Validacin de los mtodos microbiolgicos

CARACTERISTICAS DE LOS RESULTADOS

DE MEDICION DE METODOS
MICROBIOLOGICOS

Bqca. QM Alicia I. Cuesta,

Consultora Internacional de la FAO

Objetivos de la clase
9Conceptos de precisin, veracidad o justeza y exactitud
en mtodos microbiolgicos.
9Estudios de intercomparacin: tipos, caractersticas
generales.
9Incertidumbre de medicin: Concepto, clculo, expresin
en le resultado.

La naturaleza y la forma en que se comportan los

microorganismos determina las caractersticas de
los resultados obtenidos por los mtodos
microbiolgico.
En general la distribucin de los microorganismos
podra describirse mediante modelos estadsticos,
como cantidad de microorganismos por unidad de
volumen o peso ( Distribucin de Poisson)

 Qu caractersticas
tienen los resultados de medicin
mtodos microbiolgicos
cuantitativos cuando los repito?
Qu caractersticas
Tienen que tener?

Caractersticas de los resultados de medicin

METODOS MICROBIOLOGICOS
CUANTITATIVOS
ISO 5725 (trueness and precision) of measurement
methods and results

PRECISIN:
proximidad entre resultados
de mediciones independientes
del mismo mensurando,
bajo condiciones estipuladas.

PRECISIN:
9Repetibilidad (r):
Grado de concordancia entre los resultados de sucesivas
mediciones del mismo mesurando realizadas en las
mismas condiciones de medicin.
(ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y
generales de la metrologa: 1993)
9Reproducibilidad (R):
Grado de concordancia entre los resultados de sucesivas
mediciones del mismo mesurando realizadas en
diferentes condiciones de medicin.
(ISO Vocabulario internacional de trminos bsicos y
generales de la metrologa: 1993).

PRECISIN:

Resultados precisos

Resultados imprecisos

JUSTEZA O VERACIDAD (TRUENESS):

Grado de concordancia entre el promedio de
una gran serie de mediciones y el mesurando
(ISO 5725).
Proximidad entre el promedio de una gran serie
de mediciones y el valor de referencia.

SESGO (bias): resultado de la medicin menos el

valor de referencia o valor asignado.

9 Valor verdadero: valor en consistencia con la

definicin de una magnitud
Concepto abstracto,
no realizable en la prctica.

9 Error de medicin: resultado de la medicin

menos el valor verdadero.

EXACTITUD
Definicin: es el grado de concordancia entre el
resultado de una medicin y el valor del
mensurando
PRECISIN
+
JUSTEZA

EXACTITUD

Ejemplo:
Precisin. Justeza y Exactitud

Resultados precisos y No justos:

No exactos

Resultados imprecisos y No justos:

No exactos

Resultados imprecisos y justos:

No exactos

Resultados precisos y justos:

exactos

El laboratorio microbiolgico tiene la

responsabilidad de garantizar que los
resultados que l produce sean exactos,
validos y confiables
de modo de poder tomar una decisin
acerca de la inocuidad y calidad sanitaria de
los alimentos.

CARACTERSTICA
CUALITATIVA

EXPRESIN
CUANTITATIVA

JUSTEZA O VERACIDAD
(TRUENESS):

Sesgo (bias),
desvio, error sistemtico

PRECISIN:
Repetibilidad
Reproducibilidad
EXACTITUD

Desviacin estndar

Incertidumbre

Desvio standard experimental

Es la expresin cuantitativa de la precisin.

En la prctica:
9 Calculadora n-1
9 en Excel DESVEST

Cmo determino en la prctica el

VALOR VERDADERO?
9Valor convencionalmente verdadero, o valor
asignado o valor de referencia (vREF).
9El valor asignado o valor de referencia lo
obtenemos de:
Estudios intercomparacin (Ensayos de Aptitud
Interlaboratorio, Estudios colaborativos)
o
Cepas de referencia certificadas
(2da opcin es difcil de obtener en microbiologa)

DESVIO (BIAS)
Clculo en la prctica es:
Resultado de la medicin menos el
valor de referencia o asignado.
BIAS= x- vREF

Ensayos de Aptitud Interlaboratorio

Mtodos cuantitativos (Proficiency
Testing) :

ESTUDIOS DE
INTERCOMPARACIN :
La intercomparacin es una herramienta muy
valiosa como evaluacin externa cuantitativa
de la calidad de los laboratorios.
Ejemplo ensayos de aptitud interlaboratorio.
Norma en las que se basan el laboratorio proveedor de
interlaboratorio: Gua ILAC G13 o ISO 43.
Anlisis de resultados de los interlaboratorios:
Z-score ISO/DIS13528 Statistical methods for use in
proficiency testing by interlaboratory comparisons.

