PRCTICA 1.

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLCULAS

Objetivos:

Identificar mediante reacciones qumicas y pruebas caractersticas, la presencia de

una o varias biomolculas en una mezcla y para cuantificar alguna de ellas.

Estudiar algunas actividades enzimticas.

Introduccin:

Las biomolulas son las molculas que constituyen a los seres vivos. Los elementos ms

abundantes en los seres vivos son el carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O)

y nitrgeno(N), representando alrededor del 99 por ciento de la masa de la mayora de

las clulas. Toda materia viva est compuesta por un grupo de molculas combinadas entre

s: el agua, las sales minerales, protenas, enzimas, los cidos nucleicos, etc.

Glcidos

Tambin llamados hidratos de carbono, carbohidratos o sacridos, los glcidos son la

fuente de energa que utilizan los seres vivos para realizar sus funciones vitales. La glucosa

est al principio de una de las rutas metablicas productoras de energa ms antigua.

Polisacridos

Los polisacridos estn formados por la unin de cientos de monosacridos. Son sustancias

de gran tamao y peso molecular, insolubles al agua los cuales pueden ser cristalizados.
El almidn es uno de los polisacridos de reserva de los vegetales ya que sirva como

almacn de la glucosa.

Lpidos

Los lpidos son molculas no polares, insolubles al agua, con estructura qumica variada,

que incluyen aceites, grasas, aceites, creas, fosfolpidos, etc. Los lpdos ms abundantes en

los seres vivos son las grasas neutras aquellas que producen ms del doble de energa por

gramo.

Protenas

Las protenas son cadenas de aminocidos que poseen estructuras primaria, secundaria,

terciaria, y, a veces, cuaternarias. Son molculas complejas formadas por unidades los

cuales son los aminocidos. Las protenas son especficas da cada especie y varan un poco

de una especie a otra. Por ltimo, las protenas es el principal factor de las diferencias que

median entre una especie y otra.

Prctica:

1.- Identificacin de glcidos con poder reductor

Materiales

Reactivo de Felhing A Reactivo de Felhing B

Tubos de ensayo

Mtodo:

1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de glcido I y en otro tubo 2mL de glcido II.

2. Aadir a cada tubo 0.5 mL de Fehling A y 0.5 mL de Fehling B.

3. Calentar a la llama.

Fundamento de la reaccin:

En medio alcalino, el cobre procedente del CuSO4 se encuentra en forma de hidrxido

cprico, y se forma la correspondiente sal Na2SO4. Cuando el Cu(OH)2 (de color azul) se

calienta en presencia de un compuesto reductor se forma xido cuproso (de color rojo

ladrillo).

Si hay un compuesto reductor, el Cu cambia su estado de oxidacin, lo que se evidencia por

el cambio de color.

2.- Identificacin de polisacridos: Identificacin de almidn mediante la prueba de

Lugol

Materiales:

Agua de arroz

Amilasa (saliva)

Tubos de ensayo

Lugol ( Iodo)

Mtodo:

1. Poner en un tubo de ensayo 2 mL de la solucin 1 y en otro 2 mL de la solucin 2.

 2. Aadir a cada uno de los tubos de ensayo 1 gota de Lugol (solucin acuosa de iodo

e ioduro potsico). Observar el resultado.

Para comprobar que es una interaccin fsica:

1. Calentar a la llama el tubo que contiene almidn (teido de azul con I), hasta que

desaparezca el color azul.

2. Enfriar en el grifo y observar la aparicin de nuevo de color azul.

Fundamento de la reaccin:

Si a la disolucin de almidn se le aade I, esta toma un color azul intenso. Esta

caracterstica es especfica del almidn, debido a su estructura, y se debe a la adsorcin del

I por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilasa. Por tanto no es una reaccin

qumica, sino una interaccin fsica reversible por mtodos fsicos. Esto se puede

comprobar fcilmente, pues al calentar la mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla

vuelve a aparecer.

3.- Identificacin de lpidos. Reaccin de saponificacin.

Materiales:

Tubos de ensayo

Aceite

NaOH (lcali)

Mtodo

1. Aadir aceite (sin pipetearlo) a un tubo de ensayo, hasta alcanzar 1 mL

 2. Aadir 2 mL de NaOH al 20% (p/v) en agua.

3. Agitar enrgicamente.

4. Calentar al bao Mara y observar lo que ocurre.

Fundamento de la reaccin:

La presencia de un lpido se puede detectar fcilmente por su insolubilidad en agua.

Adems, se puede detectar si un lpido es saponificable, mediante la reaccin de

saponificacin, o formacin de jabn. Los esteres de cidos grasos sufren hidrlisis en

presencia de un agente alcalino. Esta hidrlisis conduce a la liberacin del alcohol y a la

formacin de sales de cido graso o jabones:

4.- Identificacin de protenas mediante la reaccin el Biuret

Materiales:

Leche de vaca Clara de huevo

Leche soya Reactivo de Biuret

Leche almendras

Mtodo:

1. Romper cuidadosamente un huevo de gallina y recoja la clara (albumina) en un

vaso qumico.

