Aseguramiento de calidad

ENSAYOS INTRALABORATORIOS

ENSAYOS INTERLABORATORIOS
Norma ISO 17025

Bqca. QM Alicia I. Cuesta,

Consultora Internacional de la FAO

Objetivos de la clase

ENSAYOS INTRALABORATORIOS Ensayos microbiolgicos cualitativos y cuantitativos. Evaluacin e interpretacin de los resultados. Utilidad de los resultados del Ensayo Intralaboratorio.
ENSAYOS INTERLABORATORIOS: Ensayos microbiolgicos cualitativos y cuantitativos. Evaluacin e interpretacin de los resultados. Utilidad de los resultados del Ensayo Interlaboratorio. Proveedores de Ensayos Interlaboratorios. Grficos de control.

El ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD: Es un programa de actividades llevadas a cabo por el laboratorio con la finalidad de verificar que los resultados obtenidos tienen una precisin y exactitud aceptable y mejorar en conjunto el funcionamiento del mismo.

Estos programas son planificados y revisados peridicamente.

Introduccin

Interpretacin Exactitud Reproducibilidad Error sistemtico Outlier Estadstica Evaluacin Veracidad ISO 5725 Criterio Dato Precisin Repetibilidad

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS Dicho programa debe abarcar todos los ensayos incluidos en el alcance de acreditacin del laboratorio.
La frecuencia de realizacin de cada uno de estos Programas queda establecida por el laboratorio. El laboratorio debe tener procedimientos de control de calidad para monitorear la validez de los ensayos llevados a cabo.

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS

CONTROLES DE CALIDAD: Son las actividades que se deben realizar para todos los ensayos acreditados. Comprenden: 1. Control de calidad interno: Un programa de controles peridicos es necesario para demostrar que se controla la variabilidad (por ejemplo, entre analistas y entre equipos o materiales, etc.). Uso de cepas de referencia. Participacin en Ensayos Intralaboratorio. 2. Control de calidad externo: Participacin en Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing)

Control de calidad interno: El control de calidad interno consiste en todos los procedimientos realizados por un laboratorio para la evaluacin continua de su trabajo. El principal objetivo es asegurar la coherencia de los resultados obtenidos diariamente y el cumplimiento de los criterios establecidos.

Uso de cepas de referencia

Empleo de cepas de referencia durante la realizacin del ensayo como : Control positivo, negativo. Muestras inoculadas para control. Control de productividad y selectividad de los medios de cultivos usados. El uso de materiales de referencia (incluidos los materiales utilizados en Ensayos de aptitud)

ENSAYOS INTRALABORATORIO:
Son las verificaciones de calidad para evaluar el desempeo de los analistas del laboratorio en un ensayo. MTODOS CUANTITATIVOS: Se comparan los resultados obtenidos : Por cada analista perteneciente al laboratorio que realiza por duplicado el anlisis de la muestra. (repetibilidad de cada analista). Entre analistas del mismo laboratorio para un ensayo (reproducibilidad entre analistas)

Definiciones: Ensayos Cuantitativos

Es un mtodo de anlisis cuyo respuesta es el recuento del analito medido en forma directa (la enumeracin por masa o volumen), o indirectamente (el absorbancia del color, la impedancia, etc.) en una cierta cantidad de muestra. (prEN ISO 16140:1999)

ENSAYOS INTRALABORATORIO:

MTODOS CUALITATIVOS: Se comparan los resultados obtenidos : Entre analistas del mismo laboratorio para un ensayo: Recuperacin de un microorganismo a partir de un material de referencia.

Definiciones: Ensayos Cualitativos

Es un mtodo de anlisis cuyo respuesta es la presencia o ausencia del analito detectado directamente o indirectamente en una cierta cantidad de muestra.
( prEN ISO 16140:1999)

Participacin en Ensayos Intralaboratorio:

El laboratorio, en forma peridica, planifica, realiza, evala y verifica que estn bajo control los resultados de los ensayos: Cualitativos: verificando que los resultados entre analistas sean concordantes y conformes.
Cuantitativos: determinando los parmetros de precisin. Determina la Repetibilidad : El anlisis por duplicado de una misma muestra por los distintos analistas (autorizados o en vas de autorizacin) que realizan el ensayo. Determina la Reproducibilidad :Los recuentos cruzados entre analistas o con mtodos diferentes, etc.

