Manual de Calidad de

Manual de Calidad de
Inmunohistoqumica
Inmunohistoqumica
en Anatoma
en Anatoma
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. Manuel V
. Manuel V
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S. Anatoma P
S. Anatoma P
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2007
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NDICE
Introduccin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5
Fijacin de tejidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7
Recuperacin antignica . . . . . . . . . . . . . . . . .9
Cuantificacin del resultado
inmunohistoqumico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10
Realizacin de inmunohistoqumica
en preparaciones citolgicas . . . . . . . . . . . . . .11
Evaluacin de nuevos anticuerpos . . . . . . . . . .12
Tipos de anticuerpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Anticuerpos disponibles . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Paneles de anticuerpos . . . . . . . . . . . . . . . . . .14
Primario desconocido . . . . . . . . . . . . . . . .14
Tumores indiferenciados . . . . . . . . . . . . . .17
Utilidad del EMA . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17
Mama . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17
S. Nervioso: neurodeg. y tumores . . . . . . .18
Pulmn/mesotelio . . . . . . . . . . . . . . . . . .20
Piel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
Hgado . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21
Rin-urotelio/prstata/testes . . . . . . . . .21
Ovario/trofoblasto . . . . . . . . . . . . . . . . .24
Endocrinos-neuroendocrinos . . . . . . . . . . .25
Partes blandas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .25
Algoritmo en carcinoma colorectal . . . . . . .26
Hematopoyticos . . . . . . . . . . . . . . . . . .27
Controles externos recomendados . . . . . . . . . .28
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Hoja de peticin de estudios
inmunohistoqumicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30
Anexo: Ejemplo de la base de datos
de anticuerpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31
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El uso de tinciones de tejidos para facilitar su observa-
cin microscpica se inici con la hematoxilina-eosina en
el siglo XIX. En el primer tercio del siglo XX se introduce la
histoenzimologa que utiliza tejidos sin fijar y de la que
quedan nicamente restos, como los estudios con DPNasa
y ATPasa en enfermedades musculares. La primera inmu-
nohistoqumica se realiz con anticuerpos fluorescentes
sobre tejidos frescos como los que se utilizan actualmen-
te en diversas enfermedades de piel y rin. Los mtodos
inmunoenzimticos (peroxidasa, avidita-biotina) que per-
mitan amplificar la seal del cromgeno favorecieron la
utilizacin de tejidos fijados en formol e incluidos en para-
fina. Actualmente se utilizan polmeros sintticos para
amplificar la seal (Envision, Powervision).
La inmunohistoqumica es una tcnica esencial en el
diagnstico anatomopatolgico de las enfermedades, fun-
damentalmente de las neoplsicas. Para que su utilidad
sea plena es necesario realizar la fijacin de los tejidos,
las indicaciones de uso, las tcnicas y la lectura y valora-
cin de los resultados atenindose a unos criterios de
Controles de Calidad tanto internos del propio servicio
como externos, en nuestro caso los auspiciados por la
Sociedad Espaola de Anatoma Patolgica.
Con el objetivo de servir de gua para la obtencin de
resultados ptimos con las tcnicas de inmunohistoqumi-
ca se recogen en este Manual los distintos apartados
necesarios para conseguir, primero, unos niveles de cali-
dad estndares y que ello conduzca despus a su mejora
continua.
En el Servicio de Anatoma Patolgica del Hospital
Donostia se cuenta con un laboratorio de Inmuno-
histoqumica con los medios tcnicos y una cantidad sufi-
ciente de anticuerpos que permiten obtener los mejores
5
Introduccin (J Histotech 1999; 22:163; Arch
Pathol Lab Med 2000;124: 945)
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resultados diagnsticos. Sin embargo, es necesario organi-
zarlos y gestionarlos adecuadamente para que cualquiera
de los patlogos del servicio obtenga la mayor eficacia y
reproducibilidad con los mismos. Por ello, es imprescindi-
ble contar con una base de datos que incluya todos los
anticuerpos y sus caractersticas, con una gua tcnica y
con indicaciones sobre paneles de conjuntos de anticuer-
pos segn las patologas a estudiar y algoritmos diagnsti-
cos para las mismas; tambin deben existir controles
internos en el mismo corte o de tejidos o tumores ad hoc
que permitan unas valoraciones cuantitativas objetivas
con mnimas variaciones inter e intraobservador.
La estandarizacin de cada uno de los pasos, desde la
recogida del tejido hasta la valoracin final del resultado
obtenido, es clave para que la inmunohistoqumica sea
totalmente fiable y, a la vez, que el gasto realizado sea el
ms ajustado a las necesidades. Con estos fines nace este
Manual.
Agradezco la colaboracin de los patlogos del servicio,
as como el apoyo y la asistencia tcnica recibida para la
realizacin de este trabajo a los tcnicos del laboratorio
de inmunohistoqumica Elena, Juana y Puri; a Koro,
supervisora del servicio, y a Linda, por su apoyo inform-
tico. Sin ellas la tarea hubiese sido mucho ms ardua y el
resultado inaccesible.
