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BACTERIAL ANTIGENS

Antgenos Bacterianos
Aglutinacin en porta y tubo

Determinacin cualitativa de anticuerpos febriles C. Mtodo de aglutinacin en tubo (semicuantificacin)


1.Preparar una serie de tubos tal como sigue:
IVD
Conservar a 2 - 8C. Diluciones 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640
Muestra (L) 100 -- -- -- -- --
ClNa 9 g/L (mL) 1,9 1 1 1 1 1
PRINCIPIO DEL METODO 1 mL
Los Antgenos Bacterianos son una tcnica de aglutinacin en porta y tubo para la 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL desechar
deteccin y semicuantificacin de anticuerpos anti-Salmonella, Brucella y Proteus en
suero humano. Los reactivos, suspensiones bacterianas, coloreadas y estandarizadas,
aglutinan en presencia del anticuerpo homologo correspondiente en las muestras 2. Preparar 2 tubos ms para Control Positivo y Negativo: 0,1 mL Control + 0,9 mL
ensayadas. ClNa 9 g/L.
3. Aadir una gota (50L) de antgeno a cada tubo.
SIGNIFICADO CLINICO
4. Agitar e incubar los tubos a 37C durante 24 h (Nota 3).
El diagnostico de enfermedades febriles puede establecerse bien sea por el aislamiento
del microorganismo en sangre, orina o heces o por la demostracin del ttulo de LECTURA E INTERPRETACIN (Nota 4)
anticuerpos especficos, somticos (O) y flagelares (H) en el suero del paciente. La Mtodo de aglutinacin en porta
determinacin de estos anticuerpos forma las bases para el ensayo de Widal que Examinar macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin
establece que altos niveles de anticuerpos O y H superiores a 1/100 en suero, es inmediatamente despus de retirar el porta del agitador y comparar los resultados con
indicativo de infeccin por estos microorganismos. los sueros control.
REACTIVOS Los resultados obtenidos en el mtodo de titulacin en porta, son aproximadamente
REACTIVO Antgeno Ref. Presentacin equivalentes a los que se obtendran en el mtodo de aglutinacin en tubo con
diluciones del suero de 1/20, 1/40, 1/80, 1/160 y 1/320 respectivamente. Cualquier
Salmonella paratyphi AH a flagelar 1205011 resultado positivo, es aconsejable confirmar el ttulo mediante el mtodo de
Salmonella paratyphi AO 1,2,12, somtico 1205021 aglutinacin en tubo.
Salmonella paratyphi BH b flagelar 1205031
Salmonella paratyphi BO 1,4,5,12 somtico 1205041 Mtodo de aglutinacin en tubo
Salmonella paratyphi CH c flagelar 1205051 Examinar macroscpicamente el modelo de aglutinacin (Nota 5) y comparar los
Salmonella paratyphi CO 6,7 somtico 1205061 resultados con los obtenidos en los tubos control.
Salmonella typhi H d flagelar 1205071 5 mL El control positivo debe mostrar aglutinacin parcial o completa. El Control negativo no
Salmonella typhi O 1,9,12 somtico 1205081 debe mostrar ningn tipo de aglutinacin.
Se considera como resultado positivo cualquier grado de aglutinacin parcial o
Brucella abortus * somtico 1205091
completa, con diversos grados de clarificacin del sobrenadante. El ttulo de la
Brucella melitensis somtico 1205097
muestra se define como la dilucin mayor que muestra resultado positivo.
Proteus OX2 somtico 1205101
Proteus OX19 somtico 1205111 CONTROL DE CALIDAD
Proteus OXK somtico 1205121 Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar la funcionalidad de
Control + 1205201 los reactivos, as como modelo de comparacin para la interpretacin de resultados.
1 mL
Control - 1205211
(*): Adecuada tambin para determinacin de anticuerpos anti- Br. suis VALORES DE REFERENCIA
Son indicativos de infeccin reciente:
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS Salmonellas: Ttulos 1/80 (anticuerpos somticos) y 1/160 (anticuerpos flagelares).
- Antgenos Bacterianos: Suspensin de Salmonellas, Brucellas y Proteus en tampn Brucellas: Ttulos 1/80.
glicina, pH 8,2. Conservante. Proteus: Ttulos de OX19 1/80, OX2 1/20 y OXK 1/80.
- Controles: Suero animal. Conservante. El nivel normal de anticuerpos febriles varia ampliamente segn los diferentes pases y
comunidades. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores
CALIBRACION de referencia.
No existe referencia internacional para la estandarizacin de la sensibilidad de estos
