Introduccin
Control microbiolgico del aire
Objetivo
Fundamento
Procedimiento
Resultados
Conclusiones
Control microbiolgico de superficies
Control microbiolgico

de personal
Bibliografa

Trabajo Prctico N 4

CALIDAD MICROBIOLGICA DEL AMBIENTE, SUPERFICIES Y PERSONAL

INTRODUCCIN Como se demostr en el trabajo prctico N 2, los microorganismos estn presentes en todas partes. Para la realizacin de ciertos trabajos, por ejemplo las manipulaciones aspticas y la preparacin de medicamentos, alimentos y cosmticos, se debe conocer y controlar la calidad microbiolgica del aire y de las superficies de trabajo, ya que stos podran ser fuente de contaminacin para el material con el que estamos trabajando. La evaluacin de la calidad microbiolgica del ambiente nos indica la cantidad de microorganismos que estn presentes en un rea determinada. Mientras ms limpia es un rea, menor ser el nmero de microorganismos presentes en el aire de la misma. Los microorganismos generalmente no estn flotando en el aire sino que se encuentran sobre partculas inertes, por ejemplo polvo, gotas de agua, etc. que le sirven como medio de transporte, y pueden encontrarse aislados o agregados. Algunas de estas partculas pueden depositarse sobre las superficies. Las personas tambin son una fuente de contaminacin, ya que liberan gran cantidad de partculas al moverse, toser, estornudar, por exfoliacin de la piel,

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CALIDAD MICROBIOLOGICA DEL AMBIENTE, SUPERFICIES Y PERSONAL __________________________________________________________________________________________________

etc. Algunas de estas partculas llevan microorganismos que podran contaminar el material con el que estamos trabajando. Por lo anteriormente expuesto es necesario determinar la calidad microbiolgica del aire, las superficies y el personal. CONTROL MICROBIOLGICO DEL AIRE Existen diferentes mtodos que permiten evaluar la calidad microbiolgica del aire. Uno de los ms utilizados es el mtodo de sedimentacin en placas de agar, que consiste en exponer placas con un medio nutritivo slido al ambiente durante un periodo determinado, incubar las placas y hacer el recuento de las colonias obtenidas. El tiempo de exposicin depende del ambiente a evaluar, mientras mayor sea la contaminacin menor ser el tiempo de exposicin de las mismas. Normalmente se utilizan placas de 9 cm de dimetro. Con este mtodo se detectan los microorganismos que caen sobre la superficie de la placa, lo cual simula lo que ocurre normalmente cuando estamos trabajando en el laboratorio. Como las condiciones ambientales influyen en la sedimentacin de los microorganismos es necesario que, cuando se realiza este mtodo, las placas se expongan siempre en el mismo lugar y bajo las mismas condiciones para poder comparar los resultados obtenidos. OBJETIVO Al finalizar el trabajo prctico el estudiante estar en capacidad de: Evaluar la calidad microbiolgica del aire de un rea determinada. FUNDAMENTO Al exponer la superficie de un medio de cultivo al medio ambiente durante un periodo determinado, los microorganismos que estn presentes en l pueden sedimentar sobre el medio de cultivo dando origen a colonias que se pueden contar. PROCEDIMIENTO 1. Marcar con el nmero de su equipo la tapa de la placa con agar nutritivo que le suministre el profesor y, de acuerdo a su nmero, exponer la placa en el lugar y durante el tiempo sealado en la siguiente tabla:

5.2

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CALIDAD MICROBIOLOGICA DEL AMBIENTE, SUPERFICIES Y PERSONAL __________________________________________________________________________________________________

Equipo # 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

Tiempo y lugar de exposicin de la placa 10 minutos sobre el mesn de trabajo 20 minutos sobre el mesn de trabajo 30 minutos sobre el mesn de trabajo 10 minutos sobre el mesn de la cabina del laboratorio 20 minutos sobre el mesn de la cabina del laboratorio 30 minutos sobre el mesn de la cabina del laboratorio 10 minutos en el pasillo 20 minutos en el pasillo 30 minutos en el pasillo 10 minutos en el rea de los baos de mara 20 minutos en el rea de los baos de mara 30 minutos en el rea de los baos de mara 10 minutos en el bao 20 minutos en el bao 30 minutos en el bao 10 minutos en el rea asptica 20 minutos en el rea asptica 30 minutos en el rea asptica 10 minutos dentro de la estufa 20 minutos dentro de la estufa

2. Incubar la placa a 35 +/- 2C en posicin invertida durante 48 horas. 3. Contar el nmero de colonias en la placa. 4. Calcular el nmero de microorganismos que caen por cm2 durante 1 minuto.

