RAL HERRANZ ESCOBAR DAVI D MART NEZ RAPOSO RI BAGORDA DANI EL MART NEZ- SANTOS MORENO V CTOR DEL R O DELGADO ROBERTO RODRI GO ALONSO ALEJANDRO SANTOS CARBALLES I SABEL VAZ FERNNDEZ
10.1. Microorganismos utilizados en la industria alimentaria Fundamentos de Biotecnologa
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ndice 1. CONCEPTO DE FERMENTACIN 2. MICROORGANISMOS INVOLUCRADOS. 3. ALIMENTOS ELABORADOS MEDIANTE FERMENTACIN. 4. BIBLIOGRAFA
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CONCEPTO DE FERMENTACIN 3 La fermentacin Proceso catablico y en ausencia de oxgeno en el cual rompemos molculas orgnicas para producir energa y compuestos orgnicos ms sencillos como desecho. Estos productos orgnicos son los que determinan el tipo de fermentacin. Cuatro tipos principales: Fermentacin actica: cido actico Fermentacin lctica: cido lctico Fermentacin alcohlica: etanol Fermentacin butrica: cido butanoico
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HISTORIA Se cree que la fermentacin del vino se practicaba hace 100 siglos. Los qumicos desconocan que la materia viva formase parte de estos procesos. Blondeau(1847) fue el primero en manifestar la clasificacin de las fermentaciones en base al hongo que las provocaba. Louis Pasteur enuncio que el azcar en ausencia de aire fermentaba en etanol y CO 2
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3 Factores que intervienen en el crecimiento microbiano. 1. pH, cada microorganismo tiene un rango optimo de pH.
En estas reaccin el agente que va aceptar los electrones ser un compuesto endgeno (NADH, Nicotinamida Adenina Dinucletido + Hidrgeno).
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3. Actividad acuosa
Es la relacin entre la presin de vapor del alimento y la presin de vapor del agua pura a la misma temperatura, esto hace referencia a la humedad del alimento. Este dato nos proporciona una informacin valiosa en cuanto a la capacidad de conservacin y propagacin microbiana. Este valor tiene que estar entorno a 1.
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4. Temperatura
Clasificacin R. Temperaturas C EJEMPLO Psicrofilos 15-18 Polaromonas vacuolata Mesofilos 25-40 Eubacterias Termofilos 50-70 Procariotas 10
MICROORGANISMOS INVOLUCRADOS 11 Saccharomyces cerevisiae Formas variadas (esfrica, elipsoidal, cilndrica)
Crecimiento favorecido por VITAMINAS.
Capacidad para producir alcoholes.
Capacidad en fermentacin de azcares.
Involucrada en fermentacin de pan, cerveza y vino.
12 Leuconostoc Bacterias del cido lctico
Forma de coco ovoide
Heterofermentativas.
Produccin de VINO, QUESOS
13 Pediococcus Bacterias del cido lctico
Homofermentativas
Gram-positivas
Utilizada en conservacin Ensilado. 14 Estreptococcus Homofermentativa
Diversidad de hbitats y actividades.
Variedades: Enterococcus y Lactococcus.
3 Enterococcus Bacterias del cido lctico.
Organismo facultativo aerobio.
Presentes en el intestino humano: E. faecalis y E. faecium.
Fermentacin de glucosa sin producir CO2 15 Lactococcus Bacterias del cido lctico.
Gran importancia en la industria lechera (quesos y yogures).
Composicin DNA similar a las dems bacterias lcticas. 16 Escherichia Caractersticas de animales de sangre caliente.
Funcin en el intestino (vitamina K)
Organismo anaerobio facultativo.
Fermentan glucosa y lactosa.
3 ALIMENTOS ELABORADOS MEDIANTE FERMENTACIN 3 Tipos de fermentacin. FERMENTACIN PTRIDA:
Factores intrnsecos. pH. Contenido de humedad. Actividad o disponibilidad de agua. Potencial rdox. Estructura del alimento. Nutrientes disponibles.
Posible presencia de agentes antimicrobianos naturales.