6
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La inmunohistoqumica se puede realizar en tejidos de
biopsia y de autopsia, generalmente fijados en formol e
incluidos en parafina, as como en material de citologa.
La fase de fijacin del material para inmunohistoqumi-
ca es esencial. Una fijacin inadecuada impide cualquier
resultado fiable.
El fijador que se utilizar para inmunohistoqumica es el
formaldehdo al 4% tamponado a pH 7,4 (formalina). El per-
odo ideal de fijacin no ser menor de 24 horas ni mayor de
48 horas. Fuera de estos estndares la calidad de la tcni-
ca baja sensiblemente. Es aconsejable, por tanto, indicar
en la hoja de peticin de la biopsia la hora en que se intro-
dujo en formol. Hay evidencias de que la fijacin a mayo-
res temperaturas que la ambiental empeora los resultados.
Lo ideal para la piezas mayores es mantenerlas en el frigo-
rfico a 4 C si se van a dejar toda la noche antes de tallar-
las. El material autpsico ofrece generalmente malos resul-
tados debido a los fenmenos postmorten que sufren los
tejidos. La inmunohistoqumica con vimentina permite
observar el deterioro sufrido durante la fijacin. Las piezas
que vayan a procesarse el fin de semana iniciarn dicho pro-
cesamiento el mismo viernes para evitar que permanezcan
excesivo tiempo en el formol; en caso de no ser posible, es
preferible iniciar el procesamiento por alcohol de 70.
Cuando el tejido ha estado menos de 24 horas en formol,
se produce una fijacin hbrida: perifricamente se fijan
con formol mientras las partes profundas centrales lo
hacen gracias a los alcoholes que se emplean durante el
procesamiento. Esto les hace ms sensibles a los mtodos
de recuperacin antignica y resultan ms falsos positivos.
Las citologas, al no tener que fijarse en formol, llevan
un procesamiento diferente que se recoge en el apartado
correspondiente.
7
Fijacin de los tejidos
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En caso de necesitarse utilizar un mtodo de descalcifi-
cacin se elegirn los ms suaves, preferiblemente el
EDTA. Si se han empleado cidos, es crtico realizar un
lavado de duracin variable con agua corriente, de mayor
duracin cuanto ms haya durado la descalcificacin.
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Durante la fijacin con formalina se producen puentes
metilo cruzados entre las protenas y se forman compues-
tos clcicos adyacentes. Estos compuestos afectan tam-
bin a las zonas antignicas y deben eliminarse para obte-
ner un resultado ptimo en la inmunohistoqumica.
El mtodo de recuperacin antignica se realiza funda-
mentalmente mediante incubacin con calor, en torno a
los 100 C, en bferes de citrato o EDTA. Menos frecuente
es el uso de enzimas proteolticas, sin calentamiento, ya
que dejan un fondo mayor y favorecen el desprendimien-
to del tejido.
Protease-induced epitope retrieval (PIER)
Descrito para inmunofluorescencia por Huang en 1976.
En parafina tan slo es til para un nmero limitado de
anticuerpos y adems es difcil de reproducir. El que da
resultados ms estandarizados es la proteasa. Las varia-
bles ms importantes son el tiempo de digestin y la con-
centracin de la enzima.
Heat-induced epitope retrieval (HIER)
En 1991 Shi comienza a utilizar el microondas, entre 8 y
12 minutos, introduciendo las laminillas en buffer citrato
0,001 m a pH 6. El mayor problema es que algunos epito-
pos se daan con el calor de forma irreversible y esto
acontece ms fcilmente si el tejido est poco fijado. Para
evitar el desprendimiento de los cortes tisulares se utili-
zan laminillas adherentes especiales.
9
Mtodos de recuperacin antignica
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Se seguir en general la siguiente pauta, aunque hay fre-
cuentes casos especficos en los que los porcentajes y su
significado pueden variar:
Negativo (-): total negatividad o menos del 50% de las
clulas diana con menor intensidad que el control.
Positividad dbil (+/-): ms del 50% de las clulas
diana con menor intensidad que el control.
Positivo (+): ms del 50% de las clulas diana con
igual o mayor intensidad que el control.
El lmite de intensidades entre negativo y positividad
dbil o positivo se hace por comparacin con un control
interno existente u otro externo ad hoc.
10
Cuantificacin del resultado inmunohis-
toqumico (J Histoch 2005; 28:89)
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Lo mejor es prever siempre un bloque para procesar en
parafina. Hay dos posibilidades, o bien realizar la inmuno-
histoqumica sobre la misma laminilla citolgica o tambin
despegar las zonas deseadas y transferirlas a otros portas.