reactivos, por lo que se utiliza un control interno constituido por suero animal que CARACTERISTICAS DEL METODO
contiene anticuerpos frente a cada uno de los antgenos citados anteriormente y que ha Todas las caractersticas diagnosticas de los distintos reactivos de Antgenos
sido titulado con reactivos comerciales de calidad reconocida. Bacterianos pueden encontrarse en los correspondientes Informes Tcnicos que se
PREPARACION Y ESTABILIDAD encuentran a disposicin del usuario que lo solicite.
Antgenos Bacterianos: Listos para el uso. Agitar suavemente antes de usar.
Controles: Listos para el uso. INTERFERENCIAS
Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partculas y agregados. Bilirrubina (20 mg/dL), hemoglobina (10 g/L), lpidos (10 g/L) y factores reumatoides
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el (300 UI/mL), no interfieren.
envase cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, y se evita la
contaminacin durante su uso. No congelar. LIMITACIONES DEL METODO
- La infecciones recientes, la inmunodepresin, el efecto prozona (Brucelosis) y la
MATERIAL ADICIONAL terapia con antibiticos (somticos), pueden ocasionar falsas negatividades.
- Agitador rotatorio de velocidad regulable a 80-100 r.p.m. - Se han descrito reacciones cruzadas con Brucela en casos de infeccin o
- Estufa a 37C vacunacin con algunas cepas de Vibrio cholerae, Pasteurella, Proteus OX19 y Y.
enterocolitica (serotipo 9).
MUESTRAS - Una elevada proporcin de individuos normales da resultados positivos con los
Suero fresco. Estable 8 das a 2-8C o 3 meses a 20C. antgenos de Proteus, especialmente en el ensayo de aglutinacin en porta. Un
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba. No utilizar ttulo inferior a 1/160 en tubo, no debe considerarse significativo.
muestras altamente hemolizadas o lipmicas. NOTAS
1. En los ensayos de anticuerpos anti-Brucela, se recomienda reducir la muestra a 20
PROCEDIMIENTO L para evitar el efecto prozona.
A. Mtodo de aglutinacin en porta (cualitativo) 2. En determinadas reas geogrficas, con elevada prevalencia de enfermedades
1. Dejar atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad febriles, se recomienda diluir la muestra 1/4 en ClNa 9 g/L antes de realizar el
del ensayo disminuye a temperaturas bajas. ensayo en porta.
2. Depositar 50 L de la muestra a ensayar (Nota 1 y 2) y 1 gota (50 L) de cada control 3. Se puede acelerar los tiempos de incubacin de la siguiente manera:
en crculos separados de un porta. - Antgenos somticos (O) y Proteus: 48-50C, 4 h.
3. Homogeneizar el reactivo suavemente antes del ensayo. Aadir una gota (50 L) de - Antgenos flagelares (H): 48-50C, 2 h.
antgeno prxima a la muestra a ensayar. 4. Un resultado positivo aislado es menos significativo que una variacin de ttulos
4. Mezclar con ayuda de un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie obtenidos en ensayos realizados a distintos intervalos de tiempo. El diagnstico
interior del crculo. clnico no debe realizarse nicamente con los resultados del laboratorio, sino que
5. Situar el porta sobre una agitador rotatorio a 80-100 r.p.m., durante 1 minuto. debe considerarse al mismo tiempo los datos clnicos del paciente.
5. La aglutinacin somtica se caracteriza por ser fina y granular, de formacin lenta y
B. Mtodo de aglutinacin en porta (titulacin) difcilmente disgregable. La aglutinacin flagelar es algodonosa, de formacin
1. Utilizando una micropipeta, dispensar 80, 40, 20, 10 y 5 L de muestra no diluida en rpida y fcilmente disgregable.
crculos separados de un porta.
2. Depositar una gota (50 L) de antgeno en cada crculo prximo a la muestra a BIBLIOGRAFIA
ensayar. 1. Edward J Young. Clinical Infectious Diseases 1995; 21: 283-290.
3. Mezclar con ayuda de un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie 2. Coulter JBS. Current Pediatrics 1996; 6: 25-29.
interior del crculo. 3. David A et al. Currebt Opinion in Infectious Diseases 1994; 7: 616-623.
4. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80-100 r.p.m., durante 1 minuto. 4. David R et al Current Opinion in Infectious Diseases 1993; 6: 54-62.
5. Bradley D Jones. Annu Rev Immunol 1996; 14: 533 61.

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