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Informe de Laboratorio N° 2 Biología

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Published by: Julio Oscar Quincho Rojas on Oct 16, 2012
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1. OBJETIVOS Extraer el ADN de una muestra vegetal (tomate) y una fruta (plátano). 2.

FUNDAMENTO TEORICO El ácido desoxiribonucleico o ADN (DNA) es la molécula que guarda el código genético de todas las células. Sin importar que el organismo sea multicelular o unicelular, eucariota o procariota, todos tienen el DNA como vehículo de su código genético. Muchas de las técnicas de biología molecular incluyen algún tipo de manipulación del material genético. Estos procedimientos han logrado adelantar hasta tal grado el conocimien-to del código genético, que ya es posible clonar organismos enteros. Los procedimientos iniciales eran largos y tediosos y podían pasar varios días antes de saber con certeza que se había logrado obtener DNA en calidad y cantidad suficiente para poder manipularlo. Además algunos de los reactivos usados para estos procesos son tóxicos y mutagénicos. Hoy día podemos obtener suficiente DNA de buena calidad en unas horas. Los ácidos nucleicos están siempre asociados con proteínas, de allí que una vez hecha la ruptura de las células se proceda a la desproteinización. Esta puede realizarse agitando suavemente la mezcla ácido nucleico-proteina con una solución de fenol y/o una mezcla de cloroformo-alcohol isoamílico a fin de precipitar las proteinas, la que se remueven por centrifugación. Las proteinas pueden también disociarse de los ácidos nucleicos con detergentes, cloruro de guanidina o altas concentraciones salinas, pueden también degradarse mediante proetasas, tal como la pronasa. Se obtiene así una mezcla de RNA y DNA que puede aislarse precipitando con etanol. El RNA se recupera de estos precipitados tratándolo con DNAsa pancreática para eliminar el DNA, y el DNA puede liberarse del RNA tratando el precipitado con RNasa. El DNA y RNA pueden también separase por ultracentrifugaciones. En todo este proceso y las maniulaciones subsecuentes, los ácidos nucleidos deben protegerse de la acción degradativa de las nucleasas. Estas pueden inhibirse por agentes quelantes como el EDTA que secuestra los iones metálicos divalentes que son esenciales para la actividad de las nucleasas. Los ácidos nucleicos son generalmente de más fácil

manipulación que las proteínas por carecer. para el plátano. 3. de estructura terciaria. RESULTADOS Y CALCULOS Muestra 1: Tomate Muestra 1. b. haciéndolas más tolerantes a condiciones extremas. Se trituró la muestra con un poco de agua destilada en el mortero. Se dejo reposar e. Se realizó los pasos a. 4. Se tomó 5 ml de la suspensión molecular en un tubo de ensayo (el sobrenadante) y se añadió 5 ml de alcohol isoamílico a 0ºC. Se tomó 5 ml del triturado celular tamizado en un recipiente limpio y se agregó 5 ml del tampón frío. Se agitó vigorosamente durante 2 minutos. b. después de agregar alcohol Después de 5 minutos de reposo: . OBSERVACIONES Y DATOS TABULADOS FALTA 5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL a. Se tamizó el triturado celular en un recipiente limpio. c y d. d. en la mayoría de los casos. c.

después de agregarle alcohol Muestra 2. después de 5 minutos de reposo .Muestra 2: Plátano Muestra 2.

de gran longitud. cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. proteínas y otras sustancias en menor proporción. vertiendo a este contenido molecular una disolución tampón. El tampón ahora contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. CONCLUSIONES La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. DISCUSIÓN La extracción de ADN empieza cuando se rompen las células mediante un detergente. Las proteínas asociadas al ADN.6. 8. 7. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. carbohidratos. se fraccionan en cadenas más pequeñas y separadas de él por acción del detergente. El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero. BIBLIOGRAFÍA . Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

b. ¿Por qué el azul de metileno tiñe las fibras del ADN? El azul de metileno tiñe el ADN. los cuales son dejados en la solución acuosa. por lo que precipita más rápido. . 6. y menos aun en alcohol frio. 5. El ADN es muy poco soluble en alcohol. Detergente (shampoo): El detergente es utilizado para realizar una mezcla homogénea de los tejidos utilizados. alcohol isoamilico? a. 4. ¿Cuál es la función del cloruro de sodio.CUESTIONARIO 1. cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. donde puede ser visto. porque este posee un grupo fosfato en su estructura. ¿Por qué se debe trabajar a bajas temperaturas? A menor temperatura menor solubilidad. c. Además de permitirnos ver el ADN. Cloruro de Sodio: El NaCl tiene como función de proteger y guardar el ADN. 3. 2. ¿Por qué el ADN precipita en alcohol? El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero. detergente.FALTA 10. ¿Qué otros colorantes que pueden ser utilizados para teñir las fibras de ADN? Se puede utilizar el verde de metilo para teñir las fibras del ADN. ¿Cuál es la función del detergente sobre la membrana celular? La función del detergente sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares. Alcohol Isoamílico: El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución.

Para calcular la concentración de la muestra: [DNA] = 50 mg / ml x A260 x factor de dilución (50) [DNA total] = [DNA] x volumen eluído en ml . Diluir 20 ml de muestra de DNA en 980 ml de agua desionizada y esteril (dilución 1/50) b. Medir absorbancia a 260 nm usando cubetas de 1 ml. c. Para determinar la concentración del ADN obtenido.7. que puedan usarse a luz ultravioleta.0 en una cubeta de 1 cm equivale a 50 mg de DNA por ml de agua. Explique. La concentración de DNA a A260 = 1. se puede utilizar el siguiente procedimiento: a. cómo se puede determinar la concentración del ADN.

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