Esta ltima es ms tediosa pero ofrece los mejores resul-
tados y permite sacar varios portas de una sola extensin
citolgica. El mtodo es muy reciente y se desarrolla de la
siguiente manera:
Es importante la utilizacin del medio Mount-Quick
(Newcomer supply. Middleton WI) (Cancer Cytopathol
2005;105:158/ J Histoch 2002;25:251).
Echad el medio sobre la laminilla y endurecerlo en
estufa a 50-60 C varias horas.
Marcad las zonas a estudiar con rotulador indeleble.
Calentad al bao Mara (45 C) durante 15-20 minutos
para ablandarlo.
Levantad el medio del porta con un bistur y cortadlo
en lonchas.
Transferid a porta adherente especial y mantened
durante un minuto una presin con papel de filtro
humedecido.
Mantened a 60 C durante toda la noche.
Retirad el MontQuick mediante tres pasos por xilol.
Rehidratar (No es necesario desteir si se va a utilizar
HIER).
11
Realizacin de inmunohistoqumica en
preparaciones citolgicas
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1. Seleccin de un nuevo anticuerpo primario: los moti-
vos pueden ser por que existan nuevas demandas o para
sustituir a otro existente.
Deben predecirse el nmero de test que se realizarn
anualmente y el coste de cada estudio.
Deben conocerse la dilucin aunque se preferirn los
no diluidos previamente, el mtodo de recuperacin
antignica y la sensibilidad y especificidad del anti-
cuerpo. Vg. para p53 el DO7 o el pAb 1801; HER2/neu
mejor el policlonal de conejo pero falsos +. Los poli-
clonales tiene en general mayor afinidad y pueden
emplearse diluciones >1/1000, aunque tienden a dar
ms fondo lo que obliga a bloqueos suplementarios
(vg. con la clona LeuM1 tipo IgM debe utilizarse un
anticuerpo secundario de tipo IgM).
2. Optimizacin de la inmunorreactividad
Los factores ms importantes son.
Dilucin del anticuerpo primario.
Duracin de la incubacin del primario.
Tipo y concentracin del anticuerpo secundario.
Tcnica de recuperacin antignica empleada.
Temperatura de incubacin.
Sistema de deteccin y amplificacin.
En la prctica se manejan nicamente tres variables:
Dilucin del anticuerpo primario.
Tiempo de incubacin del primario (si se aumenta el
tiempo se pude diluir ms el anticuerpo primario).
Tcnica de recuperacin antignica (el EDTA alcalino
suele ser mejor que el citrato. Excepciones: LMP-1 y
CD21, en los que se preferirn enzimas).
12
Evaluacin de nuevos anticuerpos
(J Histoch 2001; 24:275)
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La hoja de trabajo para la validacin de nuevos anti-
cuerpos es la siguiente (tabla orientativa):
* Seguid diluciones segn especificaciones de cada anticuerpo.
** Calentad (olla, microondas o autoclave) a 100C 15-20 minu-
tos y otros tantos para enfriar. En muchos casos, es mejor el
pH 9.
*** Slo para ajustar la valoracin. No para resultados en diagnsticos.
Adems de la positividad de la diana debe valorarse el
fondo. Dicha tincin de fondo tiene causas variadas. A
veces es debido a que el anticuerpo no est totalmente
purificado y tiene inmunoglobulinas inespecficas. Muchas
veces es por una titulacin deficiente del anticuerpo pri-
mario y/o secundario (disminuid la concentracin y
aumentad los tiempos para solucionarlo). En las tinciones
citoplsmicas deben tenerse en cuenta los falsos positivos
como los debidos a biotina endgena (neutralizadla con
avidina despus del anticuerpo primario) y con las peroxi-
dasas (se neutraliza con agua oxigenada) y fosfatasa (se
bloquea con levamisol) endgenas.
Para detectar problemas de fijacin es til introducir un
control de vimentina (Dako) pero sin realizar con ella
recuperacin antignica alguna.
13
Dilucin*
Recup
antg/ T **
Tiempo
antc
Sist
incubacin
Resultados ***
1/10
1/20
1/40
1/80
10 mM
citrato
pH 6 /
20 minut
32 minutos
Envision
0- negativo
1- positivo dbil
en algunas clu-
las diana
1/10

1/80
1mM EDTA
pH 8/
20 minut
32 minutos Envision
2- positivo dbil
en muchas clu-
las diana
3-positivo mode-
rado en la
mayora clulas
diana
1/10

1/80
Proteasa
8 minutos
32 minutos Envision
4-positivo fuerte
en la mayora
clulas diana
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Los anticuerpos pueden ser poli o monoclonales. Estos
ltimos son ms especficos y se obtienen mediante el
mtodo de hibridoma de Kohler que consiste en la fusin
de clulas esplnicas de un ratn inmunizado con una lnea
celular de mieloma no secretor murino. Dado que el cone-
jo es ms fcil de inmunizar que el ratn actualmente se
estn introduciendo anticuerpos monoclonales de conejo a
pesar de que este animal no padece mieloma, por lo que
deben generarse heterohibridomas conejo-ratn. Los anti-
cuerpos de conejo son ms sensibles y parecen conservar
la especificidad. (Am J Clin Pathol 2005;124:295).
