Práctica de laboratorio No.

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MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
Métodos para la elaboración de
antibiogramas
 UTILIDAD
El estudio de la sensibilidad a antimicrobianos de las diferentes
bacterias aisladas en muestras biológicas se realiza por medio
del ANTIBIOGRAMA (ATB)

Tiene 3 objetivos fundamentales:

 Guiar al clínico en la elección del mejor tratamiento individual

 Monitorizar la evolución de la resistencia bacteriana con

objeto de revisar el espectro del antimicrobiano

 Poder actualizar los tratamientos empíricos

 PUNTOS CLAVES
• El estudio de la sensibilidad de los microorganismos a los
antimicrobianos se realiza principalmente por técnicas de
dilución o de difusión.

• Las técnicas de dilución proporcionan resultados cuantitativos

(concentración mínima inhibitoria, CMI) y las de difusión
cualitativos (sensible, intermedio, resistente). Ambos
métodos son comparables ya que hay una correlación directa
entre el diámetro del halo de inhibición con un disco y la CMI.

• Las técnicas bioquímicas y genéticas permiten detectar el

mecanismo o el gen de resistencia en minutos u horas.
 PUNTOS CLAVES
• La realización de un antibiograma se basa en el
patrón de resistencia de cada bacteria. Así, los
antibióticos a los que esa bacteria es
intrínsecamente resistente o cuya sensibilidad
puede inferirse por otros, no suelen informarse en
el antibiograma.

• Los patrones de antibiograma poco frecuentes o

imposibles requieren confirmación, ya que no
responden a mecanismos de resistencia conocidos.
Técnicas de estudio de la sensibilidad a los
antimicrobianos
El estudio de la sensibilidad in vitro de las bacterias a los antimicrobianos se
realiza mediante diferentes métodos: fenotípicos, bioquímicos y genéticos.

 Métodos fenotípicos ANTIBIOGRAMAS (técnicas de dilución y de

difusión): más utilizados. Consisten en enfrentar un inóculo bacteriano
estandarizado a una única o a diferentes concentraciones de antibiótico
Técnicas de estudio de la sensibilidad a los
antimicrobianos
 Métodos bioquímicos: consisten en la determinación del mecanismo por
el cual una bacteria es resistente a un antimicrobiano. Los más utilizados
son la detección de β-lactamasa con discos impregnados con una
cefalosporina cromogénica que cambia de color cuando se hidroliza
(método que se utiliza para la detección rápida de la resistencia a
ampicilina en Haemophilus spp., Neisseria spp. y Moraxella spp.), o la
detección de la PBP2a responsable de la resistencia a cloxacilina
en Staphylococcus aureus, por una técnica de aglutinación con látex.
Técnicas de estudio de la sensibilidad a los
antimicrobianos
 Métodos genéticos: detectan genes de resistencia,
generalmente mediante técnicas de PCR, como en el
caso del gen mecA que codifica la producción de la
PBP2a.
 ANTIBIOGRAMAS
¿Qué mide el ATB?
Mide la sensibilidad de una bacteria frente a diferentes
antimicrobianos in vitro y a partir de estos resultados predice la
eficacia in vivo.

¿Cómo mide la sensibilidad el ATB?

Con un antibiograma se pueden obtener resultados:

 Cualitativos: indican si la bacteria es sensible, intermedio o

resistente a un antibiótico (Técnicas de difusión)
 Cuantitativos: que determinan la concentración mínima
inhibitoria (CMI) de antimicrobiano que inhibe el crecimiento
bacteriano (en μg/ ml o en mg/l) (Técnicas de dilución)
MACRODILUCIÓN EN CALDO
VIDEO DEMOSTRATIVO
https://www.youtube.com/watch?v=qLkvU9rlq-k
 Difusión en Agar (Método de Kirby –
Bauer)

1) En un tubo con 4 a 5 ml de caldo nutritivo o solución salina

se le agregan colonias aisladas de un cultivo de no más de
24 horas del microorganismo, se compara la turbidez con el
tubo de la escala turbidimétrica 0,5 de Macfarland.

2) Con un escobillón estéril se moja en el medio diluido

exprimir el exceso de líquido en la pared del tubo.