Proveedor de estudios colaborativos

9Prepara las muestras con diferentes niveles de
analito.
9Establece el protocolo que deben cumplir los
participantes de la intercomparacin.
Instructivo de anlisis de muestra, fecha de
realizacin anlisis y envo de los resultados, etc.
9Enva las muestras.

Ejecucin de los ensayos de aptitud:

Es fundamental enviar
muestras homogneas
y estables
Se realizan ensayos y pruebas estadsticas antes del
envo para asegurar la homogeneidad y estabilidad del
material enviado.
Los resultados obtenidos por los laboratorios participantes
deben ser enviados al organizador quien los evala.
El organizador confecciona y enva un informe con informacin
sobre el anlisis y evaluacin de los resultados
de todos los laboratorios participantes.

Segn el objetivo que persiguen

podemos tener diferentes tipos de
estudios de intercomparacin :
9 Ejercicios de ensayos de aptitud
interlaboratorio.
9 Estudios colaborativos.
9 Estudios de certificacin.

ENSAYOS DE APTITUD INTERLABORATORIO:

9Estn abiertos a todos los laboratorios que quieran
participar y pueden ser obligatorios debido a procesos de
acreditacin.
9Nos permiten evaluar la aptitud de un laboratorio para
realizar el ensayo.
9Se usa como herramienta de ASEGURAMIENTO DE
CALIDAD DE LOS RESULTADOS DEL ENSAYO.

ESTUDIOS COLABORATIVOS:
9Estn dirigidos a laboratorios especializados,
con experiencia y calidad reconocida.
9Estos laboratorios son seleccionados por el
organismo que gestiona el ejercicio.
9Cada laboratorio debe seguir en forma estricta
un protocolo previamente consensuado para
realizar el mtodo.
9Los estudios colaborativos permiten
VALIDAR MTODOS.

ESTUDIOS DE CERTIFICACIN:
9Estn dirigidos a laboratorios especializados,
con experiencia y calidad reconocida.
9Estos laboratorios son seleccionados por el
organismo que gestiona el ejercicio.
9Los estudios de certificacin tienen como
objetivo la PREPARACIN (y posterior
comercializacin) DE MATERIALES DE
REFERENCIA CERTIFICADOS.

Evaluacin de los resultados obtenidos

en los estudios de intercomparacin
mtodos cuantitativos:
9 Eliminacin de los valores aberrantes segn
Grubbs y Cochran Norma ISO-FIL 135B:1991.
9 Prueba de Z score. ISO/DIS13528 Statistical
methods for use in proficiency testing by
interlaboratory comparisons.

En microbiologa
los valores de ufc/ml o g
se distribuyen dando
una curva asimtrica.

Para normalizarla se usa

logaritmo en base 10.

DISTRIBUCION NORMAL

LOG 10

16%

68%

2,25%

16%

95,5%

-2

2,25%

+2

La distribucin Normal
est definida
por y

>

>

ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE
MEDICIN EN MICROBIOLOGA
Definicin: la incertidumbre de medicin es un
parmetro asociado al resultado de la medicin,
que caracteriza la dispersin de los valores
que podran ser razonablemente asignados al
mesurando.

NOS PERMITE TENER CONOCER AL

MESURANDO.

ESTIMACIN DE LA INCERTIDUMBRE DE
MEDICIN EN MICROBIOLOGA
9Los laboratorios de ensayo deben tener y deben aplicar
procedimientos para estimar la incertidumbre de medicin.
9La estimacin de las incertidumbres en las medidas y
resultados en los laboratorios de microbiologa de
alimentos es parte importante del control de calidad interno
de los resultados obtenidos.
9Es una indicacin cuantitativa de la calidad del resultado
INDICA LA CALIDAD DE LA MEDICIN
9Da idea de la confiabilidad del resultado.

INCERTIDUMBRE????
Pregunta: Qu es el resultado de una medicin
cuantitativa?
Respuestas:
1.Un registro de calidad.
2.Un criterio de aceptacin rechazo.
3.Una comparacin.
4.Un nmero ( unidades)
5.Ninguna de las anteriores es correcta.
Respuesta correcta es la 5:no es un nmero sino un
intervalo de nmeros.

INCERTIDUMBRE DE MEDICIN Y
CUMPLIMIENTO DE ESPECIFICACIONES

Rango de especificacin

A Declaracin de no cumplimiento con la

especificacin.
B
C

Limitarse a informar
los resultados y
su incertidumbre
(INDETERMINADO)

D Declaracin de cumplimiento con la especificacin.