Como puede observarse en la base de datos, anexada a
modo de ejemplo al final del manual, se recogen todos los
datos necesarios para la identificacin, manejo y gestin
de calidad de la tcnica de inmunohistoqumica.
De ella, junto con la hoja de peticin, se desprendern
las estadsticas mensuales de anticuerpos utilizados, por-
centaje de positividad de cada uno e incidencias tcnicas.
Metstasis de primario desconocido (J Histoch 1999;
22:209)
Las citoqueratinas (CK) se clasifican segn el Pm y el
punto isoelctrico (Moll). In vivo tienden a expresarse
en parejas, una bsica y la otra cida (CK8/CK18;
CK5/CK14). En la prctica las ms tiles son:
14
Tipos de anticuerpos
Anticuerpos disponibles
Paneles de anticuerpos (Dabs. Diagnostic
Immunohistochemistry 2002; www. immunohipermart.net;
www.immunoquery.com/login.cfm; www.cap.org)
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- PanCK AE1-AE3.
- 34beta E12 (alto Pm): se detecta en epitelios comple-
jos como el ductal, el transicional y los escamosos
(CK 1,5,10 y 14), en carcinomas escamosos pobre-
mente diferenciados y en mesotelio.
- CK5/6: positivo en clulas basales, en carcinomas
escamosos pobremente diferenciados y en mesote-
lio.
- CK7: se detecta en epitelios simples de pulmn, cr-
vix, mama, ductos biliares, tubos colectores renales,
vejiga y mesotelio.
- CK19 muy til en carcinoma de pncreas, estmago,
colon, tracto biliar, hgado y mama. El Ca papilar
tiroideo suele ser positivo frente al 50% de los folicu-
lares.
- CK20: se detecta en clulas foveolares gstricas y
clulas umbrela de la vejiga. Muy positivo en car-
cinoma de clulas de Merkel. Positivo en carcinoma
de colon.
La utilizacin simultnea de CK 7 y CK20 ofrece gran-
des ventajas en la orientacin de un posible primario:
CEA: generalmente positivo en carcinomas de pulmn,
hgado y colorrectal. A veces positivo en mama, tran-
sicionales y crvix. Generalmente negativos en meso-
telioma, rin, endometrio y ovario.
p 16- sobreexpresado en carcinomas y displasias aso-
ciadas a VPH.
15
CK7/CK20
+
CK7/CK20
negativas
CK7+/ CK 20
negativa
CK7 negati-
va/ CK20 +
Pncreas
Vejiga
Mucinoso
de ovario
Ca Merkel
Escamoso pul-
mn
Neuroendocrinos
Hepatocarcinoma
Rin
Prstata
Timoma
Pulmn No oat cell
Mesotelioma
Mama
Endometrio
Seroso de ovario
Colorrectal
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Otras combinaciones tiles para identificar el origen de
los carcinomas son:
Algunos anticuerpos son ms rgano-especficos:
PSA, tiroglobulina, TTF-1, protena surfactante tipo A.
Receptores de estrgenos y/o progesterona general-
mente positivos en mama, endometrio, crvix, ovario,
16
34BE12 CAM 5.2 AE1/AE3 CK7 CK 20 TTF-1
C Merkel N + + N + N
Oat cell N + + -/+ N +
Adc pulm -/+ + + + N +/-
Mama -/+ + + + N N
Seminoma N N N N N N
Endometr -/+ + + + N N
Vejiga -/+ + + + + N
Partida -/+ + + + N N
Neuroend N + + + N N
Pncreas -/+ + + +/- -/+ N
Biliar -/+ + + +/- +/- N
Gstrico N + + +/- +/- N
Colorrectal N + + N + N
Prstata N + + -/+ N N
Renal N + + N N N
Germinal N + + + N N
Hepatoca N + N N N N
Muc ovari N + + + + N
No muc ov N + + + N N
Tiroides -/+ + + -/+ +/- +
Adrenal N N N N N N
Timo -/+ + + N N
Endocrvix N + + + N N
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tiroides, neuroendocrinos y sudorparos. Son siempre
negativos en hepatocarcinoma, carcinoma colorrectal
y en el pulmonar no oat cell.
Tumores indiferenciados
Reactividad del EMA en carcinomas y tumores no epi-
teliales.
Mama
- Para el diagnstico diferencial entre hyperplasia duc-
tal e hyperplasia atpica-Ca in situ son tiles la cito-
queratina 34bE12 y la CK 5/6.
- Para valorar la posible invasin estromal se utilizan la
p63 y la calponina.