Definicin: Repetibilidad (r).

Grado de concordancia entre los resultados de sucesivas mediciones del mismo mesurando realizadas en las mismas condiciones de medicin. Las mismas condiciones significa resultados obtenidos : Con el mismo mtodo de ensayo. Sobre el mismo material de ensayo. Bajo las mismas condiciones (mismo operador, mismos equipos, mismo laboratorio y un corto intervalo de tiempo).

Definicin: Reproducibilidad (R).

Grado de concordancia entre los resultados de sucesivas mediciones del mismo mesurando realizadas en diferentes condiciones de medicin. El ensayo se realiza sobre el mismo material de ensayo pero en diferentes condiciones. Esto es:
Resultados obtenidos con diferentes mtodos de ensayo o equipos (REPRODUCIBILIDAD ENTRE MTODOS) Resultados obtenidos con diferentes operadores o analistas (REPRODUCIBILIDAD ENTRE ANALISTAS) Resultados obtenidos por diferentes laboratorios (REPRODUCIBILIDAD ENTRE LABORATORIOS) Resultados obtenidos en diferente tiempo.

ENSAYOS INTRALABORATORIOS

Resultado 1 Resultado 2 Comparo el Resultado 1 y Resultado 2.

El valor lmite mximo de r y R para un ensayo, para una matriz se pueden obtener a partir de: Estudios de validacin o anlisis de los resultados obtenidos en interlaboratorios, Norma o de la bibliografa.

ENSAYOS CUANTITATIVOS: Determino la repetibilidad de cada analista y la repetibilidad del laboratorio. El anlisis por duplicado de una misma muestra por los distintos analistas que realizan el ensayo. Ejemplo: El analista A ensay, con la metodologa Z, una muestra de un alimento por duplicado. Los resultados obtenidos fueron:

x1= 2.0x103 ufc/g y x2=1.5x103 ufc/g.

Los resultados se pasan a logaritmo en base 10: log 10 x1 =3.30 log ufc/g y log 10x2=3.18 log ufc/g

Ensayos Cuantitativos (cont):

Ejemplo: El valor de repetibilidad (r) obtenido por el analista A ser: r = log 10 x1 - log 10x2

r =0.12 log ufc/g

El valor lmite mximo de repetibilidad para la metodologa Z es r =0.18 log ufc/g Lo cual quiere decir: La repetibilidad del analista A es conforme.

Registro de los datos obtenidos:

PR 8.1/4
Pg.____ de ____

Ensayos cuantitativos: Planilla individual de cada analista Ensayos Intralaboratorio LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
Ensayo: Matriz: Analista:
Identificacin de las Muestras Fecha de anlisis de las muestras r del analista Clasificacin obtenida Conforme /no conforme

Metodologa

Resultado 1 ( unidades)

Resultado2 ( unidades)

log Resultado 1 (log 10 unidades)

log Resultado 2 (log 10unidades)

Firma del responsable

Valores lmites mximos establecidos para: r (log 10 unidades) : NOTA: el valor de r se obtiene de restar log10 Resultado 1 con el log10 Resultado 2.

Determinacin de la reproducibilidad:
Los recuentos cruzados entre analistas o con mtodos diferentes, etc. Ejemplo: El analista B y C ensayaron, con la metodologa Y, una muestra de un alimento. Los resultados obtenidos fueron: xB= 2.4x102 NMP/g y xC= 1.1x103 NMP/g. Los resultados se pasan a logaritmo en base 10: log 10 xB =2.38 log NMP/g y log 10 xC =3.04 log NMP/g

Determinacin de la reproducibilidad (cont.):

El valor de reproducibilidad (R) obtenido entre el analista B y C ser: R = log 10 xB - log 10 xC R =0.66 log NMP/g El valor lmite mximo de reproducibilidad para la metodologa Y es R =0.50 log NMP/g

En este caso el responsable asignado deber abrir una NO CONFORMIDAD y se determinarn sus correspondientes acciones correctivas.