3 Tipos de fermentacin. Sustrato Procesos qumicos Productos y efectos tpicos Pectina Pectinolsis Metanol, cidos urnicos (prdida de la estructura de la fruta, podredumbres blandas Protenas Protelisis, desaminacin Aminocidos, pptidos, aminas, sulfuros, amonaco, indol (amargor, acidez, mal olor, viscosidad) Carbohidratos Hidrlisis, fermentaciones cidos orgnicos, CO 2 , alcoholes mixtos (acidez, agriado) Lpidos Hidrlisis, degradacin de cidos grasos Glicerol y cidos grasos mixtos (ranciedad, amargor) 3 Tipos de fermentacin.
Factores extrnsecos. Temperatura. Humedad relativa. Gases (atmsfera). Tipos y nmero de microorganismos en el alimento. 3 Tipos de fermentacin. 3 Consiste en la descomposicin anaerobia de hidratos de carbono. Azcares tpicos, glucosa fructosa y lactosa. La gluclisis engloba todas ellas en un solo proceso metablico de 12 etapas. Se produce menor cantidad de ATP que en la etapa aerobia pero se produce en ausencia de oxgeno. 3 Hay 4 productos de desecho en las etapas anaerobias:
-Etanol
-2,3 butanodiol
-Glicerina
-cido lctico
Presenta 2 etapas la gluclisis:
-Etapa preparatoria: se obtiene gliceraldehdo-3- fosfato gastando energa
-Etapa final: se obtiene uno de los productos anteriormente mencionados para obtener energa.
3 Presenta 5 etapas principales:
Su objetivo es obtener 2 molculas de gliceraldehdo-3-fosfato 3 -Adicin de un fosfato en el carbono 6 dando lugar a la glucosa-6-fosfato
-Catalizada por la hexoquinasa
-Isomerizacin de la cetona del carbono 1 al carbono 2, pasando el hidroxilo al carbono 1
-Catalizada por la fosfoglucoisomerasa 3 -En esta reaccin vemos como se adiciona al carbono 1 un fosfato que sustituye al hidroxilo, produciendo 1,6 fructosa difosfato.
-Cataliza la reaccin el enzima fosfofructoquinasa-1. -Se produce la rotura de la fructosa-1,6 difosfato generando dihidroxiacetona- fosfato y gliceraldehdo-3-fosfato
-La reaccin es catalizada por el enzima fructosa 1,6 difosfato aldosasa 3 -Isomerizacin de la dihidroxiacetona fosfato al gliceraldehdo-3-fosfato
-Catalizada por triosa fosfato isomerasa 3 -Consta de 5 etapas en las que se obtendr piruvirato
-Se ganarn 2 molculas de ATP 3 -Adicin de un grupo fosfato al aldehdo
-Catalizada por el gliceraldehido-3- Fosfato
-Inhibidor irreversible (yodoacetato) -Obtencin de ATP por la eliminacin del grupo fosfato del aldehdo, dejando un grupo carboxilo
-Catalizado por el fosfoglicerato quinasa
-Reacciona con arsnico sin formacin de ATP 3 -Isomerizacin del fosfato del carbono 3 al 2, pasando el hidroxilo a la posicin 3
-Catalizada por el fosfoglicerato mutasa -Deshidratacin de la molcula eliminando agua del hidroxilo
-Catalizada por la enolasa 3 -Obtencin de ATP eliminando el fosfato restante, produciendo enolpiruvirato
-Catalizada por el piruviratocinasa
-Presenta tautomera, transformando el enolpiruvirato en cetopiruvirato 3 -Produccin de etanol a partir de piruvirato, regenerando el NAD+
-La primera reaccin la cataliza el piruvirato quinasa produciendo acetaldehdo
-La segunda regenera el NAD+ reduciendo el acetaldehdo a etanol, siendo catalizada por el alcohol deshidrogenasa 3 -Para regenerar el NAD+ se reduce directamente el hidrxido del piruvirato generando cido lctico.
-La cataliza la deshidrogenasa lctica. 3 En esta fermentacin se regenera el NAD+ oxidando aerobiamente el etanol resultante de la fermentacin alcohlica. El NADH producido se puede emplear para el catabolismo aerobio de la glucosa, lo cual es un aadido. 3 Genera cido butanoico a partir del piruvirato. Esta fermentacin la genera las bacterias del gnero Clostridium.
3 El chocolate 38 Importancia de una buena fermentacin. Granos bien fermentados Granos mal fermentados 39 Mtodos de fermentacin:
- En cajas
- En cajones
- En montones 40 Tipos de fermentacin. -Fermentacin alcohlica.