CAM 5.2 EMA S-100 ALC Fosf Al Plac
Carcinoma + + -/+ N -/+
Melanoma N N + N N
Linfoma N N N + N
No semino + N N N +
Seminoma R-N N N N +
17
Tpicamente
positivo
Generalmente
negativo
Positividad ms
focal
Biliar ductos
Carcinomas sarco-
matoides
Endocrvix
Endometrio
Mama
Meningioma
Mesotelioma
Pncreas
Piel y anejos
Prstata ductos
Pulmn
Salival
Tiroides
Urotelio
Tumores germinales
excepto coriocarci-
noma
Perineuroma
Neurofibrosarcomas
Sarcoma sinovial
Plasmticas
Eritroblastos
Cel L-H Hodgkin
ALK linfoma
Leiomiosarcoma
Hist fibroso maligno
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En la clasificacin es importante la conjuncin de: datos
clnicos, distribucin anatmica de las lesiones, tipo de
cambios morfolgicos y positividad, segn en tipo de pato-
loga, para los siguientes anticuerpos:
- Amiloide-
- Protena Glial Fibrilar cida
- Sinuclena
- Tau
- Ubicuitina
Tumores de sistema nervioso central
Muy importante: en las intraoperatorias hay que estar
seguros de que el material es representativo de la lesin.
Ojo!: En las biopsias obtenidas con esterotaxia, si se usa
toda la muestra para la tcnica de aplastamiento en vez
de las improntas, no quedar material para parafina. Hay
que tener adems en cuenta que algunos glioblastomas
pueden dar positividad para citoqueratinas, por lo que se
preferir el CAM 5.2. En general suelen ser tiles para el
diagnstico y clasificacin la utilizacin de Ki-67 y p53.
- Con clulas claras
PGFAP EMA Synapt Kp-1
Oligodendroglioma + - - -
Xantoastrocitoma + - - -
Ependimoma + - - -
T disembriplstico + - + -
Neurocitoma + - + -
Meningioma - + - -
Hemangioblastoma - - - -
Ca renal - + - -
Desmialinizacin + - - +
Infarto + - - +
19
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 19
- Con clulas epitelioides
- Tumores con clulas pequeas/anaplsicas
Respiratorio
- Carcinomas pulmonares: epidermoide vs oat cell
Panqueratin/
CAM 5.2
Cromogranina A TTF-1
Ca epidermoide + difuso - -
Oat cell +/- puntiforme + +
Viment GFAP Synap S100 Desmi CK EMA CD20
Ependimo-
blast
+/- -/+ - - - - - -
Medulob/P
NET
- -/+ +/- -/+ - - - -
Rabdomios - - - - +/- - - -
T
teratoide
+ +/- - - - +/- -/+ -
Hemangio-
peric
+ - - - - - - -
Linfoma - - - - - - - +
Ca cel
pequea
- - - - - + + +/-
20
GFAP CAM 5.2 EMA S-100 Cromog Sinapt
Oligodendroglioma + - - + - -
Ependimoma + - - + - -
Papiloma plexos - + - + - +
Cordoma - + + + - -
Craneofaringioma - + + - - -
Carcinoma - + + - - -
Adenoma hipofisis - + + - + +
Paraganglioma - - - - + +
Meningioma - - + - - -
Melanoma - - - + - -
Hemangioblastoma - - - - - -
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 20
- Mesotelioma epitelial vs carcinoma
Piel
- Enfermedad de Paget vs carcinomas/ melanoma
Hgado
- Carcinomas hepticos primarios
Genitourinario
- Tumores renales: perfiles inmunohistoqumicos
Adenoma metanfrico: WT1 y CD 57 positivos; CK 7 y
EMA negativos
Angiomiolipoma: HMB 45 y actina positivos; CK negativas
Carcinomas con translocacin Xp11.2/TFE3: protena
TFE 3 positiva nuclear
Carcinoma de clulas claras
21
CK 7 Pan CK CK 20 CEA S-100
Paget mama + + - + - /+
Paget vulva -/+ +/- -/+ +/- -/+
Ca recto - + + + -
Ca urotelial + + - -/+ -
Melanoma - - - - +
Bowen - - - -
Calre-
tinina
Trombo
modulin
DO 4 CK 5/6 CEA CD15
BerEP
4
Mesotelioma + +/- +/- +/- - - -
Carcinoma - - - -/+ +/- +/- +
CK AE1-
AE3
CEA Hepatocito 1 Alfa FP
Hepatocarcinoma -/+ -/+ + +/-
Colangiocarcinoma +/- +/- -/+ -/+
Positivos Negativos
CK 7
EMA
Vicentina
CD10
Fosfatasa alcalina
CK alto Pm
CEA
S-100
Inhibina
Otros:
Mucina, Oil red-O, hierro coloidal Hale
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 21
Carcinoma papilar renal
Carcinoma cromfobo
Carcinoma ductos colectores
Carcinoma urotelial
(*) CK20 para diag. Dif. Entre Ca in situ (+) e hiperplasia urotelial
22
Positivos Negativos
CEA
CK alto Pm
p63
CK 7
CK 20 (*)
_-catenina (a diferencia de
colon)
Vimentina
CDX2
Positivos Negativos
CK AE1-AE3
CK 7
Vicentina
Mucina
CK alto Pm
Ulex europeus lectina
Positivos Negativos
CK AE1-AE3
CK 7
CK alto Pm (a veces negativo)
E-Cadherina
EMA
Hierro coloidal Hale
Azul alcin
CD10
Vimentina
Positivos Negativos
EMA
CK 7
CK alto Pm
Vimentina
CEA (focal)
Mucina
CD15
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 22
Cuadro sinptico de neoplasias renales (Clin Lab
Med 2005; 25:247)
(*) intenso con refuerzo de membrana; (**) focal y dbil; (***)
membrana; (****) citoplsmico. A diferencia del cromfobo: ste
patrn en anillo con CK 7-CK 19 y AE1-AE3
- Prstata (Histopathology 2005; 47:1)
El AMARCR (antc monoclonal conejo P504S) es til en
PIN de alto grado y carcinoma prosttico. Puede
resultar positivo en adenosis y en el adenoma nefro-
gnico.
PSA- debe utilizarse un policlonal y un carcinoma de
alto grado como control.
Para diferenciar un carcinoma de prstata de otro
urotelial resultan tiles: el PSA para el origen pros-
ttico y las citoqueratinas de alto peso molecular (34
betaE12), p63 y la CK7 para identificar urotelio
(puede ser positivo en Gleason altos y lo contrario la
CK 20).
Para marcar basales resultan igual de eficaces la CK 5/6
y la p63 (sta resiste ms la electrocoagulacin).
23
Cel
Claras
Papilar Crom-
fobo
Oncoci-
toma
Ductos
colec
CD10 81-100% 63-100% +/- 26% +/- 33% -----
RCC marker 75-85% 75-96% +/- 45% ------
Vimentina + +/- ------ +/-
EMA + + 75% +
CK 7 ---- + (tipo1) 73-100% * 19-100% ** +/-
CK 20 ---- +/-(tipo 2) ---- +/- (50-80%) -----
CK 15 75% 100% +/- (25%) 63%
CD 117 +/- (15%) +/- (28%) 57-100%
***
70-100% *** -----
Racemasa -/+ (25%) 100% ----- -/+ (15%)
CK < Pm + + +
CK >Pm ---- -/+ ---- ---- +
E-
Cadherina
5% 0% (tipo1)
38% (tipo2)
95100% 100%
****
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 23
- Tumores testiculares
Suelen ser tiles los siguientes anticuerpos:
Fosf Alcalina Placentaria (membrana)- Seminoma,
neopl germinal intratubular, gonadoblastoma, ca
embrionario, TSE.
HCG- Clulas sincitiotrofoblasto.
Lactgeno placentario- trofoblasto intermedio.
Inhibina- T estroma-cordones sexuales, trofoblasto
intermedio.
EMA-si sale positiva descartar un carcinoma metast-
sico.
(*) negativa en espermatoctico; (**) S-100 y Melan A pueden ser
positivos.
- Tumores ovricos
- Ca mucionoso ovrico vs Ca colon
Colorrectal Ovrico
CK 7 - +
CK 20 + -
CEA + -
Vimentina - -/+
Epitelio
Superf
Tecom Granu
losa
Sertoli
Leydig
Tum
anex
Wolfi
Disger
minom
TSE CaEm Corio
EMA + - - - - - - -
Inhibina - + + +/- + - - - -
MelanA - - -/+ + - - - - -
CK + - - - - + + +
AFP - - - - - + -/+ -
HCG -/+ - - - - - - +
CD30 - - - - - - + -
24
PLAP CD 117 Pan CK CD30
alfa-
Feto
Inhi-
bina
Vimen-
tina
Seminoma + (*) + -/+ - - - -
Ca embrionar + + + -/+ - -
TSE +/- + - +/- - -
Tcel Leydig** - -/+ - - + +
T cel Sertoli - +/- - - + +
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 24
- Lesiones trofoblsticas y simuladores
- Tumores endocrinos/neuroendocrinos (J Histoch 1999;
22:239): cromogranina A (a veces falla en carcinoides
hindgut y prolactinomas), sinaptofisina, Leu 7, CD57
(NCAM), inhibina alfa (clulas gonadales productoras
de esteroides y corteza adrenal).
- Tumores de partes blandas (J Histoch 1999;22:219)
CD31 (PECAM-1): endotelio, plaquetas, clulas madre
hematopoyticas.
CD34: dermatofibrosarcoma protuberans, tumor fibro-
so solitario, hemangiopericitoma, GIST, endotelio,
progenitores hematopoyticos, fibroblastos y lipoma
fusocelular.
Factor XIII: histiocitoma fibroso.
S-100: melanoma, sarcoma de clulas claras, lipoma
de clulas redondas.
HMB-45: melanomas, PEComas.
HHF.35, actina muscular alfa: clulas glmicas, mio-
fibroblastos, mioepitelio y msculo liso.
