UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE INGENIERA ESCUELA DE INGENIERA QUMICA REA DE QUMICA LABORATORIO DE BIOQUMICA SECCIN B ING.

ERWIN ORTZ

PRCTICA NO.3 PROPIEDADES QUMICAS DE PROTENAS

BRENDA MARA MONTERROSO WAIGHT 200915024

GUATEMALA, 29 de agosto de 2011

A. OBJETIVOS

1. Identificar los distintos tipos de protenas mediante pruebas cualitativas de color y/o coagulacin.

2. Determinar a partir de las pruebas realizadas, un grupo en especfico en las cadenas de las protenas.

3. Determinar el mecanismo de funcionamiento de las distintas pruebas cualitativas realizadas a las protenas.

B. RESUMEN En la prctica no. 3 se realiz distintas pruebas para identificar a los protenas a partir de cambios colorimtricos y fsicos.

Para ello se realizaron 9 pruebas con 4 distintas protenas: gelatina, casena, clara de huevo y peptona. Estas pruebas fueron: Prueba de Elrich Diazo, de color o Biuret, Azufre Reducido, Test de Molish, precipitacin con NaCl, precipitacin de azcares, precipitacin por FeCl3, precipitacin por cido clorhdrico y precipitacin por cido ntrico.

Para determinar la positividad de cada reaccin, se baso en los cambios de color esperados y en otros casos observar si hubo o no coagulacin de la protena, segn la teora esperada.

C. RESULTADOS

a. Prueba Erich Diazo Tabla no.1 Prueba de Erich Diazo Conclusin

Negativa Positiva Positiva Positiva
Fuente: Pruebas de Identificacin

Protena
Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

b. Prueba de Color Tabla no.2 Prueba de Color Conclusin

Negativa Positiva Positiva negativa

Protena Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

Fuente: Pruebas de Identificacin

c. Prueba de Azufre Reducido Tabla no.3 Prueba de Azufre Reducido Conclusin

Negativa Negativa Positiva negativa

Protena Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

Fuente: Pruebas de Identificacin

d. Prueba de Molish Tabla no.4 Prueba de Molish Conclusin

Positiva Positiva Positiva Positiva

Protena Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

Fuente: Pruebas de Identificacin

e. Prueba de NaCl al 5% Tabla no.5 Prueba deNaCl al 5% Conclusin

Negativa Negativa Positiva Negativa

Protena Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

Fuente: Pruebas de Identificacin

f. Prueba de Precipitacin de Azucares Tabla no.6 Prueba de Precipitacin de Azucares Protena Conclusin Negativa. Gelatina Negativa Casena Positiva Clara de Huevo positiva Peptona
Fuente: Pruebas de Identificacin

g. Prueba de Precipitacin (FeCl3) Tabla no.7 Prueba de Precipitacin (FeCl3) Protena Conclusin Positiva. Gelatina Positiva Casena Positiva Clara de Huevo Negativa Peptona
Fuente: Pruebas de Identificacin

h. Prueba de cido (HCl) Tabla no.8 Prueba de cido (HCl) Conclusin

Negativa. Positiva Positiva. Negativa

Protena Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

Fuente: Pruebas de Identificacin

i. Prueba de cido (HNO3) Tabla no.1 Prueba de cido (HNO3) Conclusin

Positiva. Positiva Positiva Negativa

Protena Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

Fuente: Pruebas de Identificacin

D. PRUEBAS DE IDENTIFICACIN

Prueba no. 1 Nombre de la Prueba Erich Diazo Criterio de la Prueba La presencia de grupos imidazol o fenoles en una muestra se reconocen por la reaccin con el cido diazobencenosulfnico (diazida del cido sulfanlico), y forman productos de sustitucin de color rojo al alcalanizar la muestra. [Ref. no. 1, pg. 33] Reaccin

[Ref. no. 1] Observacin Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Conclusin Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Negativa Positiva Positiva Positiva Se separo en dos fases. Cambio a color rojo. Cambio a color rojo. Cambio a color rojo.

Prueba no. 2 Nombre de la Prueba Color Criterio de la Prueba Esta prueba se basa en la reaccin de Sulfato de Cobre (CuSO4) con compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos, en un medio alcalino (NaOH). El producto es un complejo de color violeta, cuya intensidad depende de la cantidad de enlaces peptdicos presentes. Este complejo de coordinacin entre los iones CU+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. Los dipptidos y los aminocidos dan esta prueba negativa. [Ref. no. 1 ] Reaccin

Observacin Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Conclusin Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Negativa Positiva Positiva negativa Color celeste dos fases. Color prpura y otra fase azul. Dos fases, violeta e incoloro. Color rojizo.

