Inmunología y Ensayos

TM Viviana Balboa
LABORATORIO DE INMUNOLOGIA
Este laboratorio desarrolla variadas técnicas como:

 INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA  ANA, DNA, AM-AML, ANCAs.

 LATEX FR, ASO
 ELISAs  ENA ID, CCP
 ELECTROFORESIS  de Proteínas, Inmunofijación
 TURBIDIMETRIA C3,C4, IgA, IgM, IgG
 MICROSCOPIA LIQUIDOS ARTICULARES
 CITOMETRIA Interleuquina, Poblaciones Cel.
LABORATORIO INMUNOLOGIA
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

Es un examen sencillo y de alta sensibilidad para la detección

principalmente de anticuerpos antinucleares (actualmente el “gold
standard” para su búsqueda). Se usa también para la detección de:

 Anticuerpos anti-Nucleares (ANA)

 Anticuerpos Anti-DNA
 ANCA, entre otros.

Se pueden desarrollar esta técnica de forma Manual y/o

Automatizada.
FUNDAMENTO IFI

Ventajas

• > Sensibilidad
• Rápida
• Reproducible

Desventajas

• Costo
• Dependiente del experimentador
 Inmunofluorescencia indirecta (IFI)

 HEP-2 cultivos celulares de

epitelio carcinoma laringeo
Núcleos de mayor tamaño
Mayor número de
antígenos expuestos
Detección de patrones
citoplasmáticos

• Los anticuerpos antinucleares (ANA) son fundamentales en el diagnóstico y

exclusión de enfermedades del tejido conectivo
 Ejemplo:
PLACAS CON CELULAS HEP-2 (ANA)
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

Anticuerpo
Suero anti IgG Humana
conjugado con
un fluorocromo

Observar Microscopio
+ (-) Fluorescencia
Sustrato celular lavado lavado

Incubar 25 min Tº Incubar 25 min Tº

ambiente ambiente
Cámara húmeda Cámara húmeda
PATRONES MAS FRECUENTES
PATRON HOMOGENEO →Asociados a anti-DNA
PATRON MOTEADO → Asociado a anti-ENA
PATRON NUCLEOLAR → Esclerosis Sistémica
PATRON ANTICENTROMERO → CREST
PATRON PERIFERICO → LES
…OTROS PATRONES OBSERVADOS

PATRON NUCLEAR DOTS

PATRON ANTICENTRIOLOS
PATRONES CITOPLASMATICOS
 PATRON HOMOGENEO
 Todo el núcleo aparece teñido uniformemente. Dentro de las células
mitóticas, los cromosomas parecen teñidos con el aspecto de una masa
de forma irregular intensamente teñida.

Células en metafase
 PATRON MOTEADO

Zona cromosómica
negativa
Tinción del núcleo
dispareja
Síndrome Sjögrens, LES,
AR
PATRON MOTEDO
 PATRON NUCLEOLAR

 Fluorescencia positiva para los

nucleolos
 Zona cromosómica negativa.

 Esclerodermia difusa

 Polimiositis
 PATRON ANTICENTROMERO
Fluorescencia que

destaca los centrómeros

de cada cromosoma
Zona cromosómica

positiva
Marcador de Síndrome

de CREST
 PATRON PERIFERICO

Fluorescencia que destaca

el contorno nuclear
Zona cromosómica

positiva intensa
LES, LES Inducido por

Drogas
PATRON CITOPLASMATICO
 PATRONES IFI
NEGATIVO
 ANTICUERPOS ANTI DNA
Sustrato : Crithidia luciliae
Es un hemoflajelado
unicelular que posee una
mitocondria gigante rica
en DNA doble cadena.

Los a-DNA nativos son

bastante específicos para
LES (95%), por lo tanto,
útiles en el diagnóstico de
esta entidad.
ANTICUERPOS ANTICITOPLASMA DE
NEUTRÓFILOS

Existen dos patrones:

C-ANCA P-ANCA
 PATRON CITOPLASMATICO
Están dirigidos principalmente al antígeno Proteinasa
(PR 3), una proteasa sérica, presente en los gránulos
azurofilos junto con mieloperoxidasa y elastasa.
PR 3 no es desprendida del granulo primario durante
la fijación con etanol, sino que permanece en el
citoplasma del neutrófilo,
ANCA-C
 PATRON PERINUCLEAR
 Están dirigidos principalmente a mieloperoxidasa, además de otros
tipos tales como lactoferrina, lactasa y catepsina G.