Un laboratorio de ensayo
competente debe estar en
condiciones de poder brindar una
afirmacin sobre la incertidumbre de
los resultados de los ensayos
realizados

Primer Paso:
IDENTIFICACIN DE LAS
FUENTES DE INCERTIDUMBRE:
Se enumeran las posibles fuentes de incertidumbre que
pueden afectar el resultado de un ensayo:
1. TCNICAS/INSTRUMENTOS.
Asociadas:
9al material de referencia.
9 a la uniformidad de la distribucin de los
microorganismos en la muestra
9 a la exactitud de los equipos utilizados para establecer
medida de masa y volumen.
9 al mezclado de las muestras.
9 al volumen usado.
9 a la calidad de medio de cultivo
9a las condiciones de incubacin
9a la lectura e interpretacin de los resultados
9a las pruebas confirmatorias

IDENTIFICACIN DE LAS
FUENTES DE INCERTIDUMBRE (cont) :
2. HUMANAS:
Asociadas:
9a la lectura de placas.
9 a la experiencia y pericia del personal en la
interpretacin de los resultados.
9 a la reproducibilidad de las determinaciones por cambio
de observadores, a los instrumentos u otros elementos.

IDENTIFICACIN DE LAS
FUENTES DE INCERTIDUMBRE (cont)
3. AMBIENTALES:
Asociadas:
9 a las condiciones atmosfricas, temperatura y humedad,
polvo.
9 a las contaminaciones biolgicas.
9 a las vibraciones.
9 interferencias electromagnticas.

Segundo Paso:
Formas de clculo Incertidumbre :
CUANTIFICACIN DE CADA
COMPONENTE DE LA INCERTIDUMBRE.
CASO 1:Para la cuantificacin de la incertidumbre se tiene
en cuenta los componentes tipo A y tipo B:
Evaluacin tipo A: Evaluacin estadstica de la
incertidumbre estndar.
Se estima una desviacin estndar, la cual se obtiene
estadsticamente utilizando mediciones repetidas, actuales o previas.

Evaluacin tipo B: Evaluacin no estadstica de la

incertidumbre estndar.
Se utiliza toda la informacin disponible para calcular la variabilidad de
cada fuente de incertidumbre

Fuentes de informacin para el

clculo:
9 Datos obtenidos de mediciones previas.
9 Especificaciones del fabricante.
9 Datos provenientes de los certificados de calibracin.
9 Datos tomados de manuales, registros, etc.
9 Experiencia o conocimiento general del comportamiento
y propiedades relevantes de los materiales e
instrumentos.

Formas de clculo Incertidumbre

(cont):

CASO 2: Se calcula la incertidumbre estndar

considerando los datos de validacin y aseguramiento de
calidad del mtodo:
La incertidumbre se estima combinando cuadrticamente
la desviacin estndar repetibilidad (Sr) y de
reproducibilidad (SR)

Formas de clculo Incertidumbre (cont):

Para el caso 1 y 2:
La contribucin de los distintos componentes de la
incertidumbre deben quedar expresados como un desvo
estndar
Tercer Paso:
INCERTIDUMBRE COMBINADA (uc): es la raz de las
varianzas totales.
Ejemplo: caso 2
uc=Sr2+SR2
Cuarto Paso:
INCERTIDUMBRE EXPANDIDA (Ue): es la incertidumbre
total uc multiplicada por el factor k = 2.
Ue= uc x k

Cuarto Paso (cont):

Expresin del resultado de un ensayo

y su incertidumbre asociada:
El resultado (Rdo) se expresa asociado a la Ue.
De la siguiente manera:
Rdo + Ue (es un intervalo)

Expresin de la Incertidumbre
en microbiologa
x

1.1 x 104 ufc/g

ucR

12% ufc/g

UeR

24% ufc/g

Resultados

Ejemplo: Recuento
total en leche en polvo

1.1 0.3 x 104 ufc/g

0.8 x 104 a 1.4 x 104 ufc/g
1.1 x 104 24% ufc/g

Documentos para
Estimacin de la incertidumbre de
medicin en microbiologa
Referencias:

EURACHEM / CITAC Guide. Quantifying Uncertainty in Analytical

Measurement.

CAEAL. Policy on the Estimation of Uncertainty of Measurement in

Environmental Testing.

NMKL Procedure N 8 (1999) Measurement of uncertainty in microbiological

examination of foods.

UKAS Publication ref: LAB 12. The Expression of Uncertainty in Testing.

Seppo 1. Niemela Uncertainty of quantitative determinations derived by

cultivation of microorganisms Publication J3/2002ADVISORYCOMMISSION
FOR METROLOGY Chemistry Section Expert Group for Microbiology

Con una frecuencia establecida por el laboratorio

se revisa, se incorporan nuevos datos y se
recalcula la incertidumbre para cada parmetro.

Se elabora un informe conteniendo toda la

informacin relacionada con el clculo y los
resultados obtenidos de incertidumbre para el
ensayo.

El clculo de la precisin y exactitud de un mtodo

microbiolgico cuantitativo, nos indica la calidad
de la medicin realizada por el laboratorio y, por lo
tanto, nos da idea de la confiabilidad de los
resultados.
Como veremos ms adelante, dicho clculo se
puede realizar usando los datos obtenidos de los
estudios de validacin y aseguramiento de
calidad.

Graciasporsuatencin