IDENTIFICACIN DE PROTENAS

OBJETIVOS 1. Identificar la presencia de protenas mediante reacciones colorimtricas. 2. Identificar la desnaturalizacin de las protenas. FUNDAMENTO TERICO Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 100 C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidas y alcohlicas. Esta coagulacin se debe a la desnaturalizacin de la protena y es de carcter irreversible. Hay una serie de reacciones coloreadas especificas que sirven para la identificacin de las protenas, entre ellas destaca la reaccin xantoproteica y la reaccin biuret. o La reaccin xantoproteica es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color amarillo, cuando las proteinas son tratadas con cido ntrico concentrado y calentadas. Si se aade posteriormente amoniaco aparecer un color pardo-anaranjado. Esta reaccin la dan las protenas que poseen en su molcula aminocidos con grupos benc o nicos (tirosina, fenilalanina, etc.), dado que estos aminocidos los poseen casi todas las protenas, esta reaccin es praticamente universal. o La reaccin de biuret la producen los peptidos y las protenas; pero no los aminocidos libres, ya que se deben a la presencia de los enlaces peptdicos. Cuando una protena se pone en contacto con un alcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada biuret, que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida da una coloracin violeta caracterstica. o La presencia de aminocidos azufrados en una protena se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de plomo. Previamente se separa el azufre de los aminocidos mediante un lcali; la reaccin del azufre con acetato de plomo forma el sulfuro de plomo, de color negro. MATERIAL Material de Laboratorio Gradilla con 5 tubos de ensayo Pipeta de 5 o 10 ml y aspirador de pipetas Rotulador permanente Mechero de alcohol y pinzas de madera Albmina de huevo al 2% (preparar 200 ml) Solucin de glicocola al 2% (preparar 100 ml) cido actico en frasco cuentagotas cido ntrico concentrado en frasco cuentagotas Amoniaco concentrado en frasco cuentagotas Solucin de hidrxido potsico al 20 % (preparar 100 ml) Solucin de sulfato cprico al 1% en frasco cuentagotas (preparar 50 ml) Solucin de acetato de plomo al 5 % en frasco cuentagotas (preparar 50 ml)

Reactivos

MTODO

1. En una gradilla colocar cinco tubos de ensayo, en cuatro de ellos echar 3 cc de una solucin de albmina de huevo al 2 % y en el quinto echar 3 cc de una solucin del aminocido glicocola (rotular como tubos 1, 2, 3, 4 y 5). 2. Anadir al tubo n 1 dos gotas de cido actico y calentar a la llama del mechero. Observar el resultado. 3. Aadir al segundo tubo 8 gotas de cido ntrico concentrado, calentar durante unos minutos y observar qu ocurre. Dejar enfriar el tubo y aadir 7 gotas de amoniaco concentrado. Observar el cambio. 4. Anadir al tubo n 3 dos cc de la solucin de hidrxido potsico al 20 % y a continuacin 4 gotas de solucin de sulfato cprico al 1%. Observar el resultado. Repetir el mismo procedimiento con el tubo de ensayo que contiene la solucin de glicocola (tubo n 5). 5. Al cuarto tubo, aadir 2 cc de solucin de hidrxido potsico al 20 % y 10 gotas de la solucin de acetato de plomo al 5 %. Calentar el tubo hasta ebullicin y observar lo que ocurre. ANLISIS Y DISCUSIN DE LOS RESULTADOS. Anota la reaccin que se produce en cada tubo. Tubo 1 2 3 4 5 Reaccin

Por qu en el tubo 5 no da la reaccin xantoproteica?. Por qu al aadir el amoniaco al segundo tubo se produce un cambio?. Explica brevemente el fundamento de las reacciones que se han producido en cada tubo.