5.3

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CALIDAD MICROBIOLOGICA DEL AMBIENTE, SUPERFICIES Y PERSONAL __________________________________________________________________________________________________

CLCULO DEL NMERO DE MICROORGANISMOS POR CM2 Para calcular la cantidad de microorganismos que cayeron en la placa por unidad de tiempo:
Contar el nmero de colonias en la placa. Este nmero se expresa como ufc (unidades formadoras de colonias), ya que varios microorganismos podran estar juntos y al multiplicarse slo se ver una colonia. Calcular el rea de la placa (A). A = r2 Para una placa de 9 cm de dimetro el rea es A = 3,14 x 4,52 cm2 = 63,62 cm2
Calcular el nmero de microorganismos que caen en el rea por unidad de tiempo. Se puede expresar en: ufc/ placa/ min, ufc/ cm2/ min o ufc/ rea total/ min. Ejemplo Se expone una placa de 9 cm de dimetro en un rea durante 30 minutos. Se incuba 24 horas a 35 +/- 2o C y se cuentan 25 colonias. Calcular el nmero de ufc/ placa/ min y ufc/ cm2 / min. 25 ufc ---------30 min X --------- 1 min

X = 0,833 ufc/ placa/ min

Si deseamos expresar los valores en ufc/ cm2/ min 0,833ufc -------- 63,62 cm2 X -------- 1 cm2 X =0,0131 ufc/ cm2/ min Es importante asegurarse al momento de comparar los resultados, que stos estn expresados en los mismos parmetros.

5.4

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CALIDAD MICROBIOLOGICA DEL AMBIENTE, SUPERFICIES Y PERSONAL __________________________________________________________________________________________________

RESULTADOS rea evaluada: ____________________________________________________ Tiempo de exposicin de las placas: ___________________ Clculos:

Nmero de microorganismos por cm2: ______________________________

CONCLUSIONES Anotar sus conclusiones __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________

5.5

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CALIDAD MICROBIOLOGICA DEL AMBIENTE, SUPERFICIES Y PERSONAL __________________________________________________________________________________________________

CONTROL MICROBIOLGICO DE SUPERFICIES El control microbiolgico de superficie nos proporciona informacin sobre la cantidad de microorganismos presentes sobre una superficie, la cual puede ser un equipo, mesn, ropa, manos del personal, etc. Esta evaluacin generalmente se hace utilizando:
Placas de contacto (RODAC)

Las placas de contacto o RODAC (Replicate Organism Direct Agar Contact) son placas de 55-60 mm de dimetro llenas con medio de cultivo hasta obtener una superficie convexa, que sobresale del borde de la placa. Estas placas pueden preparase en el laboratorio o adquirirse comercialmente.

Placa Rodac Generalmente se utilizan para determinar la calidad microbiolgica de superficies planas. Para tomar la muestra se abre la placa y se presiona sobre la superficie a ensayar, sin deslizarla. Se tapa la placa y se incuba bajo las condiciones adecuadas. Se cuenta el nmero de colonias y se calcula el nmero de ufc/rea de la placa, la cual est entre 24 y 30 cm2, dependiendo del dimetro de la misma. NOTA: Es necesario desinfectar la superficie evaluada luego de tomar la muestra, ya que podran quedar restos del medio de cultivo que favorecen el crecimiento de los microorganismos.
Mtodo del Hisopo

Se recomienda para tomar muestras de superficies irregulares donde no se pueden utilizar placas RODAC. Se debe definir el rea donde se va a tomar la muestra, generalmente se usa una plantilla con un rea entre 24 y 30 cm2. El hisopo estril se humedece en un diluente y se frota sobre la superficie a evaluar, en por lo menos dos direcciones distintas, rotndolo ligeramente. Luego la cabeza del hisopo se coloca en el diluente y se toman alcuotas para sembrarlas en placas con agar. Se incuba y se cuenta el nmero de colonias. Se calcula el nmero de ufc/rea.

5.6

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CALIDAD MICROBIOLOGICA DEL AMBIENTE, SUPERFICIES Y PERSONAL __________________________________________________________________________________________________

CONTROL MICROBIOLGICO DEL PERSONAL Para evaluar al personal se pueden utilizar placas RODAC, las cuales se presionan sobre su vestimenta. Cuando queremos detectar la presencia de microorganismos en las manos del personal se pueden usar placas con medio de cultivo (Touch plates), el personal toca el agar de dichas placas con la punta de los dedos, luego se incuban por el tiempo y bajo las condiciones adecuadas. Al final del periodo de incubacin se cuentan las colonias. NOTA: El personal debe lavarse y desinfectarse las manos luego de tocar las placas, ya podran quedar restos del medio de cultivo en los dedos y favorecer el crecimiento de los microorganismos. BIBLIOGRAFA Carlberg, D. 1995. Cleanroom Microbiology for the Non Microbiologist. Interpharm Press, Inc. Buffalo Grove, Illinois. Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de Mtodos Generales (2da edicin). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.

Prof. Luisa Rossi Devivo Octubre 2001

5.7