Prueba no.3 Nombre de la Prueba Prueba de Azufre Reducido o grupos SH Criterio de la Prueba La protena se separa mediante un lcali del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. Si aparece una coloracin negra (de sulfuro de plomo) en el precipitado, la reaccin ser positiva, indicando la presencia de azufre. [Ref. no. 4] Reaccin

Observacin Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Dos fases: verde e incoloro Se formo precipitado blanco. Se formo varias fases slidas: caf, negro y rojo. Formacin de precipitado, color amarillo. Conclusin Negativa Negativa Positiva negativa

Prueba no. 4 Nombre de la Prueba Prueba o Test de Molish Criterio de la Prueba Reaccin cualitativa entre el aminocido con el -naftol y el cido sulfrico, dando

como resultado positivo con un anillo violeta al determinar glcidos. [Ref. no.7 ] Reaccin

Observacin Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Se form una fase morada. Se formo un anillo morado en la interfase. Anillo morado en la interfase. Formacin de anillo morado en la itnerfase. Conclusin Positiva Positiva Positiva Positiva

Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

Prueba no. 5 Nombre de la Prueba NaCl al 5% Criterio de la Prueba De las protenas globulares, las albminas son solubles en agua pura, pero tambin son solubles en soluciones salinas. Las globulinas son insolubles en agua pura, pero se disuelven en soluciones neutras de sales como el cloruro de sodio. Para permanecer en solucin las globulinas necesitan cierta cantidad de sal, al disminuir la concentracin de sal, la globulina precipita. Las protenas coaguladas son insolubles en agua, solucin salina, cidos y lcalis diluidos. [Ref. no. 3] Reaccin

La reaccin involucra un rompimiento de enlaces coordinados entre diferentes cadenas laterales de los aminocidos constituyentes de la protena en los cuales estos al romperse no regresan a su forma original lo que deriva en la perdida de la forma globular de la protena.
Observacin Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Se form dos fases. No hubo cambios. No hubo cambios. Se formo una fase de color amarillo.. Conclusin Negativa Negativa Positiva Negativa

Prueba no. 6 Nombre de la Prueba Precipitacin de Azucares Criterio de la Prueba Si la protena se encuentra en una solucin a un pH mayor a su punto isoelctrico, tiene carga negativa, y en este caso, reacciona con cationes de metales, y el producto (un proteinato del catin) precipita. En este caso al aadir el NaOH se incrementa el pH, al aadir el CuSO4, la protena reacciona y precipita. Calentar a 60oC, acelera la coagulacin de las protenas. [Ref. no. 1] Reaccin

protena-COO-1 + Cu+2 2protena-COO-1Cu+2 (Precipitado)

Observacin Gelatina Dos fases, una amarilla y se form precipitado. . Casena Clara de Huevo Peptona Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Se oscureci (morado). Presento precipitado morado en el fondo. Se formo precipitado morado. Conclusin Negativa. Negativa Positiva positiva

Prueba no. 7 Nombre de la Prueba Precipitacin de FeCl3 Criterio de la Prueba Si la protena se encuentra en una solucin a un pH mayor a su punto isoelctrico, tiene carga negativa, y en este caso, reacciona con cationes de metales, y el producto (un proteinato del catin) precipita. Para este caso se aade FeCl3 y se calienta a 60 [Ref. no.1] Observacin Gelatina Casena Clara de Huevo Se formo precipitado amarillo. Se formo precipitado blanco. Dos fases, una transparente y otra naranja. En ambas fases hay partculas en suspensin. Amarillo claro. Conclusin Positiva. Positiva Positiva Negativa

Peptona Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona

Prueba no. 8 Nombre de la Prueba cido (HCl) Criterio de la Prueba Toda protena si se encuentra a un pH por debajo del punto isoelctrico, tiene carga positiva, y reacciona con aniones de cidos. El producto es insoluble en la solucin y precipita. [Ref. no.1] Observacin Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Color amarillo verdoso, una sola fase Se formo precipitado blanco. Dos fases, una lquida y una slida Una sola fase de color rojizo Conclusin Negativa. Positiva Positiva. Negativa

Prueba no. 9 Nombre de la Prueba cido HNO3 Criterio de la Prueba Toda protena si se encuentra a un pH por debajo del punto isoelctrico, tiene carga positiva, y reacciona con aniones de cidos. El producto es insoluble en la solucin y precipita. [Ref. no.1] Observacin Gelatina Dos fases: una slida y una lquida, de color amarillo lechoso. Casena Clara de Huevo Peptona Gelatina Casena Clara de Huevo Peptona Se formo precipitado blanco. Se formo espuma amarillo lechoso. Una sola fase de color amarillo claro. Conclusin Positiva. Positiva Positiva Negativa

E. INTERPRETACIN DE RESULTADOS

En la prctica no. 3, se realizaron 9 pruebas cualitativas para identificar y estudiar las propiedades de 4 protenas: gelatina, casena, clara de huevo y peptona. Las protenas son cadenas de distintas secuencias de aminocidos. A los enlaces entre los distintos aminocidos entre el grupo carboxilo y el grupo amino se le conoce como pptido.

La primera prueba realizada fue la de Elrich Diazo, la cual se utiliza para identificar el grupo imidazol o fenol, provocando un cambio de color rojo. Por ello la prueba para la casena, albmina y peptona es positiva.

La segunda prueba realizada fue la de color o Biuret. Esta prueba consiste en agregar CuSO4 a la protena previamente alcanizada con NaOH. En esta prueba las muestras de casena y albminca (clara de huevo) se tornaron entre color morado y violeta por lo que se puede concluir que es positiva. Sin embargo para el caso de la gelatina y la peptona, no hubo cambio para la primera y el color cambio a rojizo para la segunda, por lo que la prueba es negativa.

