta infusin suelen dar mejores reacciones
en la prueba de la coagulasa.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se inhibe la
flora bacteriana cuando se utiliza este medio para el cultivo de hongos
patgenos.
Resultados
Examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbiedad. Cuando sea
necesario, subcultivar en medios slidos apropiados y realizar la identificacin
bioqumica.
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar claro, sin precipitado.
Microorganismos Crecimiento
Neisseria meningitidis Bueno a excelente
Neisseria gonorrhoeae Bueno a excelente
Streptococcus pyogenes Bueno a excelente
Streptococcus pneumoniae Bueno a excelente
: uninoculated tube
: Neisseria meningitidis
: Strepcococcus pyogenes
Tetrationato Caldo.
Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella
spp. a partir de heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia
sanitaria.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona 5.0
Suspender 46 g del polvo en 1 litro de
agua destilada. Mezclar vigorosamente y
llevar a ebullicin. Enfriar a 45 C o
menos. Agregar 20 ml de solucin
iodurada. Mezclar y distribuir 10 ml por
tubo, en tubos estriles. No debe
calentarse luego de agregar la solucin
iodada. El medio base puede mantenerse
a 4 C , dura varios meses, pero una vez
agregada la solucin iodada debe usarse
en el mismo da.
Sales biliares 1.0
Carbonato de calcio 10.0
Tiosulfato de sodio 30.0
pH final: 8.4 0.2
Solucin iodo iodurada
Iodo 6.0
Ioduro de potasio 5.0
Agua 20.0
Fundamento
El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para
el desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe
metabolitos txicos.
La selectividad est dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato
(generado en el medio por el agregado de la solucin iodo-iodurada) y sales
biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima
tetrationato reductasa, como ser la Salmonella spp. e inhiben el desarrollo de la
flora acompaante.
Para evitar la proliferacin de especies de Proteus spp., se recomienda agregar
40 mg/l de Novobiocina, antes de la solucin iodada
Resultados
Caractersticas del medio
Medio preparado: suspensin blanco lechosa.
Microorganismos Crecimiento
Salmonella typhi Escaso
Salmonella typhimurium Bueno-excelente
Salmonella enteritidis Bueno-excelente
Escherichia coli Escaso
Stuart Medio de Transporte
Medio destinado a la recoleccin, transporte y preservacin de muestras
clnicas aptas para exmenes bacteriolgicos. Es til para mantener la
viabilidad de gonococos y de otros microorganismos de difcil desarrollo.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Tioglicolato de sodio 0.9 Suspender 14,1 g del polvo por litro de
agua destilada. Reposar 5 minutos.
Calentar a ebullicin hasta disolucin
total. Distribuir en tubos con cierre a
rosca (para evitar oxidacin)
llenndolos hasta 2/3 del tubo.
Esterilizar 15 minutos a 121C.
Dejar solidificar en posicin vertical.
Glicerofosfato de sodio 10.0
Cloruro de calcio 0.1
Azul de metileno 0.002
Agar 3.0
pH final: 7.4 0.2
Fundamento
Medio semislido, no nutritivo.
Contiene tioglicolato de sodio, el cual provee un ambiente reducido y es til
para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte, y azul de
metileno, que es el indicador de oxido reduccin.
De esta manera se favorece la viabilidad de los microorganismos durante su
envo al laboratorio. Cooper encontr que usando hisopos impregnados con
carbn bacteriolgico se recuperan en forma exitosa numerosos patgenos
entricos y respiratorios.
Resultados
Los tubos con medio de transporte
se subcultivan en medios slidos
apropiados segn la muestra y el
microorganismo que se quiera
aislar. Luego de la incubacin, debe
haber escasa o nula reduccin de la
viabilidad de los microorganismos.
Caractersticas del medio
Medio preparado: ligeramente
opalescente con tonalidad azul
dependiendo del grado de
oxidacin.
Pruebas
Bioqumicas
INTRODUCCIN
Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de
manera detallada su actividad bioqumica, porque otras caractersticas no
son suficientemente distintivas o diferenciales.
En el laboratorio disponemos de numerosas tcnicas para la
caracterizacin bioqumica de una especie.
En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una
sustancia nutritiva especfica o sustrato y despus de la incubacin del
cultivo se examina para ver los cambios qumicos que hayan ocurrido.
Adems de los productos finales de los procesos metablicos, tambin
se necesita conocer con detalle como se producen estos cambios, como
ocurren paso a paso las reacciones qumicas, cules enzimas
intervienen, cuales son los productos intermediarios adems de que se
deben reconstruir las secuencias de las reacciones bioqumicas que
tienen lugar dentro de la clula.
Enterotube II
Kligler Hierro Agar
Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiologa de alimentos
para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin
de glucosa y lactosa, y a la produccin de cido sulfhdrico.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona de carne 13.0
Suspender 54.8 g del polvo por litro de
agua destilada. Mezclar bien y calentar
con agitacin frecuente, hervir 1 o 2
minutos hasta disolucin total. Llenar
hasta la tercera parte de los tubos de
ensayo. Esterilizar a 121 C por 15
minutos. Enfriar en pico de flauta
profundo.
Cloruro de sodio 5.0
Lactosa 10.0
Tripteina 10.0
Glucosa 1.0
Citrato de hierro y amonio 0.5
Tiosulfato de sodio 0.3
Rojo de fenol 0.025
Agar 15.0
pH final: 7.3 0.2
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la triptena, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.
La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables.
El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de
cido sulfhdrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe
3+, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro
de hierro, de color negro.
El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico. El agar es el agente solidificante.