Cintica enzimtica

A
Concentracin de AoB

Ej. Cintica de primer orden

tiempo

Reactivo -dA/dt = v = k [A] Producto dB/dt = v = k [A0]-[B]

A=A0e-kt B=A0 + ekt

Concentracin en funcin del tiempo

velocidad

Concentracion A

v = k [A] Velocidad en funcin de concentracin de Reactivo

Velocidad vs [S] para una reaccin catalizada por una enzima S+E v0 P

[s]

Intermediario de Reaccin
A. Brown (1892, 1902) 1. La velocidad de una reaccin enzimtica NO depende de la concentracin de S 2. La velocidad de una reaccin enzimtica no se puede ajustar a una cintica de orden 2

V. Henri (1901, 1903)

1. La E se recicla en la cintica. Su concentracin total es constante 2. La Et = E + ES 3. La velocidad global del proceso est dado por v = kcat [ES], donde kcat es la constante cintica del paso lento.

Para una reaccin qumica comn, la velocidad en el tiempo cae debido a:

Disminuye la concentracin de reactivo La reaccin inversa se hace importante al aumentar la [P] La reaccin alcanza un equilibrio

Para una enzima, la velocidad en el tiempo cae debido a:

Disminuye la concentracin de reactivo (sustrato) La reaccin inversa se hace importante al aumentar la [P] El producto puede inhibir a la enzima Cambios de PH o temperatura pueden modificar a la enzima en el curso de la reaccin Al disminuir la [S] puede disminuir la saturacin de la enzima

Velocidad inicial en funcin de la [E]

E2 (k2)
Velocidad (mg S / min)

v [E] V= k[E]

E3 (k3)

E1 (k1)

10

20

[E]

Velocidades iniciales
Distintas [E] Distintas [S] Distintos PH Distintos sustratos para la misma enzima Distintas concentraciones de cofactor

Actividad enzimatica

Velocidad vs [E]
Velocidad (mg S / min)

10

[E]

Velocidad vs [S]

v0

[s]

Ecuacin de Michaelis-Menten (1913)

Cintica Enzimtica: modelos

k1 k2 k3 k4

E+S
k-1

ES
k-2

EP1
k-3

EP2
k-4

E+P

Si el paso que da producto es el limitante, y P=0 a t

k1 k2

E+S
k-1

ES

E+P

Este formalismo se cumple slo si la velocidad es inicial (v0)

v = k2 [ES]

Resolucin usando la hiptesis del equilibrio rpido (Michaelis-Menten, 1913)

k1 k2

E+S
k-1

ES

E+P

k-1 >>>k2

Donde Km= k-1/k1 = Ks = constante de disociacin de ES

Resolucin por la hiptesis del estado estacionario (Briggs-Haldane, 1925)

k1 k2

E+S
k-1

ES

E+P

Donde Km= (k2 + k-1)/k1

Velocidad inicial en funcin de la [S]

La cintica enzimtica puede tener distintos ordenes de reaccin

V0 = kcat Et [S] Km

Transformacin lineal de Michaelis-Menten:

Ecuacin de Lineweaver-Burk o doble recproca

Eadie-Hofstee

v = -Km v/[S] + Vmax

Eadie-Scatchard

v/[S] = -1/Km v + Vmax/Km

Parmetros derivados del anlisis de Michaelis-Menten

Km indica la concentracin de sustrato intracelular

v0

[S] es una constante para una enzima determinada Km = (k2 + k-1)/ k1 esta relacionada con la afinidad de la enzima por su sustrato

Vmax es un parmetro directamente proporcional a la concentracin de enzima total Vmax= kcat [Et] no es una constante ya que depende de [Et]

Nmero de recambio nmero de molculas de sustrato transformados por minuto por mol de enzima Kcat [1/s] mide la eficiencia de la enzima turnover number sirve para comparar enzimas 1/kcat [seg] tiempo de un ciclo cataltico Constante de especificidad sirve para comparar la eficiencia de una enzima dada para distintos sustratos Kcat/Km

Unidades de actividad enzimtica

Unidad internacional: cantidad de enzima que cataliza la formacin de 1 micromol de producto por minuto en condiciones ptimas Katal: cantidad de enzima que cataliza la formacin de 1 mol de producto por segundo en condiciones ptimas.

La cantidad de una enzima entonces se expresa usando una VELOCIDAD La concentracin de una enzima es la cantidad de enzima (expresada en unidades) por unidad de volumen La actividad especfica de una enzima es la cantidad de enzima (expresada en unidades) por miligramo de protena

La caracterstica principal de las enzimas es la de catalizar reacciones qumicas

K = A0 exp ( -Ea/RT)

Donde A0 es un termino pre-exponencial Ea es la energa de activacin R es la constante general de los gases y T la temperatura

Energa

Reacciones simples y complejas

en un paso simple : reaccin elemental

A I

I B en dos pasos simples: reaccin compleja

A: es un reactivo B: es un producto I: es un intermediario de reaccin

Intermediarios de reaccin y estados de transicin

AI# IB# E

I A B B A

Reacciones simples

Reacciones complejas

Estabilizacin del sustrato (modelo llave-cerradura)

Estabilizacin del estado de transicin (modelo ajuste inducido o modelo de Monod)

Desestabilizacin del sustrato (modelo ajuste inducido o modelo de Monod)

Energa de unin=GB

GB

Especificidad de unin Fuerza de unin