La tercera prueba es el test de azufre reducido, la cual identifica la presencia de enlaces de azufre en la protena a partir del precipitado de sulfato de plomo de color negro-gris. Para este caso, la prueba es positiva solo para la albmina de la clara de huevo. La prueba de Molisch es usado para la identificacin de glcidos y se manifiesta por medio de la formacin de un anillo de color morado en la interfase. En la prctica la prueba es positiva para las 4 protenas, lo que indica que la presencia de glcidos o carbohidratos en su cadena.

La prueba de NaCl, es una prueba de precipitacin salina, que identifica a las protenas a partir de su solubilidad. Si la protena es albmina: es soluble en una solucin salina y por el contrario, si es globulina no es soluble en sal.

Las protenas que son solubles en medio acuoso, forman puentes de hidrgeno. Al agregar sal, sta libera las molculas de agua unidas a la protena y por lo que aumenta la interaccin protena protena y precipita. En la prctica, para el caso de la clara de huevo, el resultado es positivo, debido a que como es albmina, soluble en solucin salina, no presento cambio.

Las pruebas de precipitacin por metales, consiste en incrementar el pH de la solucin, para que la protena se cargue negativamente, y as los iones metlicos reaccionan con los grupos carboxilo de la protena, los cuales la hidrolizan para una posterior precipitacin. En la prctica en la prueba de precipitacin de azucares se utilizo el sulfato de cobre con hidrxido de sodio; y adems se calent la muestra a 60oC. El proceso de calentamiento se utiliza para acelerar la coagulacin de la protena y as su precipitacin, esto debido a que por s sola, la protena en presencia del sulfato de cobre no precipita inmediatamente, solo cambia a color violeta como se observa en la prueba de Biuret o de color. Por lo tanto esta prueba es positiva para la clara de huevo como para la peptona nicamente. En la prueba de precipitacin con cloruro frrico, la prueba dio positivo para la gelatina, la casena y la clara de huevo.

Las pruebas de precipitacin por cidos fuertes, consisten en agregar el cido a la protena, para disminuir el pH debajo de su punto isoelctrico para cargar positivamente la protena y con ello hidrolizar la protena y provocar una precipitacin del producto entre la reaccin con los aniones cidos. As para el caso de la prctica, al utilizar cido clorhdrico, la prueba fue positiva para la casena y la clara de huevo. En el caso del acido ntrico, la prueba fue positiva para la gelatina, casena y clara de huevo.

F. CONCLUSIONES

1. Las pruebas realizadas para identificar protenas son de carcter colorimtrico y de separacin fsica.

2. La prueba de azufre reducido, se utiliza para identificar las protenas que poseen azufre en los enlaces de las cadenas de aminocidos.

3. La prueba de Molish, fue la nica prueba positiva para las cuatro protenas utilizadas en la prctica.

4. Las pruebas de precipitacin al tratar con soluciones cidas o bases, la protena se disuelve y se hidroliza, por lo que los enlaces peptdicos se rompen para dar lugar a la coagulacin de la protena. En el caso de la precipitacin salina, la sal provoca un aumento en las interacciones protena-protena por las cuales coagula.

5. OBSERVACIONES

a. Prueba de Elrich Diazo

b. Prueba de Color

c. Prueba de Azufre Reducido

d. Prueba de Molish

e. Prueba de NaCl

f. Prueba de Precipitacin de Azcares

g. Prueba de Precipitacin FeCl3

h. Prueba de Acido (HCl)

i. Prueba de cido (HNO3)

6. REFERENCIAS 1. Manual de Experimentos de Laboratorio para Bioqumica. [en lnea] (28.08.11) http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=8SAtkthrFEkC&oi=fnd& pg=PR15&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos& ots=oDjjqoo078&sig=JjvU8yogKnjSTEDRJMfzkO9WhhI#v=onepage&q& f=true 2. Reconocimiento de Protenas [en lnea] (28.08.2011)

http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Reconocimiento%20de%20Prot enas.htm 3. Prcticas de Bioqumica Descriptiva. [En lnea] (28.08.2011)

http://books.google.com.gt/books?id=xv8LNjwigGQC&pg=PA168&dq=pr ueba++de+acido+nitrico+en+proteinas&hl=es&ei=WyhbTpP4Jo6gtwe7vI G7Dg&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=3&ved=0CDQQ6AEwA g#v=onepage&q&f=false 4. Laboratorio de Bioqumica: una visin prctica. [En lnea] (28.08.2011) http://books.google.com.gt/books?hl=es&lr=&id=dAbMDrXcTHsC&oi=fnd &pg=PA3&dq=prueba++de+sakaguchi+para+proteinas+y+aminoacidos& ots=ZCV8JvHpAF&sig=m1LzfSytpXomURxPDhG5Adk3O4#v=onepage&q&f=false 5. Reaccin de molish. [en lnea] (28.08.11)

http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch