UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE ZACATECAS

“Francisco García Salinas”

Laboratorios de inmunologia y Biologia Molecular

Campus Guadalupe

Universidad Politécnica de Zacatecas

Campus Fresnillo
Conferencia 4
Tipos de ELISA
MPSS Pamela Itzel Rosales Pulido
Contenido
1. Significado del acrónimo
2. Fundamentos de la técnica ELISA
3. Tipos de ELISA
● Indirecto
● Competitivo
4. Ventajas y desventajas
5. Protocolo de ELISA
6. Conclusiones
1. ELISA

Ensayo de inmunoadsorción ligado a enzima

Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay

2. Fundamentos

Método utilizado para detectar cuantitativamente un antígeno o anticuerpo en una

muestra

Detección de un antígeno y anticuerpo inmovilizado sobre una fase sólida mediante

anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto puede ser
medido espectrofotométricamente
2.1 Determinaciones:

1. Enfermedades autoinmunes
2. Farmacos terapeuticos
3. Diversas sustancias biológicas
4. Sustancias infecciosas
5. Ac de respuesta del huésped en:
● Orina
● LCR
● Saliva
¿Qué necesitamos?
3. Tipos de ELISA

ELISA
COMPETITIVO
ELISA Indirecto

Más Sensible y Flexible

Proceso de unión de 2 pasos

Se utilizan 2 anticuerpos
● anticuerpo primario
● anticuerpo secundario

Anticuerpo secundario irá conjugado a la enzima

 ELISA competitivo
- “ELISA de inhibición”
- Técnica más compleja y flexible

- El antígeno de la muestra compite con un antígeno o

anticuerpo inhibidor que se una a una cantidad
limitante del anticuerpo marcado

- La señal detectada será más débil cuanto más antígeno

haya en la muestra (menos anticuerpo puede unirse a
los pocillos)
- Se utiliza para detectar y/o cuantificar antígenos
presentes en muy bajas cantidades
VENTAJAS Y DESVENTAJAS
TIPO DE ELISA VENTAJAS DESVENTAJAS

ELISA Indirecto 1. Alta sensibilidad 1. Mayor complejidad

2. Alta flexibilidad 2. mayor número de pasos de
3. El anticuerpo 1rio mantiene intacta su incubación por anticuerpo
inmunorreactividad al no ir conjugado secundario
3. posibilidad de reactividad
cruzada

ELISA competitivo 1. Puede realizarse vía directa, indirecta o 1. Protocolo más complejo
sandwich 2. Requiere el uso de antígeno
2. Alta sensibilidad y consistencia de inhibición
3. Permite la detección de antígenos de
pequeño tamaño y en bajas concentraciones
4. No requiere procesamiento previo de las
muestras a analizar
Protocolo ELISA
Generalidades

Euroimmun
Mexlab
 Laboratorio de Inmunologia y biologia molecular UAZ
Anticuerpo contra Utilidad diagnóstica Anticuerpo contra: Utilidad diagnóstica

Sm Patologias de tejido conectivo PRE (C-ANCA) Vasculitis autoinmunes

Ro y La Patologías de tejido conectivo Cardiolipinas LES

DSG 1 y 3 Pénfigo
RNP Patologías de tejido conectivo
BP 180 Pénfigo
BP 230
CCP Artritis reumatoide
Envoplaquina Pénfigo
Cardiolipina Sx antifosfolípidos
Gliadina IgA cuadros de celiaquía si se está
beta 2- glicoproteina 1 Sx antifosfolipidos consumiendo gluten al
momento de su realización
Scl-70 Enfermedades de tejido
conectivo Transglutaminasa IgA cuadros de celiaquía si se está
consumiendo gluten al
momento de su realización
MPO (P- ANCA) Vasculitis autoinmunes
Protocolo ELISA
Generalidades

Paso 1: Realizar
Paso 2: Añadir 100 ųl de
dilución (suero y Paso 3: Incubación
control +, - y muestra a
buffer)
estudiar

Paso 4: Lavados (3
lavados) con 300 ųl en Paso 5: Añadir 100 ųl de
cada pozo conjugado enzimático en Paso 6: Incubación
cada pozo
Protocolo ELISA
Generalidades

Paso 7: Lavados (3 Paso 9: Incubación y

lavados) con 300 ųl en Paso 8: Añadir 100 ųl de solución STOP
cada pozo sustrato en cada pozo

Paso 11: Lectura en a 450

nm en espectrofotómetro
Conclusiones

● Protocolo universal
● Técnica de laboratorio que permite detectar tanto antígenos como anticuerpos
● Ampliamente utilizada en los últimos años y de fácil acceso
● Técnica sencilla de realizar e interpretar
● Alta sensibilidad