Protenas Plasmticas

Protenas Plasmticas
1. Protenas plasmticas. Funciones generales de las protenas del plasma. Regulacin de la presin onctica. 2. El metabolismo de las protenas plasmticas. Sntesis, distribucin y catabolismo. 3. Mtodos de anlisis cualitativo de protenas plasmticas: Electroforesis 4. Proteinograma normal. Protenas ms representativas. 5. Alteraciones tpicas del proteinograma 6. Anlisis cuantitativo de protenas plasmticas. Medida de la protena total y protenas especficas.

Funciones generales de las protenas plasmticas

El plasma, fraccin de protenas solubles de la sangre El suero, fraccin de protenas solubles que aparecen tras la retraccin del cogulo sanguneo. Carece de fibringeno Funciones: Transporte de compuestos endgenos/exgenos poco solubles en agua. Regulacin de la presin onctica y el balance intra/extravasal de agua. Respuesta inflamatoria y control de la infeccin.

El fenmeno de la presin osmtica por protenas La difusin de molculas a travs de una membrana, puede condicionar su paso

Membrana semi-permeable

Regulacin de la presin onctica y el balance intra/extravasal de agua

Presin osmtica debida a protenas (onctica)

P1>P2

P1<P2

Balance proteico Sntesis: La sntesis de la mayor parte de las protenas plasmticas tiene lugar en el hgado Los linfocitos B son los responsables de la sntesis de las inmunoglobulinas Degradacin/Prdidas. El catabolismo tiene lugar en muchas distintas clulas (endoteliales, fagocitos mononucleares, fibroblastos cutneos) Prdidas por filtracin glomerular Prdidas a travs de la pared intestinal

Cundo y cmo son sintetizadas las protenas que son secretadas por las clulas...?

Cmo son exportadas dichas protenas al exterior de las clulas

Las protenas destinadas al plasma son sintetizadas de manera singular

Los grupos funcionales cidos y bsicos presentes en las cadenas laterales de los aminocidos, al disociarse en el agua, confieren a la protena cargas positivas y negativas

+ +

+ +

R R-COOH+H2OR-COO- + H3O+ R-NH2+H2OR-NH3+ + OHR La carga neta de una protena depende de la suma de cargas de ambos signos

La carga elctrica de la protena depende del grado de disociacin de sus grupos funcionales cidos y bsicos, lo que depende del pH. bsicos pH cido pH bsico + +

+ +

+ +

+ +

R-COOH+H2O R-COO- + H3O+ COOH R-NH2+ H3O+ R-NH3+ + OH-

R-COOH+H2O R-COO- + H3O+ R-NH2+ H3O+ R-NH3+ + OH-

Sometidas a un campo elctrico, las protenas son capaces de moverse en funcin de su carga y tamao La movilidad electrofortica es proporcional al cociente: Carga/Masa
Aplicacin de la muestra

Proteinograma normal del suero

Albmina

1 2

Fraccin de albminas
Albmina srica Banda mayoritaria (53-66%) del total del proteinograma Valores normales:
Recin nacidos: 2.9-5.5 g/100ml Nios: 3.8-5.5 Adultos (V): 3.3-6.1; (H): 2.7-5.6

Pre-albmina (retinol binding protein) Preprotein) Mayor movilidad electrofortica. Rpido recambio (18-45 mg/100ml) Indicador de estado nutricional

Fraccin 1 globulinas
Aumenta durante los procesos inflamatorios agudos, neoplasias, infartos y necrosis (1.9-4.1% del total del proteinograma) 1 glicoprotena cida 1 antitripsina 1 antiquimiotripsina 1 fetoprotena (<2 mg/100 ml)

Fraccin 2 globulinas
Aumenta en el sndrome nefrtico, ictericia obstructiva, tuberculosis, inflamacin crnica (7.7-12.3%) 2 macroglobulina (150-420 mg/100ml; Sndrome nefrtico) Ceruloplasmina (20-40 mg/100ml; transporte Cu2+; enf. Wilson) (20- mg/100ml; enf. Haptoglobina (60-270 mg/100ml), transporte Hb; aumenta en (60mg/100ml), Hb; inflamacin, neoplasias; disminuye hemlisis intravascular, anemia intravascular, perniciosa Protena C reactiva (<0.6 mg/100 ml). Inflamaciones e infecciones

Fraccin globulinas
Aumento moderado en sndrome nefrtico, ictericia obstructiva, cirrosis, tuberculosis, inflamacin crnica (7.6-13.0%) Fibronectina (25-40 mg/100ml; aumenta en sndrome nefrtico, colestasis, neoplasias. Disminuye en politraumatismos, quemaduras extensas, sepsis) Transferrina (200-400 mg/100ml; transporte Fe; aumenta en anemias) (200mg/100ml; Transcobalamina (900 pmol/L; transporte de B12). Complemento (C3, C4) (85-190; 12-36 mg/100 ml). Aumentan en procesos inflamatorios agudos. Disminuyen en reacciones autoinmunes.

Fraccin globulinas
La fraccin de las gammaglobulinas supone entre 10.3 y 20.8% del total de protenas del suero. Se pueden detectar IgG (2- 4mg/dl), IgM (150mg/dl), IgA (0,15 0,6mg/dl), e IgE (30g/dl) IgM aparece aumentada tras procesos agudos virales IgA aumenta en enfermedades intestinales autoinmunes (Crohn) (Crohn) IgG aumenta en enfermedades autoinmunes (lupus eritematoso, hepatitis eritematoso, crnica activa, infecciones bacterianas crnicas) IgE est aumentada en enfermedades con un componente alrgico (eczema, asma, infeccin parasitaria)

Principales alteraciones del proteinograma

Hipoproteinemia: hipoalbuminemia Hipoproteinemia: Deficiencias: 1 antitripsina, inmunoglobulinas, complemento Paraproteinemia: presencia de protenas anormales o en cantidad Paraproteinemia: excesiva (reaccin de fase aguda, mielomas, macroglobulinemia, linfomas B, etc.).