Caldesmn: msculo liso y mioepitelio pero no en
miofibroblastos ni rabdo.
Calponina: msculo liso, miofibroblastos, mioepitelio
y, a veces, en sarcoma sinovial.
EMA: perineuromas, meningiomas, carcinoma renal y
sarcoma sinovial (en ste focalmente pueden resul-
tar positivos S100 y CD99).
Myo D1: en el ncleo para que sea especfico de ms-
culo estriado.
-catenina en fibromatosis (negativo en cicatrices).
Por tumores son tiles:
Sarcoma epitelioide: EMA, vicentina, CD34 (50%),
actina (33%). La CK7 es negativa.
25
Lugar
placen
Ndulo
placen
T trofo
blastico
Ca
escamoso
CK + + + +
Ki-67 - -/+ +/- +
HLP + - +/- -
PLAP + + -
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 25
Sarcoma alveolar: positividad de actina y desmina en
el 50% casos. Protena AE3 +.
Osteosarcoma: osteocalcina.
Swing/PNET: CD99; focalmente CK, neurofilamentos.
Neuroblastomas: NSE y sinaptofisina positivos; CD99
negativo.
T. cel. redondas pequeas desmoplsico: positividad
para CK, vimentina, EMA y desmina. NES +/-.
Tumores de clulas pequeas azules redondas (J
Histoch 1999;22:289).
Algoritmo resultados IHQ con MLH1, MSH2, MSH6 y PMS2
en Carcinoma colorrectal (Rev Esp Patol 2006;39:201-8).
Modificado
26
ALC Vim Des Act MyoD CK CD
99
NF CrA Sy-
nap
TdT Inhib S
100
Leuc/linf + + - - - - +/- - - - + - -
Rabdo - + + + + - - - - - - - -
Neurobl - + - - - - - + + + - - -
Swing - + - - - -/+ +/- -/+ + -/+ - - -
S sinovial - + - - - +/- +/- - - - - - -
DSRCT - + + + - - - -/+ -/+ + - - -
Cond ms - + - - - - -/+ - - - - - -
Granulosa - - -/+ - - +/- +/- - - - - + -/+
Melanoma - - - - - - - - - - - - +
Carcinoma + -/+ - - - + - - -/+ - - - -/+
No prdidas
expresin
CCR
espordico
Mutacin
BRAF
Prdida
MLH1
+/- PMS2
Prdida
PMS2
Prdida
MSH6
Prdida
MSH2
Criterios
Bethesda
revisados
Anlisis
germinal
Sndrome
Lynch
CCR
Familiar
NO Lynch
Inestabilidad
Microsatlites
BAT-26
Criterios
Bethesda
revisados
S
S No
No
No
No
S
S
+/-
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 26
Hematopoyticos y afines:
- Antgeno leucocitario comn (ALC: CD45RB/CD45):
clulas originadas en la mdula sea, incluyendo
linfocitos y monocitos. Son negativos en 50% casos:
linfoma ALK y linfoblsticos. Suelen ser negativos:
cel Hodgkin y plasmticas.
- ALK: varias localizaciones celulares.
- CD1a: cel Langerhans, timocitos corticales (inma-
duros) y, a veces, Rosai-Dorfman.
- CD3: policlonal. Si monoclonal usad psilon (7S1).
- CD5: timocitos, linfos T, Carcinomas tmicos, LLC y
linfoma del manto.
- CD10: LLA, centro germinal, linfoma folicular, linf
Burkitt.
- CD15 (LeuM1): granulocitos, algunos macrfagos y
cel Reed-Sternberg (Golgi y membrana).
- CD20: linfocitos B.
- CD23: LLC, cel dendrticas.
- CD30: marcador de activacin linfocitario, linfoma
ALK, Carcinoma embrionario y cel Reed-Sternberg
(Golgi y membrana).
- CD38: linfos activados y plasmticas.
- CD43: linfos T, granulocitos (LMA), monocitos,
megacariocitos, mastocitos y un 30% de linfomas B.
- CD45RO (UCHL1): linfos T, monocitos y granulocitos
(LMA).
- CD63: plasmticas (marca retculo endoplsmico).
- CD68 (KP-1): positividad citoplsmica en monoci-
tos, SER, osteoclastos, precursores mieloides y
algunos linfos B.
- CD79a: linfocitos B.
- CD99: timocitos corticales y timomas, PNET/Ewing
y LLA.
- CD123: precursor dendrtico hematodrmico.
- CD138: plasmticas.
- Mum 1: plasmticas.
- Pax-5: diferenciacin lnea B.
- Bcl-2: linfomas de bajo grado y linfocitos T.
- Bcl-6: origen centro germinal.
- Ciclina D1: linfoma del manto.
27
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 27
- S100 (nuclear y citoplsmico): cel Langerhans, cel
interdigitantes,Rosai-Dorfman, leucemia mieloide,
melanomas y cel Schwann.
- TdT: leucemias linfoides agudas.