3) Sembrar en medio de Mueller Hinton en cuatro planos

diferentes hasta cubrir la totalidad de la caja de Petri.
 Difusión en Agar (Método de Kirby –
Bauer)
4) Tapar la caja y dejar en reposo por 5 minutos para permitir
la absorción del exceso de líquido.

5) Colocar los discos de sensibilidad equidistantes, máximo 5

- 6 discos. Los sensidiscos deben quedar a 15 mm de la orilla
de las cajas y a 30 mm de otro sensidisco.

6) Incubar por 24 horas y luego medir los halos de inhibición

con una reglilla milimetrada, midiendo el diámetro total del
halo y compararlo con las tablas estándar de halo para cada
antibiótico.
 Escala de Mac Farland
Tubo patrón de la escala turbidimétrica de Macfarland
UITLIDAD: poder realizar suspensiones bacterianas ajustadas
a un patrón

 Su turbidez corresponde a 1.5 x 10 a la 8 microorganismo

viables x ml.
 Se prepara mezclando 0,5 ml de BaCl2H2O (al 1.75% con
99,5 ml de H2SO4 0,36 N al 1 % se agita suavemente y se
distribuye en tubos 6-8 ml en tubos tapa rosca.
 Se conservan a temperatura ambiente protegidos de la luz.

Nota: El patrón debe prepararse cada 6 meses.

VIDEO DEMOSTRATIVO

ANTIBIOGRAMA
https://youtu.be/XQ08zZGgL8Y
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
 SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
Staphylococcus spp

• Penicilina
• Meticilina u Oxacilina de 5mcg
• Eritromicina
• Aminoglucósido (Gentamicina, Netilmicina, Amikacina)
• Levofloxacina
• Lincomicina o Clindamicina
• Trimetropin sulfa
• Vancomicina

Nota: Los Estafilococos resistentes a Oxacilina son resistentes a todas las

penicilinas y a Betalactámicos (Cefalosporinas, Carbapenemas).
 SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
Estreptococcus del grupo viridans
• Penicilina G
• Clindamicina o Lincomicina
• Eritromicina
• Cefalosporina de primera y segunda generación
• Vancomicina
• Tetraciclina
 SUGERENCIAS PARA EL USO DE ANTIMICROBIANOS
Streptococcus pneumoniae

ATENCIÓN PRIMARIA HOSPITAL

Penicilina
Penicilina
Cefotaxima
Amoxicilina Ceftriazona
Eritromicina Amoxicilina
Clindamicina Meropenem
Eritromicina
Moxifloxacino Clindamicina
Levofloxacino Moxifloxacina
Levofloxacina
Vancomicina
Rifampicina
 SUGERENCIAS PARA EL USO DE ANTIMICROBIANOS
Enterococcus sp

ATENCIÓN PRIMARIA HOSPITAL

Penicilina
Penicilina
Ampicilina
Levofloxacina Ampicilina
Nitrofurantoina Estreptomicina
Eritromicina Gentamicina
Clindamicina
Vancomicina
Cefalosporina de primera y segunda
generación Teicoplanina
Daptomicina
Infecciones urinarias Tigeciclina
• Norfloxacina
• Nitrofurantoina
Linezolid
• Ácido nalidixico Levofloxacina
• Sulfametosazole Nitrofurantoina
SUGERENCIAS PARA EL USO DE ANTIMICROBIANOS
Enterobacterias

• Amino glucósido
• Ampicilina
• Amoxacilina
• Cefalosporina de 1º generación
• Cefalosporina de 2º generación
• Cefalosporina de 3º generación
• Trimetropin -SuIfa
• Quinolona
• Infecciones urinarias
• Nitrofurantoina
• Ácido nalidixico
• Norfloxacina
• Trimetropinsulfa
 SUGERENCIAS PARA EL USO DE
ANTIMICROBIANOS
Pseudomona spp
• Aminoglucósido
• Piperacilina
• Carbenicilina
• Cefoperazona o Ceftazidime
• Quinolona
• Aztreonam
• Imipenem o Meropenem
• Sulfoperazona
 Observaciones del ATB
• El disco de Ampicilina se utiliza para pruebas de sensibilidad
a las Ampicilinas y la Amoxicilina.

• El disco de Cefalotina registra sensibilidad para todas las

Cefalosporinas de 1º generación como Cefalotina,
Cefaloridina. Cefalexina, Cetapirina, CefadroxilCefradina.