Registro de los datos obtenidos:

PR 8.1/6
Pg.____ de ____

Ensayos cuantitativos: Planilla reproducibilidad entre metodologas Ensayos Intralaboratorio LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
Ensayo: Matriz:
Identificacin de las Muestras Fecha de anlisis de las muestras log Resultado Metodologa 1 R entre Metodologa Clasificacin obtenida Conforme /no conforme

Analista

Metodologa 1

Metodologa 2

log Resultado Metodologa 2

Firma del responsable

Valores lmites mximos establecidos para: R (log 10 unidades): NOTA: el valor de R se obtiene de restar log10 Resultado Metodologa 1 con el log10 Resultado Metodologa 2 para la misma muestra y el mismo analista.

Sntesis Parcial
Control de calidad interno: consiste en todos los procedimientos realizados por un laboratorio para la evaluacin continua de su trabajo. El principal objetivo es asegurar la coherencia de los resultados obtenidos diariamente y el cumplimiento de los criterios establecidos. Para los ensayos Cualitativos se verifica que los resultados entre analistas sean concordantes y conformes. Y para los Cuantitativos determina la Repetibilidad y la Reproducibilidad entre analistas. Empleo de cepas de referencia durante la realizacin del ensayo.

ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS

LOS CONTROLES DE CALIDAD INTERNOS NO SON SUFICIENTES.

No puedo determinar mediante ellos el Valor verdadero!! Realizo un Control de calidad externo.

Definiciones:
Valor verdadero : valor en consistencia con la definicin de una magnitud (concepto abstracto, no realizable). Valor asignado o valor de referencia: es el valor convencionalmente verdadero. Exactitud de una medicin: Proximidad entre el resultado de una medicin y el valor verdadero del mensurando.

Exactitud de una medicin:

Clculo del valor de referencia o valor asignado: Uso un material de referencia certificado. Casi nunca son estos los casos en ensayos microbiolgicos. Se considera que el valor medio obtenido por el conjunto de laboratorios luego de eliminar los outliers en el propio ejercicio puede utilizarse como valor de referencia o valor verdadero.

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :

Los programas de ensayos de aptitud organizados externamente por un proveedor de ensayos interlaboratorio CONSTITUYEN UN MEDIO INDEPENDIENTE por el cual un laboratorio se puede EVALUAR OBJETIVAMENTE y demostrar la veracidad y precisin de los resultados obtenidos por sus mtodos analticos.

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :

Constituye una herramienta para la evaluacin externa de la calidad de los resultados de ensayo o desempeo del laboratorio. La participacin en estos ensayos PERMITE AL LABORATORIO COMPARAR SUS RESULTADOS FRENTE A LOS DE OTROS LABORATORIOS. Es importante evaluar los resultados obtenidos en los ensayos de aptitud como una manera de comprobar la calidad de los ensayos, adoptando las medidas oportunas, si son necesarias.

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :

La organizacin proveedora de Ensayos de Aptitud Interlaboratorio enva muestras cuyo contenido en tipo y nmero de microorganismos es desconocido por el participante. El laboratorio participante las analiza y remite los resultados obtenidos al organizador, posteriormente recibe un informe con sus anlisis y evaluaciones. ISO/DIS 13528 Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory comparisons.