 Durante la fijación con etanol, los MPO cargados positivamente, son

liberados de los gránulos alfa en el citoplasma y emigran al núcleo
negativamente cargado en la célula.

 Esta redistribución de MPO a las zonas perinucleares de las células

no ocurre cuando la muestra es fijada usando formalina, como
resultado, un ANCA P “verdadero” demuestra una coloración
perinuclear en placas fijadas con etanol, y coloración citoplasmática
en placas fijadas con formalina.
ANTICUERPOS ANTIMITOCONDRIALES
Anticuerpos antimitocondriales (AMA),
ANTICUERPOS ANTI-MUSCULO LISO
MICROSCOPIO DE IFI
 FACTOR REUMATOIDEO
La técnica se basa en la

aglutinación de partículas
de látex recubiertas con
IgG.
 TÉCNICA DE LÁTEX PARA FR
 El FR → AR y SS.

 75%-90% de las AR tienen un FR positivo para

IgM en títulos significativos > 1:80 (AR

seropositivas).

 Los pacientes con AR y títulos elevados de FR,

tienden a tener una enfermedad agresiva y con

mayor compromiso extraarticular.

 Se observa aglutinación en suero positivo

 Se realizan diluciones seriadas

ELECTROFORESIS DE PROTEINA
Las proteínas monoclonales son moléculas de
inmunoglobulina (abreviada como ”Ig”) o partes de ellas.

Las Celulas Plasmáticas en condiciones fisiológicas

normales producen Igs (SI)

Células plasmáticas anormales

producen una molécula monoclonal
patológica que no actúa como
anticuerpo
 ELECTROFORESIS DE PROTEINA
Metodología (electroforesis)
Las proteínas son capaces de moverse en función de su carga y
tamaño cuando son sometidas a un campo eléctrico
La movilidad electroforética es proporcional al cociente:
Carga/Masa

Metodología (electroforesis)
Las proteínas son capaces de moverse en función de su carga y
tamaño cuando son sometidas a un campo eléctrico
La movilidad electroforética es proporcional al cociente:
Carga/Masa
PROTEINOGRAMA

(+) (-)
> PM < PM
Ejemplos PROTEINOGRAMAS
PRINCIPALES ALTERACIONES ELECTROFORETICAS
PRINCIPALES ALTERACIONES ELECTROFORETICAS
CUADRO RESUMEN
 INMUNOFIJACION
 Inmunofijación (Suero / Orina)

Detección mediante Anticuerpos específicos

 ELISAS
Panel Disponible:

ELISA Patologias Infecciosas

ELISA Autoinmunidad
AUTOINMUNIDAD
Rheumatology (ANA,ENA etc)

Thrombosis (Cardiolipin, PL etc)

Vasculitis (MPO, PR3 etc)

Thyroid (TG, TPO etc)

Gastroenterology (GA, TtG, ASCA etc)

Fundamento ELISA
Ag o Ac
Ag o Ac Conjugado:
fijado a
en la Ac unido a SUSTRATO
una fase
Muestra ENZIMA
Sólida

CAMBIO
DE
COLOR
ELISAS
ELISA COMPETITIVO
El Ac de la muestra compite con el
conjugado por un número limitado
de sitios de unión del antígeno.
ELISA NO COMPETITIVO
Consiste en enfrentar la muestra con el
antígeno o anticuerpo que está en la fase
sólida.

Habrá ausencia de color en una Si una muestra es positiva se formará el

muestra positiva complejo antígeno-anticuerpo y al agregar
el conjugado reaccionará con el respectivo
sustrato desarrollando color

ELISA DIRECTO Detectan

antígenos

Detectan
ELISA INDIRECTO anticuerpos
ELISAS
ELISAS MANUALES
TURBIDIMETRIA Y NEFELOMETRIA
COMPLEMENTO
CUANTIFICACION INMUNOGLOBULINAS
MEDICION DE DROGAS
TURBIDIMETRIA
 La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a
partículas de una suspensión y cuantifica la luz residual transmitida.
 Se relaciona Absorbancia (Densidad Óptica) con el número de
microorganismos totales (UFC) o Analitos.
TURBIDIMETRIA