2. Colocar en un tubo de ensayo la albumina.

3. Aadir 2 mL del reactivo Biuret.

 4. Agitar para que se mezcle bien.

5. Repetir el mismo procedimiento con la leche de vaca, almendras y la leche de soya.

Fundamento de la reaccin:

La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del

Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la

presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color

violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los

pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces pepiticos.

Prctica 4.2. Desnaturalizacin a pH cido de la amilasa

Las enzimas tienen un pH ptimo de actuacin. Cambios de pH desnaturalizan la protena

y, por tanto, inhiben la actividad enzimtica. La amilasa es una de las enzimas encargadas

de la digestin del almidn, concretamente hidroliza enlaces 1-4 entre molculas de a-

glucosa. Es una enzima que se encuentra a lo largo de todo el tracto digestivo de los

mamferos, y que tambin la producen las glndulas salivares.

Mtodo:

1. Preparar 2 tubos de ensayo con los siguientes reactivos:

TUBO1 TUBO 2

1mL gotas de H2OAmilasa (escupir un poco de saliva)

2 gotas de HCL 1N

2. Agitar los tubos y esperar 5 min.

3. Aadir 1 mL de solucin de almidn a cada tubo.

4. Agitar los tubos y dejarlos reposar 10 min para que transcurra la reaccin enzimtica.

5. Realizar la prueba del Lugol a cada tubo.

Identificacin de grasas: Leche de almendras y leche de vaca. Mediante el Sudan III

Materiales:

Sudan III

Leche de vaca

Leche de almendras

Tubos de ensayo

Mtodo:

1. Colocar 1mL de leche de vaca y almendras respectivamente en cada tubo.

2. Aadir 5 gotas de Sudan III.

3. Tapar con la yema de los dedos y agitar.

4. Esperar 8 minutos aproximadamente y observar las reacciones.

Fundamento de la reaccin:

El Sudan III genera una reaccin en la lactosa indicando si contiene grasa o no, el cual se

puede comprobar si hay algn cambio en el color de la muestra. La identificacin de grasas

es positiva si llega a tener un color rojizo.

Resultados:
Tabla #1

Resultado de las reacciones ante los reactivos

Muestras de *Test de Biuret Test de Saponificacin Sudn 3 Iodo-Lugol

alimentos Fehling A

analizados yB

Leche de vaca Negativo Positivo

Leche de soya Negativo

Clara de huevo Negativo

Leche de Negativo Positivo

almendras

Agua de arroz Positivo

Aceite vegetal Positivo

Gaseosa Negativo

blanca

Saliva Negativo

Resultados finales de todas las reacciones con su respectiva tcnica. Los datos estn basados en

observaciones hechas en el laboratorio.

Interpretacin de la tabla de resultados:

Resultado Prctico: Identificacin de glcidos con poder reductor

Fotografa hecha por: Guisella Gonzlez

Se puede observar en la imagen que el tubo que contiene la gaseosa (el tubo de en medio),

hace que el resultado sea negativo, ya que al parecer, la gaseosa no tena glucosa y adems

no muestra ningn cambio de color. No hubo ningn color rojizo por lo que el resultado

nos da negativo.

2.- Identificacin de polisacridos: Identificacin de almidn mediante la prueba de

Lugol

Fotografas hechas por: Guisella

Gonzlez
En la prueba de almidn, se pude observar que el agua de arroz tuvo un cambio de color

negro con morado intenso lo que la hace positiva. Despus, se hizo lo prueba si sta poda

devolverse a su estado natural. En la imagen 2, se comprueba esto. En cambio la saliva es

negativa, no contiene almidn.

3.- Identificacin de lpidos. Reaccin de saponificacin

Fotografa hecha por: Guisella Gonzlez

En la identificacin de lpidos, es sencillo notar que se ha creado una especie de textura a

jabn lo que confirma la presencia de lpidos en el aceite.

Identificacin de protenas mediante la reaccin el Biuret

Fotografa hecha por: Guisella Gonzlez

En la identificacin de protenas, en cambio, sali que todas eran negativas lo cual muestra

el error en la prctica de laboratorio. El reactivo tuvo que haber estado inestable ya que no

mostr que las muestras tuviesen un color morado. Se tiene en cuenta la albumina que es

100% protena, sin embargo no se mostr como tal. Por lo tanto hubo un problema con el

reactivo utilizado.

Identificacin de grasas: Leche de almendras y leche de vaca. Mediante el Sudan III

Fotografa hecha por: Guisella Gonzlez

En la identificacin de grasas, se puede notar que la leche de almendras, (tubo nmero 4)

contiene ms grasa que la leche de vaca, (tubo nmero 2), por el color ms intenso que

tiene la leche de almendras que el color que tiene la leche de vaca.