- Triptasa: mastocitos.
- MIB-1 (Ki-67): marcador de proliferacin.
- ZAP70- indicador de peor pronstico en LLC y, pro-
bablemente, en linf manto.
Controles externos recomendados (www.ihcworld.com).
28
Anticuerpos Tejidos Localizacin
Actina msculo-especifica
AE1/AE3
AFP
ALK
Beta amiloide
Beta Catenina
BerEP4
CD (varios), bcl-2/bcl-6
CD15
CD30
CD99
CD117
CEA (monoclonal)
CK AE1-AE3
CK7
CK20
Caldesmon
Calretinina
COX2
Cromogranina A
Desmina
E-Cadherina
EGF R
EMA
Estrogeno R
Fosfatasa alc placentaria
Hepar 1
hCG
HMB-45
Inmunoglobulinas
Inhibina
Ki-67 (MIB1)
Lactgeno placentario
Melan A
Mieloperoxidasa
Colon, bazo
Colon, piel, pncreas
Hgado fetal
Linfoma anaplsico
Cerebro Alzheimer
Ductos,dctulos biliares
Mama, colon
Amgdala
Hodgkin
Hodgkin, pncreas
Timo
Piel, cerebro, pulmn,
bazo
Colon
Colon, piel, pncreas
Mama, pulmn
Colon, pncreas
Msculo liso
Mesotelio, timo teste,
cerebelo
Colon, rin
Pncreas, adrenal, ovario
Colon, bazo
Mama
Placenta
Amgdala, rin
Mama, tero
Placenta
Hgado normal
Placenta
Melanoma
Amigdala
Ovario
Piel, timo, amigdala
Placenta, amgdala
Melanoma
Mdula sea
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Variable nuclear/citopl
Citoplasma
Ncleos
Citoplasma
Membrana
Membrana-Golgi
Membrana/Golgi
Membrana
Membrana/citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Ncleo-citoplasma
Granular citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Membrana
Membrana
Nuclear
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Nuclear
Citoplasma
Citoplasma granular
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 28
29
Anticuerpos Tejidos Localizacin
Pax-5
p53
p63
PDGF R
Progesterona R
Protena Glial fibrilar
PSA
Racemasa
S-100
Sinaptofisina
Tau
TdT
Tiroglobulina
TTF-1
Triptasa
Vimentina
WT-1
Hodgkin nodular linf
Ca seroso, Ca mama
Mama
Mama
Mama, tero
Cerebelo
Prstata
Prstata
Piel
Cerebro, adrenal
Alzheimer
Timo
Tiroides
Tiroides
Mdula sea
Ca de colon
Rin
Ncleo
Nuclear
Nuclear
Membrana
Nuclear
citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Ncleo + citoplasma
Citoplasma
Citoplasma
Ncleo
Citoplasma
Nuclear
Citoplasma
Citoplasma
Nuclear
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 29
N de la muestra
Urgente
Dr/Dra. Fecha peticin: Fecha entrega:
Observaciones para el tcnico:
Valoracin tcnica (1 a 10)
TEAP:
Patlogo:
Problemas tcnicos observados:
30
Peticin de estudios inmunohistoqumicos
Actina musc esp
ALK protena
Alfa1-antitrip
Alfa-fetoprot
Alfa sinuclena
Amiloide AA
Amiloide beta
Anti HH3
Bcl-1
Bcl-2
Bcl-6
Bcl-10
BerEP 4
Caldesmn
Calmodulina
CD1a
CD3
CD4
CD5
CD7
CD8
CD10
CD15
CD20
CD23
CD30
CD31
CD34
CD43
CD45RA (ALC)
CD45RO/UCHL
CD56
CD57
CD68
CD79a
CD99
CD117
CD123
CEA
c-erb-2
Cromogranina A
Citoq AE1-AE3
Citoq 5/6
Citoqueratina 7
Citoqueratina 19
Citoqueratina 20
Citoq 34 B E12
Desmina
DO 4 D2-40
EBER
e-cadherina
Enolasa NE
Estrgeno recept
Factor XIII a
Fosfatasa cida
Fosfat alcalina
Granzima B
HCG-beta
Hepatocito 1
HMB-45
Inhibina alfa
Inmunoglob A
Inmunoglob D
Inmunoglob G
Inmunoglob M
Kappa
Ki-67
Lactgeno plac
Lambda
LMP-1
Melan A
Mieloperoxidasa
Myo-D1
MUM-1
MLH1-MSH2-MSH6-
PMS2
Neurofilamentos
p16
p53
p63
Pax-5
Perforina
Progesterona
recep
Prot glial fibrilar
PSA
Racemasa alfa
S-100
Sinaptofisina
Surfactante pr A
Tau
TdT
TIA-1
Tiroglobulina
Triptasa
Trombomodulin
TTF-1
Vimentina
ZAP-70
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 30
31
ANEXO
Inmunohistoqumica cast 25/6/07 15:58 Pgina 31
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