• El disco de Clindamicina se utiliza para probar la sensibilidad

tanto a la Clindamicina como a la Lincomicina.

• El disco de Oxacilina y CEFOXITIN se utiliza para determinar

la sensibilidad a todas las penicilinas resistentes a
penicilinasa (es decir, Cloxacilina, Dicloxacilina y Oxacilina).
 Observaciones del ATB
• El disco de Oxacilina de 1ug puede utilizarse para probar la
sensibilidad o resistencia del S. pneumoniae a la Penicilina.

• El disco de Penicilina G se utiliza para determinar la

sensibilidad a todas las Penicilinas susceptibles a la
penicilinasa.

• El disco de Tetraciclina se utiliza para determinar la

sensibilidad a todas las Tetraciclinas (es decir
Clortetraciclina, Doxiciclina, Oxitetraciclina, Minociclina y
Tetraciclina). Algunos microorganismos resistentes a la
Tetraciclina pueden ser sensibles a la Minoclicina
 INTERPRETACIÓN
La interpretación de los resultados del antibiograma (sensible,
intermedio o resistente) se realiza en función de los valores establecidos
por diferentes comités

 Clinical and Laboratory Standards Institute en Estados Unidos

 European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing en Europa
 Mesa Española de Normalización de la Sensibilidad y Resistencia a los
Antimicrobianos

Estos comités determinan y establecen puntos de corte basados en

propiedades microbiológicas, farmacocinéticas y de eficacia clínica, para
definir la sensibilidad (éxito terapéutico) o resistencia (fracaso
terapeútico) de las diferentes especies bacterianas a cada
antimicrobiano.
PUNTOS DE CORTE CLSI PARA LECTURA
DEL ATB
 INTERPRETACIÓN
SENSIBLE o SUSCEPTIBLE (S): se define como el punto de corte en el cual la
bacteria es inhibida o destruida.

 Si hablamos de CIM ó CMI ó MIC (Concentración inhibitoria mínima en

la técnica cuantitativa): significa que la bacteria con un CIM menor o
igual (≤) al punto de corte susceptible es inhibida por las
concentraciones usuales de antibiótico cuando es usada la dosis
recomendada para tratar la infección lo que daría como resultado un
TRATAMIENTO CLÍNICO EFICAZ.

 Si hablamos de ZONAS DE DIÁMETRO (En la técnica cualitativa):

significa que la bacteria con una zona de diámetro mayor ó igual (≥) al
punto de corte susceptible es inhibida por las concentraciones usuales
de antibiótico cuando es usada la dosis recomendada para tratar la
infección lo que daría como resultado un TRATAMIENTO CLÍNICO EFICAZ.
 INTERPRETACIÓN
INTERMEDIO (I): es una categoría que está definida por un
punto de corte que incluye aislamientos con CIM o zonas de
diámetro dentro del rango intermedio que se acercan
usualmente a los niveles del antibiótico en sangre y tejidos y
para los cuales las tasas de respuesta suelen ser mas bajas
que los aislamientos que son sensibles o susceptibles.

Esta categoría implica eficacia clínica en sitios del cuerpo

donde el antibiótico alcanzan una buena concentración
fisiológica o el uso de dosis mas altas de la recomendada o
de la normal.
 INTERPRETACIÓN
RESISTENTE (R): se define como el punto de corte en el cual la bacteria NO es
inhibida o destruida.

 Si hablamos de CIM ó CMI ó MIC (Concentración inhibitoria mínima en la

técnica cuantitativa): significa que la bacteria con un CIM mayor o igual
(≥) al punto de corte resistente NO es inhibida por las concentraciones
usuales de antibiótico cuando es usada la dosis recomendada para tratar la
infección lo que daría como resultado un TRATAMIENTO CLÍNICO INEFICAZ
(FRACASO TERAPÉUTICO).

 Si hablamos de ZONAS DE DIÁMETRO (En la técnica cualitativa): significa

que la bacteria con una zona de diámetro menor ó igual (≤) al punto de
corte resistente NO es inhibida por las concentraciones usuales de
antibiótico cuando es usada la dosis recomendada para tratar la infección
lo que daría como resultado un TRATAMIENTO CLÍNICO INEFICAZ
(FRACASO TERAPÉUTICO).