Observaciones:

En la identificacin de glucosa, en la gaseosa, mediante el test de Fehling se ha demostrado

que no contiene glucosa, la gaseosa est libre de azcar por lo que no dio un cambio de

color a un rojo ladrillo. Esto hizo que la prueba salga negativa. Hubo un problema en la

identificacin de protenas en la cual la prueba nombraba a todas como negativa, que tena

protenas. Se not que eso era un error por lo que tambin se utiliz un blanco/ testigo, el

cual era la albumina (clara de huevo), que es 100% protena y tambin result como falso

negativo. Esto se debe a que el reactivo Biuret ha de estar inestable o algo parecido que

haya provocado este resultado. Es recomendable asegurarse que los reactivos funcionen

correctamente antes de la prctica y tener las muestras correctas requeridas.

Solucin al cuestionario:

Prctica 1: Identificacin de glcidos con poder reductor

Cal o cales son los azcares reductores?

Los azucares reductores son aquellos que pertenecen a un grupo carbonilo intacto y, que a

travs de ello pueden reaccionar como reductores con otras molculas.

Quin se oxida y quin se reduce en la reaccin?

La muestra que obtenga un color rojo ladrillo contiene un azcar reductor, en cambio, la

muestra que no forme un color rojo, no es un reductor. En esta prctica, se us una gaseosa

blanca sin azcar (glucosa), por lo que el resultado sali negativo.

Para qu sirven el tartrato Na-K y el calor?

Estabiliza al hidrxido del cobre por lo que en este tipo de condiciones es muy reactivo,

mientras que el calor acelera la reaccin.

Qu resultado dara la reaccin de Fehling con glucosa? Y con sacarosa?

El glcido ms probable sera la glucosa, ya que es un monosacrido y todos ellos son

reductores. La sacarosa no podr ser porque es un disacrido y no tiene un hidroxilo para

reducir.

Prctica 2: Identificacin de polisacridos: Identificacin de almidn mediante la prueba

del Lugol.

Cul de los dos soluciones contiene almidn?

El agua de arroz, contiene un gran nivel de almidn. La saliva no contiene almidn.

El almidn dara positiva la reaccin de Fehling?

El reactivo de Fehling es para manifestar la presencia de glucosa, el almidn, no es un

reductor porque es un polmero formado por cadenas de glucosa las cuales tienes que

romperlas para as poder detctarlas.

La celulosa dara positiva la prueba del Lugol?

Aunque forme hlices, la celulosa es un monmero de glucosa, el lugol es para identificar

la presencia del almidn.

El azul que aparece tras calentar y enfriar es igual de intenso? Por qu?

Hay menos iodo a lo que se evapor, por lo que se debilita un poco el color azul.
 3.- Identificacin de lpidos. Reaccin de saponificacin

Existen lpidos saponificables en el frasco de aceite?

S, al realizar la prueba, ha resultado una textura a jabn en la muestra al reaccionar con el

reactivo, lo que confirma la saponificacin del lpido.

A qu corresponde cada fase de las que aparecen en el tubo?

La primera fase, la de ms abajo corresponde a una mezcla de glicerina y agua. La fase del

medio, entre la primera y la tercera, corresponde al jabn en formacin. Por ltimo, la

tercera fase, la que se encuentra ms arriba que las otras dos, corresponde al aceite.

Por qu se da esa disposicin de fases?

Una de las caractersticas del jabn es la presencia de una molcula con dos zonas de

diferente polaridad. Las molculas de jabn poseen la propiedad de solubilizar molculas

polares y no polares, provocando las fases en la muestra.

4.- Identificacin de protenas mediante la reaccin el Biuret

Cul es la concentracin de protenas de la muestra problema?

La muestra con ms concentracin de protenas es la albumina( clara de huevo) ya que

tiene un color ms intenso que las dems muestra y es 100% protena.

Se podra determinar la concentracin de cualquier muestra de protenas con esta

recta patrn?

Se podra hacer una estimacin pero no habra una cifra exacta.

Los aminocidos y los pptidos daran positiva la reaccin del Biuret?

Los aminocidos no porque son los bloques de construccin de las protenas, no son las

protenas puras. Los pptidos estn conformados por aminocidos que constituyen a la

formacin de las protenas por lo tanto no es muy posible que reaccione con el Biuret, sera

negativo

Servira esta reaccin para determinar protenas en orina?

S, porque eso es lo que se quiere conocer. Al encontrarse con protenas en la orina, puede

ser algn problema como si estuvisemos enfermos de alguna infeccin o algo pero si

determinara protenas.

Identificacin de grasas: Leche de almendras y leche de vaca. Mediante el Sudan III

En qu tubo/s da positiva la prueba del Lugol? En cul/es negativa? Por qu?

En el tubo 2 porque el cido clorhdrico ha disminuido el pH que desnaturaliza la amilasa y

no rompe al almidn, dando positiva la reaccin de Lugol.

Bibliografa:

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http://farmaciaulat.blogspot.com/p/identificacion-de-biomoleculas.html

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