-Fermentacin acido lctica.
-Fermentacin actica.
-Fermentacin butrica. 41 Microorganismos involucrados -Levaduras: (Saccharomyces cerevisae). Hongos unicelulares que metabolizan los azcares de la pulpa dando lugar a etanol.
Saccharomyces cerevisae 42 Microorganismos involucrados -Bacterias lcticas (Lactobacillus y Streptococcus): se activan por accin del etanol y dan lugar a acido lctico.
Lactobacillus Streptococcus 43 Microorganismos involucrados -Bacterias etanoicas (Acetobacter y Gluconobacter): producen cido actico por oxidacin del etanol.
Acetobacter Gluconobacter 44 Microorganismos involucrados - Hongos, mohos como Aspergillus, Penicillium y Mucor, que producen compuestos que producen ciertos olores y sabores desagradables en el cacao.
Aspergillus Penicillium 45 Evolucin de los microorganismos en la fermentacin. 46 Composicin de la pulpa antes y despus de la fermentacin Composicin de la pulpa Antes de la fermentacin Despus de la fermentacin Sacarosa 12% 0% cido ctrico 1-3 % 0,5% Pectina 1-1,5 % 0 % pH 3,7 % 6,5% Etanol 0 % 0,5% cido actico 0 % 1,6% 47 DERIVADOS DE LA SOJA Sustrato Producto Final Microorganismos implicados Pas originario Soja y trigo Shoyu (salsa de soja) Aspergillus oryzae, bacterias, levaduras Malasia, China Soja Sufu Actinomucor elegans China Soja Hamma natto Aspergillus oryzae Japn Soja Tauco A.Oryzae, bacterias, levaduras Indonesia Soja Kochuyang Bacillus, Aspergillus, Rhizopus, levaduras Corea Soja Tau-si Aspergillus oryzae Filipinas Soja y arroz Miso A.Oryzae, Saccharomyces rouxii China y Japn Soja negra Ketyap Aspergillus oryzae Indonesia 3 DERIVADOS DE LA SOJA Tostado y trituracin del trigo Remojo (10 h) de las habas de soja y trituracin Coccin Cultivo iniciador: Aspergillus oryzae, A. sojae, A. tamari Mezclar e incubar KOJI + NaCl Moromi Fermentaciones lctica y alcohlica Maduracin o envejecimiento Prensado Pasteurizado SALSA DE SOJA Salsa de soja 3 DERIVADOS DE LA SOJA Sufu Inmersin en agua, molturacin y coccin de las semillas Filtracin Bebida de extracto de soja Prensado Cuajada o Tofu Corte y calentamiento Siembra (Actinomucor elegans) Salazonado Sufu 3 DERIVADOS DE LA SOJA Miso (soja + arroz) Preparacin del arroz y las semillas de soja Cultivo de Ped. Halophilus, Sacch. Rouxii, Torulopsis sp, Str. faecalis Mezcla Envejecimiento o maduracin Pasteurizacin Producto final (Miso) 3 DERIVADOS DE LA SOJA Tempeh Trituracin de las semillas de soja Remojo Escurrido y pelado mecnico Coccin Escurrir y enfriar Sembrar esporas de R. oligosporus Prensar Incubacin Tempeh 3 BEBIDAS ALCOHLICAS Proceso de elaboracin de la cerveza: 1) Materias primas y preparacin de la malta. Materia prima consistente en cereales malteados
Humidificacin : 10%-50% (p/p)% en H2O.4 15 C - 21 C
Germinacin del grano.
Secado de la malta: Se inhibe el crecimiento microbiano. Se interrumpen los procesos respiratorios de la germinacin. Cuando se alcanza el grado de modificacin requerido: 3 BEBIDAS ALCOHLICAS 2) Maceracin y filtracin: Materias primas maceradas se tratan con agua. Los carbohidratos necesarios para la fermentacin se solubilizan, hidrolizan enzimticamente y se extraen del cereal. Sistemas de macerado: Infusin. Coccin. Combinacin entre ambos. Sistema de maceracin por infusin 3 BEBIDAS ALCOHLICAS 3) Separacin del mosto: Una vez macerado el producto se hierve con objeto de conseguir: La inactivacin de los enzimas.
La esterilizacin del mosto.
Generacin de aromas y sabores por caramelizacin de azcares y oxidacin de taninos.
Precipitacin de protenas.
Destilacin de voltiles. 3 BEBIDAS ALCOHLICAS 4) Fermentacin del mosto:
La velocidad de fermentacin depender de la cantidad de levaduras inoculadas.
El mosto ha sufrido un proceso de aireacin previo para favorecer la sntesis de cidos grasos y esteroles.
Los azcares fermentables que normalmente constituyen el 70-80% de los carbohidratos del mosto se convierten en etanol durante la fermentacin.
El pH disminuye aproximadamente una unidad a partir del valor inicial de 5,2. Esto se debe fundamentalmente a la presencia del cido actico motivada por la fermentacin del acetaldehdo.
3 BEBIDAS ALCOHLICAS 4) Fermentacin del mosto: La temperatura tiende a aumentar a medida que avanza la fermentacin y cundo se alcanza el mximo puede ser necesario enfriar. 3 BEBIDAS ALCOHLICAS 4) Acondicionamiento final: Fermentacin secundaria.
Se produce CO2 que ayuda a purgar la cerveza de oxgeno, cido sulfhdrico y de compuestos voltiles no deseados.
Aditivos para ajustar el aroma, el sabor o el color de la bebida. Eliminacin de residuos por floculacin, centrifugacin o filtracin. 3 BEBIDAS ALCOHLICAS Proceso de elaboracin del Whisky: 1) Materias primas y maceracin. Materia prima consistente en una combinacin de cereales malteados y no malteados.
Adicin de Amilglucosidasa, optimiza la fermentabilidad del mosto.
Proceso de maduracin similar al de la cerveza.
3 BEBIDAS ALCOHLICAS 2) Fermentacin del mosto. Partimos de un mosto que a diferencia con el de la cerveza: No est lupulado. No se ha sometido a un proceso de coccin.
Actividad enzimtica y concentracin bacteriana mayor.
La mayora de esas bacterias aerobias mueren en la fermentacin anaerobia
Consecuencias 3 BEBIDAS ALCOHLICAS 3) Destilacin y maduracin del Whisky: Objetivo de la destilacin: Extraer los compuestos con los aromas deseados. Generar nuevos aromas debido a las reacciones del proceso. Maduracin: El destilado se almacena en barricas de roble, donde extrae y oxida algunos componentes de la madera. 3 BEBIDAS ALCOHLICAS Proceso de elaboracin del Vino: 1) Preparacin del mosto. Preparacin del mosto: consiste en el prensado de la uva y la separacin de las pepitas de la misma. En el caso del vino blanco se elimina la piel de la uva y en el caso del tinto no.
Se aade dixido sulfuroso, que inhibe los enzimas oxidantes y el crecimiento de microorganismos indeseables.
3 BEBIDAS ALCOHLICAS 2) Fermentacin del mosto y almacenado del vino. Durante la fermentacin la temperatura va ascendiendo pero no debemos dejar que supere los 37 C para no matar las levaduras. Cuando finaliza la fermentacin, se obtiene una concentracin de etanol del 8 al 15% en volumen El vino se separa de las levaduras se clarifica y se almacena. El vino se deja envejecer en tanques, donde sufrir reacciones de esterificacin y oxidacin. 3 EL QUESO Proceso de elaboracin del queso: Etapas generales del proceso: Tratamiento previo de la leche: Reduccin de la actividad microbiana por pasteurizacin. Coagulacin: se consigue generalmente mediante el proceso combinado de la reduccin del pH y de la accin de enzimas. La acidez reduce la solubilidad de las casenas a medida que el pH se aproxima a 4,6, su pI. La Acidificacin se lleva a cabo mediante cultivos lcticos: LactosaAc.Actico 3 EL QUESO Etapas generales del proceso: Coagulacin. Maduracin del queso. Separacin de la cuajado slida y del suero lquido Moldeado de la cuajada 3 EL QUESO Es aconsejable emplear leche con un bajo recuento bacteriano. A nivel general: Evitar excesiva produccin de gas y desarrollo de aromas desagradables. Las diferencias entre unos quesos y otros radican en los distintos microorganismos empleados para la fermentacin. Proponibacteriuum (queso suizo) Penicillium roqueforti (azul) 3 PRODUCTOS CRNICOS Proceso de elaboracin de productos crnicos fermentados: Generalidades del proceso: La fermentacin microbiana empleada contribuye a alcanzar un pH cido. El objetivo es controlar los staphylococcus carnosus. El pH del producto debe ser inferior a 5,3. Contribuye a la estabilidad y alarga la vida del producto. Facilita la eliminacin de la humedad. Genera aromas caractersticos. 3 VINAGRE Proceso de elaboracin del vinagre: Generalidades del proceso: El objetivo es obtener una disolucin acuosa rica en cido actico. Oxidacin del etanol de partida, bajo accin de la alcohol deshidrogenasa Acetaldehdo. El Acetaldehdo hidratado reacciona mediante la accin de la acetaldehdo deshidrogenasa. cido actico. C2H5OH CH3CHO +H2O CH2CH(OH)2 CH3COOH + H2O 3 Fabricacin de levaduras y pan 3 Fabricacin de levaduras - Las levaduras son los microorganismos ms importantes y ms ampliamente utilizados en la industria. - En casi todos los procesos industriales se utiliza la misma especie de levadura: Saccharomyces cerevisiae, o especies similares.
3 Produccin de levaduras 3 Produccin de levaduras - Se utilizan fermentadores aireados con un volumen de entre 40 y 200 litros. - Medio: melazas constituidas por grandes cantidades de azcar, y en menor proporcin aminocidos, minerales y vitaminas. Se aade cido fosfrico como fuente de fsforo y sulfato amnico que aportar azufre y nitrgeno.
3 Produccin de levaduras - Las melazas se aaden progresivamente para evitar la fermentacin y maximizar la produccin de levadura.
3 Productos La levadura se comercializa como: Pastillas de levadura prensada (panadera) Levadura desecada activa (panadera) Levadura alimenticia en polvo (suplemento alimenticio) 3 Fabricacin del pan Pan: alimento complejo muy antiguo. Alto valor nutritivo en trminos energticos y de protenas. Ingredientes del pan: Harina (generalmente de trigo) Agua Levadura Sacarosa Sal Grasas especficas
3 Etapas La fabricacin del pan consta de las siguientes etapas: Amasado Fermentacin Coccin 3 Amasado - Funciones del amasado: Mezclar e hidratar los ingredientes Producir la masa panaria Aireacin de la masa Puntos de nucleacin del CO2 Oxigenacin para ayudar al esponjamiento
3 Amasado - Tienen lugar en amasadoras, equipos de agitacin que deben asegurar la mezcla y la formacin de la estructura. - Temperatura de 30C 1C. La temperatura se controla con el agua aportada. La actividad de las levaduras en la fermentacin depende crticamente de esta temperatura.
3 Fermentacin Incubado de la masa a 25 - 35C para impulsar la fermentacin de los azcares de la masa por las S. cerevisiae formando alcohol y dixido de carbono, cuyas burbujas quedan atrapadas en la masa. Como resultado de la fermentacin se produce el hinchamiento de la masa, la modificacin de la estructura del gluten, el desarrollo de una textura ligera y esponjosa y la aparicin del aroma y sabor de pan. 78 Coccin - Horneado: Proceso de coccin seco a una temperatura de entre 200 y 230 C. Mecanismos de conveccin y radiacin. - Se busca: Evaporacin de algunos componentes y expansin de los gases Desactivacin de las levaduras Gelatinizacin del almidn, que lo har digerible Fusin de la grasa Desnaturalizacin de las protenas Formacin del flavor 79 BIBLIOGRAFA
La Ciencia del Chocolate. Stephen T. Beckett. Editorial Acribia, 2008. ISBN: 978-84-200-0963-6 The Microbiology of ChocolateChristine L. Case, Ed.D. Biology Professor Skyline College La Salud y la Soja. Instituto Toms Pascal. Editorial Edimsa, 2007. ISBN: 84-7714-251-3 Biotecnologa de la Fermentacin. Owen P. Ward. Editorial Acribia, 1989. ISBN: 84-200-0706-4 Microbiologa. Prescott, Harley, Klein. Ed. McGraw-Hill. Obtencin y caracterizacin de cepas autctonas de levaduras para la elaboracin estandarizada de vinos de calidad. Jose Antonio Regodn Mateos Bioqumica de los procesos metablicos. Virginia Melo, Virginia Melo Ruiz, Oscar Cuamatzi.