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio Mtodos cualitativos (Proficiency Testing) :

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio Mtodos cuantitativos (Proficiency Testing) :

STAPHYLOCOCCUS aureus - cereal Z-score-2=5257ufc/g valor asignado=21000ufc/g score+2=83891ufc/g 80 70 60 50 40 30 20 10 0

rio cu es tio fa ct o na bl e

Z-

is fa ct or sa io tis fa ct or sa io tis fa ct or cu io es tio na in bl sa e tis fa ct or io

in sa tis

sa t

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio Mtodos cuantitativos (Proficiency Testing) :

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio Mtodos cuantitativos (Proficiency Testing) :

Valor de Z-score: lzl<2 2 < lzl < 3 lzl >3

Clasificacin Satisfactorio Cuestionable Insatisfactorio

ENSAYOS INTERLABORATORIOS Los laboratorios deben participar regularmente en ensayos de aptitud relacionados con el alcance de su acreditacin, dando preferencia a los programas de ensayos de aptitud que utilicen matrices apropiadas. Los laboratorios no slo deben usar la valoracin de calidad externa para evaluar el bias o sesgo del laboratorio sino tambin para verificar la validez del sistema de calidad entero.

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :

Los resultados de los laboratorios participantes de una ronda interlaboratorio se clasifican, dependiendo del mtodo estadstico usado, para evaluar los resultados en: Satisfactorios e insatisfactorios (Ejemplo: ensayos cualitativos y D-score) o Satisfactorios, cuestionables e insatisfactorios (Ejemplo: Z-score).

Registro Ensayos de Aptitud Interlaboratorio Ensayos cualitativos (Proficiency Testing) :

Ensayo: Matriz:

Proveedor del Ensayo Interlaboratorio

Identificacin de las Muestras

Fecha de anlisis de las muestras

Analista

Metodologa usada por el laboratorio

Resultado obtenido por el laboratorio

Valor asignado

Clasificacin obtenida Satisfactorio /Insatisfactorio

Firma del responsable

Proveedores de Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (proficiency testing) : Lo ideal es que estn acreditados por ISO 43.

Algunos de ellos figuran a continuacin:

QM Quality Management Limited. UK AOAC Laboratory Proficiency Testing Program USA. RAEMA Rseau dAnalyses et dEchanges en Microbiologie des Aliments. Francia INTI Instituto Nacional de Tecnologa Industrial. Argentina. SVM Foundation for the Advancement of Public and Environmental Protection The Netherlands

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :

Cuando los resultados de los ensayos NO resultan dentro del intervalo de conformidad o se visualice una tendencia determinada

tomar respectivamente acciones correctivas o preventivas, siguiendo los lineamientos establecidos en el Procedimiento Reclamos, sugerencias, no conformidades, acciones correctivas y acciones preventivas.

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :

Qu hago cuando el resultado del control de calidad es no conforme? Anlisis de causa: puedo usar como herramienta tormenta de ideas En un alto % no se encuentra la causa verdadera. Ejemplo: Si EIL no conforme Realizo una evaluacin: analizo posibles causas. Si no encuentro la causa participo en otro interlaboratorio para volver a demostrar la competencia.

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio (Proficiency Testing) :

Qu hago cuando el resultado del control de calidad es no conforme? Hasta que no se demuestre nuevamente la competencia tcnica el laboratorio debe dejar de hacer el ensayo.

IMPORTANTE!!! Los datos obtenidos a travs del programa el aseguramiento de la calidad deben ser registrados en forma tal que se puedan detectar las tendencias y aplicar tcnicas estadsticas para la revisin de los resultados.

Evaluacin de las tendencias de los resultados obtenidos: Los grficos de control son una herramienta de trabajo para el control estadstico de los resultados de ensayo y sirven para monitorearlos.

Ejemplo: Ensayo de Aptitud Interlaboratorio Matriz: Queso Metodologa: FIL-IDF 73B:1998 parte I Ensayo: recuento de Coliformes a 30 C (ufc/g) Ao: 2002 2003 y 2004

Sntesis Final
El laboratorio debe llevar a cabo peridicamente controles de calidad interno y externo con la finalidad de verificar que sus resultados tienen una precisin y exactitud aceptable y mejorar en conjunto el funcionamiento del mismo.

Actuar

Planear

Ciclo de Deming Verificar Hacer