Principales alteraciones del proteinograma (I)

1 2 Normal

Reaccin inflamatoria (fase aguda)

Reaccin inflamatoria (crnica)

La reaccin de fase aguda

Cambios en la sntesis heptica de protenas plasmticas, como consecuencia de la regulacin de genes inducida por citoquinas inflamatorias (IL-6, IL-1, TNF-)

Aumento muy importante (>5x): CRP, SAA Aumento moderado (1-5x): 1 antitripsina, 1 glicoprotena (1cida, 1 antitripsina, ferritina, inmunoglobulina G, complemento C3/C4, ceruloplasmina, 1 antiquimiotripsina Pocos cambios (1-2x): Fibringeno, Haptoglobina (1Disminucin: Albmina, Transferrina

Principales alteraciones del proteinograma (II)

1 2 Normal

Sndrome nefrtico

Cirrosis heptica

Alteraciones de la fraccin de globulinas

Las hipergamaglobulinemias policlonales se manifiestan en inflamaciones crnicas (hepatitis crnica, cirrosis) e infecciosas (brucelosis, lepra, endocarditis), y ciertas enfermedades autoinmunes (lupus). Las hipogamaglobulinemias se presentan en el sndrome nefrtico, mieloma con proteinuria Bence-Jones, gran parte de las leucemias crnicas, sndrome de Cushing. Existen tambin a-gamaglobulinemias Gamapatas de clulas B (Plasmacitomas, mieloma mltiple) - Macroglobulinemia de Waldestrm
Patolgico Normal

Inmunodeficiencias asociadas a clulas B 1. Agamaglobulinemia infantil asociada al cromosoma X (enfermedad de Bruton; 1/100.000) 2. Hipogamaglobulinemia transitoria del recin nacido (clulas T-helper) 3. Deficiencias en la produccin del anticuerpo * IgA : la ms comn * IgM : rara * IgG : muy infrecuente

Principales alteraciones del proteinograma (III): (paraproteinemias)

1 2 IgA IgG IgG Waldestrm (IgM)

Principales alteraciones del proteinograma: (deficiencias)

Alb 1

Dficit 1 antitripsina

Normal

Principales alteraciones del proteinograma: (albmina)

Alb 1 2 Albmina/ bilirrubina Bisalbuminemia Bisalbuminemia Analbuminemia

Alteraciones del proteinograma: (albmina)

Causas de la hipoalbuminemia: hipoalbuminemia: Artefactual (por dilucin):
Error en la toma (miembro infundido) Excesiva administracin parenteral de lquidos

Redistribucin:
Posicional (de pie, vs.decbito) Aumento de la permeabilidad capilar (postoperatorio, shock) Retencin de lquido (edema)

Balance negativo:
Menor sntesis (enfermedad crnica heptica, malnutricin, sndromes de malabsorcin) Mayor catabolismo (muchos procesos patolgicos con balance negativo de N2) Prdidas (enfermedad renal, quemaduras extensas, epidermolisis, enteropatas)

Alteraciones del proteinograma: (albmina)

Consecuencias de la hipoalbuminemia: hipoalbuminemia: Edema:
Extravasacin de lquido, edema

Transporte:
Muchos compuestos endgenos van unidos a albmina (Ca2+, cidos grasos) Muchos frmacos se unen a albmina. Puede aumentar la fraccin libre de frmaco, y con ello un exceso de efecto farmacolgico. Desplazamiento de un frmaco por otro, y aumento de la concentracin libre plasmtica

Medida cuantitativa de protenas plasmticas

1. Reaccin de biuret. Valores normales de protena total (6-8 g/100ml). 2. Medida de protenas especficas por mtodos inmunolgicos (nefelometra, inmunodifusin radial)

La Respuesta de Fase Aguda

Citoquinas e Inflamacin
IL-6 ILIL-1 ILTNF TNF

Virus LPS

Bacterias Necrosis ? IFN + Monocitos Macrofagos

IL-1 ILACTH

TNF TNF Fibroblastos (F) Endoteliales (E) Queratinocitos (K)

K

IL6
+

Glucocorticoides

HGF, LIF

Biochem. J. 265, 621-636 (1990).

Protenas de Fase Aguda

Aparicin secuencial de citoquinas durante la inflamacin

3

Relative changes of cytokines

2 1 0 5

Patients Controls

IL-1

Infarto de miocardio
3000 2500

2 1 0

IL-6

c p m /m g p ro te in

2000 1500 1000 500

IN F

N -M C

0 0 4 8 12 16 20 24
Time (hours)

Am. J. Physiol. 269, R229-R235 (1995).

IN F -M

CR

TNF-

0
C N R

La Interleukina 6 es la seal inflamatoria ms potente para los hepatocitos humanos

Inhibition (%) - Fold increase
25 20 15 10 5 0 -5 -10 -15 -20
SAA CRP HTG ACH FBN AAT AGP AMG FNT TRF ALB

rhIL-6 rhIL-

25 15 5 -5 -15 -25 -35

rhIL-1 rhIL-

25 15 5 -5 -15 -25 -35

rhTNF

SAA CRP HTG ACH FBN

AAT AGP AMG FNT

TRF

ALB

SAA CRP HTG ACH FBN

AAT AGP AMG FNT

TRF

ALB

Fundamento de la inmunodifusin radial

1. Preparacin de la placa 2. Adicin de agar con anticuerpo 3. Aplicacin de las muestras 4. Difusin

Patrn 3 Problema Patrn 2

Patrn 4

Patrn 5 Patrn 1