Suero Control Positivo: Suero de conejo el cual ha sido inmunizado contra todos los antgenos febriles en una suspensin.

MATERIALES REQUERIDOS, NO INCLUIDOS Pipetas serolgicas Placa de Reaccin Agitador

ANTGENOS FEBRILES
AGENTE DE DIAGNSTICO
SIGNIFICADO CLNICO La infeccin causada por microorganis-mos de diversas especies produce entre otros sntomas una marcada elevacin de la temperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea causada por Salmonella typhi, S. enteritis , as como las paratifoideas causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo causado por el genero Rickettsias . La infeccin por estos microorganismos induce a una respuesta inmune de tipo humoral con la produccin de anticuerpos que pueden ser detectados con el antgeno especfico. Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rickettsia sp, el antgeno empleado para la determinacin de anticuerpos es el de Proteus OX-19, el cual presenta una reaccin cruzada con bacterias del genero Rickettsia. La reaccin de Huddleson es un mtodo serolgico que detecta anticuerpos contra B. abortus, B. melitensis y B. Suis, agentes causales de la brucelosis; tambin conocida como fiebre de malta o fiebre ondulante por el cuadro febril caracterstico que se presenta. FUNDAMENTO La prueba se basa en una reaccin inmunolgica entre los anticuerpos sricos y el antgeno correspondiente produciendo una reaccin de aglutinacin macroscpica. CONTENIDO
G

RECOLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA Obtenga sangre venosa y separe el suero evitando la hemlisis. MTODO DE PRUEBA RPIDA EN PLACA Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antgeno que se este usando. NOTA: El reactivo as como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba. 1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar: 0.08 mL, 0.04 mL, 0.02 mL, 0.01 mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR TOTALMENTE CLARO). 2. Agitar el antgeno a utilizar para tener una suspensin uniforme. 3. Aadir 30 L de la suspensin de antgeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 L). 4. Mezclar el antgeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero. 5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecnico (120 rpm) durante 2 minutos. 6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinacin macroscpica. 7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo. INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS El grado de aglutinacin se registra como sigue:

Tfico O - Salmonella typhi; Antgeno somtico, pH: 6.5 1.0 Tfico H - Salmonella typhi; Antgeno flagelar, pH: 6.5 1.0

4+ 3+ 2+ 1+ -

Aglutinacin del 100% de los organismos Aglutinacin del 75% de los organismos Aglutinacin del 50% de los organismos Aglutinacin del 25% de los organismos Aglutinacin del 0% de los organismos

G G G G

1.0 Paratfico B - pH: 6.5 1.0 Proteus OX-19 - pH: 6.5 1.0 Brucella abortus - pH: 6.5 1.0
Paratfico A - pH: 6.5

Suero control negativo: Suero de conejo el cual no ha sido inmunizado contra ningn antgeno, por lo que no muestra ninguna aglutinacin con los antgenos en suspensin.

El titulo del suero ser la inversa de la dilucin ms alta en donde se observa una aglutinacin del 50% de microorganismos (2+) Las diluciones del suero en la prueba en placa son aproximadamente equivalentes a las diluciones para prueba en tubo como se muestra a continuacin.

VOLUMEN DEL SUERO 0.08 mL 0.04 mL 0.02 mL 0.01 mL 0.005 mL

TITULO 1 : 20 1 : 40 1 : 80 1 : 160 1 : 320

9. Registrar el ttulo del suero en el cual la ultima dilucin de una aglutinacin sea 2+. PRECAUCIONES 1. Todos los sueros por probar debern estar totalmente claros y libres de contaminacin bacteriana. 2. No caliente el suero antes de probarlo. 3. Agite bien el antgeno antes de utilizarlo para asegurar una suspensin uniforme. 4. El antgeno se debe mantener en refrigeracin a 2-8C cuando no se utilice. 5. No congelar. Se recomienda la utilizacin de sueros control Positivo y Negativo probados en paralelo con la muestra de suero para asegurar al analista que el antgeno bacteriano en uso es capaz de reaccionar con su anticuerpo homlogo y mostrar cmo sern los resultados esperados en muestras de suero positivas y negativas. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO 1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infeccin anterior. No siempre se presenta produccin de aglutininas en infecciones bacterianas. 2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tfica puede producir aglutininas contra antgenos Proteus. 3. En la reaccin de Huddleson, ttulos de 1:80 pueden consi-derarse ya de significado clnico. Nota: El diagnstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el laboratorio clnico y el mdico, ya que la elevacin del ttulo en la muestra de suero con sintomatologa reciente y la muestra de suero en fase convaleciente indicar la exactitud del diagnstico. BIBLIOGRAFA 1. Spink, W.W. : Amer, J. Clin, Path., 22 :201, 1952. 2. Dyer, R.E. : J.A.M.A., 124 : 1165, 1944. 3. Welch, H. & stuart, C.A. : J. Lab. Clin. Med., 21 :411, 1936 4. Felix, A. : Brit. MD. J., 11 :597, 1942. Rev.: 22/02/02 IN-384 Fabricado en Mxico por: LABORATORIOS MICSA Estudios Clasa No. 9 Col. Jardines Tecma Mxico, D.F.

MTODO DE TITULACIN EN TUBO: Mezcle bien la suspensin de antgeno mediante agitacin suave; prepare una dilucin 1:20 del antgeno a utilizar en solucin salina. 1. Colocar 7 tubos de 13 x 100 mm en una gradilla para cada antgeno a probar, marcndolos del 1 al 6 y el tubo 7 como control. 2. Aadir al tubo 1, 0.9 mL de solucin salina y 0.5 mL a los 6 tubos restantes. 3. Aadir 0.1 mL del suero a probar al tubo nmero 1, mezcle bien y transfiera 0.5 mL al tubo nmero 2. 4. Contine esta operacin hasta el tubo nmero 6, eliminar 0.5 mL de esta dilucin. El tubo 7 (Control negativo) tendr nicamente solucin salina. 5. Aadir 0.5 mL del antgeno diluido 1:20 a cada uno de los 7 tubos. 6. Agitar bien la gradilla para mezclar el antgeno y el suero e incubar en bao de agua. El tiempo y temperatura recomendado es el siguiente. Antgeno Tfico O Tfico H S. paratyphi A y B Temperatura 48-50C 37C 48-50C 37C 37C Tiempo de incubacin 18-24 Horas 2 Horas 2 Horas 48 Horas 18-24 Horas

Brucella abortus Proteus OX-19

7. Despus de la incubacin, saque la gradilla que contiene los tubos del bao y observe la aglutinacin. La utilizacin de una fuente de luz directa contra un fondo negro dar mejores condiciones para la lectura. 8. Registrar los resultados como sigue : 4+ Todos los organismos 100% aparecen sedimentados en el fondo del tubo y el sobrenadante es totalmente claro. Aproximadamente el 75% de los organismos se encuentran sedimentados y el sobrenadante es ligeramente turbio. Aproximadamente el 50% de los organismos se encuentran sedimentados y el sobrenadante es moderadamente turbio. Aproximadamente el 25% de los organismos se encuentran sedimentados y el sobrenadante es turbio. No se observa aglutinacin y la suspensin es turbia.

3+

2+

1+

Negativo

para: Laboratorios Licon S.A. Viveros del Roco No. 33 Col. Viveros de la Loma C.P. 54080 Tlalnepantla, Edo. de Mxico Tel.: (55) 5362-0299 Fax: (55) 5362-1792